Manual de Química Orgánica, 2º Semestre Lic. Ciencias de la Tierra Fac. Ciencias, UNAM
!"CT#CA N$.% CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA IDENTIFICACIÓN DE TERPENOS EN MANZANILLA INTRODUCCIÓN La cromatografía cromatografía en capa fina (CF), (en inglés Thin Thin Layer Chromatography Chromatography o TLC) es una técnica analítica rápida y sencilla, muy utilizada en un laoratorio de !uímica "rgánica# $ntre otras cosas permite% & 'eterminar el grado de pureza de un compuesto# e puede determinar así, por eemplo, la efecti*idad de una etapa de purificaci+n# & Comparar muestras# i dos muestras corren igual en placa podrían ser idénticas# i, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia# & ealizar el seguimiento de una reacci+n# $s posile estudiar c+mo desaparecen los reacti*os y c+mo aparecen los productos finales o, lo -ue es lo mismo, saer cuando la reacci+n ha acaado# La muestra a analizar se deposita cerca de un e.tremo de una lámina de plástico o aluminio -ue pre*iamente ha sido sido recu recui ier erta ta de una una fina fina capa capa de adso adsor rent ente e (fase $ntonc nces es,, la lámi lámina na se colo coloca ca en una una estacionaria). $nto cueta cueta cerrada cerrada -ue contie contiene ne uno o *arios *arios disol* disol*ente entess (fase móvil). móv il). mezcl mezclado adoss / medida -ue la mezcla de diso disol* l*en ente tess asci ascien ende de por por capi capila lari rida dad d a tra* tra*és és del del adsor adsorent ente, e, se produc produce e un repart reparto o difere diferenci ncial al de los productos presentes en la muestra entre el disol*ente y el adsorente#
Adsorbentes y elyentes
Fig# 1# CC6
Los dos adsorentes (fase estacionaria) más ampliamente utilizados son la gel de sílice (i 0) y la almina (/l 0"2), amas de carácter polar# La almina anhidra es el más acti*o de los dos, es decir, es el -ue retiene con más fuerza a los compuestos3 por ello se utiliza para separar compuestos compuestos relati*ament relati*amente e apolares apolares (hidrocarur (hidrocaruros, os, haluros haluros de al-uilo, al-uilo, éteres, éteres, aldehídos aldehídos y cetonas)# La gel de sílice, por el contrario, se utiliza para separar sustancias más polares (alcoholes, aminas, ácidos caro.ílicos)# $l proceso de adsorci+n se dee a interacciones intermoleculares de tipo dipolo&dipolo o enlaces de hidr+geno entre el soluto y el adsorente# $l adsorente dee ser inerte con las sustancias a analizar y no actuar como catalizador en reacci reaccione oness de descom descompos posici ici+n# +n# $l adsor adsorent ente e interac interaccio ciona na con las sustanci sustancias as mediant mediante e interacci+n dipolo&dipolo o mediante enlace de hidr+geno si lo presentan# $l orden de eluci+n de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase m+*il o eluyente# $l eluyente puede ser un disol*ente nico o dos misciles de distinta polaridad# $n el siguiente recuadro se recoge por orden creciente de fuerza eluyente los disol*entes más comnmente empleados# 4e.ano 5 tetraclorometano 5 cloroformo 5 diclorometano 5 acetato de etilo 5 acetona 5 0&propanol 5metanol 5 agua
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7sualmente se emplea una mezcla de dos disol*entes en proporci+n *ariale3 la polaridad de la mezcla será el *alor promediado en funci+n de la cantidad de cada disol*ente empleada# $l eluyente id+neo para cada caso ha de encontrarse por 8el método del ensayo y del error8#
O!"#TI$O% 1# 0#
$.traer los metaolitos secundarios presentes en la flor de Matriacaria chamomilla eparar por cromatografía en capa fina los terpenos presentes en el e.tracto de flores de manzanilla Comparar los f otenidos e.perimentalmente con los reportados en literatura#
2#
ACTI$IDAD#% &R#$IA%
$laora un mapa conceptual con los distintos tipos de cromatografía# 9ndica sus principales aplicaciones# 9n*estiga los metaolitos secundarios presentes en la flor de manzanilla 9n*estiga -ué son los terpenos y su importancia médica y ecol+gica# 'iua las estructuras -uímicas del isaonol, camazuleno, farneseno# 9n*estiga :c+mo se calcula el f; 9n*estiga los tipos de re*eladores más frecuentes en cromatografía en capa fina#
$laora la ficha técnica del tolueno, acetona, acetato de etilo, alumina TO'U#NO
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&ro. *sicas &ro. +*micas &nto de sión &ntos de #bllición To,icolo-*a Usos y alicaciones órmla oleclar y #strctral
DISEÑO EXPERIMENTAL I.
