SELAMAT DATANG ANDA MEMASUKI KAWASAN KAWASAN TERTIB DISIPLIN MANDIRI DI DUNIA … PRAKTIKUM AOMK
PRAKTIKUM ANALISIS OBAT, MAKANAN DAN KOSMETIK
JENIS PRAKTIKKUM : LABORATORY/EXPERIMENTAL PRAKTIKUM MANDIRI/SEMI MANDIRI (1-2 ORANG/KELOMPOK) ORANG/KELOMPOK) DURASI 6 JAM TIAP KELOMPOK MEMPEROLEH MATERI :
MAHASISWA MEMBAWA SAMPEL SENDIRI
SAMPEL DIBAWA PADA SAAT PRETES DAN PRAKTIKUM.
PRAKTIKUM ANALISIS OBAT, MAKANAN DAN KOSMETIK
JENIS PRAKTIKKUM : LABORATORY/EXPERIMENTAL PRAKTIKUM MANDIRI/SEMI MANDIRI (1-2 ORANG/KELOMPOK) ORANG/KELOMPOK) DURASI 6 JAM TIAP KELOMPOK MEMPEROLEH MATERI :
MAHASISWA MEMBAWA SAMPEL SENDIRI
SAMPEL DIBAWA PADA SAAT PRETES DAN PRAKTIKUM.
TUGAS & KEWAJIBAN PRAKTIKAN
LULUS PRETES Persiapan :
1. buat laporan sementara berupa : materi, metode, 7an prakt, dasar teori, mekanisme reaksi ,cara kerja skematis ( analisis kuali & kuantitatif, pembuatan larutn maupun yg lainya, perhitungan ( sampel dibawa saat pretes u/ memudahkan perhitungan ) perhitungan ) 2. literatur standart jangan ketinggalan. Harus di bawa ! 3. Belajar & bisa jawab pertanyaan dgn benar.
PADA SAAT PRAKTIKUM: MEMAKAI PAKAIAN PAKAIAN YANG YANG SESUAI SYAR’I : SYAR’I : TIDAK KETAT, PANJANG, TIDAK TRANSPARAN, DSB DATANG 10 MENIT SEBELUM PRAKTIKUM DIMULAI, DIMULAI, TOLERANSI KETERLAMBATAN DENGAN ALASAN YANG DAPAT DITERIMA MAX 15 MENIT SEPATU, BUKAN SANDAL MEMAKAI SEPATU, ATAU SEPATU SANDAL MEMAKAI JAS PRAKTIKUM MEMBAWA SAMPEL
LANJUTAN …
BERLAKU SOPAN
TIDAK MEROKOK
MEMBAWA MEMBAWA BEKAL MAKAN/MINUMAN SECUKUPNYA (JANGAN (JANGAN SAMPAI KELAPARAN SAAT KELAPARAN SAAT PRAKTIKUM APALAGI SAMPAI PINGSAN PINGSAN KARENA KARENA LAPAR)
PRAKTIKUM YUUK …
ALAT-ALAT SEDERHANA, MISAL : PIPET TETES, TABUNG REAKSI (KALO PUNYA) DIBAWA SENDIRI
WAJIB BAWA LAP/SERBET & TISU
SEMUA PEREAKSI DIBUAT SENDIRI OLEH MAHASISWA. AND …. CARA BUAT & JML KEBUTUHAN DISIAPKAN DARI RMH ( BESERTA HITUNG2ANNYA) VOLUME PEREAKSI YANG DIBUAT SESUAI KEBUTUHAN LARUTAN BAKU UNTUK TITRASI MAX 250 ML FASE GERAK UNTUK DENSITOMETRI MAX 20ML
Penimbangan :
Tablet ; hitung keseragaman bobot tablet sesuai FI III, jumlah yang dibutuhkan disesuaikan.
Cairan ....?
Jika lotion, salep,gel,penimbangan menggunakan wadah langsung.
