analisis asam lemak

dentifkasi komposisi asam lemak dapat ditentukan menggunakan kromatograf gas. Kromatograf Kromatograf gas (GC-Gas Chromatography) adalah teknik analisa untuk memisahkan komponen berdasarkan polaritas dan titik didihnya. Kromatograf gas dapat memberikan inormasi kualitati dan kuantitati untuk masing-masing raksi atau komponen penyusun sampel. Pemisahan yang terjadi dalam kromatograf dilaksanakan dilaksanakan dengan manipulasi sedemikian rupa siat-siat fsik umum dari suatu senyawa atau molekul yaitu ! a. Ke"enderungan suatu molekul untuk larut dalam "airan (partisi). b. Ke"enderungan suatu molekul untuk menguap. #asing-masing raksi atau komponen penyusun sampel memiliki karakteristik karakteristik struktur kimia yang berbeda komponen ini dapat ber-partisi dalam kolom sebagai ase stasioner berdasarkan polaritas. Komponen yang siatnya polar akan "enderung tertahan di kolom bila digunakan kolom yang juga siatnya polar sedangkan komponen yang siatnya lebih non polar akan terbawa oleh ase gerak dalam hal ini adalah gas sehingga komponen yang non polar akan terdeteksi lebih dahulu. $engan demikian pemisahan diantara komponen dapat terjadi. #asingmasing raksi atau komponen penyusun sampel juga memiliki kisaran titik didih yang berbeda sehingga bila suatu komponen diberi perlakuan pemanasan yang tinggi sampai pada titik didihnya komponen yang menguap lebih dahulu akan terdeteksi lebih dulu dibandingkan dengan komponen lainnya yang titik didihnya lebih tinggi dengan demikian pemisahan dapat terjadi. Pada prinsipnya kriteria sampel yang ingin diketahui komponen penyusunnya melalui kromatograf gas haruslah sampel yang tahan panas dan mudah menguap pada saat injeksi. %nalisis lemak yang terdiri dari asam lemak non &olatil dikon&ersi dikon&ersi se"ara kimia (proses esterifkasi asam lemak) menjadi komponen yang &olatil yaitu '%# ('atty %"id #ethyl ster). '%# ini kemudian dapat dianalisa menggunakan GC. Gli"erol ester dapat di-dekomposisi se"ara kimia menjadi metil ester dari masing-masing asam lemak. #etilasi asam lemak dapat dilakukan dilakukan dengan  "ara * metilasi metode K+,-#etanol dan transmetilasi in situ. Pada metilasi metode K+,-#etanol ipida (gli"eride gly"erophosphatide gly"osygly"eride sterol ester atau lilin) mulanya dihidrolisis dalam medium alkali yang digunakan untuk mengekstrak lemak dan ase yang tidak tersabunkan (non lemak) yang ada pada lemak kasar ("ampuran sterol alkohol hidrokarbon pigmen &itamin). $ilakukan saponifkasi pada suhu ruang. eagen yang digunakan adalah "ampuran K+, dalam metanol. 'ase yang tidak tersabunkan bila dilakukan sentriugasi akan mengendap sehingga supernatan berisi metil ester asam lemak kemudian digunakan untuk analisis selanjutnya menggunakan GC. #etode /ransmetilasi 0n 1itu untuk memperoleh turunan asam lemak dalam bentuk metil ester dilakukan dengan pemanasan terhadap asam lemak bebas menggunakan anhydrous metanol berlebih dengan keberadaan katalis 2'3.

Pemberian asam seperti ,Cl atau suluri" a"id-metanol biasanya digunakan untuk menyempurnakan proses esterifkasi asam lemak dengan rantai sangat panjang (C4!5-C36!5) sebelum dilakukan analisis GC. Prosedur kerja ! Persiapan metil ester asam lemak metode transmetilasi in situ (Park and Goins 7884) 1ampel minyak ditimbang sebanyak 57 g ke dalam tabung reaksi $itambahkan 57 m metilen klorida dan 7 m 9a+, 5: 9 dalam metanol $ipanaskan dalam penangas air bersuhu 855C selama 75 menit $idinginkan dan ditambahkan 7 m 2'3 74; dalam methanol $ipanaskan dalam penangas air bersuhu 855C selama 75 menit $idinginkan dan ditambahkan 7 m akuades dan 5: m heksana $isentriugasi ke"epatan 3555rpm selama : menit $iambil lapisan atas dan siap untuk analisis dengan GC Kondisi kromatograf gas (GC) yang digunakan ! <

Kolom

! Kapiler bahan isian silika panjang :5 m * id. 5 mm

<

2ahan isian

! 1ilika

<

=enis

! 2onded phase

<

'ase

! C2P5 (Polar)

<

Ketebalan lapisan

<

Gas pembawa

<

Gas pembakar

<

Gas pembantu

! 5: mikrometer ! 9itrogen ke"epatan 55 kg>m ! ,idrogen ke"epatan 75 kg>"m ! ?dara tekanan 5: kg>"m

<

1uhu kolom

! 745-55 5C dengan kenaikan suhu :5C per menit

<

1uhu injektor

! :5 5C

<

1uhu detektor

<

@olume 0njeksi

! :5 5C !  mikroliter

Sampel (minyak) ditimbang 0,2 g dalam tabung reaksi tertutup, kemudian ditambahkan 2 ml natrium hidroksida dalam metanol, dipanaskan pada suhu 80oC selama 20 menit, kemudian diangkat dan dibiarkan dingin. Selanjutnya ditambahkan 2 ml larutan boron trifluorida 20% dan dipanaskan kembali selama 20 menit, kemudian diangkat, dibiarkan dingin dan ditambahkan 2 ml natrium klorida jenuh serta 2 ml larutan heksan. Setelah itu ampuran dikook sampai merata, lalu lapisan heksannya diambil dan dimasukkan ke tabung uji (e!endop).

"ondisi alat kromatografi gas yang digunakan untuk analisis asam lemak adalah#

$asil preparasi kemudian diinjeksikan ke alat kromatografi gas ketika suhu menunjukkan &0oC. 'ombol start pada rekorder dan alat ditekan, dan hasilnya akan keluar berupa kromatogram. Selanjutnya dilakukan analisis kualitatif dan kuantitatif.

erdasarkan kromatogram yang diperoleh, kemudian dilakukan penookan aktu retensi yang sama atau mendekati aktu retensi standar asam lemak. "adar asam lemak dihitung dengan rumus sebagai berikut#

"eterangan#

* + luas area ontoh

*s + luas area standar

Cs + konsentrasi standar

 + !olume akhir

b + bobot ontoh

'abel .2. $asil analisis asam lemak pada beberapa ontoh kaang-kaangan