Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al
medio base. Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido enr iquecido al cual se ha añadido unamezcla de tres antibióticos antibióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. La sangre de carnero es la más adecuada para la preparación de Agar Sangre y Agar Chocolate. Comúnmente se utiliza la sangre de carnero entre 5 - 10% como un medio de enriquecimiento nutritivo en la preparación de medios de cultivo. Éste es utilizado principalmente para el crecimiento, identificación y observación de las reacciones hemolíticas causadas por algunas bacterias con importancia clínica. El Agar chocolate lleva Hemoglobina que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o Hemina termoestable. Otros factores, en particular el factor V (dicotín-adenina (dicotín-adenina nucleótido) termosensible ter mosensible,, que no se encuentran en el Agar chocolate pueden aportarse en una mezcla químicamente definida: el PolyViteX. El Agar chocolate con PolyViteX permite el cultivo de la mayor parte de los gérmenes encontrados en patología humana o veterinaria. La siembra de líquidos cefalorraquídeos, pus, resiembra de hemocultivos, etc., es favorable en este medio, pero está particularmente indicado para aisla miento de las Neisserias patógenas y de los Haemophilus. Aislamiento e identificación de Haemophilus de Haemophilus Los microorganismos del género Haemophilus se cultivan en Agar chocolate con PolyVitex. Como en el caso del gonococo el cultivo es rápido y abundante sobre todo en atmósfera rica en C02. Estos gérmenes encuentran en este medio los factores X y V necesarios para su crecimiento. crecimie nto. El diagnóstico de la serie s erie al respecto puede conducirse de la manera siguiente: Si se siembra en cuatro medios diferentes: - Agar Trypcase-soja que no contenga ni factor V, ni factor X - Agar Trypcase-soja con PolyViteX (factor V)
- Agar chocolat (factor X) - Agar chocolat con Pol it
(factores X y V)
El recuadro que se da a continuaci n indica los resultados obtenidos en estas condiciones con los pr inci pales Haemophilus: H. parainf luenzae crece en Trypcase so ja con PolyViteX (V) y en chocolate con PolyViteX (V yX) H. aphrophilus crece Chocolate (X) y en chocolate con PolyViteX (V yX) H. inf luenzae, H. haemolyticus, H. aegi ptius crecen en los 4 medios otras pruebas que ayudan a d iferenciar los: H. aegi ptius aglutina hematies humanos (prueba en por ta), H. inf luenzae no los aglutina H. haemolyticus da hemólisis en Agar con 5% de sangre de caba llo Debido a que Haemophilus inf luenzae no crece en los medios rutinar ios para efectuar anti biograma, se necesita preparar unmedio especial que además de la base de Mueller-Hinton contiene 15ug/mL de beta-NAD, 15ug/mL de hematina bobina, 5mg/mL de extracto de levadura y un pH de 7.2 a 7.4. De acuerdo con el Comit Nacional de Estándares en Laborator io Clínico (NCCLS-USA) el Agar chocolate no debe usarse para efectuar anti biograma de Haemophilus. A
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Recuento del inoculo b acteriano utilizado
El recuento del inóculo se realiza con el f i n de determinar la exactitud de la concentración de bacter ias de la suspensión utilizada en la siembra. Extienda el inóculo en cada ca ja de agar con un bastón de vidr io o con asa bacter iológica, tenga cuidado de no tocar los bordes de la ca ja, ya que es dif í cil contar las colonias que crecen en los bordes. Incube las ca jas en 5% de C 2, de 18-20 horas a 35ºC. 0
Para realizar la lectura después del per íodo de incubación, cuente las colonias aisladas en cada una de las placas, actividad que puede realizar con ayuda de un cuenta-colonias. Si alguna de las placas presenta demasiadas colonias, informe el recuento como "demasiadas para contar". Para calcular la cantidad de bacter ias en cada placa, multi plique el número de colonias en cada una por el factor de dilución y por la inversa del volumen de inoculo utilizado y expresar el conteo como UFC/ml. # UFC / ml = # de colonias * factor de dilución ml sembrados en la placa
