UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
FISIOLOGÍA DE LEVADURAS INTEGRANTES: CAMACHO GONZÁLEZ MARIO ALBERTO GÓMEZ LARIOS LORENA PAZ GARCES IVONNE MENDOZA ESPINOSA ADRIAN EQUIPO: 1 GRUPO: 2752
LEVADURAS
Resistentes a actidiona y ciclohexidina. Inactivadas entre 7 y 20 MPa. Aerobios. Algunas levaduras forman hifas verdaderas Presentan sistemas enzimáticos pH óptimo de 4.5 a 6.5 Temperatura óptima de 35-37°C
LEVADURAS
Resistentes a actidiona y ciclohexidina. Inactivadas entre 7 y 20 MPa. Aerobios. Algunas levaduras forman hifas verdaderas Presentan sistemas enzimáticos pH óptimo de 4.5 a 6.5 Temperatura óptima de 35-37°C
En medios sólidos crecen dando lugar a colonias compactas y visibles a las 24 – 48 hrs. de incubación. Unicelulares. Redondos u ovalados, con un diámetro de entre 3 y 30 μm Algunos presentan dimorfismo Crecen en concentraciones concentracio nes de azúcar. Reproducción sexual y asexual.
Unidad funcional
Célula aislada
Tamaño
2 a 10 um (diámetr (diámetro) o)
Forma
Estructuras
Reproducción
Colonias
Ovoideas, esféricas o rectangulares. Puede formarse una pseudohifa. Puede presentar una cápsula de poslisacáridos. Forma For ma una pared p ared celular de polisacáridos, lípidos y quitina. Asexual: gemación, tabicamiento o una combinación de ambos. Sexual: células haploides que se unen. Pastosas, cremosas, 3 mm (d). Se requieren pruebas bioquímcas para poder diferencias las levaduras.
ESQUEMA DE UNA LEVADURA EN PROCESO DE GEMACIÓN.
P, paredcelular; Vac, vacuola; CG, cicatriz de una gemación; M,mitocondria; CL, cuerpo lipídico; AGaparato de Golgi; RE,retículo endoplasmático; V, vesícula; CHP, corpúsculo huso polar; N, núcleo
Candida albicans Es un microorganismo unicelular, de forma elipsoidal, ovoide u ovalada de 3 a 5 µ de diámetro: se reproduce asexualmente por gemación multipolar (blastoconidios) y en ciertas condiciones produce pseudomicelios.
Candida albicans
Candida krusei
Candida tropicalis
Cryptococcus sp
Rhodotorula
Rhodotorula rubra
Trichosporon
Saccharomyces cerevisiae
Tomada de:Lim, D. 1998. Microbiology. Mc Graw-Hill. Estados Unidos
Pruebas de identificación
AGAR ALPISTE
Es
utilizada
para
aislar Cryptococcus spp y Cryptococcus neoformans, C neoformans es el unico que al metabolizar la Guizotia abyssinica(alpiste) produce melanina originando un color marrón oscuro
El agar glucosado de Sabouraud (SDA) Es el medio de aislamiento por excelencia para la identificación de levaduras.
En ocasiones puede aparecer prolongaciones aracneiformes en la periferia de las colonias. Si se observa un micelio aéreo definido debe considerarse la posibilidad de que se trate de un hongo dimórfico.
Una colonia de aspecto y consistencia mucoide sugiere la formación de capsulas
Las colonias de color rojo-anaranjado o naranja, de aspecto cremoso o rugoso, son características de las especies del género Rhodotorula (del gr. rhodo, rojo), color que manifiesta esta levadura por su riqueza en carotenoides.
Pero no todas las colonias blancas y cremosas son levaduras; las especies de algas aclorofílicas del género Prototheca, tras incubación a 28 °C durante 3-4 días, desarrollan unas colonias blancas cremosas muy parecidas a las producidas por el género Candida
PRODUCCIÓN DE CLAMIDIOESPORAS (MORFOLOGIA EN AGAR HARINA DE MAÍZ) Ayuda a determinar si la levadura produce blastoconidios, artroconidios, seudohifas o clamidioesporas.
Las clamidioesporas en este medio es característico de C. albicans.
Plato de agar harina de maíz para C. albicans
Con resiembra de los cultivos en agar harina de maíz, en 24 a 48 h se observan producción clamidiosporas características de
distribución intercalar o terminal.
Clamidioesporas de C. albicans Fundamento: se la agrega polisorbato para reducir la tensión superficial a fin de permitir el desarrollo de clamidioesporas
Prueba del tubo germinativo
Está prueba es el método más aceptado y económico en el laboratorio clínico para identificación de levaduras. Ya que determina la formación de seudohifas o tubo germinativo en Candida albicans. El tubo germinativo parecen extensiones de las células levaduriformes similares a hifas. Producidos por lo general sin un estrechamiento en el punto origen de la célula.
TUBOS GERMINALES (C. albicans) Fundamento: Las cepas c. albicans forman tubos germinales en medios nutritivos.
AGAR BIGGY Fórmula: Glucosa 10g Extracto de levadura 1g Glicina 10g Citrato de bismuto amónico 5g Sulfito de sodio 3g Cloranfenicol 5g Agar 20g Agua destilada 1000mL pH 6.8 ± 0.2
USOS Fue descrito por Nickerson y se basa en la propiedad de algunas levaduras para reducir las sales inorgánicas. Con este medio se forma sulfuro de bismuto y las colonias de Candida adoptan una coloración que varía de marrón a negro.
