Curso de DNA Forense

Programa de Educação Continuada a Distância

Curso de DNA Forense

Aluno:

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Curso de DNA Forense MÓDULO I

Atenção: O Atenção: O material deste módulo está disponível apenas como parâmetro de estudos para este Programa de Educação Continuada. É proibida qualquer forma de comercialização do mesmo. Os créditos do conteúdo aqui contido são dados aos seus respectivos autores descritos descritos na biblio biblio rafia rafia consultad consultada. a.

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SUMÁRIO

Módulo I Introdução Breve histórico do DNA forense Fundamentos de biologia molecular

Módulo II DNA genômico x DNA mitocondrial Marcadores de variação genética Análise do DNA forense: aspectos aspectos gerais Estudo da metodologia aplicada à identificação humana Exame pericial em local de crime

Módulo III Coleta do material biológico Extração de DNA Quantificação de DNA Reação de amplificação pela polimerase - PCR

Módulo IV Eletroforese e detecção dos fragmentos de DNA Gel de agarose Gel de poliacrilamida Eletroforese capilar

3 Este material deve ser utilizado utilizado apenas apenas como parâmetro parâmetro de estudo deste Programa. Programa. Os créditos deste deste conteúdo são dados aos seus seus respectivos autores autores

Módulo V Interpretação dos resultados Análise de outros perfis genéticos Cromossomo Y DNA mitocondrial Controle de qualidade dos laboratórios Controle de qualidade externo: testes de proficiência em genética forense Considerações finais Glossário Referências bibliográficas

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MÓDULO I Introdução A identificação humana pelo estudo do perfil genético é amplamente utilizada em casos de caracterização de vínculo genético familiar, seja em processos cíveis (ex.: exclusão ou não da paternidade), como também em processos criminais (ex.: cadáveres e materiais biológicos encontrados na cena do crime). Atualmente, a mídia tem contribuído de forma significativa para a divulgação e popularização dessa tecnologia, que vem evoluindo sobremaneira nas últimas duas décadas. No entanto, algumas considerações sobre essa tecnologia não passam de mito, pois não se pode concluir que “o DNA resolve tudo”, mas que a análise

do

perfil

genético

pode

auxiliar

na

identificação humana fazendo parte das provas periciais de um determinado caso criminal ou civil.

Segundo Butler (2005), os testes de DNA para identificação humana podem ser utilizados para: Casos forenses: análise do DNA do suspeito com aquele obtido da evidência biológica encontrada na cena do crime ou nas vítimas; Teste de paternidade ou caracterização de vínculo genético familiar: exclusão ou não de supostos pais, filhos, mães e outros membros da família; Desastres em massa: identificação dos fragmentos humanos e dos corpos encontrados em um desastre com inúmeras vítimas; Investigações históricas; Investigações de pessoas desaparecidas; 5 Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores

Identificação de militares; Banco de DNA de criminosos ou de evidências biológicas.

Para isso, é necessário que alguns conhecimentos sejam adquiridos para sua posterior

realização

laboratorial.

Tais

conhecimentos teóricos serão ensinados nesse curso, que englobará desde os fundamentos básicos da biologia molecular até a elaboração de protocolos para a realização do estudo do DNA forense.


Breve Histórico do DNA Forense

Antes da utilização do DNA para identificação humana, os genes e suas estruturas foram estudados para outras finalidades, sendo resumidamente descrito a seguir: 1856-1863: Gregor Mendel

Figura 1: Gregor Mendel



Considerado o “pai da genética moderna”



Estabeleceu as regras da herança genética



Realizou experimentos com 21.000 plantas híbridas para estabelecer o conceito de herança genética (Figura 2).


Figura 2: Resumo dos experimentos realizados por Mendel, com diversos tipos de plantas e sua herança genética, com a presença de genes dominantes YY e recessivos yy.

1900-1933: Thomas Hunt Morgan (Figura 3)

Figura 3: Thomas Hunt Morgan contribuiu para a genética moderna ao descobrir a herança cromossômica e a recombinação genética. 8 Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores



Descobriu a herança cromossômica (Figura 4) e a recombinação genética, na qual os ocorre a troca de fragmentos cromossômicos antes da divisão celular (Figura 5).

Figura 4: Representação esquemática dos resultados dos experimentos de Morgan: herança de genes ligados ao cromossomo X.

Figura 5: Esquema ilustrativo do método de recombinação genética dos cromossomos. 9 Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores

1944: Avery, MacLeod e McCarty (Figura 6) 

Atribuíram ao DNA a herança genética

Figura 6: Fotografias dos pesquisadores que estudaram a herança genética do DNA.


Grupos sanguíneos: Antes dos testes utilizando-se ácidos nucléicos, muitos tipos de exames sanguíneos eram utilizados para auxiliar na investigação de paternidade. Esses testes, baseados em diferentes sistemas de grupos sanguíneos ofereciam resultados de até 70 a 90%, se todos fossem analisados e combinados. Os grupos sanguíneos recomendados pela Associação Médica Americana eram os sistemas eritrocitários: ABO, Rh, MNs, Kell, Duffy, Kidd e o sistema sanguíneo leucocitário HLA (PAGE-BRIGHT, 1982). 1953: James Watson e Francis Crick (Figura 7). 

Descoberta da estrutura do DNA (Figuras 8 e 9)

Figura 7: Watson e Crick.


Figura 8: Fórmula química de uma cadeia simples de ácido nucléico e diagrama da molécula de DNA.

Figura 9: Modelo original da molécula de DNA descrita por Watson e Crick em 1953.


1985 – Alec Jeffreys (Figura 10):

Figura 10: Alec Jefreys em seu laboratório – a origem da análise do perfil de DNA.



DNA fingerprint ou impressão digital de DNA (Figura 10 e 11) foi descrito pela

primeira vez por Alec Jeffreys, em 1985, e revolucionou a análise do DNA visando a caracterização de vínculo genético. A identificação das regiões polimórficas é realizada empregando-se Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de Restrição (Restriction Fragment length polymorphism – RFLP), no qual o DNA é submetido à digestão utilizando-se enzimas de restrição específicas que cortam a dupla fita de DNA em regiões determinadas. Os fragmentos são separados eletroforeticamente, e posteriormente desnaturados, neutralizados e transferidos do gel de eletroforese para uma membrana de nylon, em um processo denominado Sourthen blotting . Mediante a presença de uma solução de hibridização com sondas específicas contendo fósforo radioativo, os fragmentos de DNA fita simples irão


hibridizar e aqueles não correspondentes serão removidos. Após a autorradiografia, os VNTRs poderão ser visualizados para análise (Figura 11 e 12) (COMMITTEE ON DNA TECHNOLOGY IN FORENSIC SCIENCE, 1992; JEFFREYS, 1985).

Figura 11: Análise da impressão digital de DNA por Alec Jeffreys.


Figura 12: Representação esquemática da análise de Repetições Consecutivas de Número Variável ou VNTR.

