ABSORCIÓN Y ELUCIÓN DE ANTICUERPOS I.-ABSORCIÓN: • •
la muestra problema es el plasma del paciente con mezcla de anticuerpos. las célula célulass para para absorb absorber er los anticu anticuerp erpos, os, son glóbul glóbulos os rojos rojos con antige antigenic nicida idad d conocida (comercial o preparadas en cada laboratorio)
Esta técnica busca separar mezclas de anticuerpos del plasma de un paciente que este sensibilizado con varios aloanticuerpos o que posea una combinación de aloanticuerpos más autoanticuerpos. El mecanismo para hacer esto es mediante el uso de células con antígenos antígenos conocidos que puedan atraer atraer alguno de los anticuerpos anticuerpos presentes presentes en la mezcla dejar otros libres para posteriormente poder identi!icar cada uno de ellos.
Uso de la absorció •
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"nacti "nactivar var autoant autoanticue icuerpo rposs !ríos !ríos o calien calientes tes,, a !in de permit permitir ir la evalua evaluació ción n de aloanti nticuer uerpos, los que que pue pueden ser enmascara arados por por los primero eros. anemias as hemolí hemolític ticas as por anticuer anticuerpos pos !ríos !ríos es mu potente potente la !"da#e$o: en anemi reacción de los anticuerpos, a sea en el plasma o en los glóbulos rojos del mismo paciente es mu di!ícil compatibilizar trans!usiones. En algunos de estos casos, además e#isten mezclas con aloanticuerpos de signi!icancia clínica que están siendo enmascarados por la !uerza de la aglutinación de las aglutininas !rías, entonces, se tiene que brindar un medio en que los anticuerpos !ríos se peguen a glóbulos rojos dejen en el resto del plasma, los otros anticuerpos (si es que los hubiere), de esta !orm !orma, a, se pued puedee iden identi ti!i !ica carr real realiz izar ar las las prue prueba bass de comp compat atib ibil ilid idad ad sin sin inter!erencia. E#trae E#traerr anticu anticuerp erpos os $ % de sueros sueros que serán serán usados usados como reacti reactivos vos inerte inertes. s. !"da#e$o: en algunas ocasiones se necesita trabajar con plasma inerte, si se tiene un plasma $%, éste podría servir como plasma inerte, a que no tiene los anticuerpos $ %, pero en caso de no disponer, se puede absorber estos anticuerpos naturales sobre células que e#presen el antigeno $ o % seg&n corresponda obtener así, un plasma libre de anticuerpos para poder usarlo como reactivo inerte o como control negativo en laboratorio de rutina. 'ara 'ara separ eparar ar mues muestr tras as con con mezcl ezclas as de anti anticu cuer erpo poss en plas plasma ma o elua eluado dos. s. !"da#e$o: si aparece un rastreo de anticuerpos irregulares positivo luego de intentar identi!icar estos anticuerpos nos damos cuenta que aparentemente se está en presencia de una mezcla de anticuerpos a nticuerpos no se puede identi!icar por descarte cada uno de ellos, se puede absorber alguno de los anticuerpos posibles, !rente a células que tengan alguno de los antígenos a los que sospechamos están dirigidos alguno de los anticuerpos de la mezcla, de esta !orma, intentamos dejar un solo anticuerpo en el plasma del paciente para poder identi!icar. En el caso del eluado (procedimiento contrario a la absorción), es decir, cuando hemos separado anticuerpos que estaban
pegados a células problema queremos saber contra qué están dirigidos, los en!rentamos a células con antígenos conocidos para que se peguen a ellas comprobar así su especi!icidad. 'rocedimiento general •
Elegir g rojos que e#presen el antígeno sobre el cual sospechamos está dirigido el anticuerpo. avar * a + veces con '%. (veri!icar que estas células no estén sensibilizadas previo a la absorción haciendo un - directo)
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En el <imo lavado e#traer el sobrenadante con una pipeta para no perder células por inversión, además a este sobrenadante se le debe en!rentar con células testigos $ % para comprobar que no tenga anticuerpos anti $ o %, seguir con los lavados hasta que este paso dé negativo.
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$gregar la muestra del paciente (plasma con mezcla de $c) en igual volumen a las células que tenemos lavadas, mezclar suavemente por inversión. (Ej ml /0 lavados 1 ml 'lasma problema).
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"ncubar por *2 a 32 minutos a la temperatura óptima del anticuerpo a absorber. 4ezclar cada cierto tiempo
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-entri!ugar por 5 minutos a altas revoluciones (ej *222 rpm)
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6rabajar con el plasma haciendo un -oombs indirecto para probar que el anticuerpo que se sospechaba se pegó a las células.
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e puede hacer un - directo para comprobar la sensibilización de las células(absorción)
II.- ELUCION 7e !orma habitual, las técnicas de elución absorción son utilizadas en conjunto para resolver problemas en laboratorio de inmunohematología. El objetivo de toda elución es inter!erir con las !uerzas no covalentes que mantienen unido el complejo $g8$c. Estas inter!erencias pueden ser !ísicas (calor, ultrasonido, congelamiento, descongelamiento, detergentes, etc.), o una acción química directa sobre las !uerzas de unión del complejo $g8 $c, usando, por ejemplo, alteración de 'h o concentraciones de sal.
USO u maor uso se desarrolla en estudios donde se necesita remover $c pegados al glóbulo rojo, para luego utilizarlos con di!erentes !ines, ejemplo
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7iagnóstico en laboratorio de la destrucción inmune de eritrocitos, a sea por presencia de aloanticuerpos o autoanticuerpos. 'uri!icar anticuerpos de grupo sanguíneo 7etectar antígenos débiles -oncentrar anticuerpos 0etirar anticuerpos de una mezcla de ellos 7ejar eritrocitos libres de $c que puedan estar inter!iriendo en la tipi!icación sanguínea (muestras con -oombs directo +1)
-9:"7E0$-"9:E El tipo de anticuerpo que se desea eluir nos dirá que tipo de elución utilizar al momento de intentar trabajar con una muestra en particular.
El"ció %or calor e aplica pre!erentemente en el estudio de la en!ermedad hemolítica del recién nacido por incompatibilidad $%9, en la elución de anticuerpos "g4 de los eritrocitos (Ejemplo en!ermedad por aglutininas !rías). En cada método la solución salina sobrenadante del <imo lavado se analiza en paralelo con el eluído, para determinar si la reactividad encontrada en éste <imo representa la recuperación de anticuerpos de la super!icie célular, o es el resultado de la contaminación por suero residual.
El"ció %or cloro&or#o e usa en el estudio de un -oombs directo positivo asociado a anticuerpos reactivos en caliente ("g/), a sean auto o aloanticuerpos. En conjunto con técnicas de absorción, sirve para separar mezclas de anticuerpos "g/ presentes en un suero.
El"ció 'cida e usa en estudios similares a la elución por cloro!ormo, es decir, para separar anticuerpos de tipo "g/ que estén pegados a glóbulos rojos.
