1
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Salah satu perbedaan fundamental antara prokariot dan eukariot adalah pada organisasi bahan genetiknya. Pada kelompok prokariot hanya ada satu unit bahan genetik utama yang membawa semua informasi genetic yang diperlukan untuk kelangsungan pertumbuhan jasad tersebut. Meskipun demikian ada beberapa bukti yang menunjukkan bahwa prokariot tertentu mempunyai lebih dari satu unit bahan genetic utaman. Sebaliknya pada kelompok eukariot bahan genetic utama terdiri atas beberapa unit independen yang terpisah namun semua unit bahan genetik merupakan satu kesatuan genom yang menentukan kelangsungan hidup jasad. DNA pada manusia, hewan dan tumbuhan terdapat di dalam inti sel, dan beberapa organ lain di dalam sel seperti mitokondria dan kloroplast. Penyebutan nama DNA juga didasarkan pada lokasi asalnya. DNA genome inti (nuclear DNA genome) berasal dari inti sel, DNA genom mitokondria (mitochondrial DNA genome) berasal dari mitokondria, DNA genom kloroplast berasal dari kloroplast. Pada beberapa kelompok prokariot seringkali dijumpai bahan genetic tambahan selain bahan genetic utamanya. Bahan genetic tambahan/ekstra semacam ini secara umum disebut plasmid. Dalam keadaan normal kehadiran plasmid pada umumnya tidak diperlukan oleh sel. Jika sel jasad tersebut membawa plasmid maka genom jasad tersebut meliputi satu kesatuan gen yang ada pada bahan genetic utamanya dan gen yang ada pada plasmid tersebut. Meskipun demikian batasan semacam ini dapat diargumentasikan sebab plasmid dapat masuk ke dalam sel secara alami atau secara artificial di dalam laboratorium. Oleh karena itu, batasan genom pada prokariot umumnya hanya meliputi bahan genetic utamanya kecuali kalau bahan genetic tambahan tersebut merupakan bagain yang secara genetis tak terpisahkan dari sel tersebut. (Yowono, 2005) Pada bakteri, DNA penyusun kromosom dan plasmid dibungkus oleh dinding sel atau dibungkus oleh protein tertentu (pada virus). Kromosom eukariot berbentuk linear
2
sedangkan kromosom prokariot berbentuk sirkular. Selain itu prokariot juga mengandung satu atau lebih plasmid. Plasmid adalah molekul DNA sirkuler berukuran relatif kecil di
luar
kromosom yang terdapat di dalam sel prokariot, khususnya bakteri dan sel eukariotik tingkat rendah . DNA plasmid berukuran lebih kecil dari DNA kromosom dan dapat bereplikasi sendiri. Plasmid biasanya digunakan dalam teknologi DNA rekombinan menggunakan E. coli sebagai host, sehingga dalam rekayasa genetika plasmid sering digunakan sebagai vektor untuk membawa gen-gen tertentu yang diinginkan
ke
mengekspresikan
dalam produk
suatu
sel
komersial
inang. Gen-gen tertentu
seperti
tersebut
selanjutnya akan
insulin,
interferon,
dan
berbagai enzim. Penggunaan plasmid dalam DNA rekombinan dilakukan karena plasmid memiliki tiga region yang berperan penting untuk DNA kloning, yaitu, replication origin, marker yang memungkinkan adanya seleksi
(biasanya
gen
resisten antibiotik) dan region yang mampu disisipi oleh fragmen DNA dari luar Beberapa plasmid yang disebut episom bisa berintergasi ke dalam kromosom inang dan bereplikasi bersamanya. Mereka biasanya mengandung informasi genetic yang relative tidak penting seperti gen-gen untuk seksualitas atau gen-gen bagi resistensi antibiotic (Stansfield, 1991). Ada tiga tipe plasmid yaitu F dan F’ plasmid, R plasmid disebut juga RTF atau Resisten Transfer Factor plasmid, dan Col plasmid disebut juga colicinogenic. F factor dapat didefinisikan sebagai episom
B. Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang tersebut, adapun yang akan dibahas dalam makalah ini adalah. 1. Apakah pengertian plasmid? 2. Apa saja tipe plasmid? 3. Bagaimanakah struktur dan reproduksi plasmid? 4. Bagaimakah kegunaan plasmid dalam genetika dan kehidupan? 5. Bagaimakah cara mendeteksi plasmid? 6. Apakah pengertian episom?
