B0217505
B0217506
O.F. Medio Basal de Hugh & Leifson USO
Medio de cultivo utilizado en las pruebas bioquímicas de identificación bacteriana en base al metabolismo oxidativo-fermentativo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram negativas, a la movilidad y producción de gas. FUNDAMENTO
El medio basal O.F. fue desarrollado por Hugh y Leifson para evidenciar la importancia del significado taxonómico del metabolismo oxidativo-fermentativoo de los hidratos de carbono por las bacterias oxidativo-fermentativ Gram negativas. Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F. O.F. conteniendo el mismo hidrato de carbono, y uno de los 2 tubos es sellado con vaselina o parafina antes de la incubación, se puede diferenciar correctamente el metabolismo oxidativo o fermentativo así como la no utilización de un hidrato de carbono por la bacteria en estudio. En el medio de cultivo, el agregado del hidrato de carbono en concentración al 1%, permite que los microorganismos utilicen para su desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aeróbicas metabolicen la tripteína presente con la consecuente producción de reacción alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez producida por un microoganismo oxidativo. El fosfato dipotásico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH que vira al color amarillo en medio ácido luego de la oxidación o fermentación del hidrato de carbono. El contenido de agar otorga la propiedad de ser un medio semisólido y permite determinar la movilidad y la distribución de los productos ácidos. La glucosa es el hidrato de carbono mas frecuente que se agrega al medio basal O.F., pero también pueden agregarse otros azúcares (lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o xilosa) según el metabolismo del microorganismo microorganismo en estudio. CONTENIDO Y COMPOSICIÓN
Código B0217505: envase x 100 g. Código B0217506: envase x 500 g.
FÓRMULA (en gramos por litro) TRIPTEÍNA TRIPTEÍN A ....... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...... ...2.0 . 2.0 CLORURO DE SODIO.........................................................................................................5.0 SODIO.........................................................................................................5.0 FOSFATO FOSFA TO DIPOTÁSICO ................................................................................... .........................................................0.30 ...............0.30 AZUL DE BROMOTIMOL .......................................................... ..............................................................................0.03 ....................................0.03 AGAR ............................................................................... ................................................................................... ................................................................2.50 ......................2.50 pH FINAL: 7.1 ± 0.2
INSTRUCCIONES
Suspender 9.8 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente fr ecuente y hervir 1 minuto para disolución total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Agregar de manera aséptica el hidrato de carbono en estudio en concentración final al 1%. Distribuir en tubos estériles y dejar solidificar en posición vertical. Nota: alternativamente agregar el hidrato de carbono previo a
la esterilización. En este caso se debe esterilizar en autoclave a 118°C durante 10 minutos. CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCT P RODUCTO O
Medio de cultivo deshidratado: color beige verdoso, homogéneo, libre deslizamiento. Medio de cultivo preparado: color verde azulado. ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC. Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC. PROCEDIMIENTO Siembra
Inocular, por cada hidrato de carbono que se use y para cada microorganismo en estudio, 2 tubos conteniendo el medio O.F. O.F. y el mismo hidrato de carbono. Rotular un tubo con la inscripción: “Abierto” y otro tubo con la inscripción: “Cerrado” (sellado). A partir de un cultivo puro de 18-24 horas del microorganismo en
HOJA 1 DE 3
O.F. Medio Basal de Hugh & Leifson estudio, preparar un inóculo poco denso y sembrar utilizando aguja de inoculación. Picar hasta aproximadamente 0.6 mm del fondo. Agregar al tubo “cerrado” (sellado) 1 o 2 ml de vaselina o parafina fundida estéril, para excluir el oxígeno. Luego, tapar ambos tubos con las tapas apropiadas. Incubación
En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 48 horas. Algunos microorganismos requieren hasta 4 días, y otros hasta 14 días de incubación. INTERPRETACIÓN DE LOS RESU LTADOS
El uso del hidrato de carbono, ya sea por fermentación u oxidación, produce acidez en el medio, con el consecuente viraje del color verde al amarillo. Microorganismos oxidativos del hidrato de carbono en estudio: producen una reacción ácida solo en el tubo “abierto”. Presen-
tan poco o nulo desarrollo y ausencia de producción de ácido en el tubo “cerrado”. Microorganismos fermentadores del hidrato de carbono en estudio: producen una reacción ácida en ambos tipos de tubos. Microorganismos que no utilizan el hidrato de carbono en estudio: no producen cambios ninguno de los 2 tubos, los cuales
Microorganismos
OF
OF
Medio Basal
Medio Basal
(Tubo abierto)
(Tubo Cerrado)
(Tubo Abierto)
(Tubo cerrado)
K
K
AG
AG
K
K
AG
AG
K
K
A
K
K
K
A
A
K
K
A
K
Escherichia coli ATCC 25922 Escherichia coli ATCC 8739 P. aeruginosa ATCC 27853 Shigella flexneri ATCC 12022 A. baumannii ATCC 19606
OF con
OF con
1% de glucosa 1% de glucosa
A: reacción ácida: medio color amarillo. K: reacción alcalina: medio color verdo o verde azulado. G: producción de gas.
CONTROL DE ESTERILIDAD Medio sin inocular
RESULTADO Sin cambios
permanecen verdes. MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS
Se debe informar: producción de ácido (A), ácido con gas (AG), alcalino (K) o sin cambio (-).
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requerimiento.
Las reacciones típicas son las siguientes: PRECAUCIONES REACCIÓN Oxidación Fermentación Sin oxidación o fermentación
TUBOS CON REACCIÓN Abierto
TUBO ABIERTO Amarillo (A)
TUBO CERRADO Verde (-)
Cerrado Cerrado Ninguna
Amarillo Amarillo (AG) Azul o Verde (-)
Amarillo (A) Amarillo (AG) Verde (-)
CONTROL DE CALIDAD
- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo. - No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o dañado. - No utilizar el producto si existen signos de contaminación o deterioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento. - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto. - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad establecidadas por el laboratorio.
Medio de cultivo basal (sin hidratos de carbono) y suplementado con 1% de glucosa.
HOJA 2 DE 3
O.F. Medio Basal de Hugh & Leifson - Las características del producto pueden alterarse si no se conserva apropiadamente. - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del mismo según reglamentaciones vigentes.
- MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identificationmaintenance of medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore, Md. - MacFaddin. 2000. Biochemical tests for identification of medical bacteria, 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.
REFERENCIAS
- Hugh, R. and Leifson, E. 1953. The taxonomic significance of fermentative versus oxidative metabolism of carbohydrates by various Gram negative bacteria. J. Bacteriol. 66:24.
INDICACIONES AL CONSUM IDOR
Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento. Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
0 0 . V E R 0 1 0 2 / 2 0
SÍMBOLOS UTILIZADOS
DIAGNÓSTICO IN VITRO
CÓDIGO Nº
ELABORADOR
LABORATORIOS BRITANIA S.A. LOS PATOS 2175 (C1283ABI) CABA - ARGENTINA TEL/FAX 54 11 4306 0041
ESTÉRIL
Nº DE DETERMINACIÓNES
LOTE Nº
FECHA DE VENCIMIENTO
LÍMITE DE TEMPERATURA
INSTRUCCIONES DE USO
HOJA 3 DE 3
