Manual d'usuari de la pistola SigSauer Mosquito, en calibre 22lr, idioma castellàDescripción completa
Descrição completa
Science Investigatory Project on NeemFull description
Electronic mosquito repellent circuit is projectFull description
PROYECTO DE CREAR UN ATRAPA MOSQUITADescripción completa
el ADN de la empresa toyotaDescripción completa
Descripción completa
cuantidficacion adnDescripción completa
Descripción completa
BIOTECNOLOGADescripción completa
geneticaDescripción completa
Descripción: El documento habla sobre el descubriento del ADN, su estructura y muchas otras características.
Descripción: El Mosquito, periódico semanal independiente, satírico, burlesco y de caricaturas, argentino, su primer número apareció por primera vez el 24 de mayo de 1863 y el último el 16 de julio de 1893.
Descripción: El Mosquito, periódico semanal independiente, satírico, burlesco y de caricaturas, argentino, su primer número apareció por primera vez el 24 de mayo de 1863 y el último el 16 de julio de 1893.
Guidelines Prevention of Mosquito Breeding
Descripción: El Mosquito, periódico semanal independiente, satírico, burlesco y de caricaturas, argentino, su primer número apareció por primera vez el 24 de mayo de 1863 y el último el 16 de julio de 1893.
Full description
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS PROGRAMA DE BIOLOGÍA PROTOCOLO PARA PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN DE MOSQUITOS CON UN MÉTODO SIN FENOL CRISTIAN MORENO C, ESTER GUERRA S, MARIA J PATERNINA, MARIA P VARGAS.
RESUMEN El procedimiento de extracción del ADN geonómico sigue ciertas pautas para su correcta purificación que son muy diferentes a los empleados en la purificación de proteínas. Existen varias técnicas que se utilizan para la extracción de ADN; en esta prctica se tra!a"ó con el método de extracción de ADN sin fenol# en donde lo primero en $acerse fue quitar la ca!eza a los mosquitos de!ido a que esta puede contaminar la muestra dado que posee parsitos. %ueg %uego o de ya tene tenerr & mosq mosqui uito tos s en el tu!o tu!o de Eppe Eppend ndor orff lo sigu siguie ient nte e es el rompimiento de mem!ranas con solución de lisis y ayudar con el maceramiento# posteriormente precipitación de proteínas por medio de de las altas concentraciones de sales como acetato de potasio para la precipitación de estas y posteriormente precipitar ADN con etanol a!soluto frio ya que este ayuda a purificar la muestra de ADN eliminando las proteínas proteínas presentes al solu!ilizarlas solu!ilizarlas en la misma solución de etanol# adems elimina impurezas orgnicas al solu!ilizarse en el mismo por ser un compuesto orgnico el etanol el etanol $ace que el ADN se des$idrate# es decir# pierda contacto con las moléculas de agua que lo rodean y por eso al final lo que $acemos es re$idratarlo con el !uffer 'E.
Palaba! "la#$! ( Extracción de ADN# fenol# mosquito# DNA. INTRODUCCIÓN El cido cido desoxir desoxirri!o ri!onuc nucleic leico o o ADN ADN )DNA* es la molécula que guarda el código genético de todas las células. +in +in import importar ar que que el organ organism ismo o sea sea multicel multicelular ular o unicelul unicelular ar## eucario eucariota ta o procariota# todos tienen el DNA como ve$ículo de su código genético. %a extracción del ADN es el primer paso de muc$as técnicas
moleculares. A pesar de su aparente sencillez# a menudo existen pro!lemas con el rendimiento de los métodos# la calidad del ADN o!tenido encontrndose posi!les contami tamin nante ntes# degrad radacio acione nes s parc parcia iale les. s. Así como como el tiem tiempo po de duración duración de los protocolos. El empleo del nitrógeno liquido como variante en los protocolos de extracción de ADN
de diferentes especies $a permitido aumentar el rendimiento y la calidad del material genético o!tenido ),ann et al. -/; 0ang et al. 1223; Nic$ols et al. 1223*. En varias familias de insectos esta variante $a sido empleada# demostrndose adems del aumento del rendimiento su posi!le empleo en técnicas moleculares compro!ndose la calidad del ADN resultantes. %a extracción de ADN de una muestra celular se !asa en el $ec$o de que los iones salinos son atraídos $acia las cargas negativas del ADN# permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. +e empieza por lisar )romper* las células mediante un detergente o un !uffer de lisis# vacindose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento# el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares( A4N# car!o$idratos# proteínas y otras sustancias en menor proporción. %as proteínas asociadas al ADN# de gran longitud# se $a!rn fraccionado en cadenas ms peque5as y separadas de él por acción del !uffer de lisis. +ólo queda# por tanto# extraer el ADN de esa mezcla tampón y detergente# para lo cual se utiliza etanol frio# quien actua en la purificación del ADN.
OBJETIVOS
•
•
Extraer DNA de mosquito sin el uso del fenol. Aprender las pautas para la extracción de DNA en insectos.
1 ,osquitos 6inza 7isturí Estereoscopi8 'u!o eppendorf -.9ml 7uffer de lisis :ncu!adora Acetato de potasio ,acerador peque5o ielo Etanol a!soluto Etanol frio al <2= 7uffer 'E Nevera
METODOLOGIA &. 4ealización de la disección de las patas alas y la ca!eza de un mosquito. '. +e colocar la zona a!dominal# las patas y las alas del mosquito en un tu!o eppendorf de -.9 ml.
