Coloración de Wright La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky; la cuales se han utilizado por más de 100 años en la clasificación morfológica de las células hematopoyéticas. Son extremadamente importantes en laboratorios de hematología ya que puede obtenerse una cantidad abundante de información a partir del examen de un frotis de sangre bien teñido. Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación; así como colorantes así como eosina Y o eosina B . La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky y da una coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y de color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y. Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las estructuras químicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos de ácidos nucleicos, las proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante básico. La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de las moléculas de hemoglobina y a las proteínas básicas. El proceso de tinción empieza con el paso de fijación con metanol que resulta en la adherencia de las proteínas celulares al portaobjetos y evita que las células se deslaven durante los pasos subsecuentes. La fijación adicional se realiza cuando el frotis se cobre con el colorante de Wright; W right; la tinción efectiva se da con la adición de un amortiguador al colorante que da lugar a la ionización de los colorantes. Después se enjuaga con agua destilada y se deja secar al aire.
Fig. 1 Tinción de Wright
Tinción de Perls Dentro de los diversos procesos que afectan el metabolismo del hierro, en forma aislada o en asociación con otros trastornos, se ha observado la acumulación de hierro medular en cuadros como anemia hemolítica crónica, anemia sideroblástica y hemocromatosis. La determinación de estos depósitos acumulados en forma anormal puede realizarse con l a tinción de Perls, que forma parte de la batería de tinciones citoquímicas aplicadas principalmente a neoplasias hematológicas y otros síndromes. Determina la presencia de hemosiderina en el citoplasma de cualquier tipo de células, de una extensión de sangre o de médula. El proceso de tinción comienza con una fijación de alcohol metílico, se introduce la extensión fijada en solución clorhídrica de ferrocianuro a temperatura ambiente, después se lava y contratiñe con hematoxilina de Harri s; finalmente se enjuaga con metanol se deja secar y se observan gránulos intensos de color azul-verdoso que se observan en la zona de macrófagos.
Fig. 2 Tinción de Perls
Tinción con -Naftil esterasa La actividad de la -Naftil esterasa se detecta al incubar la muestra de acetato de -Naftil en un pH alcalino. Como resultado de la actividad de l a esterasa hay una hidrólisis enzimática de l os enlaces de éster y se liberan compuestos de naftol libre. El naftol liberado se acopla inmediatamente con una sal de diazonio para formar un pigmento insoluble y visible en el sitio de la acción de la enzima. La -Naftil esterasa se detecta principalmente en monocitos y los sitios de actividad de la enzima muestran una granulación negra. La actividad enzimática se puede detectar en los megacariocitos, macrófagos e histocitos, y está prácticamente ausente en los granulocitos. La actividad enzimática se puede detectar en los eritroblastos de la eritroleucemia y se puede observar actividad focal de la enzima en los linfoblastos de la leucemia linfoblástica aguda.
Tinción de Shiff (Reacción con ácido periódico de S hiff) El ácido peryódico de Shiff oxida los g rupos 1,2 glicol a dialdehídos. Estos grupos aldehídos combinan con el reactivo de shiff para dar un producto de color rojo. Los componentes celulares que contienen polisacáridos, mucopolisacáridos y glicoproteínas poseen los grupos 1,2 glicol y se tiñen. La tinción del ácido peryódico de Shiff (PAS), se ve en casi todas las células hematopoyéticas normales. Los monocitos exhiben un patrón de tinción difuso mientras que los linfocitos pueden ser negativos o mostrar unos cuantos gránulos positivos a PAS; los megacariocitos y las plaquetas se tiñen de manera intensa, y los eritroblastos normales no se tiñen. La actividad PAS es fuertemente positiva en la eritroleucemia (AML-M6); en esta enfermedad los eritroblastos tempranos exhiben positividad granulosa tosca, pero los eritroblastos de las etapas posteriores exhiben una positividad fina y difusa. Los linfoblastos en la leucemia linfoblástica aguda pueden exhibir positividad a P AS.
Referencias: 1.- Mckenzie; Hematología clínica; Manual moderno, 2ª. Ed. 2.- Hematología, Salvat, Williams-Heuter-Erstev-Hundles, Tomo I