Desde então, algumas tecnologias foram desenvolvidas incluindo a análise de Repetições Consecutivas Curtas ou STRs (Edwards et al, 1991) por gel de poliacrilamida corados por prata (Nelleman et al, 1994) ou analisados por equipamentos semiautomáticos que utilizam gel de poliacrilamida e realizam a leitura por laser dos fragmentos amplificados pela PCR com iniciadores marcados com fluoróforos que emitem fluorescência (Kimpton et al, 1993; Gill et al, 1995). Atualmente, a eletroforese por capilar (Pearce et al, 1993) é amplamente utilizada e possui o mesmo princípio que a eletroforese em gel analisados por laser, com a


diferença de que possui capilares para a separação eletroforética dos fragmentos de DNA (Butler, 2005). Há também relatos da utilização de microchips de DNA para a análise de STRs (Radtkey et al, 2000; Huang et al, 2004; Divine e Allen, 2005; Bienvenue et al, 2005), podendo também ser um potencial para a análise futura dos STRs (Figura 13).

Figura 13: Eventos históricos no mundo e no Brasil relacionados à análise de DNA forense.

O Projeto Genoma concluído agora pode identificar pelo sequenciamento do DNA humano a localização de genes, revelando que há provavelmente cerca de 20.500 genes humanos. Tal fato revelou ao mundo informações detalhadas sobre a estrutura, organização e funcionamento do conjunto completo de genes humanos. O Consórcio 16 Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores

Internacional para Sequenciamento do Genoma Humano publicou o primeiro rascunho do genoma humano na revista Nature, em fevereiro de 2001, com a sequência de todo o genoma de três milhões de pares de bases, cerca de 90% completo. A surpreendente conclusão desta primeira versão era de que o número de genes humanos pareceu ser significativamente menor do que estimativas anteriores, a qual variou de 50.000 genes a 140.000 (NATIONAL HUMAN GENOME RESEARCH INSTITUTE, 2008). A sequência completa foi concluída e publicada em abril de 2003. Após a publicação da maioria do genoma, em fevereiro de 2001, Francis Collins, diretor do Instituto Nacional de Pesquisa do Genoma Humano (National Human Genome Research Institute – NHGRI), observou que o genoma poderia ser pensado em termos de um livro com várias utilizações: “Trata-se de um livro de história, uma narrativa da viagem da nossa espécie através do tempo. É um trabalho manual, com um projeto para construção incrivelmente detalhado de cada célula humana. E é um livro-texto transformador da medicina, com informações que darão aos profissionais da saúde novos poderes para tratar, prevenir e curar as doenças” (NATIONAL HUMAN GENOME RESEARCH INSTITUTE, 2008). As ferramentas criadas através do Projeto Genoma também estão sendo utilizadas para caracterizar o genoma de outros organismos usados extensivamente em pesquisa biológica como ratos, moscas e frutas. Tal pesquisa é importante porque a maioria dos organismos tem genes muito semelhantes ou “homólogos”, possuindo funções similares. Estes objetivos são necessários e continuarão a exigir uma variedade de novas tecnologias que tornarão possível e relativamente rápido construir um primeiro esboço do genoma humano, assim como aperfeiçoar este projeto (NATIONAL HUMAN GENOME RESEARCH INSTITUTE, 2008).


As técnicas utilizadas no projeto genoma incluem: 

Sequenciamento de DNA;



O emprego da técnica de análise de Fragmentos de

Restrição dos Polimorfismos de Comprimento (RFLP); 

Cromossomos artificiais em levedura (YAC);



Cromossomos artificiais em bactéria (TAS);



A reação em cadeia da polimerase (PCR);

Eletroforese.



Fonte: An Overview of the Human Genome Project. Disponível em http://www.genome.gov/12011238


Fundamentos de Biologia Molecular O DNA (ácido desoxirribonucléico) armazena toda a informação genética, sendo encontrado nos cromossomos do núcleo e nas mitocôndrias, a maior parte localizada no primeiro (Figuras 14 e 15).

Figura 14: A célula é a unidade básica de todos os indivíduos vivos.


Figura 15: DNA a molécula da vida: do cromossomo a cadeia dupla de DNA.


O DNA pode ser extraído de amostras de sangue, de esfregaços bucais, de saliva, de osso, de dente, de tecidos e órgãos, de fios de cabelos, de sêmen, entre outros materiais biológicos (Brettell et al, 2005) (Figura 16).

Figura 16: Amostras biológicas para análise do DNA forense.


As moléculas de DNA caracterizam-se por polímeros de alto peso molecular, compostos de unidades básicas de nucleotídeos contendo 2-desoxirribose ligados entre as posições 3’ e 5’ de carbonos por ligações fosfodiéster. A estrutura do DNA é uma dupla hélice de cadeias complementares opostas, na qual as duas moléculas são mantidas juntas por fracas pontes de hidrogênio (Figuras 17 e 18) (Watson & Crick, 1953).

A)


B)

Figura 17: A) Representação esquemática da dupla hélice da molécula de DNA segundo Watson & Crick, 1953; B). Estrutura química da molécula de DNA, com sua natureza antiparalela com o carbono 3’ com o carbono 5’. As bases C e G são ligadas por três pontes de hidrogênio e as A e T, por duas.


Figura 18: Representação esquemática da molécula de DNA.

A base adenina liga-se com timina e citosina com a guanina através de duas ou três uniões de hidrogênio respectivamente. Essas bases nitrogenadas (adenina - A, timina - T, citosina - C e guanina – G ou g) (Figura 19), ao se ligarem com o açúcar, constituem o nucleosídeo; sendo que o último ligado com um grupamento fosfato, constitui o nucleotídeo, que é a unidade básica de repetição na fita de DNA (Watson & Crick, 1953) (Figura 20). 24 Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores

Figura 19: Estrutura química das bases nitrogenadas e suas respectivas pontes de hidrogênio.


Figura 20: O nucleotídeo e par de bases (“base pair” - bp)

Determinados fragmentos de DNA especificam a síntese de RNA em um processo denominado transcrição. O ácido ribonucléico (RNA) é um polímero linear composto de cadeia de unidades de ribose ligadas pelas posições 3’ e 5’ por intermédio de grupamentos fosfodiéster, tendo como função a síntese protéica e também pode constituir o genoma de alguns vírus. O gene é uma unidade de transcrição que consiste de um segmento de DNA específico que se estende do início do sítio de transcrição ao sítio de término de transcrição. O RNA especifica a síntese de polinucleotídeos que formarão as proteínas, sendo tal processo denominado tradução, ocorrendo nos ribossomos, nas mitocôndrias e cloroplastos (Figuras 21, 22 e 23) (Beard & Armentrout, 1967; Srinivasan & Yathindra, 1977).


Figura 21: Fluxograma da transcrição e translação.


Figura 22: Mecanismo de produção de aminoácidos pelas células.


Figura 23: Ilustração da transcrição e translação.

As regiões de um gene que codificam proteínas são denominadas éxons e aquelas que não a realizam, íntrons. Cada éxon codifica uma porção específica da proteína completa. Em algumas espécies, incluindo a humana, os éxons são separados por longas regiões de DNA denominadas íntrons ou DNA “lixo”, que aparentemente não estão associadas à codificação de DNA (National Human Genome Research Institute, 2008) (Figura 24 e 25).


