2013 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA INGENIERIA DE HIENE Y SEGURIDAD AMBIENTAL
ALUMNO: ZUMAETA YNGA JHONY .D DOCENTE: TELLO CEBREROS, JORGE
UNI
INDICE
OBJETIVO
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3
FUNDAMENTO TEORICO ……………………………………………………………………
4
PROCEDIMIENTO
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8
RESULTADOS
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9
CONCLUSIONES
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10
RECOMENDACIONES
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11
CUESTIONARIO
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11
TALLER
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14
BIBLIOGRAFIA
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1
1. OBJETIVO: ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Demostrar el efecto de diferentes concentraciones de cristal violeta sobre bacterias Gram positivas y gram negativas.
También es demostrar como las concentraciones en que se diferencia cada crisol varia el crecimiento de microorganismos
Hacer la tinción gram para determinar si dicha bacteria es cocos o bacilos según los pasos que habíamos hecho con anterioridad
Otro también es saber a qué tipo de agrupación pertenece dicha bacteria
ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS
Demostrar la acción oligodinámica de algunos metales
Determinar el por qué no presenciamos crecimiento cerca a la moneda pero si lo hubo alrededor, mientras más lejano a la moneda más crecimiento se notara
Tener bien presente los pasos a seguir ya que cualquier error nos podría llevar a unos resultados erróneos.
Denotar las diferencias de cada grupo para ver las diferencias y similitudes y así poder saber en qué se equivoco cada grupo.
2. FUNDAMENTO TEORICO: ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Los colorantes del grupo trifenilmetano presentan una marcada acción bacteriostática selectiva sobre las bacterias Gram positivas, en diluciones que aparentemente no afectan a las Gram negativas. Esta propiedad se aprovecha mediante la incorporación de alguno de esos colorantes en medios de cultivo con el fin de facilitar el aislamiento de bacterias Gram negativas.
Entre los colorantes usados con estos propósitos están: cristal violeta, fucsina básica, verde brillante y verde malaquita .
ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS
Los iones de algunos metales pesados en altas diluciones son capaces de ejercer una acción tóxica sobre las bacterias y otros microorganismos. Si se coloca una moneda o un trozo de cobre debajo o sobre un medio de cultivo sólido recién inoculado con un microorganismo, luego de incubar se puede observar que no hay crecimiento en la zona alrededor del metal. Esta es la zona oligodinámica; con frecuencia las colonias en el borde del halo de inhibición son de mayor tamaño que en el resto de la placa, debido a que tuvieron una mayor disponibilidad de nutrientes que no fueron utilizados en la zona sin crecimiento.
Acción oligodinámica, son activos en muy bajas concentraciones (ppm). Inactiva específicamente enzimas claves al reaccionar con grupos SH. Son muy tóxicos y su actividad disminuye con la existencia de fluidos biológicos.
3. PROCEDIMIENTO: ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Primero tuvimos que haber preparado el agar nutritivo:
Primero pesamos y trituramos el agar nutritivo. Vertimos el agar en un vaso precipitado y agregar 375ml de agua y mover con la bagueta. Continuamos con la dilución del agar, como no se disuelve todo aumentamos la temperatura para aumentar la solubilidad de la solución y después de ello los separamos en 25 tubos de prueba de 15ml y tapamos los tubos con algodón Después se colocan los tubos en una canastilla y luego se coloca en el autoclave. Esterilizar los materiales a usar en el horno. Esterilización del Agar en el autoclave a 121°C por 15 min.
Una vez obtenido el agar nutritivo comenzamos con las soluciones del cristal.