BEDA PRAKTIKUM AOMK & KA
PRAKTIKUM KA : PROSEDUR KERJA ADA DI BUKU PETUNJUK PRAKTIKUM PEREAKSI DISEDIAKAN
PRAKTIKUM AOMK … PROSEDUR KERJA, MAHASISWA MENCARI SENDIRI PEREAKSI DIBUAT SENDIRI
REFERENSI
FARMAKOPE INDONESIA, USP, BP
EKSTRA FARMAKOPE
AOAC
SNI
NEW’S BURGER (KOSMETIK)
KODEKS KOSMETIKA
KODEKS MAKANAN
JURNAL
PERSIAPAN PRETES ? PELAJARI
TENTANG SAMPELNYA SENDIRI (FUNGSI, SIFAT, DLL…) TENTANG SEMUA METODE PK YANG MUNGKIN DILAKUKAN BESERTA ALASAN METODE PK TERPILIH + ALASAN (MENGACU PADA KRITERIA METODE) DETAIL METODE TERPILIH CARA KERJA MAKSUD LANGKAH KERJA CARA NGITUNG KADAR REAKSI
RESPONSI … ??? BERUPA PRAKTIKUM MANDIRI (SENDIRI-SENDIRI) SAMPEL DIUNDI BAHAN ??? ADA 2 ALTERNATIF : MAHASISWA BELI SENDIRI, OR MaHaSiSwA IURAN KOLEKTIF tapi PENGADAAN DIBANTU LAB PENILAIAN …. ??? PRAKTIKUM, HASIL (KETEPATAN)
MATA KULIAH TERKAIT
KA
KO
AOMK
KROMATOGRAFI
SPEKTRO & ELEKTROKIMIA
FTS (SEDIKIT)
Contoh sampel
Paracetamol syrup obat flu (SFL)
Curcumin dlm minuman instan (D)
Hidrokinon dalam krim pemutih (S)
Paracetamol dalam jamu (K)
Kofein dlm minuman berenergi (D)
Nitrit dalam sosis (S)
Vit C dalam suplemen (K)
Sulfametoksazol dlm tablet (K)
OMS dalam lotion (D)
BAHAN TAMBAHAN MAKANAN (BTM) YANG DIIZINKAN (PerMenKes No : 722/Menkes/Per/IX/88) Antioksidan : Vitamin C, Vitamin E, PG, BHA, BHT Antikempal : Ca-silikat, MgCO3, Al-silikat Pengatur keasaman : Amonium karbonat, As asetat glasial, As sitrat Pemanis buatan : Sakarin, Siklamat, Sorbitol, Aspartam Pemutih dan Pematang tepung: Vitamin C, KBrO3, Na-stearil fumarat Pengemulsi, Pemantap, Pengental : Pektin, Agar, Dekstrin, CMC, Amm alginat, Karagen, Gelatin Pengawet : Asam benzoat, Asam sorbat, K-nitrat atau nitrit, SO2 Pengeras : Al-K-sulfat, Ca-glukonat, Ca-laktat Pewarna : -Karoten, Kurkumin. Karamel, Klorofil, Karmin, Titanium dioksida, Biru berlian, Coklat HT, Tartrazin Penyedap rasa dan aroma, Penguat rasa : L-mentol, Asam l-glutamat, Vanilin Sekuestran : Asam sitrat, Di-Na-edetat, Na-fosfat Batas maksimum
BAHAN TAMBAHAN YANG DILARANG DIGUNAKAN DALAM MAKANAN (Lampiran II PerMenKes No : 722/Menkes/Per/IX/88)
1. Asam borat (Boric Acid ) dan senyawanya 2. Asam salisilat dan garamnya (Salicylic Acid and its salt) 3. Dietilpirokarbonat (Diethylpirocarbonate, DEPC ) 4. Dulsin (Dulcin) 5. Kalium klorat (Potassium chlorate) 6. Kloramfenikol (Chloramphenicol ) 7. Minyak nabati yang dibrominasi (Brominated vegetable oils) 8. Nitrofurazon (Nitrofurazone) 9. Formalin (formaldehyde) (Lampiran II. PerMenKes No : 1168/Menkes/Per/X/1999) Senyawa pada poin 1-9 tetap dilarang, ditambah : 10. Kalium bromat (Potassium bromate ) (Berdasarkan hasil penelitian, penggunaan kalium bromat dalam makanan dan minuman dapat membahayakan kesehatan karena bersifat karsinogenik, oleh karena itu perlu dilarang penggunaannya)
