INFORME DE LABORATORIO 3
CROMATOGRAFIA PRESENTADO POR: JOSE DAVID DAVID SERNA MORALES MORALES JESUS ALEJANDRO GAMBOA MESA PROFESORA: LUZ AMPARO VÉLEZ UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA ESCUELA DE MICROBIOLOGIA ASIGNATURA: QUIMICA Y LABORATORIO MEDELLIN
2016
Objetivo general: -
Separar una mezcla de compuestos orgánicos en solución, mediante cromatografía de capa fina.
Objetivos espec!icos: -
Identificar cada uno de los compuestos separados comparándolos con muestras patrones
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Calcular el factor de retardo para cada una de las especies separadas incluyendo la muestra desconocida.
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Identificar el compuesto en la muestra problema.
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Separar acetaminofén y cafeína de un fármaco por cromatografía de columna.
MAR"O TE#RI"O
La cromatografía en capa fina es una técnica usada para separar moléculas relativamente peue!as, al igual ue otras cromatografías utiliza una fase móvil y una fase estacionaria y su principio es el mismo" la sustancia de interés se ad#iere a la fase estacionaria o se mueve con la fase móvil, la fase estacionaria puede ser variada" puede ser de papel, celulosa o de un gel de silicato unido a una superficie sólida, una placa de aluminio, vidrio, plástico o papel, el tipo de fase estacionaria depende del tipo de moléculas ue se uiere separar. La fase estacionaria consiste en agua un solvente orgánico o una mezcla de ambos. La cromatografía en capa fina permite, determinar el grado de pureza de unas sustancias, comparar muestras y realizar el seguimiento de una reacción. Cromatografía de columna, $n este tipo de cromatografía, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias al e%terior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el eluyente o fase móvil. Seguidamente la mezcla orgánica ue nos interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase estacionaria, y así la fase móvil podrá ir atravesando el sistema.
DATO$ 4 . 6 e s a F
g
2 . 8 e s a F
o c i l á G o d i c A
o c i l á G o d i c A
l o n i c r o s e R
l o t f a n - B
l o n i c r o s e R l o t f a n - B
& '
'
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RE$%LTADOO$ Luego de realizar la prueba se puede observar ue la elución situó a los compuestos de la siguiente manera, ()naftol, *esorcinol y ácido gálico, ordenadas por su polaridad, en ambas placas se puede observar ue aparentemente la muestra carece de resorcinol, teniendo porciones de ácido gálico y ()naftol . + partir de la placa .- por su mayor resolución realizaremos los cálculos del factor de retardo.
5,52 cm
4,67 cm
2,28 cm
La distancia recorrida por de este dato se calculara compuestos.
0.03 cm
el solvente fue de ,/ cm a partir el factor de retardo para los
En &'estra (esconoci(a )*+: en la muestra aparentemente no se encuentra el resorcinol. B-na!tol: R!,
0.01 cm 2 0 ,/
ci(o g.lico: R!, -,3 cm 2 0,4,/ cm En &'estra patr/n: B-na!tol: R!,
0.01 cm 2 0 ,/ cm
Resorcinol: R!,
/,/4 cm 2 0,-5 ,/ cm
ci(o g.lico: R!, -,3cm 2 0,4,/ cm
"ROMATO0RAFIA DE "OL%MNA
ANALI$I$ DE RE$%LTADO
"ro&atogra!a en capa !ina: $l acetato de etilo es un compuesto ue polariza muy fácil, al encontrarse con el ()naftol, un compuesto no polar, #ace ue este se uede en la fase estacionaria, aunue por la presencia de #e%ano este se mueve un poco. $ntre más polar sea el compuesto su *f es mayor. &or lo cual se sit6a el ácido gálico como el compuesto con mayor *f. La muestra 7-4 contiene ()naftol y ácido gálico.
"ro&atogra!a (e col'&na8 Luego de realizar la observación de este tipo de cromatografía podemos decir ue la velocidad de arrastre de cada componente 9azul de metileno y naran:a de metilo;, depende de su grado de absorción en la fase estacionaria y de su afinidad por la fase móvil. &ara la fase móvil se utilizó silica gel, para llevar acabo la separación de etanol. +l realizar el e%perimento el compuesto ue salió primero de la columna fue el naran:a de metileno por ser la sustancia menos polar, el azul de metileno por ser más polar se liga con la fase móvil, por esta razón sale de ultimo.
"ON"L%$IONE$ -
Se determinó ue la muestra desconocida 7-4 contiene ()naftol y ácido gálico.
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La cromatografía de columna y la de capa fina son técnicas de separación de método fácil de aplicación.
