Análisis Microbiologico de Agua

FACULTAD DE CI ENCI ASAMB MBI ENTALES LABORATORI RI O DE MI CROBI OLOGÍ A UNI VERSI DAD DELACOS OSTA

ANÁLISIS MICROBIOLOGICO DE AGUA Jaider Vizcaíno Martinez1, Li! Ara"on# In"eniería A$%ienta&, # In"eniería A$%ienta&

1

Laboratorio de microbiología Grupo:

INTRODUCCIÓN. El agua es un recurso natural neces necesar ario io para para el desar desarro rollo llo de un gran número de actividades humanas. humanas. Su crecient creciente e degrad degradació ación n por disminución de su calidad implica la reducción del número de usos que se le da; es por ello, lo que se hace necesario la realización de estudios que permitan determinar la calidad de ese agua. Los análisis que se pueden real realiz izar ar al agua agua para para cont contro rola larr su cali calid dad son: son: fsi fsico cos, s, qum qumic icos os ! micro"i micro"iológ ológicos icos,, en esta esta ocasión ocasión se hará una determinación micro"iológica. #odos los organismos que que se encu encuen entra tran n en el agua agua son son importantes en el mom momento de esta"lecer el control de la calidad de la misma sin considerar si tienen su medio natural de vida en el agua o pertenecen pertenecen a po"laciones po"laciones transitorias introdu introducida cidas s por el ser ser humano. humano. Se de"e conocer la forma de los patógen patógenos os hdricos hdricos ! determin determinar ar su pres presen enci cia a ! orig origen en,, la magn magnit itud ud ! oscilación de su número, el curso de su ciclo vital ! el ndice de su sup superv ervive ivencia. ia. Los parám aráme etros tros "iológicos en las aguas pota"les son de mucho inter$s, los microorganismos que puede ha"er en

el agua son virus, "acterias, hongos, algas ! protozoos. Los microorganismos son los seres más numeros numerosos os que e%isten e%isten en la tierra, tierra, su presencia ! actividad es esencial para la salud lud ! func unciona onamie miento adecuado de todos los ecosistemas. En relación con el estándar de calidad del del agua agua.. La presenc presencia ia de más de un orga organi nism smo o &oli &olifo form rme e por por '(( '(( ml. ml. es suficiente para que el agua se considere como no pota"le. Las "acterias colif coliform ormes es,, como como grup grupo, o, no tiene tienen n el mismo significado en los alimentos que en el agua. Se han instituido normas de coliformes para determinados alimentos, &omo &omo es el caso caso de la lech leche e crud cruda a cert certif ific icad ada a ! la lech leche e past paster eriz izad ada. a. )uchos "acteriólogos consideran que la investigación del grupo &oliforme en los alime alimento ntos s tiene tiene escasa escasa signif significa icació ción n ! que únicamente se de"e valorar desde el punto de vista de la calidad, la presencia de &oliformes *ecales +E. coli.

1. OBJETIVOS. 1'1 Objetivo General. •

-eterminar la calidad micro"iológica de muestras de agua pota"le de la ciudad de arranquilla.

FACULTAD DE CI ENCI ASAMBI ENTALES LABORATORI O DE MI CROBI OLOGÍ A UNI VERSI DAD DELACOSTA

1'# Objetivos Espec!icos. •

•

Esta"lecer los factores que influ!en en la presencia de po"laciones micro"ianas /econocer las t$cnicas de )uestreo de agua para identificar microorganismos

-ependiendo de la fuente de car"ono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en autótrofos si es el &42atmosf$rico +microorganismos que fotosintetizan ! heterótrofos si utilizan car"ono orgánico.

Clasi!icaci%n &e los 'e&ios &e c(ltivos )"* En !(nci%n &e s( consistencia.

