DEFINISI MIKROPIPET Sekilas Tentang Mikropipet 1. Multichannel Pipet (Image from sciencephoto.com) sciencephoto.com)
Di berbagai bidang ilmu, termasuk biologi sel, mikrobiologi, biotechnologi, biokimia dan kimia kuantitatif, pipetting merupakan keterampilan penting yang harus dikuasai. Pipet adalah alat penting di berbagai bidang ilmu pengetahuan. Bekerja di laboratorium tentu tidak akan terlepas dari urusan ukur-mengukur. Untuk sampel padatan, kita akan berurusan dengan neraca analitik, sementara untuk sampel cairan, pipet volumetrik-lah andalannya. Akurasi dan presisi pemipetan merupakan faktor utama keberhasilan analisa atau percobaan yang melibatkan melibat kan cairan. Pipet sudah digunakan digunakan sejak abad ke-! oleh "ouis Pasteu Pasteurr #$% #$%%-$! %-$!&' &' dan da n ki kini ni jen jenis is pi pipet pet su suda dah h be berk rkem emba bang ng lu luas as de deng ngan an ti ting ngka katt ak akur urasi asi da dan n pr presi esisi si ya yang ng bermacam-macam pula. 2. Mengenal Jenis-Jenis Pipet Volumetrik Pipet Serologis. Pipet ini terbuat dari pipa kaca silinder yang lurus dan memiliki skala volume. (etelitian pipet serologis sesuai dengan skala terkecilnya. •
•
•
Pipet Vo Volumetrik lumetrik Vo Volume lume Te Tetap. tap. Pipet jenis ini hanya memiliki garis tera dengan volume tertentu, berbentuk silinder tetapi bagian tengahnya lebih gendut. (etelitiannya lebih tinggi dibanding pipet pasteur karena garis tera berada pada bagian atas pipet yang memiliki diameter kecil. Pipet Volumetrik engan Piston . Pipet jenis ini mulai berkembang pada tahun !)*an. A+alny A+alnyaa pipet ini memiliki volume yang tetap, namun kemudian berkembang hingga memiliki volume yang dapat diatur pada range tertentu. Pipet jenis ini lebih disukai karena selain volumenya yang dapat diatur, akurasi dan presisi yang tinggi, pemakaiannya pun simpel dan mudah.
!. "unakan Jenis Pipet #ang Sesuai Pipet yang digunakan harus disesuaikan dengan jenis sampelnya
•
•
•
•
•
ampel airan Biasa. /unakan pipet jenis air-displacement ampel ai ampel airan ran (hu (husus. sus. Unt Untuk uk cai cairan ran ken kental tal #gl #gliser iserol, ol, mad madu', u', mud mudah ah men mengua guap p #chloroform, methanol', korosif dan mengandung radioaktif, gunakan pipet jenis positivedisplacement. Untuk sampel biologi molekular yang harus terbebas dari kontaminasi D0A, 10A, nucle nu clease ase da dan n ba baha han n lai lain n ya yang ng da dapa patt me meni nimb mbul ulka kan n de degr grada adasi si pa pada da sam sampel pel,, ma maka ka bi bisa sa digunakan pipet jenis air-displacement dengan menggunakan tips steril berfilter maupun menggunakan pipet jenis positive-displacement juga dengan tips dan piston steril.
(a) $ir %ispacement & 'Positie %isplacemen Pipette Pipet air-displacement selalu memiliki ruang udara #dead volume' antara piston pipet dan sampel cairan, sedang sedangkan kan pipet positi positive-disp ve-displacemen lacementt tidak tidak,, cairan kontak langsu langsung ng dengan piston.
Piston merupakan bagian permanen pada pipet air-displacement, tetapi pada pipet positive-displacement bersifat disposable, menyatu dengan tips pipet.
