PENGARUH DAYA ANTIMIKROBA ANTISEPTIK SABUN LUX TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus LAPORAN PRAKTIKUM Disusun untuk memenuhi tugas Matakuliah Mikrobiologi yang dibina oleh Drs. H. M. Noviar Darkuni, M.Kes. Oleh: Kelompok 2/ Offering G Denny Fahrudin M. (120342422502) Hestin Atas Asih (120342422468) Lutfiyah Walida (120342422480) Kharirrotun Nafiah (120342422503) Rahmah Sari N. R. (120342422484) Yuslinda Annisa (120342400166)
UNIVERSITAS NEGERI MALANG FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM JURUSAN BIOLOGI Oktober 2014 A. JUDUL Pengaruh Daya Antimikroba Antiseptik Terhadap Bakteri B. TUJUAN
Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui daya antimikroba dari bahan C.
antiseptik tertentu terhadap bakteri. DASAR TEORI Antibakteri adalah senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan atau
mematikan bakteri. Antibakteri dalam definisi yang luas adalah suatu zat yang mencegah terjadinya pertumbuhan dan reproduksi bakteri. Antibiotik maupun antibakteri sama-sama menyerang bakteri, kedua istilah ini telah mengalami pergeseran makna selama bertahun-tahun sehingga memiliki arti yang berbeda. Antibakteri biasanya dijabarkan sebagai suatu zat yang digunakan untuk membersihkan
permukaan
dan
menghilangkan
bakteri
yang
berpotensi
membahayakan (Volk and Wheeler dalam Sari, dkk; 2010). Koloni sel bakteri merupakan sekelompok masa sel yang dapat dilihat dengan mata langsung. Semua sel dalam koloni itu sama dianggap semua sel itu merupakan keturunan satu mikroorganisme dan arena itu mewakili sebagai biakan murni. Penampakan koloni bakteri dalam media lempeng agar menunjukkan bentuk dan ukuran koloni yang khas, dapat dilihat dari bentuk keseluruhan penampakan koloni, tepid dan permukaan koloni (Dwidjoseputro, 1968). Antibakteri dapat menggunakan bahan kimia buatan atau bahan kimia alami yang diambil dari zat pada tumbuhan. Sabun merupakan suatu bahan yang digunakan untuk membersihkan kulit baik dari kotoran maupun bakteri. Sabun yang dapat membunuh bakteri dikenal dengan sabun antiseptik. Sabun antiseptik atau disebut juga dengan sabun obat mengandung asam lemak yang bersenyawa dengan alkali dan ditambah dengan zat kimia atau bahan obat. Sabun ini berguna untuk mencegah, mengurangi ataupun menghilangkan penyakit atau gejala penyakit pada kulit. Sabun antiseptik memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri, baik bakteri gram positif maupun gram negatif (Fitri, Tanpa Tahun). Mekanisme penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri oleh senyawa antibakteri dapat berupa perusakan dinding sel dengan cara menghambat pembentukannya atau mengubahnya setelah selesai terbentuk, perubahan permeabilitas membran sitoplasma sehingga menyebabkan keluarnya bahan
makanan dari dalam sel, perubahan molekul protein dan asam nukleat, penghambatan kerja enzim, dan penghambatan sintesis asam nukleat dan protein. Di bidang farmasi, bahan antibakteri dikenal dengan nama antibiotik, yaitu suatu substansi kimia yang dihasilkan oleh mikroba dan dapat menghambat pertumbuhan mikroba lain. Senyawa antibakteri dapat bekerja sebagai bakteristatik, bakterisidal, dan bakterilitik (Pelczar dalam Sari, 2010). Metode difusi merupakan salah satu metode yang sering digunakan untuk menguji aktivitas antimikroba, metode difusi dapat dilakukan 3 cara yaitu metode silinder, lubang dan cakram kertas. Metode cakram yaitu meletakkan beberapa cakram kertas yang telah diinokulasi dengan bakteri. Tiap cakram direndam pada larutan yang dianggap memiliki zat antibakteri yang akan diuji dan diinkubasi. Setelah diinkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada tidaknya daerah hambatan di sekeliling cakram kertas.
