Objetivos •
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Llevar a cabo la identificación identificación del principio activo Paracetamol en una forma farmacéutica sólida, mediante el tiempo de retención obtenido en HPLC
Práctica #4. Determinación de acetaminofén en tabletas por HPLC 6/Abril/2016
Determinar la concentración del principio activo presente en la forma farmacéutica f armacéutica proporcionada proporcionada para lo cual se utilizarán las áreas bajo la curva obtenidas con la sustancia de referencia y muestra.
Resultados
Estándar Muestra 1 Muestra 2
R é p l ic a a b c a
tʀ !."!! !.'%! !.''! !.'&(
Área bajo la curva ##$%&'( ##+$(& ##!'+" #(&!%!#
b a b
!.'+' !.'!! !.'#(
#($'!!% #(+'!# #(!"%!&
Paracetam PARACETAMOL
)* ##+'+(+ D-* (.$(" )* #(&(&!$.$ D-* (.##&# )* #(+!(!+ D-* (.#"
Calculo de la concentración práctica /st
[] St
/0
⌈ ⌉ M 1
( 1657791.500 )( 0.0101796 ⌊ ⌋ M 1 =
/st
⌊ ⌋ St
/0#
⌊ ⌋ M 2
mg ) mL
1775692.333
( 1675157.500 )( 0.0101796 ⌊ ⌋ M 2 =
1775692.333
Calculo del 1eorica
((2
(100 )( 0.009503 Practica ⌊ ⌋ M 1 =
1eorica
mg ) mL
mg 0.0100 mL
=95.03
((2
(100 )( 0.009603 Practica ⌊ ⌋ M 2 =
mg 0.0100 mL
mg ) mL
=96.03
=0.009503 mg
mL
mg ) mL
=0.009603
mg mL
Calculo de !" de paraceta!ol 03 de paracetamol*DC4/m5/ref 6actor de dilución 4D * #$(( C* (.(('%& m35mL /m*&$''%.$ /m#*&'$$'.$ /ref *''$&%#.!!! mg de paracetamol =( 2500 ) ( 0.0101796 )
(
1657791.500
mg de paracetamol =( 2500 ) ( 0.0101796 )
(
1675157.500
1775692.333
1775692.333
)=
23.7592 mg
)=
24.0081 mg
#iscusi$n -l acetaminofén, compuesto polar, con electrones libres en el átomo de nitró3eno y o783eno, contiene diferentes especies 9ue acompa:an a la muestra como e7cipientes, saborizantes, colorantes, conservantes, los cuales pasarán en un tiempo de retención diferente al del analito lo 9ue posteriormente favorecerá la e7actitud de la cuantificación, ya 9ue 9uedan ad;eridos a la fase de la columna. Particularmente se esperar8a 9ue el analito pase primero 9ue los e7cipientes, pues estos poseen en su mayor8a anillos y ;eteroátomos 9ue le disminuyen polaridad. -n la tabla de los resultados se puede observar 9ue las concentraciones obtenidas en las muestras y # estan por debajo de la concentración 9ue mostro el estándar, sin embar3o las desviaciones estándar 9ue dieron las muestras 9uedaron dentro del ran3o de las condiciones cromato3ráficas se:aladas,
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-l método cromato3ráfico de HPLC tiene una alta reproducibilidad en tiempos de retención y área bajo la curva para la determinación de la concentración practica del paracetamol =na tableta de $((m3 de >uitadol tiene entre un %$ 2 a %&2 de /cetaminofen siendo un contenido de +'$ m3 por cada una apro7imándose a la especificación del productor de $(( m3 netos contenidos de paracetamol
C%E&T'O(AR'O . Defina los si3uientes términos? @olumen de elusión. -s el volumen de eluyente re9uerido para causar la elusión. Aajo condiciones normales de una mezcla conocida de los solutos en una cierta técnica, el volumen de elución puede ser suficiente información para identificar los solutos. )olu!en de colu!na* )olu!en cero o !uerto +V0 o Vm,* Es el volu!en de elu-ente .ue se consu!e sin .ue se detecte nin"/n co!ponente* &e de0ine i"ual .ue el volu!en de retenci$n pero el tie!po utiliado es el tie!po !uerto?