A. BAHAN PENGAWET Bahan pengawet a. An-organik, antara lain : SO 2, nitrat, nitrit b. Organik, antara lain : asam sorbat, asam benzoat, paraben I. Asam benzoat dan garamnya
Analisis kualitatif Uji dengan FeCl3
Analisis kuantitatif 1. Alkalimetri Sampel : kecap, jeli, jam, ikan kering dan ikan asin 2. Spektrofotometri UV asam benzoat diperiksa pada 265-280 nm Sampel : kecap, produk tomat lainnya, jeli, minuman ringan beralkohol, soft drink, dan jus buah-buahan. Tidak dapat untuk sampel padat. 3. Kolorimetri, HPLC
II. SO2 Digunakan dalam bentuk gas; dalam larutan sebagai sulphurous acid , atau sebagai Na, K atau Ca-sulfit; bisulfit, dan metabisulfit
Analisis kualitatif sulfit dan free sulfurous acid
Dapat dipelajari pada AOAC dan Pearson’s Chem.An.of Foods Analisis kuantitatif sulfurous acid
1. SO2 Kolorimetri Sampel + air, diblender. Blenderan + NaOH 0,5N, dicampur, diaduk. Tambahkan H2SO4 0,5N, + reagen merkurat, dilarutkan dengan air, diencerkan. Enceran + reagen rosanilin + formeldehid 0,015%, dicampur, dibiarkan 30 menit. Absorbansi ditentukan pada 550 nm vs blanko. Kurva standar dibuat dan SO 2 dikonversi dalam ppm. Sampel : buah-buahan yang telah dikeringkan.
NH2
NH 2
CH3
CH3
NH2+Cl-
C
+ SO2
SO3H
O H C 3 H C
merah
C
tidak berwarna
CH3 HC
OH
SO3H
+
NH2
pereaksi Rosanilin (Merah)
2. Titrimetri a. Refluks-alkalimetri Sampel dalam labu destilasi + akuades + metanol, dicampur. Ke penampung destilat dimasukkan H2O2, akuades dan indikator, + NaOH 0,01 N hingga berwarna hijau, dst.. H2O2 + SO2 H2O + SO3
H2SO4
dititrasi dengan NaOH
b. Iodimetri
IV. Nitrit dan Nitrat Garam nitrit dan nitrat umumnya digunakan pada proses curing daging untuk memperoleh warna yang baik, dan untuk mencegah pertumbuhan C. Butolinum
Analisis kuantitatif 1. Nitrit titrimetri 2. Nitrit modified Griess reagent Sampel + H2O bebas nitrit , dipanaskan diatas water bath, didiamkan 2 jam, diaduk. Tambahkan larutan HgCl2 jenuh, dicampur, dinginkan, disaring. Filtrat + campuran as sulfanilat dalam asam asetat dan -naftilamin dalam asam asetat, didiamkan 1 jam. Absorbansi diukur pada 520 nm vs blanko.