*. Mikro Pipet 2ikropipet 2ikro pipet ini ditemu ditemukan kan dan dipate dipatenkan nkan pada tahun !)* oleh Dr. 3ann 3annss chm chmit4 it4 #2arburg, 5erman'. etelah itu, mitra penemu dari perusahaan bioteknologi 6ppendorf, Dr. 3einrich 0etheler, me+arisi hak-hak yang melekat pada paten itu dan memulai penggunaan mikropipet secara umum dan luas di laboratorium-laboratorium di dunia. Pada tahun !7%, mikropipet yang dapat ditala ditemukan di Universitas 8isconsin92adison oleh beberapa orang, terkhusus 8arren /ilson dan 3enry "ardy. +. Perhatikan Volume ,airan #ang $kan %ipipet
Perhatikan range volume pipet yang akan digunakan. Setiap pipet memiliki range volume tertentu. Maka angan !ampai !ampai !alah memilih memilih pipet" pipet" karena produ!en produ!en tidak tidak menamin menamin akura!i pemipetan pemipetan ika dilakukan di luar angkauan yang !udah mereka tentukan.
elain itu jika volum volumee yang kita kehen kehendaki daki cocok deng dengan an dua range volu volume me pipet, makaa pil mak pilihl ihlah ah yan yang g men mendek dekati ati vol volume ume mak maksim simalny alnya. a. on ontoh toh,, jik jikaa kit kitaa ing ingin in mem memipe ipett sebanyak .! u", bisa menggunakan pipet dengan range volume -* u" atau *.%-% u". 0amun sebaiknya gunakan pipet pipet dengan range *.%-% u"
. . "unakan Tip Pipet #ang aik ekilas nampak semua tip pipet sama saja, namun tidak semua tip cocok untuk semua pipet. :leh karena itu pemilihan tip sangat menentukan akurasi pemipetan. Ada baiknya menggunakan tip dengan brand yang sama dengan pipet. 0amun jika ingin menggunakan brand lain, maka harus memperhatikan hal-hal berikut ini
•
•
/unakan ;ips ;ips dengan (ualitas Baik ;ip harus bersih dan bebas dari partikel debu Bentuk bagian kerah #yang menempel ke pipet' dan ujung tip harus benar-benar halus dan rapi
•
;ransparan
•
;ahan ;a han terhadap bahan-bahan kimia
•
•
Adanya keterangan nomor identifikasi, nomor batch dan sertifikat mutu merupakan hal penting untuk menjamin kualitas tip Pilih kemasan yang sesuai, ada yang dikemas secara bulk, ada yang sudah berjejer rapi di dalam rak, ada yang sudah disterilisasi, dll.
/. ,ara Memasang Tip #ang enar Bagaimana cara Anda memasang tip pada pipet= Pipet diketuk-ketukkan dengan kuat ke dalam tip= ;ip dikencangkan menggunakan tangan= Atau bagaimana= ;ernyata cara yang
benar adalah dengan memasukkan ujung pipet ke dalam tip #tidak terlalu kencang', kemudian pipet diputar untuk memperkuat posisi tip pada pipet. (husus untuk pipet multichannel, cukup dengan digoyang sambil ditekan ke kiri dan kanan. 0. Moe Pemipetan orar atau 3eerse4 aatt Ad aa Adaa men meneka ekan n plu plunge ngerr pip pipet, et, mak makaa An Anda da aka akan n men menemu emukan kan pos posisi isi plunger plunger berhenti. berhenti. 5ika plunger 5ika plunger terus terus ditekan, maka ia akan berhenti lagi pada posisi kedua. 0ah, bagaimana cara pemipetan yang benar= Apakah Apakah plunger plunger pipet pipet ditekan hingga posisi berhenti pertama atau kedua= Ada dua cara pem pemipet ipetan, an, yai yaitu tu or Beriku ikutt ini ilus ilustras trasii orar ar Moe dan 3ee 3eerse rse Moe. Ber kedua proses tersebut
,ara Pemipetan Moe orar (image from "ilson "uie to Pipetting)