3
BAB II
PEMBAHASAN
A. Pengertian Plasmid
Pada umumnya, bakteri mempunyai satu kromosom. Kromosom bakteri berupa DNA sirkuler atau DNA yang berbentuk lingkaran. Di samping memiliki satu kromosom, beberapa jenis bakteri juga memiliki DNA sirkuler lainnya yang ukurannya jauh lebih kecil dari DNA kromosomnya. DNA ini disebut plasmid. Jadi plasmid adalah DNA bakteri yang terpisah dari kromosom bakteri. Informasi genetik pada bakteri disimpan di dalam kromosom utama yang mengandung ribuan gen dan di dalam beberapa minikromosom yang dikenal sebagai plasmid dan episom. Umumnya, akan tetapi tidak semua, plasmid tidak penting bagi sel induknya, tapi beberapa mempunyai kemampuan untuk reaksi antibiotik. Karena plasmid memiliki kemampuan untuk bereplikasi sendiri dan untuk berkombinasi dengan DNA lain dan untuk membawa DNA dalam pusat aktivitas sintetis sel, maka digunakan dalam teknik genetika. Plasmid membawa informasi sifat keturunan dalam bentuk gen, unit dasar hereditas. Plasmid umumnya membawa lebih sedikit gen daripada kromosom utama dengan yang dibawa biasanya bermanfaat, tapi tidak penting untuk pertahanan sel. Sebagai contoh suatu plasmid membantu bakteri memanfaatkan sumber makanan yg tidak bisa dia makanan (Tjahjoleksono, 2005) Beberapa plasmid adalah suatu pragmen kromosom bakteri dan beberapa lagi merupakan pragmen DNA rekombinan. Sebagian besar plasmid tidak penting sel induknya, tapi bererapa mempunyai kemampuan untuk reaksi antibiotic. Karena kemampuannya untuk bereplikasi sendiri dan untuk berkombinasi dengan DNA lain dan untuk membawa DNA dalam pusat aktivitas sintetis sel, mereka digunakan dlm teknik genetika. Suatu plasmid yang disebut TI (tumor indicing) membawa sequence DNA yang merubah bentuk sel tanaman dikotil, seperti tembakau, bunga matahari menjadi sel tumor.Tumor hasil transpormasi ini dihub dg penyaki Crowgall. Penyakit ini merupakan
4
bentuknya seperti bintik yang bergerombol yag diinducing suatu bakteri yang disebut Agrobacterium tumevacien. Tanaman yang terkena penyakit ini dalam beberapa akan mati dan tumornya akan terus tumbuh. Fragmen dari plasmid TI sudah dikombinasi dengan segmen DNA dari tanaman yang terinfeksi. Gen yang dibawa oleh plasmid itu sekarang sudah digabungkan dalam plasmid Tanaman yang mengkode suatu enzim untuk merangsang keberlangsungan dan pertumbuhan tumor yang ketidak terkontrolnya yang merupakan perpanjangan dari gen bakteri penginduksi bintil.
B. Tipe Plasmid
Ada tiga tipe plasmid: 1. . F dan F’ plasmid, factor fertilitas konjugasi Faktor F adalah suatu plasmid yang dikenalkan oleh Lenderberg, yang secara independent dapat bereplikasi sendiri. Berbentuk sirkuler, double strain DNA dan lebih kecil dari kromosom utama. Ditemukan juga bahwa transfer F factor, terjadi jauh lebih sering daripada transfer materi genetik yang lain. Dimana selama konjugasi terdapat satu rekombinan pada 10 7 sel dimana transfer F factor terjadi rata-rata sekitar 1 konversi F- ke F+ disetiap 5 kali konjugasi. Plasmid F, terdiri dari sekitar 25 gen, sebagian besar diperlukan untuk memproduksi pili seks (Gambar 1) Ahli-ahli genetika menggunakan simbol F + untuk menyatakan sel yang mengandung plasmid F (sel "jantan"). Kondisi F + dapat diwariskan: plasmid F bereplikasi secara sinkron dengan DNA kromosom, dan pembelahan satu sel F+ biasanya menghasilkan dua keturunan yang semuanya merupakan F+. Sel-sel yang tidak memiliki faktor F diberi simbol F - , dan mereka berfungsi sebagai resipien DNA ("betina") selama konjugasi. Kondisi F+ adalah kondisi yang "menular' dalam artian sel F+ dapat mengubah sel F- menjadi F+ ketika kedua sel tersebut berkonjugasi. Plasmid F bereplikasi di dalam sel "jantan”, dan sebuah salinannya ditransfer ke sel "betina” melalui saluran konjugasi yang menghubungkan sel-sel tersebut. Pada perkawinan F+ x F- seperti ini, hanya sebuah piasmid F yang ditransfer. Sel yang dilengkapi dengan faktor F dalam kromosomnya disebut sel Hfr (high frequency of
5
recombination atau rekombinasi frekuensi tinggil). Sel Hfr tetap berfungsi sebagai jantan selama konjugasi, mereplikasi faktor F dan mentransfer salinannya ke F pasangannya (Campbell, 2002).