SO3
O3S
+
NH3
+
+ NO2-
H2N
N N
520
NH2
+ H2O
nm
3. Nitrat metode xilenol (dalam daging)
O
II. Sakarin NH SO2
Analisis kualitatif 1. Uji organoleptis 2. Konversi menjadi asam salisilat 3. Uji fenol-asam sulfat Uji untuk sakarin : a. Uji dengan resorsinol Sakarin memberikan warna hijau fluoresens jika direaksikan dengan resorsinol dan NaOH berlebih. b. Uji KLT Sakarin memberikan warna jingga muda dengan -naftilamin di bawah sinar UV
Analisis kuantitatif 1. Dengan pereaksi Nessler
khusus minuman tidak beralkohol
2. Gravimetri
3. TBA Kadar baku pembanding untuk na-sakarin ditetapkan secara titrasi bebas air
4. Alkalimetri Sakarin-Na destruksi N total
5. HPTLC Analisis pemanis buatan (campuran aspartam, sakarin dan acesulfam) Sediaan : lemonades (soft drinks) dan sediaan oral cair Preparasi : soft drink yang biasanya mangandung 100 g/ml digunakan langsung setelah dibebaskan dari CO 2 (asam karbonat). Untuk tablet, dilarutkan, disaring. Untuk keju dan Yoghurt, sampel disuspensi dengan air dan disaring . Kondisi Kromatografi Plat : silikagel 60F254 (SILG-25UV254) M & N, 20X20 cm (untuk sejumlah besar sampel) Tehnik : ascenden F gerak : Xylene- asetat-n-propanol-asam formiat (45:7:6:2) Migrasi : 45 mm, 10 menit Deteksi : UV Scanning densitometri (Camag Scanner II) Mode : absorbansi : 215/370 nm Hasil kromatografi HRf : Aspartam – 12, acesulfam – 36, sakarin – 58 (calculated
III. Vitamin C
OH
O
O
HC
H2C OH
HO
OH
Dalam keadaan kering cukup stabil Dalam larutan cepat dioksidasi oleh udara dan dipercepat oleh adanya ion-ion logam berat (Cu, Fe) pengaruh sinar matahari
berubah jadi coklat
1.
Iodimetri Vitamin C dlm air bebas CO2 + H2SO4 encer Titrasi dg lar I2 0,1 N 1 ml I2 0,1 N ~ 8,808 mg Vitamin C I2 + H 2O
2 HI + O
OH
OH O
O
HC
O
HC
+O
H 2C OH
O
HO
OH
H2C OH
O
O
Asam dehidroaskorbat
2. Dengan larutan 2,6-diklorofenol indofenol (DCPIP) Sifat mereduksi vitamin C thdp lar DCPIP dari biru jadi tdk berwarna/merah jambu Vitamin C dlm asam metafosfat 20 %, encerkan dg air ad vol tertentu titrasi dg lar baku DCPIP ad merah jambu mantap. Lakukan titrasi blangko Cl
C6H8O6
O
+
askorbic acid
N
OH
Cl
Biru
asam metafosfat 20% Cl
C6H6O6
+
H N
HO
dehidroaskorbic acid Cl
pink/tdk berwarna (bentuk tereduksi)
OH
3. Kolorimetri Vitamin C + hasil diazotasi dari 4-metoksi-2-nitro anilin Biru 570 nm
4. Spektrofotometri Vitamin C Dalam air netral
265 nm Dalam asam mineral
245 nm
Vitamin C FI Edisi IV Injeksi Vitamin C dan tablet
RO
iodimetri DCPIP
O
penting untuk kosmetik R Tocopherol H Tocopherol asetat CH3CO
Formula C29H5002 C31H5203
BM 430,72 472,76
Vitamin E alami bersifat dextrorotarory (d) Vitamin E sintetik merupakan campuran (d l) Tocopherol ß, γ dan δ aktivitas biologis Sbg α-tocopherol
Penetapan Kadar Sampel dlm alkohol refluks dg lar H2SO4 alkoholik 5 N + 3 jam, terlindung dari matahari. Didinginkan, + alkohol absolut ad vol tertentu. Sejumlah tertentu aliquat di atas, vol tertentu + H2SO4 alkoholik 0,5 N, air dan indikator 2 tetes lar difenilamin. Larutan ini dititrasi dg lar Ce(SO4)2 0,01 N ad warna biru mantap + 10”.