CHROMagar Candida Fórmula: Cromopeptona
10g
Glucosa 20g Mezcla cromógena 2g Cloranfenicol 0,5g Agar
USOS Se trata de un medio selectivo empleado para el aislamiento e identificación de las levaduras. Sobre una base de peptona y glucosa incorpora cloranfenicol y una mezcla de sustratos cromogénicos que lo convierten en un medio selectivo y diferencial, que permite la identificación de las diferentes especies de Candidas.
Asimilación y fermentación de carbohidratos Asimilación : valoran la capacidad de la levadura para metabolizar en condiciones aerobias, azúcares, alcoholes y ácidos orgánicos. (Auxonograma) Fermentación: estas pruebas demuestran la capacidad de la levadura, para utilizar determinados carbohidratos, en condiciones anaerobias. (Zimograma
Auxonogra ma
D) Se incuba a 37ºC por 28 a 48 horas.
A) cada cepa de levadura se suspende en solución salina estéril.
B) se introduce en cada tubo un hisopo estéril y se siembra masivamente cada levadura en su respectiva caja.
C) se humedecen los discos de papel filtro, con c/u de las soluciones de los carbohidratos, se deja secar el exceso y se colocan los discos en la caja petri ya sembrada.
E) se reporta el crecimiento de cada levadura alrededor de c/u de los discos.
2.-Un halo de inhibición alrededor del disco indica que no hubo asimilación de azúcar por parte del hongo
F) Se interpreta de la siguiente forma
1.- Un crecimiento indica que hubo asimilación de ese carbohidrato por parte del hongo.
Zimograma
A) Se inocula cada cepa de levadura en cada tubo que contiene el carbohidrato más púrpura de bromocresol.
B) Se incuba a 37º C por 24 a 48 horas, se leen y se reportan los carbohidrat os.
Púrpura de bromocresol (indicador de pH) pH abaix o de 5.2
amar elo
pH acima de 6.8 ⇌
viole ta
C) Se interpreta como cualquier cambio o gas detectado, indica fermentación del carbohidrato
SISTEMAS COMERCIALES PARA LA IDENTIFICACION DE LEVADURAS
SISTEMA API-20
Sistema. uni-yeast-tek
Estos sistemas se basan en la asimilación de carbohidratos Son pruebas muy eficientes. Pruebas costosas
Sistema Uni-Yeast-Tek® (Remel):está constituido por una placa plástica con múltiples compartimentos que contienen un medio con agar para la asimilación diferencial de siete hidratos de carbono. También incorpora una cubeta central con agar harina de maíz-Tween 80 para determinar el crecimiento micelial y la producción de clamidosporas. Además, está provisto de agar urea, agar para la asimilación y reducción de nitratos y de un caldo con extracto de carne al 2,6% (con 0,05% de glucosa) para realizar la prueba del tubo germinal.
Sistema Uni-Yeast-Tek (Remel).
API 20C AUX® (bioMérieux):La galería API 20 C AUX (bioMérieux) se compone de 20 cúpulas con sustratos deshidratados que permiten realizar 19 pruebas de asimilación. Las cúpulas se inoculan con un medio mínimo semisólido y las levaduras sólo se reproducen si son capaces de utilizar el sustrato correspondiente La lectura de la prueba genera un código numérico que facilita la identificación de 34, especies de levaduras distintas
Dos tubos 13 X 100 con caldo maltosado más PBC con campana de Durham
Dos tubos 13 X 100 con caldo sacarosa más PBC con campana de Durham
Dos tubos 13 X 100 con caldo trealosa más PBC con campana de Durham
Dos tubos 13 X 100 con caldo lactosa más PBC con campana de Durham
TUBO GERMINATIVO Colocar 1mL de suero de conejo, carnero o humano en 2 tubos de ensaye.
Inocular en cada tubo una asada de la cepa del hongo
Observar al microscopio
Incubar a 35°C por 3 horas
Tomar una gota de cada tubo, transferirla a un portaobjetos y colocarle y cubreobjetos
PRODUCCION DE CLAMIDIOESPORAS Dividir por la mitad la caja de agar harina de maíz
En cada mitad sembrar cada cepa en forma de “Z”
Incubar a 37°C por 24-48 horas
Observar al microscopio
Agregar a cada muestra una gota de solución salina
Tomar una muestra de cada mitad y colocarla en un portaobjetos
Reportar el tipo de crecimiento
AUXONOGRAMA Suspender cada cepa en solución salina fisiológica estéril
Reportar el crecimiento de cada levadura alrededor de cada uno de los discos.
Introducir en cada tubo un hisopo estéril y sembrar masivamente cada levadura en cada caja con purpura de bromocresol.
Incubar a 37 ºC por 24 a 48 h.
Se interpreta: „
Crecimiento indica asimilación del carbohidrato por parte del hongo. „ Halo de inhibición alrededor del disco indica que no hubo asimilación del azúcar por parte del hongo.
Humedecer los discos de papel filtro estéril (marcar los discos con lápiz), con cada una de las soluciones de carbohidratos.
Dejar secar el exceso y se colocan todos los discos en la caja Petri ya sembrada.
ZIMOGRAMA Se inocula cada cepa de levadura en cada tubo que contiene el carbohidrato mas purpura de bromocresol
Se incuba a 37 ºC por 24 a 48 h, se leen y re3portan los resultados .
Se interpreta como: „
Cualquier cambio o gas desarrollado, indica fermentación del carbohidrato.