Figura 24: Diferenças entre os éxons e íntrons. Observe a remoção da parte amarela, correspondente ao íntron.


Figura 25: Diferenças entre os éxons e íntrons.


Os alelos constituem as variantes de um gene em uma região particular, ou lócus, em um cromossomo. Diferentes alelos produzem variações nas características individuais como, por exemplo, cor do cabelo ou tipo sanguíneo (National Human Genome Research Institute, 2008) (Figura 26).

Figura 26: Alelos correspondentes à cor dos olhos, ligados ao cromossomo X.


A duplicação celular ocorre através da mitose (Figura 27) e a formação de gametas masculinos e femininos ocorre através da meiose (Figura 28).

Figura 27: A mitose é responsável pelo crescimento e desenvolvimento dos indivíduos, bem como a reposição de células injuriadas ou destruídas do corpo.


Figura 28: A meiose é um processo de divisão celular pelo qual uma célula diplóide (pares de cromossomos, sendo um materno e outro paterno) origina quatro células haplóides (um cromossomo), reduzindo à metade o número de cromossomos constante de uma espécie.


A transferência das informações genéticas de uma geração a outra ocorre através da replicação do DNA, catalisada por enzimas denominadas DNA polimerases. Essas enzimas mediam a síntese da nova fita de DNA in vivo, utilizando como molde (template) a fita complementar da molécula existente. Inicialmente, a molécula de DNA tem as suas fitas separadas pelo rompimento das ligações de hidrogênio que mantêm a dupla hélice, em um processo denominado desnaturação, que ocorre in vivo em pH alcalino. Além da fita molde, é necessária a presença de um oligonucleotídeo iniciador ou primer , ou seja, um pequeno fragmento de DNA simples, complementar a fita molde, desoxinucleotídeos trifosfatados (dATP, dCTP, dGTC, dTTP), que serão incorporados à fita duplicada. A replicação do DNA ocorre em regiões específicas denominadas origem de replicação (Marmur & Doty, 1959). Sucintamente, a replicação ocorre com a adição de um nucleotídeo à fita de DNA pela ligação de seu grupo fosfórico, presente no carbono 5' da desoxirribose, com a hidroxila do carbono 3' da desoxirribose do último nucleotídeo presente na cadeia replicada. Por esse motivo, descreve-se que a síntese de DNA ocorre no sentido 5´-> 3´ (Figura 29) (Marmur & Doty, 1959;). Todo o processo descrito acima será a base do princípio da amplificação do DNA in vitro denominada reação em cadeia pela polimerase (Polymerase Chain Reaction – PCR), que será estudado nos tópicos adiante.


Figura 29: Posição 5´- 3´das fitas de DNA.

----------------FIM DO MÓDULO I---------------


C rso de N Fo ens

MÓD LO II

Atenção: O material deste módulo está disponível apenas como parâmetr de estudos para est Programa de Educação Continua a. É proibi a qualquer forma de c mercializaç o do me mo. Os cr ditos do c nteúdo aq i contido s o dados aos seus re pectivos a tores descritos na Bibliografia Co sultada.

MÓDULO II

DNA Genômico X DNA Mitocondrial O conjunto completo de sequências no material genético de um organismo é denominado genoma, incluindo todos os cromossomos mais qualquer DNA presente nas organelas. O genoma nuclear humano possui cerca de 3300 Mb, distribuídos em 22 cromossomos autossômicos e 2 sexuais (Figura 30 e 31), compostos de 30 a 35 mil genes, caracterizando por 1,5% a 2% de DNA codificante de proteínas, sendo que 46% do total constitui-se de sequências de DNA repetitivas (Wiemann, 2001; Szymasky, 2005).

Figura 30: Cromossomos humanos.


Figura 31: Cariótipo de um humano do sexo masculino.

A finalização do sequenciamento do DNA humano (Tabela 1) trouxe alguns dados que alteraram os valores esperados pela comunidade científica, como por exemplo, a quantidade de genes. Estimava-se que o genoma humano possuía mais de 80.000 genes, mas após o Projeto Genoma, estima-se que existam de 20.000 a 25.000 genes (Figura 32).


Tabela 1: Quantidade de nucleotídeos em cada cromossomo humano.


Figura 32: Resumo das características básicas do genoma humano.


O genoma mitocondrial possui particularidades que o diferenciam do genoma cromossômico, sendo sua herança materna. Sua estrutura circular de 16,5Kb lhe fornece maior resistência à digestão enzimática de uma única célula há a presença de milhares de mitocôndrias, cada qual com uma cópia de DNA mitocondrial, sendo que 93% do seu genoma é codificante, não possuindo íntrons e com poucas regiões repetitivas (Anderson et al, 1981). Dentro de uma única célula há inúmeras cópias do genoma mitocondrial, ao contrário do genoma nuclear, que possui uma cópia por célula (Budowle et al, 2003) (Figura 33, 34 e 35).

Adaptado de http://www.fbi.gov/hq/lab/fsc/backissu/july1999/dnaf1.htm. Acessado em 28/09/2008 Figura 33: Diferenças básicas entre o DNA genômico ou nuclear e mitocondrial.


Figura 34: Representação esquemática do DNA genômico ou nuclear e do DNA mitocondrial (mtDNA).


Figura 35: Representação esquemática do DNA mitocondrial (mtDNA), de acordo com as suas regiões hipervariáveis.


Marcadores de Variação Genética A variabilidade do DNA humano confere a diferença entre cada ser vivo, sendo que pode ser denominada por polimorfismo se a variação genética possuir frequência acima de 1% em determinada população e mutação abaixo desse valor (Beiguelman, 2006). Jeffreys et al. (1985) foi um dos primeiros a analisar as regiões de minissatélites do DNA humano, possibilitando a investigação de paternidade e a identificação em casos criminais. O polimorfismo dos minissatélites permite que ocorra a diferenciação dos indivíduos, aumentando a possibilidade de termos uma quantidade maior de alelos na população, desde que não sejam gêmeos idênticos, posto que terão o mesmo perfil genético. Para a análise do minissatélite, Jeffrey et al . desenvolveram o DNA fingerprint (impressão digital de DNA). Ao utilizar a tecnologia de Southern blot , obtiveram um padrão de bandas específico para cada indivíduo, como se fosse uma impressão digital. Os

Single Sequence Length Polymorphism (SSLP) ou polimorfismo de

comprimento de sequência única englobam os VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) ou repetições consecutivas de número variável (Wyman e White, 1980; Jeffreys et al,1985; Wolff et al,1989) ou minissatélites descritos no parágrafo anterior, e também os STR (Short Tandem Repeats) ou repetições consecutivas curtas ou microssatélites (Edward et al, 1991; Edward et al, 1992) (Figuras 36, 37 e 38). A diferença entre eles é o tamanho da sequência que se repete, sendo que nos microssatélites essa estrutura é menor, pois possuem repetições constituídas de 2 a 9 pares de bases, e o minissatélite, de 10 a 64 pares de bases. Esse DNA satélite na maioria das vezes não é transcrito, consequentemente não está associado com a expressão da informação genética (Nelleman et al, 1994; Hamond et al , 1994; Gill et al , 1994; Urquart et al , 1994; Chakraborty et al , 1999).