Lakukan titrasi blangko 1 ml larutan Ce(SO4)2 0,01 N ~ 2,363 mg C31H5203 1 ml larutan Ce(SO4)2 0,01 N ~ 2,154 mg C29H5002 Penetapan total tocopherol asetat Dilakukan saponifikasi yakni sampel dalam alkohol absolut direfluks dgn KOH + 20 menit terlindung dari cahaya, + HCl pekat tetes demi tetes dinginkan Dimasukkan dalam corong pisah + air Ekstraksi beberapa kali dengan eter
o
o
o
o
Fase eter dikumpulkan sisa + alkohol absolut, encerkan ad vol tertentu dg alkohol absolut larutan sampel Lar sampel vol tertentu + 1 ml FeCl 3 0,2% dlm alkohol absolut + 1 ml lar α.α’-dipyridyl 5% dlm alkohol absolut encerkan dg alkohol absolut ad vol tertentu gojog ad homogen warna merah 10’ A 520 Lar blangko 10’ A 520 (sbg koreksi) Total tocopherol = asetat (mg/g)
Ak X 32,0 C I1 XX C
o
Tocopherol (mg/g) =
Ak X 32,0 I X C
Keterangan : AK : As 520 – AB 520 (terkoreksi) I : tebal kuvet (cm) C : konsentrasi sampel (g/100 ml lar sampel)
TURUNAN ANILIN DAN p-AMINOFENOL H N
O C CH3
Asetanilida H N
O
H N
C
O C CH3
CH3 C2H5
HO
Parasetamol
O
Fenasetin
H N
O C CH3
I. Parasetamol HO
Parasetamol
Penetapan kadar 1. N - total/Kjeldahl (FI III untuk bahan baku) Dasar : destruksi/digesti 2. Nitrimetri H N
O C
NH2
CH3 HO
+ H2O
+ CH3COOH
HO
p-aminofenol
N
NH2 Diazotasi
HO
+ Cl-
NaNO2, HCl
HO
N
3. Spektrofotometri UV Untuk sediaan (tablet, sirup, eliksir) tunggal, spektrum parasetamol di-scan pada 240-350 nm. Kadar baku pembanding untuk parasetamol juga dapat ditetapkan secara spektrofotometri UV. Pelarut yang digunakan : metanol-air. 4. HPLC atau KCKT Untuk uji parasetamol dalam tablet, sediaan berupa larutan dan suspensi oral
5. HPTLC Sediaan
: tablet, kapsul [parasetamol, kaffein, vit C, fenilefrin-HCl] Preparasi : diekstraksi dengan etanol 80 % Kondisi Kromatografi Plat : HPTLC pre-coated, silika gel 60 F254 – glass, 10X20 cm Tehnik : horizontal F gerak : (i) metilen klorida-etilasetat-etanol-asam formiat (35:20:40:5, v/v); (ii) metilen klorida-etilasetat-etanol (50:50:10, v/v) Migrasi : 50 mm, 25 menit Deteksi : UV Scanning densitometri (Camag Scanner II) Mode : absorbansi : parasetamol dan kaffein – 254 nm; fenilefrin-HCl – 274 nm; vit C – 264 nm Komentar : metode ini dapat dipakai untuk menilai stabilitas parasetamol; produk dekomposisi utama: p-aminofenol
ASAM HIDROKSIBENZOAT DAN TURUNANNYA COOH
COOH
OH
Asam salisilat
COOCH3
OCOCH3
Asetosal
OH
Metil salisilat
COOR
Nipagin (R = - CH3) Nipasol (R = - C3H7) OH
Paraben
I. Asam benzoat
COOH
Asam benzoat
Sifat kimia
(a)
Asam yang cukup kuat digunakan sebagai standar primer Gugus –OH pada posisi ortho menaikkan ionisasi –COOH menjadi 100 X ionisasi –COOH (a) Gugus –OH pada posisi meta dan para mempunyai ionisasi seperti (a) Substitusi pada gugus –OH oleh gugus alkil atau asil tidak berpengaruh besar pada ionisasi asam
Berdasarkan keterangan 2, 3 dan 4 dapat disimpulkan : semua asam hidroksi benzoat dan derivat dengan gugus karboksil tidak tersubstitusi dapat ditetapkan kadarnya dengan cara titrasi langsung dengan basa kuat menggunakan indikator phenophthalein (pp)