,ara Pemipetan Moe 3eerse (image from "ilson "uie to Pipetting) Umum Um umny nyaa pi pipe pett je jeni niss air air-d -disp ispla lacem cemen entt me meng nggu guna naka kan n >o >or+ r+ar ard d 2o 2ode de ke keti tika ka melakukan melaku kan kalibrasi, sehingga metode inilah yang harus kita gunak gunakan. an. 2ode 1evers 1eversee dapat digunakan digu nakan ketika mengg menggunaka unakan n pipet jenis air-d air-displac isplacement ement untuk memipe memipett cairan yang kental atau mudah menguap. ementara itu pipet positive-displacement hanya menggunakan mode >or+ard saja. #. 5ati-hati engan 6ontaminasi
(ontaminasi pada Pemipetan #image from /ilson /uide to Pipetting'
•
•
•
Ada be Ada bebe bera rapa pa je jeni niss ko kont ntam amin inas asi, i, ke kena napa pa bi bisa sa sa sam mpa paii te terj rjad adii dan dan ba baga gaim iman anaa ca cara ra mencegahnya= 6ontaminasi Pipet-ke-Sampel. Penyebab Penyebab 2enggunakan tip atau pipet yang sudah terkontaminasi. Pencegahan Pencegahan Be Bersi rsihk hkan an da dan n st steri erilk lkan an ba bagi gian an pi pipe pett ya yang ng ko kont ntak ak de deng ngan an sampel. /unakan tips steril, dan ganti tip setiap berganti sampel. Penyebab ampel atau aerosol dari sampel kontak 6ontaminasi Sampel-ke-P Sampel-ke-Pipet. ipet. Penyebab dan memasuki bagian pipet. Pencegahan Pencegahan 5angan terlalu memiringkan pipet, simpan selalu pipet secara sec ara vertikal, sedot se dot cairan dengan perlahan dan gunakan filter tip atau gunakan pipet positive-displacement. 6ontaminasi Sampel-ke-Sampel (sample carr#oer). Penyebab Penyebab 2enggunakan tip bekas untuk sampel yang berbeda. Pencegahan berbeda. Pencegahan /anti tip setiap berganti sampel $%.
•
•
•
•
6ali'rasi an Peraatan 3utin
(alibrasi akan menjamin akurasi. "akukanlah secara rutin minimal satu satun sekali. (alibrasi bisa dilakukan sendiri atau dengan memanfaatkan jasa laboratorium kalibrasi yang sudah terakreditasi. 5angan lupa untuk melakukan hal-hal berikut ini 2engecek secara rutin kondisi pipet, periksa apakah ada bagian yang rusak, retak atau ada komponen yang hilang. 2embersihkan pipet setiap sebelum dan sesudah pemakaian dengan alkohol atau cairan khusus pembersih pipet. 2ensterilkan komponen-komponen pipet yang dapat disterilkan #dengan autoclave atau penyinaran U?' 5ika terdapat kerusakan atau kelainan dan kejanggalan, segera periksakan kondisi pipet Anda Anda ke Distributor atau agen penjualnya. emoga bermanfaat MIKROPIPRT 100ML TISSUE GELAS ARLOJI
,ara Menggunakan Micropi Micropipet pet %*.@) "A0DA ! comments
Mikropipet (micropipet) adalah suatu alat yang digunakan untuk memindahkan cairan dalam jumlah kecil secara akurat. Penggunaan pipet gelas seperti pipet ukur
dan pipet gondok tidak mempunyai akurasi yang tinggi t inggi untuk volume kurang dari 1 ml. Sehingga pada pemindahan cairan dengan volume kecil kurang dari 1000 microliter,, orang cenderung menggunakan mikropipet, biasa juga disebut dengan microliter pipet otomatis. Pipet otomatis ini mempunyai akuraritas dan presisi yang lebih baik dari pada pipet gelas. isamping itu setiap pipet dapat diset berapapun volumenya selama dalam range volume pipet. !da beberapa macam merek mikropipet yang beredar dipasaran seperti "ilson, Pipetman, dll. Meskipun produk mikropipet telah dirancang akurat dan presisi oleh pabriknya, alat tersebut tetap harus dikalibrasi jika digunakan untuk laboratorium yang terakreditasi. !da beberapa macam mikropipet yang biasa dipakai di laboratorium, seperti misalnya merk "ilson ada tertulis P#0, P#00 dan P1000 pada kepala pipet.