Figura 36: Representação esquemática comparando as VNTRs das STRs, segundo sua unidade de repetição.

Figura 37: Representação esquemática das repetições consecutivas do STR TPOX e seus respectivos alelos.


Os Single Nucleotide Polymorphism (SNP) ou polimorfismo de nucleotídeo único é uma variação na sequência de DNA que ocorre quando um nucleotídeo é alterado por outro em sequências de DNA que podem ou não codificar genes (Delahunty, 1996; Sobrino et al , 2005; Butler, 2005) (Figuras 38 e 39).

Figura 38: Representação esquemática comparando os polimorfismos de sequência com os de comprimento .


Figura 39: Representação esquemática de sequências de DNA de três indivíduos distintos com a presença de um SNP (polimorfismo de sequência) e um STR (polimorfismo de comprimento), mostrando suas diferenças.

Atualmente, os STRs e SNPs são empregados amplamente para a identificação humana e possuem diferenças relevantes (Gill et al , 2004; Butler, 2005) (Quadro 1).


Quadro 1: Comparação entre os STRs e SNPs (adaptado de Butler, 2005). STR

SNP

Variam de 2 a 9 nucleotídeos que se repetem consecutivamente

Troca de bases A/T, A/G, A/C, C/T, C/G, T/G.

Apresentam-se em diversos alelos,

Normalmente 2

normalmente mais de 5 Detectado por separação eletroforética em gel ou capilar

Análise por sequenciamento ou hibridização em microchip.

O FBI preconiza 13 STRs

Estima-se que mais de 50 SNPs seriam necessários para a análise (Gill et al, 2004)

Vantagens: 

Vantagens:

Banco de dados populacionais



realizado no mundo todo 

Os produtos de PCR podem ser menores, resultado em maior chance de amplificação,

A presença de vários alelos

principalmente em amostras

facilita a identificação de

biológicas degradadas.

mutações e misturas de DNA. 

Após devidamente otimizados e estudados, pode-se analisar mais de 1000 SNPs em um mesmo microchip, mas essa tecnologia ainda não é amplamente empregada.


A análise dos SNPs também pode estar associada aos fenótipos individuais, havendo uma possibilidade futura de identificação de traços físicos como, por exemplo, a cor da íris (Frudakis et al , 2003). Sua grande aplicação na atualidade se dá nas pesquisas de farmacogenética e na indústria farmacêutica, na caracterização de doenças de origem genética e bioquímica (Wang et al , 1998). Jobim et al . (2006) relata que os melhores STRs utilizados na identificação humana são aqueles com maior polimorfismo (maior número de alelos), menor tamanho (100 a 200 pares de bases), elevado índice de discriminação e heterozigose, e baixa frequência de mutações. Para isso, há a necessidade dos laboratórios realizarem a frequência genética em pelo menos 100 indivíduos não relacionados.

Análise do DNA Forense: Aspectos Gerais

Para analisar uma amostra de material biológico visando caracterização de vínculo genético, seja familiar ou em casos criminais, qualquer contaminação de DNA estranho, ou mesmo a inadequação das metodologias aplicadas, pode resultar tanto na impossibilidade de estabelecer os perfis genéticos como na inutilização da amostra, posto que principalmente em casos forenses a amostra pode ser única. A primeira preocupação no estudo do perfil genético, visando à identificação humana, é avaliar o quanto as metodologias de detecção utilizadas pelos laboratórios são válidas, assim como seus princípios moleculares e genéticos. Tendo em vista assegurar uma geração de dados corretos e tecnologias adequadas, um apropriado programa de controle de qualidade é essencial para os laboratórios de análises clínicas que realizam identificação humana pelo DNA. Todas as metodologias de análise de DNA forense devem ser submetidas a um programa de validação visando assegurar a segurança, a reprodutibilidade e robustez da técnica (Klosterman, 2001). Resumidamente, a análise de DNA forense ocorre da seguinte maneira (Figura 40):


Figura 40: Esquema da sequência dos métodos a serem utilizados para o estudo do DNA forense, englobando os estudos da Biologia, da Tecnologia envolvida e da Genética aplicada.

Desde 1989, a Sociedade Internacional de Hemogenética Forense (ISFG), que atualmente é denominada de Sociedade Internacional de Genética Forense (ISFG), publica recomendações envolvendo polimorfismos de DNA, demonstrando o interesse em avaliar a reprodutibilidade e exatidão das metodologias utilizadas. O FBI acrescenta alguns itens para o controle de qualidade dos laboratórios que trabalham com evidências de DNA forense, que inclui, além desses cuidados, a realização de periódicos testes de proficiência (a cada 180 dias) e auditorias anuais, para a manutenção da garantia de qualidade. O teste de proficiência é utilizado para monitorar o rendimento e identificar


tópicos que devem ser aperfeiçoados e a auditoria para averiguar a qualidade das atividades realizadas pelo laboratório (DNA Advisory Board, 2000). Os exercícios propostos para laboratórios que realizam caracterização de vínculo genético normalmente são constituídos de amostras biológicas de indivíduos mãe, filho e suposto pai, com o intuito de comparar as estratégias utilizadas, seus protocolos metodológicos, assim como os resultados obtidos entre os participantes (Bjerre et al , 1997; Hallengerb e Morling; 2001). No Brasil, tais testes de proficiência em identificação humana pelo DNA são realizados pelo Grupo Espanhol e Português da Sociedade Internacional de Genética Forense (Grupo Español Y Portugués - International Society for Forensic Genetics), não havendo um grupo específico que realize testes de proficiência no país. Esses testes consistem na análise de amostras de sangue e outro fluido biológico que simulam um caso forense para a manutenção da qualidade na análise do DNA de amostras (ISFG, 2000). As contaminações das amostras pelos investigadores e pessoas do laboratório podem resultar em uma incorreta interpretação do perfil genético. Dessa maneira, o desenvolvimento e cumprimento de normas de procedimentos e treinamentos específicos para o exame de DNA tornaram-se imprescindíveis (Neumayer, 1998; INTERPOL, 2001). Nos EUA o FBI implantou o CODIS - Combined DNA Index System, que tornou-se operacional em 1998, e combina a ciência forense com a tecnologia eletrônica, formando um banco de dados de perfis genéticos de DNA extraído de evidências biológicas coletadas na cena do crime e DNA de criminosos condenados por agressão sexual e outros tipos de violência física (Figura 41). Todos os estados americanos podem ter acesso a esse banco de DNA e, dessa maneira, há a possibilidade de comparar os perfis genéticos de um suspeito em um crime com os perfis contidos no CODIS, averiguando se o mesmo cometeu anteriormente outra infração (FBI, 2002).


Figura 41: Inspeção visual de evidência forense.

O CODIS selecionou 13 STRs para a análise do perfil genético: CSF1PO, FGA, TH01, TPOX, vWA, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, e D21S11 (Budowle & Moretti, 1999) (Figura 42 e Tabela 2). Esse conjunto de loci transformou-se uma referência para outros países do mundo, no que se refere à ciência forense (Sun et al , 2003).


