FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIÓN DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA ÁREA DE MICROBIOLOGIA
Prácticas de Laboratorio de Microbiología
UNIVERSIDAD DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CRECIMIENTO Y EL DEL CAUCA EFECTO DE FACTORES AMBIENTALES EN UN CULTIVO
Guía No. 6
BACTERIANO.
1. INTRODUCCIÓN Las bacterias, al igual que los demás seres vivos requieren de una serie de condiciones o fact factor ores es ambi ambien enta tale less para para el desa desarro rrollllo o celu celula larr y conf confor orma maci ción ón de pobl poblac acio ione ness y comuni comunidad dades. es. Los factor factores es pueden pueden diferen diferencia ciarse rse en abióticos, referi referidos dos a aquell aquellos os relacionados con aspectos propios del medio donde se desarrollan, como la temperatura, el pH, pH, los los gase gasess resp respir irat ator orio ioss (O2 y CO2), las radiac radiacion iones es (lumín (lumínica icas, s, sonoras sonoras,, electromagn electromagnética éticas), s), la presión presión (atmosféri (atmosférica, ca, hidrostáti hidrostática, ca, osmótica) osmótica) y la presencia presencia de nutrientes y en bióticos, referidos a aquellos relacionados con las interrelaciones que se dan entre las diversas poblaciones y comunidades. Cuando la bacteria encuentra condiciones propicias para su desarrollo o se adapta a las nuevas condiciones del medio, ocurre inicialmente un crecimiento en masa celular y posteriormen posteriormente, te, en el número de células células a medida medida que avanza el tiempo. tiempo. Estos cambios pueden pueden repres represent entars arse e median mediante te una curva, curva, la cual cual ha sido sido denomi denominad nada a curva curva de crecimiento, tal como se presenta a continuación:
Las etapas de la curva de crecimiento son: •
Las célu célula lass bact bacter eria iana nass se acli aclima mata tan n al nuev nuevo o ambi ambien ente te y las las Fase Fase Lag: Lag: Las características de estas. En esta fase se da inicialmente un crecimiento en masa celular y luego comienzan a formarse nuevas células si se encuentran las condiciones apropiadas Elaborado por: para ello. Revisado Por: Aprobada por: Fecha de Aprobación: Jefe Unidad de Área
.
Presidente Comité Técnico Ambiental
Presidente Comité de Plan Rector Coordinador Comité Desactivación Residuos
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Guía No. 6
BACTERIANO. •
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poblac ació ión n bact bacter eria iana na se incr increm emen enta ta Fase Fase de crecim crecimien iento to expone exponenci ncial: al: La pobl exponencialmente (el mismo número de células por la misma unida de tiempo). Las células se han adaptado al ambiente.
Fase estacionaria: La tasa de crecimiento disminuye por la acumulación de desechos metabólico metabólicoss y el agotamiento agotamiento de los nutrientes. nutrientes. La tasa de crecimient crecimiento o iguala iguala la tasa de mortalidad. Fase de muerte: La población bacteriana disminuye por el agotamiento total de nutrie nutriente ntes, s, los efecto efectoss tóxico tóxicoss de los desech desechos os metabó metabólic licos os y las modifi modificac cacion iones es sustanciales en el ambiente.
2. OBJETIVOS •
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Establecer la curva de crecimiento de un cultivo bacteriano. Capacitar al estudiante en le Manejo del espectrofotómetro y sus aplicaciones en el trabajo de laboratorio. Proporcionar a los estudiantes los conceptos físicos y químicos que permiten a la espectrofotometría ser una herramienta de análisis en el laboratorio.
3. CONSULTAS PRELIMINARES ¿Cuáles son los factores ambientales determinantes del crecimiento y desarrollo bacteriano? ¿Cuál es el principio de operación de un espectrofotómetro? ¿Qué es la densidad óptica de un cultivo bacteriano?
4. MATERIALES MATERIAL Cajas de Petri Tubo de ensayo con tapa Asa bacteriológica Mechero Cultivo bacteriano
CANTIDAD 10 2 1 1 1
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Guía No. 6
BACTERIANO. No hay restricción de seguridad por el uso de los medios de cultivo. 6. EQUIPOS
EQUIPOS* Incubadora Espectrofotómetro SQ118 Baño de María Cámara flujo laminar con luz UV
CANTIDAD 1 1 1 1
La incubadora y el baño de maría deberán estar previamente calibrados a la temperatura requerida. No manipular el equipo y mantenerlo cerrado. Abrir solamente para incluir el cultivo a incubar.
7. PROCEDIMIENTO PROCEDIMIENTO 7.1
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DETER ETERM MINA INACIÓN IÓN DE LA CURVA RVA DE CRECIM ECIMIE IENT NTO O DE UN CULT ULTIVO IVO . BACTERIANO Transfiera con el asa bacteriológica una porción de cultivo bacteriano a un tubo de ensayo ensayo conteniendo conteniendo cinco (5) mL de caldo nutritivo. Prepare dos cultivos cultivos (2 tubos de ensayo) para obtener una réplica. Determine el porcentaje de transmitancia (%T) de los cultivos inicialmente preparados en la parte anterior, utilizando el espectrofotómetro previamente calibrado a 660 nm. Coloque los cultivos a incubar en “baño de maría” a 35 - 37 ºC, realizando agitaciones suaves cada cinco minutos para asegurarse de distribuir las células y los nutrientes. Realice lectura del porcentaje de transmitancia de sus cultivos en el espectrofotómetro cada 10 minutos hasta obtener la curva de crecimiento de su cultivo. Convierta el porcentaje de transmitancia obtenido en cada lectura a el valor de densidad óptica (D.O.) del cultivo, aplicando la fórmula: D. O. = 2 – log %T Con los valores convertidos realice la curva de crecimiento de su cultivo bacteriano, cruzando las variables tiempos versus densidad óptica.
7. BIBLIOGRAFÍA BIBLIOGRAFÍA BENSON, HAROLD. 1981. Microbiological applications. A laboratory manual in general microbiology. Wm. C. Brown Company Publishers. Iowa.