Gambar 1. Pili Seks
2. R plasmid adalah disebut juga RTF atau Resisten Transfer Factor plasmid membawa beberapa gen untuk resistensi terhadap antibiotik atau obat antibiotik yang lain. R plasmid merupakan plasmid yang membawa gen resisten mengandung 1 atau lebih zat kimia. Adanya zat kimia tersebut yang mengandung racun bertujuan untuk melawan infeksi. Resistensi terhadap 1 atau lebih dari racun merupakan infeksi yang berguna untuk memblok atau menahan DNA marker, yang ditransfer selama konjugasi. R factor mengandung 2 bagian yaitu resistence transfer factor atau RTF yang bertanggung jawab untuk mentransfer berbagai macam sistron yang resisten terhadap obat-obatan yang terdiri dari faktor R. R Faktor merupakan plasmid, yang memiliki rentangan ukuran dari yang rendah yaitu 1,5 x 10 4, hingga yang tinggi yaitu 1 x 10 5 pasang DNA. Sebagian besar selalu ada dalam 1 hingga 3 kopi per sel, walaupun terdapat jumlah yang lebih besar pada beberapa R factor (George, 1983). 3. Col plasmid disebut juga colicinogenic, plasmid yang mengkode untuk colisin, protein yang membunuh secara sensitive sel E. Coli. Faktor colisigenic merupakan plasmid yang membawa penanda atau marker untuk produksi colisin : yang merupakan protein antibody khusus yang diproduksi oleh beberapa strain bakteri usus. Strain lain bersifat rentan jika terdapat reseptor site colisin pada dinding selnya, dan yang disentesisnya sendiri. Terdapat berbagai macam colisin,
6
masing-masingnya memiliki cara membunuh tersendiri. Satu dari sebagian besar yang diamati adalah colisin K yang menghambat replikasi DNA, Transkripsi DNA, dan sintesis polipeptida. Kebanyakan dari plasmid ini transporable pada saat konjugasi. Terbatas double strain molekul DNA sirkuler yang berukuran antara 6 ribu - 21 ribu pasang basa. Plasmid col mengandung lokus yang memproduksi protein yang bera cun, karena berbagai macam alasan ke strain bakteri yang tidak memiliki plasmid tersebut. Colisin menyerang sel bakteri di reseptor yang ada di permukaan selnya. Berdasarkan tipe reseptor yang diserang oleh colisin, colisin dibedakan menjadi 20 atau lebih kategori beberapa kolisin dapat masuk ke dalam secara langsung, tetapi ada juga yang tidak. Sebagai contoh colisin K sangat sensetif membunuh sel melalui penghambatan sintesis DNA, RNA dan protein meskipun tidak secara langsung masuk ke dalam sel. Col plasmid dan F factor memiliki sequence insersi yang merupakan keadaan yang baik sehingga perubahan di dalam plasmid terjadi dan banyak dari plasmid tersebut mempunyai kemampuan untuk berintegrasi ke kromosom inang. Meskipun mobilitas mereka tersebut membuat para ahli lebih mudah memetakan dan mempelajari plasmid, tetapi juga membuat masalah bagi kesehatan manusia. Resistensi terhadap berbagai macam antibakteri sangat mudah ditransfer diantara dunia bakteri. Transfer resistensi kadang-kadang dapat terjadi diluar tubuh organisme induk, dimana polusi atau sampah ditemukan. Sebagai tambahan resistensi dapat juga ditemukan pada bakteri yang tidak berbahaya Plasmid dapat dibedakan atas 2 kelompok berdasarkan apakah plasmid tersebut mediate konjugasi atau tidak. Berdasarkan kemampuan konjugasinya adalah plasmid F dan F’, banyak plasmid R dan beberapa plasmid Col merupakan konjugasi. Secara garis besar plasmid juga diketahui untuk mengkode bakteriosin atau tidak hanya colisin. Sebagai contoh adalah plasmid yang diketahui untuk mengkode fibriocins dimana protein tersebut dapat membunuh bakteri fibrio colera dan plasmid-plasmid tersebut tampak mirip dengan col plasmid.