Figura 42: STRs recomendados pelo Banco de DNA, vinculado ao FBI (CODIS), segundo a sua distribuição nos cromossomos humanos. Fonte: http://www.cstl.nist.gov/div831/strbase/fbicore.htm.


Tabela 2 – Informação dos 13 STRs recomendados pelo CODIS.

Nome do Lócus

Localização do cromossomo

Unidade de repetição

CSF1PO

TAGA

D3S1358

5q33.1 c-fms prontooncogene, 6° intron 4q31.3 -fibrinogênio 3° intron 11p15.5 Tirosina hidroxilase 1° intron 2p25.3 Tiroide peroxidade 10° intron 12p13.31 von Willebrand factor 40° intron 3q21.31

D5S818 D7S820 D8S1179

5q23.2 7q21.11 8q24.13

D13S317 D16S539 D18S51 D21S11

13q31.1 16q24.1 18q21.33 21q21.1

FGA

TH01

TPOX

VWA

Acesso GenBank http://www.n cbi.nih.gov/ Genbank/in dex.html X14720

Variação dos alelos

Número de alelos observados

6-16

15

CTTT

M64982

15-51,2

69

TC|AT

D00269

3-14

20

GAAT

M68651

6-13

10

[TCTG] [TCTA]

M25858

10-24

28

[TCTG] [TCTA] AGAT GATA [TCTA] [TCTG] TATC GATA AGAA [TCTA] [TCTG] complexo

NT_005997

9-20

20

G08446 G08616 G08710

7-16 6-15 8-19

10 22 13

G09017 G07925 L18333 AP000433

5-15 5-15 7-27 24-38

14 10 43 70

Adaptado de Butler et al, 2005

O DNA working group of the European Network of Forensic Science Institutes (ENFSI) e Scientific Working Group on DNA Analysis Methods (SWGDAM) (Gill et al , 2004) levantam a possibilidade futura da substituição do banco de dados de DNA atualmente contendo os 13 STRs indicados pelo CODIS do FBI por um banco de dados 55 Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores

de DNA contendo informações de SNPs. Entretanto, os autores citam que a curto e médio prazo não haverá a substituição dos bancos de dados, inclusive das tecnologias utilizadas, e sim a incorporação dos mesmos em estudos forenses visando à padronização do seu uso assim como de sua análise. Essa normatização possibilita maior facilidade em comparar tanto as frequências alélicas populacionais como os resultados dos perfis genéticos, mesmo que seja realizada em outros países. Visando futuramente implantar um banco de perfis genéticos de criminosos como o CODIS, o governo federal brasileiro já adotou os STRs sugeridos pelo CODIS como referência em perícias criminais em seu Manual de Padronização de Exames de DNA em Perícias Criminais (Secretaria Nacional de Segurança Pública SENASP, 2006), que está sendo utilizado como referência para os laboratórios que trabalham com identificação humana.


Estudo da Metodologia Aplicada à Identificação Humana A análise do DNA em caracterização do vínculo genético engloba desde o domínio da metodologia de coleta do material biológico até a interpretação dos resultados obtidos (Butler, 2004) (Figura 43). Cada qual possui sua particularidade e cuidados inerentes à técnica que podem oferecer vantagens e desvantagens, de acordo com o objetivo almejado.

Figura 43: Esquema de todos os procedimentos envolvidos em caracterização do vínculo genético.


A análise do DNA compreende diversas etapas, independen e da met dologia a ser emp egada e do tipo

e amost a que s rá analisada (CO MITTEE ON DNA

TECHNO LOGY IN FOREN IC SCIE CE, 199 ; BONA CORSO, 2005). O processo inclui: 1) oleta de mostras; 2) extração, purifica ão e qua tificação do DNA d todas as amostras; 3) análise dos

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4) vi ualização dos fragmentos e caracterização; 5)

interpretação e anál ise comp rativa dos resultados (INTER OL, 2001 . No entanto, para fins didáticos, os tópicos serão divididos em:

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58 Este material deve ser utilizado penas como par metro de estudo deste Programa. Os créditos des e conteúdo são ados aos seus re spectivos autore

Exame Pericial no Local do Crime Em 2000, a Agência Federal de Investigação dos Estados Unidos (EUA), mais conhecida como FBI (Federal Bureau of Investigation), elaborou um guia para a investigação da cena do crime (TWGCSI – Grupo de trabalho técnico da investigação da cena do crime, 2000). Esse manual visa à padronização das práticas adotadas para a investigação da cena do crime dos policiais e peritos americanos, tornando-se referência em investigação da cena do crime, seja para o exame de DNA forense ou não. Eles elaboraram esse manual dividindo em cinco sessões distintas: chegada à cena do crime, documentação preliminar, avaliação da cena, processando a cena, finalizando a investigação da cena do crime.

1) Chegada à cena do crime: Um dos cuidados mais importantes da perícia criminal é a manutenção das evidências físicas e a preservação da cena do crime, que deve ser realizada imediatamente após sua constatação, e é realizado normalmente pela polícia local (Figura 44).

a)

Anotar o local, a data, o tipo de ocorrência, casas, veículos, eventos

ocorridos e elementos envolvidos; b)

Não permitir que pessoas, veículos ou objetos saiam da cena do crime,

identificando possíveis vítimas e suspeitos; c)

Aproximar-se da cena cuidadosamente e verificar a possibilidade de outros

crimes ao redor; d)

Realizar observações iniciais (olhar, ouvir e cheirar) o ambiente e anotá-los;

e)

Observar a possibilidade de perigo de explosão e contaminação por

materiais perigosos ou tóxicos e, se necessário, chamar policiais especializados para analisar a cena do crime;


Figura 44: Esquema de isolamento da cena do crime.

f)

Não permitir que pessoas, veículos ou animais se aproximem da cena do

crime, evitando contaminações e perigos como explosões; g)

Após controlar as situações de perigo e isolar a área, a próxima atenção é

chamar socorro médico para dar assistência médica necessária aos feridos, minimizando ao máximo a contaminação da cena do crime; h)

Anotar todas as etapas dos cuidados médicos, desde sua hora de chegada

até os cuidados prestados; i)

Assegurar que evidências como roupas, objetos e manchas encontradas no

corpo sejam preservadas pela equipe médica; j)

Documentar todos os comentários e testemunhos de pessoas envolvidas ou

presentes no local do crime ou ao seu redor;


k)

Um oficial da polícia deve sempre que possível acompanhar a vítima para o

hospital para garantir a preservação das evidências ou mesmo documentar comentários feitos pelo paciente; l)

Lacrar a cena do crime com faixas e adesivos;

m)

Controlar o fluxo de pessoas, inclusive peritos e outros policiais;

n)

Se possível, efetuar mensurações e tirar fotografias com escalas, para

preservar as evidências – como pegadas, marcas de pneu no chão, etc –, presentes na cena do crime, caso chova, neve ou derreta (se for gelo); o)

Não permitir que qualquer pessoa fume, masque chiclete, use o telefone ou

banheiro, coma ou beba qualquer coisa, mexa nos vidros e janelas, mude os móveis de lugar, etc. Ou seja, não permitir que mexam em qualquer objeto presente na cena do crime ou ao seu redor; p)

Toda a documentação e anotações feitas pelo policial devem ser entregues

ao investigador de polícia para posterior estudo e análise.

