INFORME PRACTICO NOMBRE: Yomara Bautista Camacho MATRICULA: 10647 DOCENTE: Andrea Schnorr Vargas NOTA: MATERIA: Enzimología y T. de las Fermentaciones NOMBRE DE LA PRACTICA: ADN de las levaduras Nº PRACTICA: 7
FECHA: 16/05/14
OBJETIVOS: OBJETIVO GENERAL:
Realizar en laboratorio la extracción del ADN de levaduras.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Realizar el rompimiento de la pared celular de la levadura.
Disolver el ADN y realizar la desnaturaliz desnaturalización ación de la levadura.
Observar la precipitación del ADN al fondo del vaso.
INTRODUCCION: La información que permite vivir a los seres vivos está contenida en los ácidos nucleícos. Estos son macromoléculas compuestas por nucleótidos, que tienen en su estructura un azúcar (ribosa o desoxirribosa), una base nitrogenada (adenina, guanina, citosina, timina, uracilo) y un grupo fosfato. En principio, según se gún el azúcar que forma su esqueleto se s e distinguen dist inguen dos tipos de ácidos á cidos nucleícos: nucle ícos: el ADN, con desoxirribosa y el ARN, con ribosa. El ADN contiene la información genética necesaria para la síntesis de las proteínas que forman los seres vivos y llevan a cabo todos los procesos fisiológicos de los seres vivos. El ARN tiene diversas funciones siendo una de las principales el transporte de la información desde el ADN hasta la maquinaria donde se producen las proteínas. A nivel estructural encontramos que mientras el ADN ADN se encuentra mayoritariamente formado por por una doble doble hélice con dos hebras complementarias, el ARN está formado por moléculas de una sola hebra que se pliegan sobre sí mismas adquiriendo estructuras internas.
En su estructura secundaria, y de acuerdo a los diversos estudios fisicoquímicos, el ADN en solución acuosa ha demostrado que se trata de un polímero de elevado peso molecular (5 x 106) y que ofrece una configuración más bien rígida y distendida. Entre las consecuencias de su elevado peso molecular y de la rigidez de sus moléculas se destaca la elevada viscosidad de las soluciones acuosas de ADN. Una solución de ADN tiene una densidad mucho mayor que la del agua. Otra consecuencia de las citadas propiedades de la molécula de ADN es la gran facilidad con que las fuerzas de fricción reducen su peso molecular por rotura de su cadena. Es prácticamente imposible obtener a partir de material biológico ADN sin que tenga cierto grado de fricción, por lo que es muy probable que los pesos moleculares del ADN aislado tengan poco que ver con el tamaño de la molécula del ADN in vivo. Debido a que el ADN es la molécula que almacena la información precisa para que un ser vivo pueda llevar a cabo todas las funciones que necesita, su aislamiento de células y tejidos es el primer paso en muchas investigaciones en biología. El aislamiento del ADN también es empleado en diversos campos como la medicina, la biotecnología o la criminología para obtener mejores terapias, mejorar cosechas o identificar individuos. Cuando se habla del ADN hay que diferenciar el ADN genómico, que se encuentra en el núcleo y contiene la mayoría de los genes, de los ADNs extranucleares, que se encuentran en la mitocondria y el cloroplasto y contienen la información de ciertas proteínas necesarias para el funcionamiento de esos orgánulos celulares. En el presente informe se muestra un método de extracción del ADN de levadura en cuatro fases: 1. 2. 3. 4.
Rotura de las células de levadura. Homogeneización del extracto en presencia de detergente. Desnaturalización de las proteínas ligadas al ADN. Precipitación del ADN con etanol.
PROCEDIMIENTO DE ANALISIS ADN de las Levaduras:
Pesar 120 gr de levadura Añadir 150ml de agua fria a la levadura Añadir una cucharada de sal Añadir dos chorros de limon Agitar suavemente Colar Repetir filtrado (conservar la pulpa) Preparar 150ml de agua fria + 1 cucharada de sal+ 3 cucharadas de alcohol + 2 gotas de detergente Agregar a la pulpa y mezclar Revolver suavemente por 20 minutos Agregar 3 cucharadas de sal y agitar 10 minutos Dejar reposar
Conservar liquido Diluir el liquido con 3 veces su volumen de alcohol Observar el ADN precipitado en el fondo del vaso
N®
1
2
ANALISIS Y RESULTADOS NOMBRE DEL ANALISIS RESULTADOS
ADN de las Levaduras
Se observo: El ADN de las levaduras en forma de finas hebras blancas.
ANALISIS DE RESULTADOS
El método de extracción del ADN de levadura permitió la obtención pequeñas y finas hebras blancas.
El primer paso de la extracción permitió la ruptura de las células de levadura por un medio de la adición de sal y limón. El detergente permitió la degradación de los componentes celulares para permitir la liberación del ADN. Finalmente la adición de etanol (un disolvente con polaridad media) permite la precipitación del ADN.
Este extracto representa en su mayor parte ADN, sin embargo, es muy probable que esta muestra no se encuentre totalmente pura y que contenga cantidades considerables de impurezas como ARN.
Debido a esto el método presentado en la presente práctica podría ser utilizado como un método de extracción inicial siendo necesarios otros procedimientos de purificación para obtener un ADN mucho más puro.
CONCLUCIONES
Se realizó una práctica de extracción y caracterización de ADN a partir de la levadura.
El primer paso de la extracción permitió la ruptura de las células de levadura por un medio de la adición de sal y limón. El detergente permitió la degradación de los componentes celulares para permitir la liberación del ADN. Finalmente la adición de etanol (un disolvente con polaridad media) permitió la precipitación del ADN mediante la desnaturalización de la levadura.
El ADN obtenido se presento en forma de fi nas hebras blancas.
CUESTIONARIO 1. ¿Qué es ADN como está formado y qué función cumple?
El ADN es una molécula formada por unidades de nucleótidos. Cada nucleótido está formado por: Un grupo fosfato Un azúcar llamado desoxirribosa Una base nitrogenada que puede ser adenina, timina, guanina o citosina Su función es guardar y trasmitir la herencia genética de progenitores a descendientes.
2. ¿Cuál es la importancia de ADN en las levaduras de uso alimentario? Las levaduras transgénicas se usan principalmente en la industria alimentaria, en la producción de aditivos alimentarios, aminoácidos, péptidos, ácidos orgánicos, polisacáridos y vitaminas. 3. ¿Cuántas moléculas de ADN tienen las levaduras?
Las levaduras en estado haploide tienen 16 cromosomas y por tanto 16 moléculas de DNA, pero también existe un estado diploide que tiene 32 cromosomas y por tanto 32 moléculas de DNA.
4. ¿Qué utilidad práctica tiene sintetizar en laboratorio los cromosomas de la levadura de la cerveza?
Una de las utilidades practicas que tiene la síntesis de los cromosomas de la levadura de la cerveza, es incrementar la eficiencia de la levadura eliminando los genes no esenciales. Ya que muchos de sus genes son prescindibles y suponen un consumo de energía innecesario.
