Introducción El proc proces eso o dige digest stiv ivo o es nece necesa sari rio o para para que que el cuer cuerpo po pued pueda a utilizar los nutrientes. Tiene lugar en el tracto buco-gastro-intestinal y es posible gracias a la actuación de enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la dieta. La primera de ellas es la
α
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amilasa salival, que degrada el almidón a una mezcla de hidratos de
carbono más sencillos (según el nivel de actividad y el tiempo de actuación, pueden llegar a maltosa e incluso glucosa libre) y un resto, inat inatac acab able le por por ella, ella, llam llamad ado o dext dextri rina na lími límite te.. El co cont nten enid ido o en
α
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amilasa en saliva es variable, y puede ir desde 0 a 3 mg/ml, puesto
que algunas personas no poseen esta actividad, sin que ello suponga ningún problema para ellos si disponen de niveles adecuados de
α
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amilasa pancreática.
La saliva es una mezcla derivada de la secreción de 3 pares de glándulas, las parótidas, submaxilar y sublingual, como también de pequeñas glándulas mucosas ubicadas difusamente sobre la mucosa de la boca. La cantidad normal secretada en una persona adulta es de 1 a 1,5 Iitros Iitros en 24 horas. horas. La compos composici ición ón de la saliva saliva es un 99,5% 99,5% H2O y 0,5 % de sólidos orgánicos e inorgánicos, el pH oscila entre 6,2 y 7,4. Los principale principaless component componentes es orgánicos orgánicos son las glicoprot glicoproteínas, eínas, proteínas (albúmina, globulinas) y carbohidratos. Los componentes inorgánicos principales son calcio, sodio, potasio, magnesio y fósforo. La enzima a-amilasa, presente en la saliva, inicia la degradación del almidón, la principal fuente de carbohidratos de la dieta humana. Esta enzima hidroliza al azar los enlaces a (1 4) que unen residuos de glucosa en el almidón, a excepción excepción de los enlaces enlaces cercanos a los extremos y a los puntos de ramificación de las cadenas. La alta conc co ncen entr trac ació ión n de prot proton ones es del del estó estóma mago go inac inacti tiva va la a-amilasa
salival.
La digestión del almidón continúa en el intestino delgado
por la acción de la a-amilasa pancreática. No obstante, el proceso digestivo propiamente dicho tiene lugar en el intestino delgado. De la mezcla de enzimas que llegan a él, formando parte del llamado jugo pancreático, nosotros estudiaremos en esta práctica la lipasa pancreática, que consigue la hidrólisis de triacilgliceroles (TAG) a
ácidos grasos (AG).
Objetivos •
Determinar la presencia o ausencia de la actividad enzimática de las enzimas de amilasa de acuerdo a las diferentes propiedades que presentan los reactantes y productos de las reacciones catalizadas.
•
Demostrar la actividad catalítica de la amilasa salival, determinando; la presencia de almidón (sustrato residual) y la presencia de carbohidratos reductores (productos de reacción).
Fundamento El método se basa en la hidrólisis del almidón (sustrato), en condiciones de pH y temperatura fisiológicos, por acción de una amilasa presente en la saliva. Los productos de reacción son polisacáridos de menor peso molecular hasta llegar a disacáridos (maltosa), no evidenciables con el reactivo de Lugol (pero sí con Fehling).
Materiales y Métodos MATERIAL BIOLÓGICO – REACTIVOS ♦ ♦
Preparado de Amilasa
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Almidón al 1%
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Cloruro de Sodio 0.0025M
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Buffer fosfato 0.01M
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Lugol
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Agua destilada
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MATERIAL DE LABORATORIO ♦
Tubos de Ensayo
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Gradilla Pipetas graduadas
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Vaso de precipitación
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Balones
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Algodón
Procedimiento
PREPARACIÓN DE LA AMILASA SALIVAL
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Enjuagarse la boca con agua de caño, manteniendo en la boca unos 40ml de agua destilada tibia durante 2minutos.
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Vaciar en un vaso de precipitación.
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Filtrar esta solución por Lana de Vidrio.
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Mantenerla en hielo hasta el momento de usar.
ENSAYO DE LA ACTIVIDAD DE LA PREPARACIÓN DE AMILASA SALIVAL
REACTIVOS
Tubo 1
Tubo 2
Tubo Tubo 4 3
Preparado de amilasa
0.025
0.050
0.75
0.10
Almidón al 1%
1.0
1.0
1.0
1.0
NaCl 0.0025 M (ml)
0.75
0.7
0.5
0.5
Buffer fosfato 0.01M
2.225
2.25
1.75
2.4
Incubar a temperatura ambiente durante 13 minutos Detener la reacción agregando 2 gotas de solución de Lugol
Resultados
Conclusiones dddddd
REACTIVOS USADOS PARA ESTA PRÁCTICA
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TUBOS MOSTRANDO LAS DIFERENTES COLORACIONES A LOS REACTIVOS POR ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE ELLOS
En los tubos donde hay menos coloración azul indica que hay una alta actividad enzimática, pero donde el color azul es más prominente se entiende que la
actividad está reducida o
ausente. ♦
El color es un factor muy importante por ello la utilización del Lugol para lograrlas, la menor presencia de color, indica que hay mayor amilasa y por tanto mayor degradación del almidón.
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La mayor degradación del almidón hace que el color azul o violeta desparezca casi por completo, indicando así, la mayor actividad enzimática que existe en el medio estudiado o experimentado, por parte de la amilasa.
Referencias Bibliográficas
BROCK,
T.
y
M.
MADIGAN.
1997.
BIOLOGÍA
DE
LOS
MICROORGANISMOS. 8va. Edición. Editorial Prentice Hall. España