DISCUSION 1. PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO, CULTIVO, PLAQUETAS Y SIEMBRA:
Con esta práctica se pretende aprender las técnicas de preparación de medios de cultivo, su esterilización y su almacenaje, así como la importancia de los medios de cultivo y su uso. Además también se pretende que el alumno se familiarice con las técnicas empleadas en Microbioloía para el cultivo y la manipulación de microoranismos en condiciones de esterilidad. !n medio medio de culti cultivo vo es un con conju junt ntoo de nutr nutrie iente ntes, s, fact factore oress de creci crecimi mien ento to y otros otros com compone ponent ntes es que que crea creann las cond condiicion ciones es nece necesa sari rias as para para el desa desarr rrol olllo de los microoranismos. "uesto que la diversidad metabólica de los microoranismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es también muy rande. #a mayoría de los medios de cultivo cultivo se comercializan comercializan en forma de liofilizado liofilizadoss que es preciso re$idratar. re$idratar. #a preparación de un medio de cultivo se reduce en eneral a pesar la cantidad cantidad de medio y redisolverla redisolverla en aua destila destilada da %libre %libre de in$ibi in$ibidore doress del crecim crecimient iento& o& siuie siuiendo ndo las instru instrucci ccione oness del fabricante. #as sustancias termolábiles se esterilizan por filtración y se a'aden al resto de los componentes previamente esterilizados en la autoclave. (n términos microbiolóicos se entiende por )*(M+A el proceso mediante el cual se lleva una porción de una población de microoranismos %inóculo& de un cultivo bacteriano a un medio nutritivo para su crecimiento. "AA !-A C(C C(C/A /A (A#*0A (A#*0AC*1 C*1- 2( #A )*(M+ )*(M+A A )- -(C()A -(C()A*A *A) ) C*(/A) C-2*C*-()3 4ue se lleve a cabo con instrumentos estériles sobre medios de cultivo estériles. "ara estudiar una bacteria determinada, es necesario destruir todos aquellos microoranismos que pudieran encontrarse en el medio y en los instrumentos de trabajo. (sto se consiue con la ()/(*#*0AC*-, ()/(*#*0AC*-, proceso que consiste en conseuir conseuir que todos los microorani microoranismos smos presentes mueran desde el punto pun to de vista microbiolóico.
"ara la preparación de los medios de cultivo, primero se esterilizan en el A!/C#A5(, el cual $ace uso del calor $6medo. (l autoclave es un aparato que permite elevar la presión y la temperatura con lo que se consiue un aumento en la temperatura de ebullición del aua. -ormalmente, se lleva la presión a 7 atmósfera %por encima de la ambiental& lo que corresponde a una temperatura interior de 789:C, manteniéndolo en estas condiciones durante 8; minutos. /odo el material de vidrio %pipetas, tubos, varillas.etc..& se esteriliza con calor seco, siendo el <$orno "asteur< el aparato más empleado %se somete a temperaturas de 7=;>7?; :C durante 8$>@$&. (n el caso de objetos metálicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el momento de su utilización, se mantienen en la llama $asta que se ponan al rojo, teniendo la precaución de enfriarlos antes de su uso. "ara la utilización del aar se utilizó el "2A, "apa 2etrosa, es utilizado para el cultivo de $onos )on aquellos que contienen un aente solidificante entre sus componentes, normalmente aar. )e preparan en placas de "etri o en tubos en slant %tubos con la superficie del medio inclinada&. 2. IDENTIFICACION DE PLANTULAS, Y TALLOS EN CULTIVO DE TEJIDOS.
!n medio de cultivo adecuado para la investiación microbiolóica $a de contener, como mínimo, carbono, nitróeno, azufre, fósforo y sales inoránicas. (n muc$os casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.
"ara la
preparación del medio de cultivo se tiene en cuenta partiendo de un medio líquido, podemos modificar su consistencia a'adiendo productos como alb6mina, elatina o aar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. (l uso de las técnicas de cultivo de tejidos puede etender y mejorar las posibilidades de la propaación veetativa para alunas especies. !no de los objetivos prioritarios del mejoramiento de especies no industriales será probablemente las actividades relacionadas con la conservación de la variabilidad enética %Baines, 7=&. (l cultivo in vitro de tejidos es un área de la biotecnoloía cuya importancia en la conservación de los recursos fitoenéticos está aumentando, especialmente en las especies que se propaan
veetativamente. #a propaación veetativa representa un camino más directo para retener las características enéticas deseables de un árbol o de una especie amenazada. 2entro de este tipo de propaación, el cultivo de tejidos ofrece un ran potencial de apoyo a los métodos tradicionales. (l n6mero de plantas que se obtiene dependerá de la especie veetal y de las condiciones del medio de cultivo. (l n6mero de plantas que se obtiene por la vía de la micropropaación permite alcanzar incrementos eponenciales, considerando que todos los factores que afectan el crecimiento $ayan sido optimizados. "ara las condiciones necesarias de $umedad se tiene un nivel mínimo de esta, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células veetativas microbianas en los cultivos. Condiciones necesarias de luz, la mayoría de los microoranismos crecen muc$o mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Bay ecepciones evidentes como sería el caso de los microoranismos fotosintéticos.