Para la solución 1/10000, transferimos 1 ml del cristal violeta de una concentración de 1/1000 a un tubo de 9 ml de agua
Para la solución 1/100000, transferimos 1 ml de cristal violeta de una concentración de 1/10000 a un tubo de 9 ml de agua
Para la solución 1/1000000, transferimos 1 ml de cristal violeta de una concentración de 1/100000 a un tubo de 9 ml de agua
Luego mezclamos las diluciones con el agar nutritivo, tomamos 3 tubos de ensayo y echar 9 ml de agua destilada, ayudados con una pipeta de 1ml. Sacar con una pipeta y una bombilla 1ml del cristal violeta (0.1%) y echarlo en el tubo N°1. Proceder a sacar 1ml del tubo N°1 con pipeta de 1ml y echarlo en el tubo N°2. Proceder a sacar 1ml del tubo N°2 ayudado de una pipeta limpia de 1ml y echarlo en el tubo N°3.
Flameamos el tubo con agar nutritivo y echamos en una placa petri, este primer tubo se echara en la placa N°1 que no contiene colorante y nos servirá de control.
Luego vertir el agar fundido en las tres placas petri restantes y mezclar bien el colorante con el agar rotando suavemente la placa, para obtener una distribución uniforme de colorante.
Cuando ha solidificado el agar, dividir las placas en dos regiones iguales y nombrarlos A y B.
División de las placas en zonas A y B para inocular con los microorganismos.
Incubar las placas a 37ºC durante 48 horas.
ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS
Limpiamos la moneda de diez céntimos dentro de una solución cuya concentración es del 10% de acido nítrico
Lavar la moneda con agua para quitarle lo acido
Colocar la moneda en el centro de la placa petri
Tomar un tubo con agar nutritivo fundido mantenido a 45°c
Inocular el tubo con agar con una gotita del cultivo, tomada con el asa del inoculador
Rotar el tubo alrededor de la palmas para tener una distribución uniforme
Verter el agar dentro de la placa petri que contiene la moneda
Dejar que solidifique el agar, invertir la placa e incubarla a 37° C por 48 horas
4. RESULTADOS : ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA Grupo N° 1
Grupo N° 2
Grupo N° 3
Grupo N° 4
Grupo N° 5
Dilución
A
B
A
B
A
B
A
B
A
B
1/10000
+
+
-
-
+
+
+
+
+
+
1/100000
+
+
-
-
+
+
+
+
+
+
1/1000000
+
+
-
-
+
+
+
-
+
+
(+) (-)
Hay
crecimiento No se puede determinar
Haciendo la tinción identificamos con el microscopio si es gran positiva o gran negativa y también determinar el grupo al que pertenece
Grupo
Colonia A
Colonia B
N° 1
Gram positivo
Estafilococos
Gram positivo
Diplobacilos
N° 2
---
---
---
---
N° 3
Gram negativo
Diplobacilos
Gran negativo
Diplobacilos
N° 4
Gram negativo
Estreptobacilos
Gran positivo
Diplococos
N° 5
Gram negativo
Cocos
Gram negativo
Diplobacilos
Crecimiento
Cristal Violeta
Control
Dilución
Eschirichia Coli
Bacillus Subtilis
1/10000
-
-
1/100000
+
-
1/1000000
+
+
Sin colorante
+
+
ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS
Grupos Grupo N° 1
Crecimiento Hubo crecimiento escaso alrededor de la moneda
Grupo N° 2
Experimento fallido
Grupo N° 3
Hubo crecimiento escaso alrededor de la moneda
Grupo N° 4
Experimento fallido
Grupo N° 5
Hubo crecimiento abundante y uniforme alrededor de la moneda
GRUPO N°1, 2, 3, 5:
5. CONCLUSIONES: ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Una de nuestras conclusiones a la que podíamos llegar es como varia la cantidad de microorganismos en las diluciones utilizadas
También llegamos a la conclusión de algo que ya sabíamos por medio de la teoría, por ejemplo que en 1/10000 no íbamos a notar ninguna de las dos bacteria (Escherichia Coli y Bacillus Subtilis), en cambio que en 1/100000 íbamos a notar solo el crecimiento de la Escherichia Coli y que en 1/1000000 iba haber crecimiento de ambos.