-l volumen e7tra en columna representa el volumen total de todos los componentes del sistema y conducciones capilares 9ue no están directamente involucrados en el proceso de separación, desde el punto de inyección de la muestra ;asta la detección. -ste volumen e7tra debe ser minimizado a fin de evitar la formación de picos anc;os y una disminución en la eficacia de la columna además de perder resolución cromato3ráfica. 1iempo muerto 4t( o tm. -s el tiempo de retención del componente inerte o 3as portador. 1iempo de retención 4tr. -s el tiempo transcurrido entre el instante en 9ue se introduce la mezcla y el instante en 9ue se detecta la se:al propia del componente en su má7ima intensidad. Los tiempos de retención no son reproducibles, ni si9uiera en una misma columna cromato3ráfica. 1iempo de retención relativo. -s la razón entre los tiempos de retención corre3idos del
componente considerado, i, y de otro, p, 9ue se toma como patrón de referencia? L8nea base. -s la porción del cromato3rama 9ue re3istra la respuesta del detector cuando solo sale de la columna el 3as portador. esolución. -s el parámetro 9ue e7presa el 3rado de separación 9ue se puede obtener en
un sistema cromato3ráfico para dos componentes dados. elaciona la capacidad separadora de un sistema cromato3ráfico para dos componentes.
Donde Rs es
la
resolución, tRA y tRB son
los
tiempos
de
retención
de
los
componentes A y B, y aA y aB son las anc;uras de los picos del cromato3rama de los anteriores componentes. La resolución puede observarse directamente sobre el cromato3rama de picos.
Hay demasiada muestra en la columna. La columna o placa es corta.
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La fase móvil no discrimina entre los componentes.
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La columna es demasiado 3ruesa.
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-ficiencia. Para definir la eficacia se utiliza el concepto de piso teórico, y se define éste
como la sección teóricoBtransversal en la cual se realiza el e9uilibrio de partición durante el flujo de fase móvil. Cuanto mayor se el nmero de platos teórico 4 N mayor será la eficiencia de la columna. -l nmero de platos teóricos mide la capacidad de la columna para separar los componentes, no la retención de los mismos. La eficiencia o el nmero de platos se puede observa directamente a partir del cromato3rama, observando la a3udeza de los picos.
Donde N es teóricos, L es la lon3itud de la columna,
H es
corre3ido de retención de un componente y
ai es
el
nmero
la altura de cada plato,
de
t'R es
platos
el tiempo
la anc;ura del pico cromato3ráfico. ?
#. Proporcione ejemplos de otros ! fármacos 9ue puedan determinarse por HPLC. Carba!acepina Etosui!ida 3enobarbital !. E>ué sensibilidad de detección puede alcanzar este métodoF %%.%2 +. E>ué contaminante puede encontrarse presente en Paracetamol 4acetaminofén materia prima como producto de de3radaciónF /demás de paracetamol, los demás componentes 4e7cipientes son celulosa polvo, celulosa microcristalina, estearato ma3nésico, almidón de ma8z y dió7ido de silicio, estos pueden ser contaminantes en la muestra. Los e7cipientes son los componentes del medicamento diferentes del principio activo 4sustancia responsable de la actividad farmacoló3ica. Gstos se utilizan para conse3uir la forma farmacéutica deseada 4cápsulas, comprimidos, soluciones, etc. y facilitan la preparación, conservación y administración de los medicamentos. -s el nico componente 9ue puede diferir cuando comparamos un medicamento 3enérico y su e9uivalente de marca. $. EPor 9ué se re9uieren disolventes de alta pureza 3rado HPLC, en cromato3raf8a de l89uidos de alta resoluciónF