D.
ALAT DAN BAHAN Alat 1. Pelubang kertas 2. Cawan petri steril 3. Jarum inokulasi berkolong
4. Inkubator 5. Pinset
Bahan 1. 2. 3. 4. 5.
E.
Biakan murni Staphyllococcus aureus dalam medium nutrien cair umur 1x24 jam Medium lempeng NA Kertas penghisap Bahan antiseptik (sabun cair) Cotton bud steril
CARA KERJA Menyediakan 2 medium lempeng NA steril
Menginokulasi secara merata biakan murni bakteri (Staphylolococcus aureus) ke medium NA yang berbeda. Inokulasi dilakukan dengan cara mencelupkan ujung cotton bud dalam medium nutrien cair, kemudian dioleskan pada permukaan medium lempeng NA ampai merata secara aseptik.
Membagi medium lempeng NA menjadi dua bagian sama besar dengan memberi tanda pada cawan petri
Membuat larutan antiseptik dari sabun cair dengan konsentrasi larutan 25%, 50%, 75%, dan 100%
Membuat beberapa guntingan kertas penghisap dengan bentuk cakram atau lingkaran (modifikasi dari paper disk). Guntingan kertas penghisap dimasukkan dalam larutan antiseptik berbagai konsentrasi dan direndam selama 10 menit.
Meletakkan guntingan kertas penghisap yang sudah direndam, pada permukaan medium yang sudah diinokulasi bakteri di bagian atas secara aseptik (dengan menggunakan pinset steril). Jarak antar cakram dalam satu medium diusahakan cukup berjauhan, dan tidak terlalu dekat dengan tepi cawan petri.
Menginkubasi bakteri yang sudah diberi perlakuan pada suhu 370C selama 1x24 jam, 1x48 jam, dan 1x72 jam.
Mengukur diameter zona hambat pertumbuhan bakteri yang terdapat di sekeliling kertas penghisap yang telah direndam dalam larutan antiseptik sebelumnya
F. DATA Bahan
: Sabun Lux
Tabel Pengamatan Zona Antimikroba selama 3 x 24 Jam Konsentrasi d(cm) d (cm) Antimikroba 1 x 24 Jam 2 x 24 Jam 100 % 2,5 cm 2,5 cm 75 % 2,8 cm 2,5 cm 50 % 2 cm 2 cm 25 % 1,5 cm 1,5 cm Keterangan: Bahan antiseptik Sabun Lux G.
d (cm) 3 x 24 Jam 2,6 cm 2,6 cm 2,1 cm 1,6 cm
Rata-rata 2,53 cm 2,63 cm 2,03 cm 1,53 cm
ANALISIS DATA Pengamatan daerah antimikroba yang dilakukan pada praktikum ini
menggunakan bahan antimikroba yaitu sabun lux. Pengamatan tentang luas daerah antimikroba dilakukan selama 3 x 24 jam dan konsentrasi bahan antimikroba yang diberikan adalah 25 %, 50 %, 75 %, dan 100 %. Pengamatan ini dilakukan dengan melihat diameter zona hambat pertumbuhan bakteri yang terdapat di sekeliling paper disk yang telah direndam dengan larutan sabun lux dengan konsentrasi yang berbeda–beda. Diameter daerah antimikroba=diameter zona hambat pertumbuhan bakteri = diameter zona jernih termasuk diameter paper disk. Pada pengamatan hari pertama (1 x 24 jam) dengan konsentrasi 25 % setelah diukur, didapatkan diameter daerah antimikroba yang terbentuk adalah 1,5 cm. Pada konsentrasi 50 % daerah antimikroba yang terbentuk 2 cm,