Penetapan Kadar 1. HPTLC Sediaan
: lotion, ointment [asam salisilat (AS) dan asam benzoat (AB)] Preparasi : diekstrak atau diencerkan dengan metanol atau benzen Kondisi Kromatografi Plat : HPTLC pre-coated, silikagel 60 F254, 10X10 cm Tehnik : ascenden (menaik) F gerak : etil asetat-aseton (9:2, v/v) – 11 ml; PE-asam asetat (9:1, v/v) – 10 ml Migrasi :Deteksi : UV Scanning densitometri (Camag Scanner II) Mode : absorbansi : AS dan AB – 267 nm; AB – 223 nm, AS – 295 nm Catatan : kromatogram dapat di-scan pada 223 nm dan 295 nm masing-masing untuk serapan maksimum AS dan AB, kendati demikian 267 nm dipilih sebagai the iso-absorption point
2. HPTLC Sediaan
: kosmetik, sun screen lotion, tanning lotion, liquid dosage form (oral), tablet, soft gelatin capsules [methyl paraben (MP), propyl paraben (PP), p-hydroxybenzoic acid (PHB), p-methoxycinnamic acid (PMC)] Preparasi : larutkan atau suspensikan sampel dalam 40 ml aseton-etil asetat (2:1), sonikasi pada 40 oC, dinginkan, saring, cuci residu sampai diperoleh filtrat 50 ml Kondisi Kromatografi Plat : HPTLC pre-coated, silikagel 60 F254, 20X10 cm Tehnik : ascenden (menaik) F gerak : (i) PE-dietilketon-asam asetat (88:5:12, v/v) (ii) Pentan-diklorometan-asam asetat (25:25:3, v/v) Migrasi : 40 mm; (i) 10 menit (ii) 18 menit Deteksi : UV Scanning densitometri (Camag Scanner II) Mode : absorbansi : 254 nm – PHB, MP dan PP; 310 nm – PMC
3. TBA Na-benzoat Na salisilat
dititrasi dengan HClO4/CH3COOH
4. Iodometri Asam salisilat 5. Asidi-/alkalimetri
Titrasi langsung : Asam salisilat Asetosal
Titrasi kembali : Asetosal Metil salisilat
6. Spektrofotometri UV - asetosal dalam pelarut CHCl 3 maks = 278 nm - as salisilat dalam pelarut CHCl 3 maks = 308 nm Asam salisilat sering terdapat dalam sampel asetosal. Keduanya dianalisis pada daerah UV Asetosal dalam kloroform absorbansi diukur pada (tablet/kapsul) maks 308 dan 278 7. Bromometri - Asam salisilat
- Paraben
Untuk nipagin, gugus ester dihidrolisis sebelum dibrominasi
O
O
C
C OCH3
ONa
+ NaOH
30'
OH
+ CH3OH
OH + HCl
- NaCl
O C
Br OH
+ Br 2 >>>
+ 3 HBr + CO2 Br
OH
Br OH
KBr + I2
Kelebihan Br 2 + KI
I2 dititrasi dengan Natrium tiosulfat 0,1 N I2
+ 2 Na2S2O3
amilum
NaI + Na2S4O6
8. Spektrofotometri Vis as salisilat + Fe(NO 3)3 (dalam etanol-air)
kompleks ferri-salisilat
pH tertentu
(violet) = 525 nm
OH
HO
C
C O
O
Fe
O O
O O
OH C
Ferri salisilat (Lembayung) = 525 nm
9. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)/HPLC Sediaan : tablet (asetosal) Kondisi Kromatografi Fase gerak : 2 g Na-1-heptana sulfonat dalam - 850 ml air - 150 ml asetonitril + asam asetat glasial hingga pH 3,4 Pengencer : asetonitril-asam format (99:1) Kolom : ukuran 4,0 mm X 30 cm, isi oktadesil silana (ODS) Detektor : UV 280 nm Laju alir : ± 2 ml/menit
DEMIKIAN SEKILAS INFO
SELAMAT BERJUANG
JUJURLAH DALAM BEKERJA