A esa conclusión fuimos capaces de llegar, ya que utilizamos la tinción gram y combinado con el microscopio (objetivo 97) para determinar a la bacteria, no solo para saber si era cocos o bacilus, sino que también para poder afirmar que agrupación pertenece.
ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS
Se observa la acción oligodinámica de los metales pesados, ya que se nota que el crecimiento de microorganismos en un cultivo, es afectado por la presencia de metales pesados. por lo que se logra diferenciar tres zonas: la zona oligodinámica, zona de estimulación y de crecimiento normal.
Se pudo notar un crecimiento de bacterias pero alejados de la moneda de diez céntimos en las zonas de estimulación y de crecimiento normal
Se diferencian tres zonas: la zona oligodinámica (que es una zona despejada donde no aparecen colonias), zona de estimulación (zona angosta donde se presenta un crecimiento abundante) y la zona de crecimiento normal (se presenta en todo el resto del agar).debido a eso las cantidades diminutas de iones metálicos estimulan el
crecimiento mientras que concentraciones mayores producen inhibición.
6. RECOMENDACIONES: ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Al extraer el agar nutritivo de la autoclave debemos mantenerlo a una temperatura de 45 °C para evitar que se solidifique, ya que si este se solidifica perjudicara en los resultados del experimento.
Se debe esterilizar correctamente el inoculador antes de usarlo para extraer el cultivo.
Tener cuidado cuando se utiliza el acido nítrico en la limpieza de la moneda, evitar el contacto directo con este, haciendo uso de instrumentos adecuados como guantes, mascarillas para no respirara el gas del acido , ya que este puede causar quemaduras o irritaciones en los ojos,etc.
La realización del estriado en las zonas A y B de cada placa deben tratar de realizarse en forma uniforme para poder notar las posibles diferencias entre las placas conteniendo diluciones del cristal violeta y la placa correspondiente al control (1/1000). Y con la menor cantidad de microorganismo posible.
ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS
Cuando desinfectamos la moneda de diez céntimos nos hizo falta la seguridad de que en el momento de que nosotros pongamos en las placas petri siga estando estéril ya que en el trayecto estuvo expuesto al aire
Otro también fue nuestras manos, las cuales no estaban desinfectadas y así cogimos la moneda de diez céntimos, es por eso que notamos un leve crecimiento de microorganismos.
7. CUESTIONARIO 1. Explicar qué es un agente bacteriostático. Un efecto bacteriostático es aquel que aunque no produce la muerte a una bacteria, impide su reproducción; la bacteria envejece y muere sin dejar descendencia. Un efecto bacteriostático está producido por sustancias bacteriostáticas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como medios defensivos contra las bacterias. 2. ¿Qué es una acción bacteriostática selectiva?, Indique algunas aplicaciones prácticas de este fenómeno.
3. ¿A qué se debe la acción oligodinámica? Indique algunas aplicaciones: ACCION OLIGODINAMICA: Es la propiedad que tienen ciertos metales, especialmente la plata, de ejercer efectos letales sobre las bacterias COMPUESTOS DE PLATA: en cantidades pequeñísimas. El mecanismo de acción de la plata está estrechamente relacionado a la interacción de los iones plata con grupos suldhidrilo (SH-), y esta actividad antimicrobiana va a depender de la acumulación intracelular de bajas concentraciones de iones plata, que interactúan con las enzimas, proteínas y ácidos nucleicos produciendo cambios estructurales en la pared celular bacteriana, membranas y ácidos nucleicos afectando su viabilidad.
8. BIBLIOGRAFIA:
PELCZAR, Michael J. et al. Microbiología. Mexico, Ed. Mc GrawHill, 1982.
FRAZIER, W.C. y D.C. Westhoff, Microbiología de los Alimentos
THATCHER, F. S. y D. S Clark. Análisis microbiológicos de los alimentos. España. Acribia, 197
Bacteriología A. J. Salle 4ta edición año 1960
MICROBIOLOGIA, Autor: Thomas D. Brock, Michael T. Madigan Sexta Edición 1991