pada
konsentrasi 75 % daerah antimikroba yang terbentuk 2,8 cm dan disini terlihat adanya aliran dari larutan sabun dari paper disk sehingga yang dihitung adalah diameter yang paling luas dari paper disk, dan pada konsentrasi 100 % daerah antimikroba yang terbentuk 2,5 cm. Pada pengamatan ini pada konsentrasi 75 % mempunyai daerah antimikroba paling luas. Pada pengamatan hari kedua (2 x 24 jam) pada konsentrasi 25 % setelah diukur, didapatkan diameter daerah antimikroba yang terbentuk adalah 1,5 cm, yang berarti tidak ada peningkatan diameter daerah antimikroba. Pada konsentrasi 50 % daerah antimikroba yang terbentuk 2 cm, dan pada konsentrasi ini tidak ada peningkatan diameter daerah anti mikroba. Pada konsentrasi 75 % daerah antimikroba yang terbentuk 2,5 cm. Pada konsentrasi 75 % ini terlihat seperti ada
aliran dari larutan sabun pada paper disk sehingga terlihat daerah antimikroba yang terbentuk sangat lonjong sampai ke bagian tepi cawan petri, sehingga yang dihitung untuk luas diameter daerah anti mikroba adalah daerah yang melingkar saja yang berarti pada konsentrasi 75 % ini terdapat penurunan luas daerah anti mikroba. Pada konsentrasi 100 % daerah antimikroba yang terbentuk 2,5 cm. Pada pengamatan ini pada konsentrasi 75 % dan 100 % mempunyai luas daerah antimikroba yang paling luas diantara konsentrasi yang lainnya yaitu 2,5 %. Pada pengamatan hari ketiga (3 x 24 jam) pada konsentrasi 25 % setelah diukur, didapatkan diameter daerah antimikroba yang terbentuk adalah 1,6 cm, yang berarti ada peningkatan diametr daerah anti mikroba 0,1 cm. Pada konsentrasi 50 % daerah antimikroba yang terbentuk 2,1 cm, yang berarti pada konsentrasi ini ada peningkatan diameter daerah anti mikroba cm 0,1. Pada konsentrasi 75 % daerah antimikroba yang terbentuk 2,6 cm, yang berarti ada peningkatan diameter daerah antimikroba sebanyak 0,1 cm. Pada konsentrasi 100 % daerah antimikroba yang terbentuk 2,6 cm yang berarti diameter daerah anti mikroba bertambah 0,1 cm. Pada hari ketiga ini, untuk semua konsenntrasi terdapat kenaikan diameter sebanyak 0,1 cm. Rata–rata diameter zona hambat yang terbentuk pada konsentrasi 25% adalah 1,53 cm, pada konsentrasi 50% adalah 2,03 cm, pada konsentrasi 75% adalah 2,63 cm dan pada konsentrasi 100% adalah 2,53 cm. Maka yang memiliki rata-rata diameter paling lebar adalah pada konsentrasi 75%, hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi 75% merupakan konsentrasi yang paling efektif sebagai antimikroba. H.
