PONTIFICIA UNVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES ESCUELA DE CIENCIAS BIOLOGICAS Laboratorio de biología Practica # 4 ACTIVIDAD ENZIMÁTICA INTEGRANTES: Juan Jiménez David Navarrete Franco Poma
Introducción : En los seres vivos las reacciones reacciones químicas químicas ocurren gracias gracias a la presencia de enzimas, puesto que son estas quienes regulan regulan la velocidad velocid ad de dichas reacciones. Las enzimas tienen la capacidad de afectar a la velocidad con la cual se produce una reacción química por medio de la energía de activación. El sustrato al ser formado formado puede puede reducir reducir la en ergía de de activación de de las reacciones, reacciones, cuando este se descompone forma el producto y así el catalizador queda libre para reaccionar con otra molécula de sustrato. Las enzimas también se caracterizan por ser altamente especificas esto quiere decir que catalizan una sola reacción química, factores como la temperatura y el PH pueden afectar su actividad. Objetivos : y y y
Tener la capacidad de reconocer una enzima específica. Conocer y darnos cuenta lo especificas que son las enzimas. Poder conocer y diferenciar la actividad enzimática que poseen las bacterias con la actividad enzimática que poseen los animales.
METODO EJERCICIO
No 1
FORMACIÓN Y DETECCIÓN DE BENZOQUINONA y y
Se rotuló 3 tubos de ensayo de la siguiente forma: 1a, 2b, 3c. Se marcaron líneas en cada tubo de ensayo a 1cm y 2cm desde la base.
y
y
y y
y
Se llenó cada tubo de la siguiente forma: Tubo 1a: 1cm de catecol oxidasa 1cm de solución de catecol. Tubo 1b: 1cm de catecol oxidasa 1cm de agua destilada Tubo 1c: 1cm de agua destilada 1cm de solución de catecol al 1% Se mezcló el contenido de los tubos, y se procedió a anotar el color de cada tubo en el tiempo ³0´ en la tabla 1 Se colocó los tubos en baño maría a 40°C Se tomó lectura de el color de los tubos a los 5, 10, 15 minutos y además se anotó la intensidad de los colores de cada tubo en una escala del 1 al 5, tomando como referencia que el color a los 15 minutos representa la intensidad 5 y el color al tiempo 0 segundos representa la intensidad 0 Estos tubos se guardaron para utilizarlos en el ejercicio2.
EJERCICIO
No 2
ESPECIFICIDAD ENZIMÁTICA y
y
y
y
Se rotuló 3 tubos de ensayo: 2a, 2b, 2c igual se marcó líneas a 1cm y 2cm desde la base del tubo. Se llenó cada tubo de la siguiente forma. Tubo 1a: 1cm de catecol oxidasa 1cm de solución de catecol al 1%. Tubo 1b: 1cm de catecol oxidasa 1cm de hidroquinona al 1% Tubo 1c: 1cm de catecol oxidasa 1cm de agua destilada Se mezcló el contenido de los tubos y se registró la intensidad del color de cada tubo en tiempo 0 de acuerdo con los estándares del primer ejercicio. Se colocó los tubos en baño maría a 40°C y se registró la intensid ad de su color a los 5 y 10 minutos.
EJERCICIO
No 3
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA EN BACTERIAS y y y
Se tomó un cultivo de E. coli y uno de B. subtilis en agar almidón. Con el gotero se colocó lugol sobre los cultivos de ambas bacterias. Se observó lo que sucedía y se registró cual de las dos bacterias posee la enzima amilasa para metabolizar el almidón.
EJERCICIO
No 4
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA EN ANIMALES. y y y
y y
y
Se marcó dos tubos de ensayo A y B. A los dos tubos se los marcó con 3 líneas a 1cm, 2cm y 3cm desde la base. Al tubo A se lo rotuló CH (catalasa de hígado) y al tubo B CC (catalasa de corazón). Se colocó peróxido de hidrógeno al 1% en los dos tubos hasta la línea de 1cm Se colocó catalasa de hígado y catalasa de corazón respectivamente en los tubos hasta la marca de 2cm, y se observó la producción de burbujas. Para detener la reacción se colocó ácido sulfúrico (H 2SO4) luego de 5 minutos.