7
C. Karakteristik Fisika dan Kimia pDNA (Plasmid DNA)
Plasmid adalah molekul DNA double stranded. Untuk aplikasi terapeutik, dapat mengandung gen manusia atau non manusia, dan berukuran (Mr>106)
sangat besar
jika dibandingkan dengan protein. Masing-masing untai molekul pDNA
adalah polimer linier dari fosfodiester.
asam
deoksiribonukleat
dihubungkan
dengan
ikatan
Gugus fosfat bermuatan negatif pada pH>4. Untai anti paralel DNA
membentuk struktur double helix yang distabilkan dengan ikatan hidrogen WatsonCrick antara pasangan basa AT dan GC, dan gaya pengikat. Di bagian dalam heliks bersifat sangat hidrofobik, berisi basa-basa aromatik. Axis heliks pDNA dapat juga membentuk coil, yaitu membentuk molekul pDNA supercoiled (SC). Fraksi populasi molekul pDNA dapat pula berada dalam bentuk non supercoil atau bentuk open circular (OC). Varian
yang lain yaitu linier, pDNA terdenaturasi atau
oligomerik dapat pula ditemukan dalam lisat sel. Bentuk linier dihasilkan dari pemutusan kimia atau enzimatik dari ikatan fosfodiester dalam untai DNA, bentuk terdenaturasi menggambarkan konformasi dimana ikatan hidrogen antara untai yang komplementer pada lokasi tertentu telah rusak, dan oligomer adalah akibat dari rekombinasi homolog
D. Struktur dan Reproduksi
Sebagian besar plasmid memiliki struktur sirkuler (Gambar 2) namun ada juga plasmid linear yang dapat ditemukan pada mikroorganisme tertentu, seperti Borrelia burgdorferi dan Streptomyces. Plasmid ditemukan dalam bentuk DNA utas ganda yang sebagian besar tersusun menjadi superkoil atau kumparan terpilin. Struktur superkoil terjadi karena enzim topoisomerase membuat sebagian DNA utas ganda lepas (tidak terikat) selama replikasi plasmid berlangsung. Struktur superkoil akan menyebabkan DNA plasmid berada dalam konformasi yang disebut lingkaran tertutup kovalen atau covalently closed circular (ccc), namun apabila kedua utas DNA terlepas maka akan plasmid akan kembali dalam keadaan normal (tidak terpilin) dan konformasi tersebut disebut sebagai open circuler Kebanyakan bakteri hanya memiliki 1 kromosom tetapi dapat mengandung 1 – 100 kopi plasmid. Plasmid bereflikasi secara independent pada saat pembelahan sel, dan
8
ketika sel yg mengandung plasmid itu membelah, plasmid didistribusikan secara acak ke dalam dua sel anak hasil pembelahan. Dalam hal ini setiap sel anak memang tidak selalu tepat memiliki jumlah kromosom yg sama.
Gambar 2. Struktur Plasmid yang Sirkuler (http: fp.unud.ac.id) E. Kegunaan Plasmid dalam Genetika
Plasmid terpisah dari kromosom utama dalam sel. Plasmid penting digunakan dalam teknik genetika untuk memanipulasi materi genetik suatu organisme dan juga sebagai kunci para ahli dalam memahami bagaimana bakteri dapat menyebabkan penyakit pada manusia. Sebagai struktur genetika DNA dalam tubuh makhluk hidup adalah sama, sehingga DNA
pada hampir semua organisme dapat dikombinasikan
dengan DNA plasmid. Berikut ini beberapa kegunaan plasmid: 1. Plasmid dapat digunakan sebagai alat yang cocok untuk mentransfer gen dari organisme satu keorganisme yang lain. Menggunakan enzim retriksi seperti endonuklease dan ligase yang bertindak sebagai molekul pemotong dan penempel, para ahli dapat memotong dan menempel setiap bagian DNA dari sumber yang berbeda bersama-sama membentuk molekul yang dikenal sebagai DNA rekombinan. Plasmid rekombinan dibuat dengan beberapa teknik sehingga dapat dimasukkan kedalam sel bakteri untuk mermproduksi bakteri dengan karakteristik yang penuh manfaat.