(. Adicionamos 92 ul de !uffer de lisis para $omogenizar la muestra. ). ,aceramos !ien# $asta que la muestra $omogenice.
*. :ncu!amos a >9? por &2 minutos.
+. Agregar -9 ul de acetato de potasio y mezclar suavemente por inversión.
. :ncu!ar durante &2 minutos
en
$ielo. -. @entrifugar a -&222 r. p. m. por -9 minutos# a 3?@. . 6asar el +ND a un tu!o nuevo.
&/.
Adicionar -22l de etanol a!soluto# mezclar suavemente por inversión y de"ar a temperatura am!iente de 9 a > minutos# descartar el +ND y lavar el !otón con -22ul de etanol frio al <2=.
&&. @entrifugar a -&222 r. p. m. por 9 minutos# a 3?@ y descartar el +ND.
&'. De"ar secar el pellet 12 min y resuspenderlo en -92 ul de !uffer 'E por -2 minutos y almacenar a B12?@.
ANALISIS DE RESULTADOS En un procedimiento de la!oratorio los materiales son muy importantes y cada uno cumple un papel específico en nuestros procedimientos. En esta prctica se realizar un método en el cual no usaremos fenol ya que si lo utilizramos necesitaríamos compuestos orgnicos tóxicos para la salud de los seres $umanos y para el am!iente. 6ara realizar la extracción de ADN de moquito en este caso se utilizaron & de ellos # a los cuales se en primera instancia a cortarles la ca!eza ya que esta posee parsitos los cuales
pueden contaminar la muestra; se o!tuvo ADN de mosquito mediante el método de altas concentraciones de sales. +e utilizó !uffer de lisis# cuya función es romper la mem!rana celular y nuclear# permitiendo esto la li!eración del ADN. 6osteriormente se le adiciono acetato de potasio )Ac0* el cual precipita las proteínas# y su eficiencia aumenta al incu!arlo en $ielo. El Ac0 es una sal neutra; se a5ade una sal para disminuir la solu!ilidad de las proteínas por incremento de la fuerza iónica del solvente. Después de la adición de cierta cantidad de sal# se esta!lece una competencia entre los grupos cargados y polares de la proteína y los iones de la sal )en mayor cantidad* por las moléculas de agua que disminuye la capa de solvatación alrededor de la molécula proteica# sus grupos $idrofó!icos superficiales se exponen y se favorece el esta!lecimiento de interacciones intermoleculares# la agregación y por tanto# la precipitación. %uego se centrifugo y se o!tuvo un precipitado !lanco. 6osteriormente en otro tu!o eppendorf que contenía etanol a!soluto se le adiciono el so!renadante del tu!o que se $a!ía centrifugado; luego se centrifugo el tu!o que contenía el ADN con alco$ol a!soluto esto con el fin de precipitar el
ADN. 6osteriormente la muestra es lavada y precipitada con etanol frio al <2= del cual el 32= es etanol y el &2 = es agua. El etanol se encarga de precipitar el ADN# pues este# es solu!le en agua )y# por tanto# invisi!le a nuestros o"os# pues cada molécula est rodeada de agua y nuestra vista no perci!e moléculas individuales de ADN* pero insolu!le en etanol# lo cual origina que en presencia de éste se aglutine o Cse precipiteC. Al aglutinarse# el ADN forma partículas macroscópicas y se $ace visi!le. inalmente el ADN es resuspendido en !uffer 'E# el cual es una solución amortiguadora del p# con el fin de proteger el DNA. %a capacidad amortiguadora del !uffer depende del 'ris# mientras que el ED'A es el responsa!le de proteger a los cidos nucleicos inactivando a las DNAsas. El ED'A logra esta inactivación actuando como quelante de cationes divalentes como el @a1 y el ,g1 los cuales son indispensa!les para el funcionamiento de estas enzimas. 6or Fltimo se almaceno a B12 2@ para su conservación.
CONCLUSION Durante este procedimiento se $a logrado familiarizarse un poco con los procesos de extracción de ADN# y entendemos que como en todo proceso se siguen una serie de pasos o protocolos los cuales ayudan a un eficiente resultado. Este proceso tuvo
unos puntos claves rompimiento de mem!ranas# precipitación y purificación. %a solución de lisis rompe las mem!ranas celulares#en la presipitacion actuando el acetato de potasio de!ido a que es una sal neutra y la purificación por medio del etanol y re$idratación por el !uffer 'E.
BIBLIOGRAFIA •
•
•
•
A%7E4'+ 7.# G8N+8N A.# %EH:+ G.# 4A ,.# 487E4'+ 0.# HA%'E4 6. 7iología molecular de la célula. 8mega. 3IEdición )1223* ,iller# +.A.# DyJes# D.D. and 6olesJy# .. )-//* A simple salting out procedure for extracting DNA from $uman nucleated cells. Nucl. Acids 4es. -># -1-9.
Kerald Jarp. 7iología celular y molecular. ED ,cKraLill -/.6g. <1
7iología ,olecular y erencia. 4o!ert A. Hallace# GacJ %. 0ing#Kerald 6. +anders.# -a edición. Editorial 'rillas. ,éxico --( pgina<# /.