PEMBAHASAN Pada praktikum ini, kemampuan suatu antimikroba dalam menghambat
pertumbuhan bakteri akan dibandingkan antar konsentrasi dari antimikroba tersebut melalui uji antimikroba metode cakram kertas atau biasa disebut dengan metode Kirby-Bouer dan mengetahui pengaruh adanya pengaruh waktu penginkubasian. Antimikroba yang digunakanan adalah sabun Lux cair. Pada metode ini cakram kertas saring yang telah dicelupkan ke dalam suatu larutan antimikroba dalam berbagai konsentrasi, selanjutnya diletakkan pada lempengan
agar yang mengandung bakteri yang Stphylococcus aureus. Setelah itu penginkubasian dilakukan dalam suhu kamar selama 3 x 24 jam dan setiap 1x24 jam medium diamati dan diukur zona hambat antimikroba pada tiap-tiap konsentrasi. Pada pengamatan 24 jam pertama zona hambat yang terbentuk dari antimikroba sabun lux dengan konsentrasi 25% adalah 1,5 cm, 24 jam selanjutnya zona hambat yang terbentuk masih 1,5 cm dan pada pengamatan hari terakhir zona hambat yang terbentuk adalah 1,6 cm. Hal ini menunjukkan bahwa sabun lux cair mempunyai pengaruh terhadap pertumbuhan bakteri. Berdasarkan data juga dapat diketahui adanya pengaruh lama penginkubasian terhadap luas zona hambat, pada hari ketiga zona hambat meluas 0,1mm. Pada pengamatan 24 jam pertama zona hambat yang terbentuk dari antimikroba sabun lux dengan konsentrasi 50% adalah 2 cm, 24 jam selanjutnya zona hambat yang terbentuk masih 2 cm dan pada pengamatan hari terakhir zona hambat yang terbentuk adalah 2,1 cm. Jika dibandingkann dengan zona hambat yang terbentuk pada antimikroba 25%, zona hambat yang terbentuk dari sabun lux dengan konsentrasi 50% lebih luas. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi sabun yang lebih tinggi menyebabkan zona hambat antimikroba yang lebih besar atau lebih luas. Pada pengamatan konsentrasi 50% diketahui adanya pengaruh lama penginkubasian terhadap luas zona hambat. Pada hari ketiga zona hambat meluas 0,1 mm. Antibiotik adalah golongan senyawa, baik alami maupun sintetik, yng mempunyai efek menekan atau menghentikan suatu proses biokimia dalam organisme khususnya dalam proses infeksi oleh bakteri (Dwidjoseputro, 2005). Sesuai dengan hasil praktikum yang ditunjukkan, sabun lux memiliki bahan aktif yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Bahan aktif yang terdapat pada sabun lux adalah Benzalkonium Chloride. Benzalkonium Chloride merupakan suatu bahan aktif yang terdapat pada bahan sabun-sabunan atau bahan pencuci lainnya. Fungsi dari bahan aktif Benzalkonium Chloride sebagai disinfektan untuk menghilangkan bakteri dan mikroorganisme yang tidak diinginkan (membunuh kuman). Sifat dari bahan aktif Benzalkonium Chloride
bukan saja merupakan suatu bakteriosatatik melainkan juga merupakan suatu bakteriosida (Dwidjoseputro,2005). Hal ini sesuai dengan pernyataan Dwidjoseputro (2005), zat-zat yang menghambat pembiakan bakteri dengan tidak membunuhnya disebut zat antiseptik atau zat bakteriostatik. Zat yang dapat membunuh bakteri disebut disenfektan, germisida atau bakterisida. Ada disenfektan yang membunuh bakteri dengan tidak merusaknya sama sekali, tetapi zat-zat kimia seperti basa dan asam organik menyebabkan hancurnya bakteri dan mungkin terjadi kehancuran ini akibat dari suatu hidrolisis. Kerusakan bakteri pada umumnya dibagi atas 3 golongan yaitu oksidasi, koagulasi atau penggumpalan protein, depresi dan ketegangan permukaan. Perbedaan konsentrasi dan pengaruh lama penginkubasian terhadap luas zona hambat merupakan faktor penentu apakah zat kimia itu merupakan suatu antiseptik ataukah suatu germisida. Karena untuk menentukan apakah suatu zat tersebut bekerja maksimal adalah takaran pengencerannya (konsentrasi) dan lamanya bakteri terkena zat tersebut. Jika suatu zat dangan konsentrasi 25% merupakan antiseptik, maka jika konsentrasi di bawah itu atau lebih encer lagi maka zat tersebut dapat tidak berfungsi sebagai antiseptik(Dwidjoseputro,2005). Dari analisis data terlihat bahwa luasan wilayah antimikroba dengan konsentrasi 75% dari hari pertama hingga ketiga pengamatan cukup luas, dengan adanya peningkatan diameter pada hari ketiga pengamatan (3 x 24 jam) sebesar 0,1 cm menjadi 2,6 cm. Pada hari kedua (2 x 24 jam) pengamatan seakan terjadi penyempitan wilayah antimikroba jika dibandingkan dengan hari pertama pengamatan (1 x 24 jam). Hal ini mungkin dikarenakan pengamat pada hari pertama dan kedua berbeda sehingga acuan pengukurannya mungkin saja berbeda, atau mungkin disebabkan perbedaan pengukuran pada hari pertama sehingga data yang terambil menjadi seakan terjadi penyempitan wilayah antimikroba. Selain itu mungkin juga bahwa kedua data tersebut benar yang dikarenakan zat antimikroba pada medium sudah menguap, sehingga medium tidak berisi zat antimikroba dan mikroba dapat tumbuh pada tempat tersebut. Pada konsentrasi sabun 100% luasan wilayah antimikroba yang terbentuk mengalami perluasan pada hari ketiga yakni sebesar 0,1 cm dari hari sebelumnya (hari pertama dan kedua pengamatan) yang
diameternya 2,5 cm menjadi 2,6 cm. Dengan demikian pada tahap akhir pengamatan didapatkan hasil akhir yang kurang lebih sama antara konsentrasi sabun 75 % dan 100% yakni diameter wilayah antimikroba sebesar 2,6 cm. Pada 1 x 24 jam setelah penanaman bakteri, bakteri langsung berkembang biak memenuhi hampir keseluruhan permukaan medium NA. Bakteri yang digunakan, Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif yang dapat menyebabkan peradangan pada kulit atas dan menimbulkan bisul bernanah pada kulit ( Cahyani dalam Susilowati, 2012), serta dapat menyebabkan bermacam infeksi seperti jerawat, meningitis, osteomielitis pada manusia dan hewan ( Supardi dan Sukamto dalam Susilowati, 2012). Namun ada wilayah-wilayah yang memang belum dijangkau oleh bakteri, dan ada juga wilayah yang memang tidak dapat ditumbuhi bakteri karena di dalamnya terdapat semacam racun yang membahayakan bahkan membunuh bakteri yang berasal dari sabun yang diberikan pada tahapan perlakuan praktikum ini. Sabun secara umum mengandung bahan aktif yang mampu membunuh bakteri. Bahan aktif ini membunuh dengan beberapa cara, seperti menghambat fungsi asam nukleat atau proses sintesis (flouroquinolone dan rifampin), penghambat sintesis protein (tetracycline dan chloramphenicol), penghambat pembentukan dinding sel (Beta lactam dan vancomycin), dan juga penghambat metabolism bakteri (Sulfonamide dan trimethoprim) (Hendrik, tanpa tahun). Dengan adanya factor penghambat pertumbuhan bakteri tersebut, bakteritidak mampu tumbuh pada medium yang didalamnya terkandung zat aktif dari sabun sehingga luasan wilayah antimikroba tidak malah berkurang, melainkan sedikit bertambah luas pada waktu pengamatan 3 x 24 jam. Peningkatan wilayah antimikroba mungkin saja terus terjadi, ataupun mungkin saja tidak akan terjadi secara terus-menerus. Hal itu dikarenakan bakteri sudah beradaptasi dengan kondisi tersebut sehingga bermutasi dan mutasinya cocok dengan kondisi tersebut atau juga zat aktifnya sudah habis sehingga bakteri dapat tumbuh lagi. Hendrik (tanpa tahun) menyebutkan terjadinya resistensi pada bakteri dapat diakibatkan oleh terjadi perubahan mekanisme obat/zat aktif sehingga menyebabkan berubahnya jalur metabolism, perubahan struktur sel kuman, dan berkurangnya atau berubahnya struktur reseptor pada bakteri sehingga zat aktif tidak dapat masuk ke dalam sel bakteri.