9
2. Kemampuan untuk mengkombinasi DNA manusia dengan DNA Bakteri telah banyak memberi manfaat dari segi medis.
-
Ilmuan telah mampu membuat bakteri yang secara genetik dapat memproduksi insulin manusia. Insulin adalah hormon yang membantu regulasi gula darah dan diperlukan oleh banyak orang yang menderita diabetes. Untuk menciptkan bakteri penghasil insulin, para ilmuan memasukkan gen yang mengarahkan untuk memproduksi insulin melalui plasmid, kemudian memasukkan plasmid tersebut kedalam bakteri. Karena bakteri dapat tumbuh dan diperbanyak secara laboratorium, bakteri-bakteri tersebut menghasilkan insulin yang sangat besar jumlahnya dan dapat dikumpuilkan dan dikemas unutk para penderita diabetes.
-
Manfaat medis lainnya dengan menggunakan DNA rekombinan, termasuk hormone pertumbuhan manusia, protein system imun, yang dikenal sebagai interferon, protein pembeku darah dan protein yang diguanak untuk membuat vaksin. TIdak semua aplikasi plasmid rekombinan untuk medis.
3. Plasmid bakteri juga digunakan untuk mentransfer gen luar ke dalam tubuh tanaman. Teknik genetik atnaman sering menggunakan plasmid yang dikenal sebagai TI, yang ditemukan bakteri Agrobacterium tumefaciens, bakteri yang menyebabkan bintil pada tanaman. 4. Plasmid juga membantu para ahli untuk memahami bagaimana bakateri dapat menyebabkan penyakit. Beberapa bakteri pembawa plasmiod yang diketahui sebagai Plasmid virulen, sehingga menyebabkan bakteri-bakteri tsb berbahay bagi manusia. Sebagai contoh bakteri Clostridium tetani yg hanya membawa toksin tetanus. Para ilmuan telah mempelajari bahwa bakteri dapat segera mentransfer plasmid resisten k e bakteri yg lain. Ketika
sel bakteri
tahan terhadapo dua antibiotik
resisten plasmid yang berbeda, gen resisten antibiotic yangg dibawa oleh dua plsmid kadang-kadang bergabung menjadi satu plasmid. Plasmid baru ini kemudian dapat ditransfer ke bakteri dimana menyebabkan bakteri tersebut memiliki gen resisten antibiotik. Proses ini dp dipercepat dalam beberapa saat, memberikan manfaat plasmid yg membuat bakteri resisten terhadap beberapa antibiotik yang berbeda. Penginfeksian yang disebabkan oleh bakteri tersebut sangat sulit untuk diobati.
10
Penggunaan antibiotik memberi konstribusi untuk mengembangbiakkan bakteri yg resisten terhadap antibiotik. Ketika seorang pasein tidak menggunakan antibiotic dengan ukuran yang tepat, bakteri resisten antibiotik akan lebih mudah untuk bertahan hidup 5. F plasmid membawa gen dimana sel bakteri mampu mentransfer DNA ke bakteri lain. 6. R plasmid mengakibatkan bakteri mampu mendegradasi atau mempu membuat inaktif antibiotic yg digunakan dlm menghambat pertumbuhannya atau untuk bertahan hidup pada lingkungan yg terdapat logam berat, dengan mengubah logam berat tersebut ke dalam bentuk yg tidak beracun 7. Plasmid yang lain memungkinkan bakteri untuk memproduksi zat kimia yang beracun bagi organisme yang lain termasuk insekta, manusia dan bakteri lainnya.
F. Pendeteksian Plasmid
Keberadaan plasmid pada suatu sel dapat ditentukan dlm bbrp cara: 1. Dilihat dgn mikrroskop electron 2. Ditreanfer dlm konyugasi (Khusus yg bersifat invektios) 3. Karena reflikasinya berlangsung dgn cara tersendiri pd kromosom independent, mereka mungkin dapat hilang dr suatu jenis sel dalam pola ac ak. 4. Secara genetic dapat dipetakan 5. Lokusnya memperlihatkan tdk adanya pautan dengan beberapa ma rker nukleid.