Macam$macam ukuran mikropipet
P#0 dimaksudkan untuk memipet larutan pada volume antara # $ #0 ul P#00 untuk memipet larutan pada volume antara #0 % #00 ul P1000 untuk memipet larutan pada volume antara 100 % 1000 ul
&agian$bagian mikropipet
&agian$bagian dari mikropipet terdiri dari !utomatic Pipettor Pipettor dan Pipe Pipette tte tips. !utomatic Pipettor ber'ungsi untuk memompa cairan yang akan dipindahkan dengan volume yang telah diset, sedang Pipette tips merupakan pasangan mikropipet yang ber'ungsi untuk menampung cairan yang dipompa.
Pengoperasian Mikropipet !da beberapa tahapan untuk mengoperasikan mikropipet secara benar yang antara lain 1. Set Set volum olume e #. Pasan Pasang g tip tip dispos disposabl able e . *ekan penyedo penyedott sampai sampai pembatas pembatas pertama pertama +. Masu Masukka kkan n tip tip ke sam sampe pell . !mbi !mbill samp sampel el -. *ahan . *arik rik ti tip /. elu eluar arka kan n samp sampel el . *arik rik pipe pipett 10.2epaskan tekanan penyedot 11.2epaskan tip 3ah, berikut ini saya uraian lengkapnya *ahap 1 1 !tur volume dengan cara memutar knop pengatur volume, saya contohkan begini...
*ahap # Pasanglah tip disposable yang telah tertata pada 4adah dengan cara menancapkan ujung mikropipet seperti gambar di samping kanan.
*ahap *ekan penyedot pipet sampai pada batas pertama.
*ahap + + &enamkan tip kedalam cairan yang akan dipindahkan. *ahap Pengambilan sampel 5ntuk mengambil sampel ke dalam tip, jagalah tekanan balik berjalan secara perlahan dan halus sampai penuh ke posisi sebelum penyedotan. 6angan birakan penyedot bergerak cepat dan tiba$tiba. &iarkan tip tetap diba4ah permukaan sampel selama pengambilan. *ahap - - &erhenti sesaat 7 *unggu *unggu sesaat untuk memastikan seluruh sampel yang disedot sudah mengisi tip. 7 *unggu lebih lama lagi untuk pengambilan volume yang lebih besar. 7 *unggu lebih lama untuk sampel yang mempunyai viskositas yang lebih besar.
ara menghilangkan cairan menempel yang benar
ara menghilangkan cairan menempel yang salah
*ahap Penarikan tip dari sampel Pindahkan Pindahkan tip dari cairan sampel. Perlu diperhatikan tidak boleh ada cairan tertinggal di bagian luar tip dan lap8usap butiran cairan di luar dengan tissue, t issue, tetapi hanya dari bagian samping saja. 6angan sentuhkan tissue pada bagian ba4ah8ujung tip. *ahap / / Pengeluaran Sampel 5ntuk mengeluarkan sampel dari pipet caranya sebagai berikut 1. Sentuhkan Sentuhkan tip tip pada dinding dinding 4adah 4adah penampu penampung ng sampel. sampel.
#. *ekan penyedo penyedott sampai sampai pembatas pembatas pertama pertama.. . *ahan *ahan paling tidak tidak 1 detik, detik, 1$# detik detik untuk P$1000, P$1000, #$ detik untuk P$000 P$000 atau lebih lama untuk sampel yang mempunyai viskositas yang lebih tinggi. +. *e *ekan kan penyedot penyedot ke pembatas kedua kedua untuk mengeluarkan sisa$sisa cairan. cairan.
2ulai mengeluarkan Pembatas Pembatas % *ahap Penarikan pipet engan penyedot masih dalam posisi tertekan tarik pipet dari 4adah penampung sampel dengan terus menempelkan tip didinding 4adah khususnya ketika pemipetan dalam jumlah kecil.
*ahap 10 10 Melepaskan tekanan penyedot Secara pelan$pelan biarkan penyedot kembalia pada posisi 5P. 6angan biarkan tertekan kembali.