2)

Documentação preliminar e avaliação da cena:

a)

O investigador de polícia deverá documentar todas as informações

recolhidas pelo policial, organizá-las e identificá-las com os dados da região do crime (delegacia, responsável, cidade, estado, etc); b)

Continuar a manutenção da cena do crime descrita anteriormente,

documentando todas as pessoas que estiverem participando da investigação; c)

Definir estratégias para a análise fotográfica e recuperação dos vestígios

encontrados na cena do crime.

3)

Processando a cena:

a)

O investigador deverá avaliar e posteriormente solicitar a presença de

peritos criminais, de acordo com a especialidade envolvida; b)

O controle da contaminação deve ser extremamente rígido, evitando-se o

contágio dos profissionais, das vítimas, da cena do crime, dos objetos, etc.;


c)

Utilizar equipamentos de proteção individual (EPI), como luvas (obrigatório),

gorros e protetores de sapato (se necessário); d)

Todo material utilizado para coleta das evidências deve estar devidamente

limpo ou até esterilizado, caso seja para coleta de material biológico, e deve ser corretamente acondicionado (Figura 45);

Figura 45: Envelopes e sacos de papel para coleta de evidências e objetos encontrados na cena do crime como roupas, celulares, documentos, etc.

e)

Toda

evidência

deve ser

corretamente

documentada,

citando-se

a

localização, identificação e condições que se encontravam, fotografada com escalas de referência e/ou filmadas antes de ser removida da cena do crime;

f)

Analisar e verificar a metodologia utilizada para a coleta da evidência. Por

exemplo, cada método requer equipamentos e materiais diferenciados para a sua realização. Sendo assim, para fazer a análise de impressões digitais não se utiliza o mesmo equipamento para exame de marcas de mordidas, e assim por diante;


g)

Documentar qualquer intercorrência ou dificuldade havida durante a coleta

do material; h)

Preservar adequadamente o material coletado com a finalidade de minimizar

sua degradação: refrigerado, congelado, local seco, local úmido, etc.; i)

Encaminhar para os respectivos laboratórios periciais.

4) Finalizando a investigação da cena do crime: a)

Determinar quais evidências foram coletadas;

b)

Discutir com toda a equipe envolvida na cena do crime as intercorrências e

evidências.

------------------FIM DO MÓDULO II-----------------


C rso de N Fo ens M DULO III

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MÓDULO III

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“Considerando: a) a necessidade de normatizar os serviços periciais relativos à coleta de materiais biológicos para exames de identificação humana, tanto nos locais de crime quanto na pessoa humana, viva ou morta; b) que os procedimentos a serem seguidos pelos órgãos policiais e periciais oficiais devem estar em consonância com os ditames da legislação em vigor, e c) que é imprescindível a correta preservação das amostras para não haver contaminações ou outros prejuízos (p. 104)”.

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EXTRAÇÃO DE DNA

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PROTOCOLO DE EXTRAÇÃO DE DNA DE SALIVA PELO MÉTODO ORGÂNICO (Anzai et al.; 2001). E )$,"#+) %! ")40A) &,4!#)%) ! &,4,&)%) !$ #63, !"#/+04 / "63$!#0%) o &!1#+096-)78, ?)+) ) "!?)+)78, %)" &/464)" %! "6) ?)+#! )>6,")G +!$,A!1%,Y ). E" ?,1#)" &,1#!1%, , )4-,%8, %," swabs n >6! &,1#/$ ) ")40A) &,4!#)%) ",3+! ) ?!4! n 9,+)$ &,4,&)%)" !$ 6$ #63, !"#/+04G "!1%, 0$!%0)#)$!1#! 010&0)%, , ?+,&!"", %! !Z#+)78,G "!$ 1!1F6$ ?+!?)+, ?+/A0,. 5$ "!-60%)G )%0&0,1)Y"! lPP N %, #)$?8, %! 40"! ?)+) ")40A) IQP$` LMJ\ ?_dGPS QP$` 5WLES PGQ ` K):4S Ou \W\R ! ?,"#!+0,+$!1#! Uh4 %! *+,#!01)"! s OP$-v$N. E?;" )-0#)78,G ) #)$?) %, #63, %!A! "!+ A!%)%) &,$ *)+)904$a ! 01&63)%) ?,+ 6$) 1,0#! ) hj ,:. E "!-60+G ) *+,#!01)"! s / 01)#0A)%) ) Vh,: ?,+ QP $016#,"G )%0&0,1)1%,Y"! lPP N %! 9!1,4 #)$?,1)%, &,$ ?_ dGP ! F,$,-!1!0D)1%,Y"! &,$ $,A0$!1#," $)16)0" 4!A!" ?,+ h $016#,". :!1#+096-)Y"! ! , ",3+!1)%)1#! / #+)1"9!+0%, ?)+) ,6#+, #63,G 6#040D)1%, 6$) $0&+,?0?!#) &,$ ?,1#!0+) !"#/+04. E&+!"&!1#)Y"! 9!1,4v &4,+,9w+$0,v <4&,,4 0",)$@40&, IOhÔi^QR 1) $!"$) >6)1#0%)%! %, ",3+!1)%)1#! +!$,A0%,G F,$,-!1!0D)Y"!G &!1#+096-)Y"! ! +!$,A!Y"! , ",3+!1)%)1#! 1,A)$!1#! ?)+) ,6#+, #63,. E%0&0,1)Y"! ), ",3+!1)%)1#! &!+&) %! O ,6 U A!D!" , A,46$! +!&6?!+)%,G <4&,,4 QPPu ! QPu %, A,46$! !$ )&!#)#, %! ";%0, h`. J1&63)Y"! %6+)1#! 6$) 1,0#! ) YOP,:. K, #!+&!0+, %0) %! !Z#+)78,G &!1#+096-)Y"! ) $0"#6+). W0"?!1")Y"! , !#)1,4G ! ), ?+!&0?0#)%, )%0&0,1)Y"! Q$N %! !#)1,4 lPuG F,$,-!1!0D)1%,Y"! &60%)%,")$!1#!. :!1#+096-)Y"! ! 1,A)$!1#! / +!$,A0%, , <4&,,4. \!&)Y"! #,#)4$!1#! , x?!44!#x. M!""6"?!1%!Y"! , x?!44!#x &,$ QPP N %! L.5. IL+0"Y3)"! QPP$`G ?_ lGjS 5WLE QP$`G ?_ dGPR.