G. Episom
Istilah episom diperkenalkan oleh Yacob dan koleganya pada tahun 1960 sebagai penanda materi genetik yaitu factor F fertility atau sex, yang salah satu berintegrasi dalam kromosom bakteri atau memisahkan diri ke dalam sitoplasma Beberapa plasmid seperti F factor dapat didefinisikan sebagai episom. Episom merupakan materi genetik yang dapat bereplikasi dengan 2 alternatif yang berbeda : 1. Tergabung dalam kromosom utama sel induk 2. Sebagai elemen genetic autosom, kromosom induk yang independent.
11
Plasmid adalah potongan bundar DNA yang merupakan gen tambahan. Bila unsur ekstrakromo¬somal dapat bereplikasi secara swantantra dan terpadu ke dalam kromosom DNA bakteri, maka disebut episom. Perilaku ini mem¬bedakan episom dari plasmid, karena yang terakhir ini tidak ter¬padu ke dalam kromosom. Jadi faktor F E. coli adalah suatu epi¬som karena dapat secara bergantian ada dalam status F+ atau Hfr. Sel donor yang mengandung F factor dikenal dengan F +
sel. Ketika F+
cel
melakukan konjugasi dengan F - sel resipien maka hanya F factor yang ditransformasi. Kedua sel yang terlibat dalam konjugasi menjadi F + karena F factor berepliklasi selama transfer materi genetik. Untuk melihat mengenai transfer F factor pada E. Coli dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3 transfer F factor pada E. Coli (gardner, 1991) Bentuk dari plasmid dan episom tidak sama. Banyak plasmid yang ada dalam bentuk terintegrasi, demikian juga pada episom seperti banyak ditemukan pd gen page ά episom tapi bukan plasmid. Peningkatan yang sangat menakjubkan sudah dibuat untuk memahami lebih dalam tentang struktur dan bagian-bagian dari plasmid selama beberapa tahun terakhir. Banyak penyusun plasmid dan episom yang diketahui tergantung pada sequence DNA pendek yg disebut IS elemen, atau disebut juga Insertion Sequence. IS elemen juga ada di dalam kromosom utama induk. Sequence DNA pendek tersebut (dari 800-1400 pasang Nukleotida) adalah transforsable, yang artinya IS elemen ini dapat bergerak dari 1 posisi ke posisi yang lain di dalam kromosom atau bergerak dari satu kromosom ke kromosom yg lain.
12
IS element menengahi rekombinasi antara elemen genetic nonohomolog yang lain dengan tempatnya. Pengaruh ini menunjukkan bahwa IS elemen menengahi integrasi episom ke dalam kromosom induknya. Hal ini dapat dijelaskan melalui integrasi E. coli K12 F plasmid selama pembentukan Hfrnya (Gambar 4)
Plasmid dapat bergabung dengan DNA kromosom tanpa terintegrasi sehingga masih dapat melakukan replikasi secara mandiri. Plasmid yang ditambahkan ke DNA ini disebut episom. Pada mamalia, episom juga digunakan untuk menyebut DNA sirkuler yang ada dalam sel mamalia (Irawan, 2008)
13
DAFTAR RUJUKAN
Campbell , 2002. Biologi Edisi Kelima Jilid I. Jakarta Erlangga. Gardner, 1991. Principles Of Genetics Eighth Edition. New York: John Wiley & Sons George, 1983. The Science of Genetics An Intruduction to Heredity . Fifth Edition. : New York: Mcmillan Publishing Co; Inc http://resources.unpad.ac.id/unpad content/uploads/publikasi_dosen/koromatografi%20pDNA.pdf Irawan, B. 2008. Genetika Molekuler . Surabaya: Erlangga University Press Stanfield. 1991. Genetika. Jakarta: Erlangga Tjahjoleksono. 2005. Plasmid. (Online), (http://www.tpb.ipb.ac.id/files/materi/genetika/dnarekombinan/plasmidpdf.pdf,, diakses 4 September 2010) Yuwono. 2005. Biologi Molekuler. Jakarta: Erlangga