". #$RCO TEÓRICO. La e%periencia como tal se fundamenta en "ases relacionadas con la micro"iologa, en este caso se ha hecho el estudio de una muestra de agua o"tenida de un lugar especfico, para o"servar el crecimiento micro"iano es un lapso de tiempo. Entendemos por crecimiento micro"iano el aumento del número de microorganismos a lo largo del tiempo. 0or tanto, no nos referimos al crecimiento de un único microorganismo +ciclo celular, sino al demográfico. (1) El crecimiento de una po"lación es el aumento del número de c$lulas como consecuencia de un crecimiento individual ! posterior división. Las c$lulas aisladas cultivadas en un volumen finito de medio de cultivo apropiado van utilizando los nutrientes que tienen disponi"les, sintetizando sus propios componentes celulares ! dividi$ndose en cuanto duplican su masa ! su material gen$tico. El tiempo que tarda una c$lula en cumplir ese proceso se denomina tiempo de generación +1 ! puede variar desde unos 2( minutos en condiciones óptimas hasta varios meses en condiciones am"ientales. 3n microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energa ! elementos qumicos para la sntesis de sus constitu!entes celulares.

Sólidos, 5gar, 6elatina, caldos, Semisólidos

Lquidos

o

En !(nci%n &e s( co'posici%n. Empricos, 7umicamente &omple8os o indefinidos.

definidos,

En !(nci%n &el (so +(e se le &a. Enriquecidos, -e enriquecimiento, -iferenciales, Selectivos, #ransporte ! mantenimiento.

Caractersticas i'portantes al 'o'ento &e preparar (n c(ltivo &e 'icroor,anis'os )"* #ipo trófico, tipo respiratorio, temperatura ! 09.

Nor'as &e biose,(ri&a& laboratorio &e 'icrobiolo,a.

en

el

Son todo ese tipo de prácticas que no de"en ser a8enas de implementarlas al momento de ingresar a un la"oratorio micro"iologa, para ello es necesario tener en cuenta algunas normas de prevención ante posi"les percances que se pueden minimizar con estas "uenas prácticas e%perimentales. Los la"oratorios de micro"iologa constitu!en am"ientes de tra"a8o especiales, que pueden presentar


riesgos de enfermedades infecciosas para las personas que se encuentren en o cerca de ellos. El tra"a8o diario en el la"oratorio es un tra"a8o de grupo, en donde la actitud de cada uno de los integrantes ante las prácticas, as como el entrenamiento que posean en las t$cnicas requeridas para el mane8o de material contaminado, determinan su propia seguridad, as como la de sus compaeros ! la de la colectividad en general. (*)

Biose,(ri&a&. La seguridad "iológica o "ioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las t$cnicas ! de los equipos necesarios para prevenir la e%posición del personal, del área de la"oratorio ! del medio am"iente a agentes potencialmente infecciosos o "iopeligrosos. (*)

$,entes Biopeli,rosos. Son todos aquellos agentes "iológicos ! materiales que son potencialmente peligrosos para los seres humanos, los animales ! las plantas. Entre ellos podemos citar: "acterias, virus, hongos, parásitos, productos recom"inantes, al$rgenos, priones, etc. (*)

Ries,o #icrobiol%,ico. El /iesgo )icro"iológico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad práctica en el La"oratorio, donde se requiera la manipulación de cultivos de microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones mu! elevadas ! pueden llegar a provocar una infección si no son manipulados adecuadamente. (*)

Tipos &e '(estras.

El muestreo consiste en tomar una muestra homog$nea que sea representativa del cuerpo de agua. La muestra puede ser simple o compuesta.

(+)

#(estras Si'ples. &uando la composición de una fuente es relativamente constante a trav$s de un tiempo prolongado a lo largo de estancias sustanciales en todas direcciones tal como el agua de suministro. Estas muestras son tomadas en una sola vez ! en un solo sitio de muestreo. (+)

#(estras Co'p(estas. Se refiere a la mezcla de varias muestras individuales colectadas en diferentes sitios del cuerpo de agua que se trate +presa, lago, etc., o en un solo sitio con intervalos de tiempo definidos previamente +tomas domiciliares, pozos. La ma!or parte de las muestras compuestas en el tiempo se emplean para o"servar concentraciones promedio usadas para calcular las respectivas cargas o la eficiencia de una planta de tratamiento de aguas. Se considera estándar para la ma!ora de las determinaciones una muestra compuesta que representa un perodo de 2 horas.

(+)

Obtenci%n &e #(estras. Las t$cnicas empleadas para la o"tención de muestras de agua pueden ser de forma manual o automática, dependiendo de la profundidad del cuerpo de agua por muestrear ! de los recursos económicos de que se dispongan. (+)

#(estreo #an(al.