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74 Este material deve ser utilizado penas como par metro de estudo deste Programa. Os créditos des e conteúdo são ados aos seus respectivos autore

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Extração de DNA Do Sangue (Salazar et al , 1998) E" )$,"#+)" %! ")1-6! 9,+)$ "63$!#0%)" o 40"! &!464)+ &,$ QPPPzN %, #)$?8, L+0"YQ IL+0" _:4 QP$` ?_ dGPG s:4 QP$`G `-:4 O QP$` 5WLE O$` ?_ dGPR &,1#!1%, L+0#,1 {YQPP ) O.hu. E?;" ) &!1#+096-)78,G ," 1=&4!," &!464)+!" 9,+)$ 40")%," &,$ OOPzN %, #)$?8, L+0"YO IL+0"Y_:4 QP$` ?_dGPG s:4 QP $`G `- :4O QP$`G 5WLE O$` ?_ dGPG K):4 PGi `R &,1#!1%, \W\ ) Qu. E" ?+,#!@1)" 9,+)$ +!$,A0%)" ?,+ ?+!&0?0#)78, ")401) &,$ QPPu "!-601%, %! 4)A)-!$ !#)1,4 lPuG ?,+ U A!D!". *,"#!+0,+$!1#! , WKE 9,0 +!""6"?!1%0%, !$ QPPzN %, #)$?8, L5 IL+0"Y_:4 QP $` ! Q$` 5WLEG ?_ dGPR ! $)1#0%," ) nOP,:.

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Tipo de amostra

Quantidade de DNA

Sangue total

OPPPP ~ iPPPP 1-v$N

Mancha de sangue

OhP ~hPP 1-v&$

Líquido seminal

QhPPPP ~ UPPPPP 1-v$N

Esfregaço de material vaginal pós-coito

QP ~UPPP 1-v!"9+!-)7,

Fio de cabelo com bulbo

Q ~lhP 1-v90,

Pêlo com bulbo

Q ~QP 1-v?X4,

Saliva total

QPPP ~QPPPP 1-v$N

Esfregaço bucal

QPP ~QhPP 1-v!"9+!-)7,

Urina

Q ~OP 1-v$N

Osso

U ~QP 1-v$-

Tecido

hP ~hPP 1-v$-


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Reagente

Concentração ótima

Tris-HCl, pH 8,3 (25°C)

QP ) hP $`

Cloreto de Magnésio

QGO ) OGh $`

Cloreto de Potássio

hP $`

Desoxirribonucleotídeos trifosfatados

OPP

(dNTPs)

16&4!,#@%!,I%EL*G %LL*G %:L*G

`

%!

&)%)

%[L*R

DNA polimerase termoestável

PGh ) h g

Soro de Albumina Bovina (BSA)*

QPP -v$N

Primers

ou Iniciadores

PGQ ) QGP ` Q ) QP 1- %! WKE

DNA

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Passo do protocolo

Desnaturação inicial

AmpFlSTR® kits

GenePrint® STR Kits

(Applied

(Promega

Biosystems)

Corporation)

Vhm: v QQ

Vhm: v QQ $016#,"

$016#,"

Quantidade de ciclos

Od &0&4,"

UP &0&4,"

Desnaturação

Vim: v Q $016#,

Hibridização

hVm: v Q $016#,

Vim: v UP "!-61%," I&0&4, Q ) QPR VPm: v UP "!-61%," I&0&4, QQ ) UPR jPm: v Q $016#,

Extensão

lOm: v Q $016#,

lPm: v Q $016#,

Extensão final

jPm: v jP

jPm: v UP $016#,"

$016#,"

Final

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!>60?)$!1#,

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Applied Biosystems

Promega

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F##?^vvyyy.?+,$!-).&,$

PRODUTO

E$?TN\LMa SGM Plus

Profiler

D21S11 IQRIOR

{

FGA IQRIOR

{

{

VWA IQRIOR

{

{

THO1 IQRIOR

{

{

D3S1358 IQRIOR

{

{

D8S1179 IQRIOR

{

D18S51 IQRIOR

{

D16S539 IOR

{

Profiler Plus {

Cofiler

J%!1#090!+

PowerPlex®

Power-Plex® 16

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

{

TPOX IOR

{

{

{

{

{

CSF1P0 IOR

{

{

{

{

{

D13S317 IOR

{

{

{

{

{

D7S820 IOR

{

{

{

{

{

D5S818 IOR

{

{

{

{

{

{

D19S433 IUR

{

{

D2S1338 IUR

{

{

Penta D IUR

{

Penta E IUR

{

Amelogenina IQR

{

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{

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-------------FIM DO MÓDULO III------------94 Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores

C rso de N Fo ens

M DULO I

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MÓDULO IV

Estudo da metodologia aplicada à identificação humana (cont.) Eletroforese e detecção dos fragmentos de DNA (" 3+)-$!1#," %! FGH )$?4030&)%," ?,+ *:2 "8, 0%!1#030&)%," )?;" ) !4!#+,3,+!"! !$ -!4 %! ?,40)&+04)$0%)I "!-60%, %) &,4,+)&8, &,$ ?+)#)I ,6 ?!4) %!#!&78, %! "01)4 346,+!"&!1#!I 1) >6)4 ," 010&0)%,+!" 6#040E)%," 1, *:2 "8, $)+&)%," &,$ 346,+,&+,$,"I ?,""0C040#)1%, ) )1<40"! ?,+ "!>6!1&0)%,+ )6#,$<#0&, JK044I LMMNO P6440A)1 et al I LMMNO Q+/-!)6 ! Q,6+1!RI LMMST.

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Descontaminação de substâncias tóxicas: brometo de etídio H ?+<#0&) %! ?+,&!""," +!3!+!1#!" k C0,""!-6+)17) / !""!1&0)4 ?)+) ) $)16#!178, %) ")=%! %)" ?!"",)" >6! 40%)$ %0+!#)$!1#! &,$ ,+-)10"$," A0A," ! "6C"#D1&0)" #;^0&)" ?)+) , "!+ X6$)1,. G, &)", %," $0&+,,+-)10"$," / 361%)$!1#)4 , 6", %! 346^," 4)$01)+!" ,6 ,6#+)" #/&10&)" %! &,1#!178, J&,$, , %, C0&, %! V61"!1T >6! 0$?!7)$ ) "6) %0"?!+"8, %6+)1#! ) $)10?64)78,. (6#+) ?+<#0&) $60#, 0$?,+#)1#! / >6! #,%," ," $)#!+0)0" %!+0A)%," %! &64#0A," %! $0&+,,+-)10"$," %!A!$ "!+ "6C$!#0%," k !"#!+040E)78, J?,+ !^!$?4,I )6#,&4)A)-!$T )1#!" %! "!+!$ %!"&)+#)%,". *,+ ,6#+, 4)%,I / #)$C/$ 0$?,+#)1#! !40$01)+ ,6 $010$0E)+ ," +0"&," %! &,1#)$01)78, %, )$C0!1#!I ",467Y!"I C)1&)%)"I !>60?)$!1#,"I 6#!1"@40," J?017)"I !"?<#64)"I !#&.T ,6 A0%+)+0)" ?,+ "6C"#D1&0)" #;^0&)" ?)+) , ,+-)10"$, X6$)1,. ( ?+,&!"")$!1#, %! "6C"#D1&0)" &,$ )4#, ?,#!1&0)4 #;^0&, ,6 $6#)-910&,I &,$, , V+,$!#, %! 5#@%0, J5#V+TI #!$ "0%, 6$ %," -+)1%!" ?+,C4!$)" %) $)0,+0) %," 4)C,+)#;+0,". ( V+,$!#, %! 5#@%0, J5#V+T / &,$6$!1#! 6#040E)%, 1," 4)C,+)#;+0," ?)+) &,+)+ <&0%," 16&4/0&," "6C$!#0%," k !4!#+,3,+!"! !$ -!4 %! )-)+,"! ,6 ) -+)%0!1#! %! :4,+!#, %! &/"0,. H )78, %, 5#V+ &,$, &,+)1#! "! %!A! ) "6) &)?)&0%)%! %! 01#!+&)4)+ !1#+! )" C)"!" %," <&0%," 16&4/0&," ! 346,+!"&!+ ",C 46E 64#+)A0,4!#). 5"#! &)+<#!+ 01#!+&)4)1#! %, 5#V+ #)$C/$ / +!"?,1"6)0" ?,%!+8, "!+ ?!+$6#)%)" %6+)1#! , ?+,&!"", %! %6?40&)78,. F!"") 3,+$)I ) 4!0#6+) !++)%) %)" "!>691&0)" %! C)"!" %, FGH ?,%! +!"64#)+ !$ $6#)78,.