*ahap 11 11 Melepas tip 2epaskan tip dengan cara menekan ejector seperti gambar. Akurasi dan Presisi !kurasi maksudnya kedekatan volume yang di keluarkan terhadap volume yang diset di pipet. !kurasi ini ditunjukkan dari angka rata$rata eror, penyimpangan pengukuran berulang terhadap volume yang diset. Sedang presisi adalah reprodusibiliti pengukuran individual untuk volume yang sama. Presisi ditunjukkan oleh standar deviasi (S). !kurasi relati' secara umum adalah 19 atau kurang, sedang presisi kurang dari 0, 9 kecuali digunakan volume terkecil yang dianjurkan dari model.
"unakan mikropipet yang sesuai dengan volume yang akan diukur8dipipet. Menggunakan pipet diba4ah volume yang dianjurkan akan menghasilkan kesalahan yang lebih besar. 5ntuk mendapatkan reprodusibilitas optimal ikuti saran sebagai berikut 1. onsisten dalam dalam :;:P! :;:P!*!3 dan dan :
MIKRO PIPET I. LATAR LATAR BELAKANG BELAKA NG
Mikropipet ini ditemukn dn diptenkn pd t!un 1"#0 o$e! %r. %r. &nn' S(!mit) *Mr+ur,- Jermn. Sete$! itu- mitr penemu dri peru'!n +iotekno$o,i Eppendor/- %r. &einri(! Net!e$er- meri'i !k!k 2n, me$ekt pd pten itu dn memu$i pen,,unn mikropipet 'e(r umum dn $u' di $+ortorium$+ortorium di duni. Pd t!un 1"34- mikropipet 2n, dpt dit$ ditemukn di Uni5er'it' 6i'(on'in7Mdi'on o$e! +e+erp orn,terk!u'u' 6rren 6rren Gi$'on dn &enr2 Lrd2 Lrd2.. Mikropipet d$! $t untuk memind!kn (irn 2n, +er5o$ume (ukup ke(i$+i'n2 kurn, dri 1000 8$. Bn2k pi$i!n kp'it' d$m mikropipetmi'$n2 mikropipet 2n, dpt ditur 5o$ume pen,m+i$nn2 *d9u't+$e 5o$ume pipette ntr 18$ 'mpi 40 8$- tu mikropipet 2n, tidk +i' ditur 5o$umen2- !n2 ter'edi 'tu pi$i!n 5o$ume *:;ed 5o$ume pipette mi'$n2 mikropipet < 8$. d$m pen,,unnn2- mukropipet memer$ukn tip. 1. Prin'ip Memind!kn 'utu $rutn dri d! ke d! $in den,n men,,unkn
ukurn tertentu pd umum n2 prin'ip ker9 ker9 mikropipet 'm den,n den,n pipet +i'n2 nmun !n2 di+edkn den,n dn2 pen,ukurn 2n, kurt 4. Tu9un . Untuk men,et!ui (r men,,unk mikropipet 2n, +ik dn +enr +. Men,et!ui k$i+r'i pertn dn ke,unn dri mikropipet =. Bentuk dn >un,'i >un,'i untuk men,m+i$ $rutn den,n 5o$ume 'edikit- den,n men,,unkn du teknik 2itu (r /orrd dn re5er'e. Ke,unn d$m +idn, ke'e!tn untuk men,m+i$ $rutn tu 'mpe$ den,n 5o$ume 2n, ke(i$. B,in +,in dri mikropipet Terdir Terdir dri 1. Pippetor 2n, +er/un,'i untukmemomp (irn 2n, kn di pind!kn 4. Pippet tip p'n,n mikropipet 2n, +er/un,'i untuk menmpun, (irn 2n, di pompkn.
II. PROSE%UR Pro'edur Pen,,unn ?r pen,,unn mi(ro' pipet di +,i men9di du (r 2itu@ 1. >orrd den,n (r 1't 'top- 4nd 'top. Artin2- tekn 1;- m+i$ $rutnm'ukn ked$m t+un,- ke$urkn tekn 4;.
4. Re5er'e- den,n (r 4nd 'top 1't 'top- rtin2 m+i$ $rutn 4 k$i $$u t!n m'ukn $rutn ked$m t+un, dn ke$urkn tekn 1 k$i. Pro'edur Pertn =. M'ukkn tip ked$m d! 2n, +eri'i ir . Lp u9un, mikropipet den,n ti''ue kerin,