6eneralmente las muestras o"tenidas manualmente se aplican para "reves periodos de tiempo ! están representadas por las muestras simples. E%isten equipos para muestreo manual que pueden adaptarse a las condiciones ! necesidades de los diferentes tipos de puntos de muestreo. El equipo de"e estar fa"ricado a partir de materiales inertes que no afecten la composición del agua o"tenida, fácil de limpiar ! además fácil de transferir el contenido muestreado al envase. (+)

I&enti!icaci%n &e #icroor,anis'os. 0ara la
Caractersticas 'acrosc%picas. 5 partir de cada cultivo inicial, se identificará: &olor +&olonia, medio, #amao, forma, "orde, superficie, levantamiento, consistencia, transparencia. Se de"en analizar las caractersticas macroscópicas de estas colonias antes de realizar la tinción ! monta8e al microscopio.

Caractersticas #icrosc%picas. Las "acterias Se tomará un inoculo de la colonia "acteriana escogida mediante un asa en aro, se aplicara en el portao"8eto, se realizara la fi8ación de la muestra con calor, ! se procederá a realizar la tinción de 6ram. Las placas serán o"servadas al microscopio con o"8etivo '((=, con el fin de identificar morfologa ! clasificación según la tinción de 6ram.

Coli!or'es ,enerali&a&es. &uando los coliformes llegan a los alimentos, no sólo so"reviven, sino que

se multiplican, por lo que en los alimentos el grupo &oliforme adquiere un significado distinto al que reci"e en el agua, se utilizan como indicadores de malas prácticas sanitarias. Los microorganismos coliformes constitu!en un grupo heterog$neo con há"itat primordialmente intestinal para la ma!ora de las especies que involucra .El grupo de "acterias coliformes totales comprende todos los "acilos 6ramnegativos aero"ios o anaero"ios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con producción de gas en un lapso má%imo de > h. a ?@A& B 'C&. Este grupo está conformado por  g$neros principalmente: Entero"acter, Escherichia, &itro"acter ! Dle"siella. ()

Esc-eric-ia coli. Es un "acilo corto 6ram negativo que se encuentra clasificado dentro de la familia Entero "acteriaceae +"acterias ent$ricas, e%iste como comensal en el intestino delgado de humanos ! animales. Sin em"argo, ha! algunas cepas de E. coli patógenas que provocan enfermedades diarreicas. Estas E. coli se clasifican con "ase en las caractersticas que presentan sus factores de virulencia únicos, cada grupo provoca la enfermedad por un mecanismo diferente. Las propiedades de adherencia a las c$lulas epiteliales de los intestinos grueso ! delgado son codificadas por genes situados en plásmidos. -e manera similar las to%inas son mediadas por plásmidos o fagos. ()

Esc-eric-ia ETEC.

coli

enterotoi,/nica

Es reconocida como el agente causal de la diarrea del via8ero, la cual se caracteriza por diarreas acuosas con o sin fie"re. Este tipo de infecciones es


mu! frecuente en pases su"desarrollados ! afecta principalmente a los nios. ()

Esc-eric-ia coli enteropat%,ena ECE0. Es causa importante de diarrea en los lactantes particularmente en los pases en vas de desarrollo. La E&E0 se adhiere a las c$lulas de la mucosa del intestino delgado. Sus factores de virulencia favorecen la adhesión ! en ocasiones penetra a las c$lulas mucosas. La infección por E&E0 provoca diarrea acuosa generalmente auto limitada aunque en ocasiones puede ser crónica. ()

Esc-eric-ia coli enteroinvasiva EIEC. Este microorganismo se encuentra estrechamente relacionado con el g$nero Shigella, produce una enfermedad similar a la shigelosis. La enfermedad se presenta comúnmente en nios de pases su"desarrollados ! en personas que via8an a dichos lugares. La E
Esc-eric-ia E2EC.