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111 Este material deve ser utilizado apenas apenas como parâmetro parâmetro de estudo deste Programa. Programa. Os créditos deste conteúdo são são dados aos seus respectivos autores autores

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-----------FIM DO MÓDULO IV-----------


Curso de DNA Forense

MÓDULO V

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EXEMPLOS DE CÁLCULOS DE PERFIL DE DNA UTILIZANDO-SE COMO EXEMPLO DUAS POPULAÇÕES DISTINTAS

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Frequência do perfil para a população caucasiana = razão de verossimilhança (LR) = 1/P P é a multiplicação de todas as frequências alélicas = 0,03 x 0,05 x 0,04 = 0,00006 OU LR = 1/0,00006 = 1 em 16666 Pode-se dizer que o perfil genético em questão pode ser encontrado em 1 em 16666 pessoas dentro da população de caucasianos americanos TF\8FI" JF XD8vU8J;NF FP=PN;F I8 ]N\6{JN;"\ Fq8DN;FJ"\ Perfil de DNA Frequência alélica do Fórmula Frequência banco de dados P.4-+ F)&).+ i&A&+ ?-& . O$#$1K. X'&?-E14($ $)&). @.( *. >$14. .>+&'3$*. *& *$*.+ D13S317 SS __ QYR 0 y RGQp Q0? RGRQ Sp Sm ? y RGRV TH01 _ _R QYR 0 y RGQS 0 RGRp _ D18S51 Sp m^ QYR 0 y RGSp Q0? RGRp S_ mY ? y RGSp

Frequência do perfil para a população caucasiana = razão de verossimilhança (LR) = 1/P P é a multiplicação de todas as frequências alélicas = 0,02 x 0,04 x 0,04 = 0,000032 OU LR = 1/0,000032= 1 em 31250 Pode-se dizer que o perfil genético em questão pode ser encontrado em 1 em 31250 pessoas dentro da população de hispânicos americanos


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Análise de Outros Perfis Genéticos I&0&1*&1*. *. %(0. & @(1$)(*$*& *& $1/)(+& *. 0&'@() 7&1B%(4. *& -# (1*(32*-.G $)B# *.+ \OD+ *&+4'(%.+ $1%&'(.'#&1%&G $)7-1+ .-%'.+ #$'4$*.'&+ +:. -%()(A$*.+ 0$'$ $ (13&+%(7$9:. *. IJF @.'&1+& MX(7-'$ ^QWZ 

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Acesso ao GenBank wsssVS •^m^VR nR^_^V nR^_RR nR^_RR nR^_SS nR^_Sm nR^Y_s nR^_RS F;RR_msR F;RRQ^^Q F;RRQ^^Q F;RRVYQR F;RRQ^^Q F;RRQVmS F;RRQ^^Q npQ_sR npQ_sV npQ_sS npQ_sQ npQ_sp npQ_sm npQ_s_

Repetição

Alelos

OFnF nFFF FOO MO;OnW MO;OFW MO;OnW MO;OFW MO;OFW MO;OnW O;OF OFO FnFO ;F FO;O OnnF nOO O;OF OOOO; FnFO FnFO FOFn OFnF O;OF OFO; OFO; OFnF

YHS_ SRHQQ SQHSs NZ sHSm NNZQmHmS SYHQs YHSm sHS_ ^HSV S^HQV YHSS ^HSm SRHSV YHSS _HSQ ^HSp SSHSp sHSQ YHSQ YHSp SSHSp SSHS_ SRHSm

Tamanho do produto de PCR SsYHQSR >0 QVQHmRR >0 SQYHSpm >0 Qm^HQ_m >0 mVmHmYV >0 S^SHQQs >0 QsVHQ^V >0 Qm_HQ_m >0 SRYHSmQ >0 S^QHQRp >0 SSRHSQQ >0 QSRHQQY >0 SQYHSpm >0 SY_HQRQ >0 QRmHQmm >0 QmYHQVY >0 QpQHQVp >0 S_SHSYS >0 SspHS^R >0 QS^HQpp >0 S_RHSsQ >0 QVSHQsS >0 m_QHmsR >0


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-----------FIM DO MÓDULO V-----------


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ABI 310 Genetic Analyzer

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ABI 3100 Genetic Analyzer

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ABI ( Applied Biosystems Incorporation)

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Ácido desoxirribonucléico

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(DNA)

0&)$ 0'&+&19$ *& *&+.f(''(>.+&G -# $9C4$' & ?-$%'. 1-4)&.>$+&+<

Alelo (frequência)

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Alelo

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U# #$'4$*.' -%()(A$*. 0$'$ %(0$7&# +&f-$)G 4-e. 7&1&

Amelogenina

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Amostra de referência

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Amplicon

Amplificação

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Artefato

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Autossômico

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Ciência forense

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CODIS

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Cromossomo

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Cromossomos sexuais

Degradação

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DNA mitocondrial (mtDNA)

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Eletroforese capilar

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Eletroforese Eucarioto Evidência biológica

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Exclusão

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Fluorescência

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Gene

Genoma

Genótipo Hereditariedade Heterozigoto

Homozigoto

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Identifiler

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In vitro

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In vivo

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Inconclusivo

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Loci de CODIS

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Loci

Locus

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Marcador

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Mutação

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Núcleo

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Nucleotídeo

Par de base

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PCR multiplex

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Perfil genético

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Poder de discriminação

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Polimorfismo

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População

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Power Plex 16

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U#$ 4$*&($ 0.)(1-4)&.%2*(4$ 4-'%$ +(1%&%(A$*$ $'%(@(4($)#&1%& Primer (ou iniciador)

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Probabilidade de exclusão

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(PE)

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Reação em Cadeia pela

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Polimerase (ou da

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Polimerase) – PCR

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Sequências

*-0)$ @(%$ 0.' 0$'&$#&1%. *& >$+&+G 4.#. $*&1(1$H%(#(1$G

complementares

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SNP

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STR

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Teste de proficiência

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Zigoto

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Genética

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