AT#RIA'#% AT#RIA'
%U%TANCIA%
1 Cr omat ogl acasdesi l i cagel
Si l i cagel 60F254 ( Me r c k )d e1 0x 3c m
1v as odeppde100mL
met anol
2v asodep pde20mL
tolueno /cetato de etilo
1mo r t e r od ep or c e l a na Papel fi l t r o Embud o 2t u bo sdeen s a y e 1p i p e t ade5mL 1Pi p e t a1mL 1l ámpar aUV365 Par r i l l aa60º C Capi l ar es
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Manual de Química Orgánica, 2º Semestre Lic. Ciencias de la Tierra Fac. Ciencias, UNAM gr a di l l a Par r i l l adec al ent ami ent o Moscamagnét i ca Cá ma r a sc r o ma t o g r á fi c a s
¡PRECAUCIÓN! $s necesario el uso de ata y campana de e.tracci+n# /lgunas sustancias *olatilizan y pueden causar irritaci+n a mucosas y piel# $*ita el contacto directo con la piel y tu ropa# =otifica a tu profesor de cual-uier duda y en caso de cual-uier accidente# /lgunas de las sustancias son flamales manea con cuidado#
II.
&ROC#DII#NTO
/. #0TRACCIÓN D# #TA!O'ITO% %#CUNDARIO% /. 6esa 1 gr de flores de manzanilla fresca y macera con un mortero hasta homogenizar# 1. 6asa a un *aso de precipitado de >< mL y adiciona 1< ml de acetona# Coloca una mosca y pon en agitaci+n moderada en una parrilla de calentamiento durante ? minutos sin calor# 2. $n otro *aso de precipitado de >< mL, filtra el e.tracto y pon a e*aporar la acetona en a@o maría o directo a la parrilla e*itando camios ruscos de temperatura# Ten cuidado de *erificar y no someter a camios ruscos de temperatura para -ue no tengas un accidente con tu material# 3. $n las paredes del *aso de precipitado -uedarán sustancias adheridas de tono *erde amarillento# esuspende con 1 mL de tolueno par a su e*aluaci+n# 1. &R#&ARACIÓN D# CROATO&'ACA% #N CA&A INA 4. Contar con una cromatoplaca de silica A de apro.imadamente > . 1< cm# (fase estacionaria) 5. Barca a una distancia de <#? cm apro.imadamente una línea con lápiz 6. Toma una muestra del e.tracto con un capilar 7. Coloca el capilar al centro de la línea como muestra la figura y deposita el e.tracto# 'ea -ue se e*apore un poco y repite el adicionar el e.tracto en el mismo punto otras a 1< *eces# ="T/% T$= 6$C/7C9D= '$ =" L$E/=T/ L/ 9L9C/ '$ L/ 6L/C/# 8. 6repara 1< mL de sistema de eluci+n Toleno9 acetato de etilo (8296) y colocalo en una cámara cromatográfica# Cierra y dea -ue se sature con los *apores del sistema de eluci+n# /:. /re la cámara cromatografica e introduce la cromatoplaca en forma *ertical, teniendo cuidado de -ue el eluyente apenas se encuentre ligeramente deao de la línea marcada con lápiz, para -ue inicie la adsorci+n a tra*és de la sílica# //. Cierra la cámara y dea -ue el sistema de eluci+n (fase m+*il), empiece a ser adsorida# /1. Cuando la fase m+*il se encuentra apro.imadamente a <#? cm del orde superior, se saca la placa de la cámara, se marca con lápiz hasta donde llego el eluyente y se dea secar a temperatura amiente o dentro de la campana de e.tracci+n enciende para la e*aporar# /2. e mide la distancia con una regla en milímetros del punto de aplicaci+n a donde se detu*o la fase m+*il, para otener la distancia recorrida por el disol*ente#
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2# R#$#'ADO D# CROATO&'ACA% #N CA&A INA