coli

entero-e'orr1,ica

0roduce veroto%ina, denominada as por su efecto citotó%ico so"re las c$lulas ero, una lnea de c$lulas renales de mono verde africano. E%isten al menos dos variantes antig$nicas de la to%ina. La E&E9 se ha asociado con colitis hemorrágica, una variedad grave de diarrea; ! con el sndrome ur$mico hemoltico, enfermedad capaz de producir insuficiencia renal aguda, anemia hemoltica microangiopática ! trom"ocitopenia. La veroto%ina tiene

muchas propiedades similares a la to%ina shiga producida por alguna cepa de Shigella d!senteriae tipo '; -e los serotipos de E. coli que producen la veroto%ina el más común ! el único que puede identificarse en muestras clnicas es el 4'@F:9F. La E. coli 4'@F:9F no emplea sor"itol ! es negativa a la prue"a de )36. ()

3. 0ROCEDI#IENTO E40ERI#ENT$5. #ateriales 6 reactivos. illiance E.&4L< G &4L<*4/) SELE&#<E )E-<3), ca8as de petri, muestras de agua, equipo millipore para filtración de vaco, pinzas est$ril, mechero.

+' ME-ODOLOG.A' Este la"oratorio se realizó por el m$todo de filtración por mem"rana, el procedimiento fue el siguiente. Se tomó la ca8a de petri en la cual esta"a el medio selectivo para E.&4L< H &4L<*4/)ES #4#5LES + / horas despu$s se realizó el conteo para determinar las unidades formadoras de colonias.

/' ANÁLISIS DE RESUL-ADOS' &oliformes totales identificados J ' E.&4L< identificados J '


3*& +unidades formadoras de colonias 3*&J coliformes totales G ml K '(( 3*&J ' G '(( K '(( J ' 3*&J E.&4L< G ml K '(( 3*&J ' G '(( K '(( J ' Según lo o"servado las muestras de agua contienen "a8as 3*&, esto pudo suceder !a que al tomar las muestras se tomaron las medidas adecuadas para no interferir en los resultados. 0oto"raía *2 $e!tra de re!&tado!'

0oto"raía 12 co&ocando e& 3a3e& i&tro en e& e4i3o $i&&i3ore'

0oto"raía +2 $e!tra de re!&tado!

0oto"raía #2 a"re"ando 155$& de a"a a& e4i3o'


calidad del agua de consumo humano. se podra decir que nuestra agua no supera los lmites má%imo permisi"le de 3*&.

7' RE0ERENCIAS BIBLIOGRÁ0ICAS (1)

standard methods for the e%amination of áter and asteater, 5rnold E. 6reen"erg 'Mth, edición 'MM@.

(#)
(*))icro"iologa #omo ', acteriologa, 0oto"raía /2 $e!tra contro&'

caracterstica ! clasificación "acteriana. /aquel 6ranados 0$rez ! &armen illaverde 0eris.

(+) 3niversidad de 5licante. *acultad de &iencias. )anual de Supervivencia en el La"oratorio Omonografa en lneaP. Espaa: 'MMM Oacceso F de a"ril 2((>P. -isponi"le en; http:GG.ua.esGcentrosGcienciasGsegurid adGha"QsegQla"Q"iol.htm .

(/) /o8as, /.2((2Elementos de vigilancia ! control, gua para la vigilancia ! control de calidad del agua para consumo humano, Lima, cepisGops.

()&amacho, 5., ).6iles, 5.4rtegón,

0oto"raía 2 $e!tra contro&'

' CONCLUSI6N' /ealizado el informe o"servamos que la muestra de agua es pota"le !a que, como nos muestra la ta"la de parámetros del 4E +decreto por el que se esta"lecen los criterios sanitarios de la

).0alao, . Serrano ! 4. elázquez. +'@ de Septiem"re de 2(''. 5nálisis )icro"iológico de 5gua ! hielo para consumo humano. +-eterminación de "acterias coliformes, coliformes fecales ! Escherichia coli por la t$cnica de Iúmero más 0ro"a"le. #$cnicas para cultivos micro"iológicos. , págs. 'R'.

(7))ilán

alo!es, T. H., &aicedo 7uintero, 4., U 5guirre /amrez, I. V. +2(''. 7ue"rada La 0opala: un análisis de calidad del agua desde algunas varia"les fisicoqumicas, micro"iológicas


! los macroinverte"rados acuáticos. /evista 6estión ! 5m"iente, ''.

Análisis Microbiologico de Agua

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