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Se encontró el factor de retardo para cada una de las especies separadas
1RE0%NTA$ 2 <=ué tipos de cromatografía se utilizan seg6n la fase estacionaria> Cromatografía de reparto8 la fase estacionaria suele mantenerse fi:a mediante un soporte poroso, papel o celulosa, esta suele ser una mezcla de disolventes medianamente miscibles en el agua, cuanto más soluble en agua sea la sustancia a cromatografíar mas retenida y retrasada uedara en el desarrollo cromatografico. Cromatografía de adsorción8 la fase estacionaria retiene con más o menos poder a la sustancia a cromatografiar por un fenómeno de adsorción en superficie. &ara ello se utiliza al6mina, gel de sílice, la cromatografía de afinidad es un tipo de cromatografía de desorción, en la ue la fase estacionaria tiene afinidad biológica por la sustancia ue se uiere separar" se utilizan así, pare:as antígeno)anticuerpo, enzima)in#ibidor, en la cromatografía de intercambio iónico, la fase estacionaria retiene a la sustancia por su carga iónica, las sustancias ue tengan carga opuesta a la resina uedara en la fase estacionaria y las cargas iguales a la resina serán arrastradas por la fase móvil, las sustancias ue uedan unidas a la resina pueden eluir si se les cambian las condiciones, variación de p? fuerzas iónicas" este tipo de cromatografía se #ace en columna y los soportes utilizados son polímeros como la celulosa, poliestireno carbo%ilado o poliaminados. @e acuerdo al soporte físico donde se #ará la separación, #abla de dos tipos de cromatografías. Cromatografía en capa fina8 la fase estacionaria se e%tiende sobre una placa. Cromatografía en columna8 la fase estacionaria se empaueta en una columna y se #ace pasar solventes a través de ella para separar o identificar sustancias.
4 <&ara ué se utiliza la cromatografía y en ué se diferencia de la electroforesis> $s una técnica de separación de compuestos, se utiliza para la identificación y verificación de rendimiento de reacciones uímicas" y la diferencia entre cromatografía y electroforesis es ue la cromatografía separa sustancias sin ning6n uso de energía como lo #ace la electroforesis, ya ue esta separa moléculas seg6n la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual los separa por tama!o y por carga eléctrica.
3 <$n ué campos es más utilizada la cromatografía sobre papel 5 La cromatografía sobre papel es muy parecida a la cromatografía en capa fina, e%cepto ue se usa papel de filtro de alta calidad como adsorbente o fase estacionaria, el fundamento de la cromatografía sobre papel no es e%actamente la adsorción, sino más bien una combinación de adsorción y reparto, el reparto ocurre entre el agua ue #idrata la celulosa y la fase móvil orgánica, el papel se emplea cuando se desea separar compuestos polifuncionales o muy polares, por e:emplo azucares, aminoácidos" estos compuestos no pueden ser cromatografiados en adsorbentes más activos" este método se realiza parecidamente a la ALC. -. 'encione cinco solventes ue se utilicen en ALC ?e%ano 9no polar; @iclorometano 9bastante polar; Bter di etílico 9medianamente polar; 'etanol 9muy polar; Cloroformo 9polar; • • • • •
. o se puede utilizar agua como solvente, ya ue esta no es muy volátil, también porue se tardaría muc#o en subir por la fase estacionaria de sílice, y lo más importante es ue al ser el agua tan polar no interact6a con las sustancias ue en su mayoría son compuestos orgánicos y por esto es una fase móvil de poca afinidad con la cromatografía en capa fina. . Si se tiene como eluente #e%ano)éter 585 y se necesita aumentar la polaridad de este Se debería aumentar el éter ue es medianamente polar, y el #e%ano por ser un #idrocarburo es un compuesto no polar, por consiguiente para aumentar la polaridad se debe aumentar de éter. 3. + un eluente benceno)cloroformo 585 se reuiere disminuir la polaridad &ara disminuir la polaridad se debería aumentar el componente benceno y disminuir el cloroformo, ya ue el benceno es un aromático no polar, entre más proporción #aya de este menos polar será la eluente. 4. <$n ué se diferencian los términos adsorción y absorción> La adsorción es un proceso físico o uímico por el cual átomos, iones o moléculas son atrapados o retenidos en la superficie de unas materias y absorción es un fenómeno físico o uímico donde átomos, moléculas o iones pasan de una primera fase a otra incorporándose al volumen de la segunda fase
BIBLIO0RAFIA$ Dilson Cardona Ealeano" *oberto amaris" 'anual de prácticas de fundamentos de uímica orgánica" universidad de +ntiouia.
"IBER0RAFIA$ #ttp8FFGGG.uprm.eduFbiologyFprofsFvelezFfina.#tm #ttp8FFestudiarfarmacia.blogspot.com.coF/055F0-Ftipos)de)cromatografia.#tml #ttp8FFdepa.fuim.unam.m%FamydFarc#iveroF$%posicionHelectroforesisH043. pdf #ttps8FFboos.google.com.coFboos> id2u?d?S4JKICMpg2&+13Mlpg2&+13Md2cromatografiaNsobreNpapelN usosMsource2blMots2@1nOvbIPMsig2Qv(R0sKK%lC&%%KLaJPuHg4M#l 2esMsa2KMved20C==+$GC/oC#'Itcz%oaEy+I#*TeC#1KUgEC7v 2onepageM2cromatografiaV/0sobreV/0papelV/0usosMf2false #ttp8FFblog.mariogonzalez.esF/003F01Fdiferencia)entre)adsorcion)y) absorcion.#tml #ttp8FFuimica.laguia/000.comFgeneralFcromatografia)en)columna #ttp8FFGGG.ub.eduFoblFoblV/0castellanoFcromatografiaHtipus.#tml