/3. e procede a identificar el nmero de bandas (manchas) -ue representan un compuesto separado del e.tracto, al e.poner en oscuridad a luz 7E# /4. e marcan las andas *isiles en 7E2A? encerrando con un lápiz y se anota la coloraci+n -ue presenta cada mancha# /5. e puede e.poner a re*elador de *ainillina en 4 0"> (<#1 g *ainillina diluido en 1< mL de ácido sulfrico) por aspersi+n para potenciar la presencia de las andas, se calienta en parrilla a 1
9#
$laora el diagrama de fluo para la e.periencia práctica
99#
egistro de resultados Completa el cuadro con la coloraci+n de la anda y la distancia a la -ue se localiza
N>mero de banda Coloración a U$254 1 0 2 > ? A
Distancia en mm del nto de alicación
999#
Calculo del f para cada compuesto separado#
9E#
Tala 1 de los compuestos separados del e.tracto de flor de manzanilla
N>mero de banda 1 0 2 > ? A
Rf
&osible comesto
AN?'I%I% D# R#%U'TADO% Las siguientes preguntas son s+lo una guía para -ue elaores tus análisis de resultados, no te limites a ellas# Tus aportaciones serán *aliosas para tu aprendizae# 1# 'e acuerdo a prueas analíticas de los terpenos presentes en la flor de manzanilla se mencionan A posiles constituyentes dentro del aceite esencial de la flor# $n el e.tracto -ue otu*iste se logro identificar el mismo nmero de compuestos# /rgumenta# 0# Consideras -ue el *alor de f es confiale para determinar -ue compuestos se pueden aislar# /rgumenta# 2# 'e las técnicas de cromatografía e.istentes, -ue *entaas y des*entaas encuentras en cada una de ellas# ># $.plica -ue importancia se tiene en el tipo de disol*entes -ue forman la fase m+*il y si la utilizada en esta e.periencia práctica es eficiente o puedes sugerir otra#
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ACTI$IDAD #0TRAC'A%#9 'e la lectura del artículo de "rme@o, $# y Fernández, C# Los terpenos de las plantas. Investi-ación y Ciencia% 0<10% A0&AG 9n http%HHIII#thcterapeutico#comHIp& contentHuploadsH0<12H
MANEJO DE RESIDUOS ecuperar por un método de destilaci+n los disol*entes# $n*iar a incineraci+n los residuos de e.tracci+n#
!I!'IO;RA@A D# CON%U'TA
1# /ott '# J /ndeIs # # (1GK<)# 9ntroducci+n a la Cromatografía, 2a ed#, /lhamra, Badrid# 1GK<# 0# /ult /#, (1GG)# Techni-ues and $.periments for "rganic Chemistry# 7ni*ersity cience ooMs, 7# 2# N*ila O# P# et al#(0<<1)# !uímica "rgánica, $.perimentos con un enfo-ue ecol+gico, 'irecci+n Peneral de 6ulicaciones y Fomento $ditorial, 7=/B, Bé.ico# ># ates ##, chaefer Q#6# (1GKK)# Técnicas de 9n*estigaci+n en !uímica "rgánica, 6rentice& 4all 9nternacional, Badrid# ?# Clement #, (0<<0)# "rganic Chemistry Laoratory Banual, Te.as /RB 7ni*ersity, 7/# A# Fessenden #Q# and Fessenden Q# # (1GG2)# "rganic Laoratory Techni-ues, rooMsHCole, 7/# K# 4ammond C#(1GGG)# $.perimental "rgan ic Techni-ues, Freeman, 7/, 1GGG# # 6a*ia '# L#, Lampman P# B# and Sriz P## (1G)# 9ntroduction to "rganic Laoratory Techni-ues, a Contemporary /pproach, 2rd# ed## aunders College, Fort orth# G# Ealencia 6, P#/# y Bartínez, /# (0<<1)# Puía para el reconocimiento d e drogas *egetales por cromatografía en capa fina# Bedellín, Colomia.I n[ ht t p: / / f ar mac i a. udea. edu. c o/ ~ff/ c ont r ol %20de%20cal i dad%20ff. pdf ]r e c up er a doel 1 5d ee ne r ode20 13
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