I.
KESIMPULAN
Daya antimikroba pada sabun lux dengan konsentrasi 25%, 50%, 75% dan 100% terbukti dapat membunuh bakteri. Sehingga dapat digaris bawahi semakin tinggi konsentresi bahan antiseptik maka semakin tinggi pula pengaruh penghambatan pertumbuhan bakteri atau semakin tinggi pengaruh dalam membunuh bakteri.
DAFTAR RUJUKAN Dwidjoseputro. 1968. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Malang: Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Dwidjoseputro.2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Malang : Universitas Negeri Malang. Fitri, Lenni. Tanpa Tahun. Kemampuan Daya Hambat Beberapa Macam Sabun Antiseptik Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, (Online) (http://www.google.co.id/url?
q=http://jurnal.unsyiah.ac.id/jbe/article/download/434/591&sa=U&ei=j d8vVKqHBdCkuQTkyoKgDw&ved=0CBcQFjAB&sig2=eVS0Gmdq3 OLVOr9O-hUczQ&usg=AFQjCNEudNWCUKHDYZ-G3hRBOsTVm3U0Q), diakses 4 Oktober 2014. Sari, Novita; Wulandari, Dian Ratri; dkk. 2010. Uji Keefektifan Antimikroba Air Perasan Blimbing Wuluh (Averhoa bilimbi) terhadap Staphylococcus aureus. Malang: Jurusan Biologi Universitas Negeri Malang. S., Hendrik B. tanpa tahun. Antimikroba, (online), (http://www.fkg.unair.ac.id /filer/ ANTIMIKROBA.pdf), diakses pada 5 Oktober 2014. Susilowati, Rina. 2012. Efektivitas Berbagai Merk Sabun Mandi terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus pyogenes. Skripsi. Jember: Universitas Negeri Jember (UNEJ).
DISKUSI 1.
Adakah perbedaan pengaruh masing-masing antiseptik terhadap spesies bakteri? Jelaskan! Dalam praktikum ini hanya menggunakan satu jenis bakteri yaitu Staphyllococcus aureus, dan juga hanya menggunakan satu jenis bahan antiseptik yaitu sabun cair. Perbedaan perlakuan berdasarkan konsentrasi bahan antiseptik yang digunakan, yaitu 25%, 50%, 75% dan 100%, dan perbedaan lama waktu inkubasi bakteri, yaitu 1x24 jam 2x24 jam, dan 3x24 jam. Berdasarkan data pengamatan yang diperoleh, terdapat perbedaan
pengaruh perbedaan konsentrasi bahan antiseptik terhadap diameter zona hambat pertumbuhan bakteri yang terdapat di sekeliling paper disk, semakin tinggi konsentrasi bahan antiseptik maka diameter zona hambat pertumbuhan bakteri yang dihasilkan semakin lebar. Sedangkan lama waktu inkubasi bakteri tidak berpengaruh terhadap diameter zona hambat pertumbuhan 2.
bakteri. Mengapa bakteri yang diuji harus dibiakan lebih dulu dalam medium cair selama 1x24 jam? Selama proses inkubasi 1x24 jam bakteri akan mengalami pertumbuhan paling maksimum, dimana pertumbuhan populasi bakteri memasuki fase log (pertumbuhan eksponensial), sel berada dalam keadaan seimbang, serta masa
3.
dan volume sel meningkat. Mengapa terbentuk zona hambat di sekitar kertas penghisap yang telah direndam dalam antiseptik? Karena kertas penghisap yang telah direndam dalam antiseptik mengandung bahan aktif yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri, dan bahan aktif yang ada dalam kertas penghisap berdifusi ke medium sehingga bakteri
yang
berada
disekitar
kertas
penghisap
akan
terhambat
pertumbuhannya yang menyebabkan terbentuknya zona hambat pertumbuhan bakteri (zona jernih).