RESULTA DOS. EJERCICIO TABLA
No1
No 1
FORMACIÓN Y DETECCIÓN DE BENZOQUINONA TIEMPO
Tubo
1a naranja rojo/naranja rojo claro rojo intenso
0 5 10 15
TABLA
Tubo
1b blanquecino blanquecino blanquecino blanquecino
Tubo
1c Incoloro Incoloro Incoloro incoloro
No 2
ESCALA
DE INTENSIDAD DE
INTENSIDAD 0 5
COLOR
Tubo
1b,1c 1a
No
Color
0 5
del producto
EJERCICIO
No2 TABLA No 3 ESPECIFICIDAD
DE
LA ENZIMA CATECOL -OXIDASA
Intensidad de color r elativa en la escala 0 -5 TIEMPO
Tubo
0 5 10
3 4 4
EJERCICIO
2a
Tubo
2b
1,00 1,25 1,50
Tubo
2c
0,5 0,5 0,5
No 3
CULTIVO DE E. COLI EN AGAR ALMIDÓN CON LUGOL
CULTIVO DE B. SUBTILIS EN AGAR ALMIDÓN CON LUGOL. Se observó que la bacteria B. subtilis posee la enzima amilasa para metabolizar el almidón y la E. coli carece de esta enzima.
EJERCICIO
No 4
CATALASA DE HIGADO con peróxido de H 1% CORAZÓN con peróxido de H 1%
CATALASA DE
Se observó que la reacción de la catalasa de hígado con peróxido de hidrógeno al 1% produjo una mayor cantidad de burbujas que la re acción de catalasa de corazón con peróxido de hidrógeno al 1%.
CONCLUSIONES.-
Se pudo observar la acción de las enzimas sobre las diferentes reacciones que realizamos, y su acción tan específica. Además de su aceleración de las reacciones mediante el calor. De igual manera se pudo observar cómo reaccionan los cultivos de escherichia coli y B.subtilis ante almidón y cual cultivo posee las enzimas necesarias. Las enzimas son muy específicas, no todos los organismos pueden metabolizar los mismos nutrientes. DISCUSION.-
Las enzimas trabajan solo con ciertas reacciones específicamente, las enzimas son altamente específicas debido a su estructura molecular. Y todo esto se demostró en esta práctica. De igual manera la acción de las enzimas de las bacterias al metabolizar el almidón. Aunque no se pudo observar claramente cómo trabajan las enzimas se puede uno dar cuenta de que están presentes y que son muy importantes para el metabolismo de los seres vivos.
CUESTIONARIO.-
1.-Def ina: Sustrato: átomos o moléculas que son los reactivos de una reacción química catalizada por enzimas. Complejo
enzima: es el que forman una enzima y la molécula sobre la que esta
actúa, realizando la enzima un cambio molecu lar en su sustrato. Ejemplo enzima: hexocinasa sustrato: glucosa. Enzima: lactato deshidrogenasa sustrato: acido láctico. Sitio
activo: región de la superficie de una enzima donde se une con el sustrato y tiene lugar la reacción Energía
de activación: es la energía necesaria para obligar a las capas electrónicas de los reactivos a juntarse antes de la formación de los productos (debe añadirse para que las moléculas reaccionen entre sí) 2.- ¿Qué tipo de gas se despr ende en la r eacción del punto 7?¶ Debido a la acción de la enzima catalasa, el agua oxigenada o peróxido de hidrógeno agregado se transformará en agua y oxígeno. El desprendimiento de oxígeno se pone de manifiesto como un intenso burbujeo.
3.- ¿Cuál de los órganos pr esenta más catalasa? En el hígado, ya que presenta la función desintoxicante y necesita la catalasa para su descomposición del peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua. El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular y su función es protector contra microorganismos patógenos, principalmente anaerobios. 4.- ¿Cómo se r elaciona la cantidad de catalasa producida con la f unción principal de cada uno de los órganos? Tiene mayor función al romper las moléculas de peróxido, necesita una mayor cantidad de catalasa para no consumir mucha energía rompiendo éstas moléculas. 5.- Existen otras enzimas pr esentes en las pr eparaciones. ¿Por qué esta pr esencia no a fecta a los r esultados? Si, están presentes pero no afectan ya que las enzimas son especificas y catalizan solamente una reacción química. 6.- ¿Cuál es la temperatura óptima para la actividad d e la catecolasa? A una temperatura de 0 - 65º C, porque el peróxido de hidrógeno inactiva la Catalasa, ésta a su vez cataliza rompiendo la molécula (H2O2), por lo que se puede decir que la actividad inicial es más rápida a temperaturas altas, y la capacid ad total es más grande al reducir las temperaturas.
