ESCUELA POLITECNICA DEL EJÉRCITO FACULTAD FACULTAD DE CIENCIAS APLICADAS APLI CADAS INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA INFORME DE LABORATORIO
Nombre: Abad Myriam; Cruz Nathaly
Materia: Biología Molecular I
Practica N°:03
Curso/Paralelo: 1!0!
Fecha: 19 – 01 – 201
1. TEMA: Extracción de ADN
2. OBJET JETIO IO!: Ob"eti#o $e%eral. " #$tr #$trae aerr A%N A%N a &arti &artirr de u'a u'a mue( mue(tr tra a )ege )egeta tall *ho+ *ho+a a de e(&i e(&i'a 'aca ca – Spinacia Olerasea,Olerasea,Ob"eti#os Es&ec'(icos " Ide'ti Ide'ti.ic .icar ar y .amil .amiliar iariza izar(e r(e co' co' el corr correct ecto o &roced &rocedimi imie't e'to o &ara u'a e$tr e$tracc acci/' i/' de A%N utiliza'do la tc'ica de %NA ol eage't" 4bte'er 4bte'er y &re&arar &re&arar correcta correctame'te me'te u'a mue(tra mue(tra *)egetal *)egetal,, (u.icie' (u.icie'te te y de calidad calidad &ara utilizarla e' el &roce(o de e$tracci/' de A%N" Co'oce Co'ocerr y di.ere'c di.ere'ciar iar la( la( .u'cio' .u'cio'e( e( y caracte caracterí( rí(tic tica( a( de lo( di.er di.ere't e'te( e( ti&o( ti&o( de reacti)o( y materiale( 5ue (e utiliza' dura'te la e$tracci/' de A%N3. INT)O*+CCI,N o MA)CO TEO)ICO 6
7cido de(o$irribo'ucleico *A%N, e( el material ge'tico de todo( lo( orga'i(mo( celulare( y ca(i todo( lo( )iru(; e(te lle)a la i'.ormaci/' 'ece(aria &ara dirigir la (í'te(i( de &roteí'a( y la re&licaci/'- *8erreira 200, #' la e$tracci/' de :cido( 'ucleico( e$i(te' di.ere'te( ti&o( de mtodo( 5ue &ermite' (u obte'ci/' &artie'do de di.ere'te( .ue'te( &or e+em&lo6 &la'ta( &l:(mido( gota( de (a'gre cabello( clula( bacteria'a( o eucari/tica( e'tre otra(- #(ta( co'te'dr:' A%N de bue'a calidad (i (e colecta y &re(er)a a&ro&iadame'te- *<= 2000, >a mayor di.icultad &ara colectar material biol/gico co' &ro&/(ito( ge'tico( e( e)itar la degradaci/' del A%N- >o( &ri'ci&ale( age'te( degradadore( de A%N e' mucha( mue(tra( (o' la( e'zima( %NAa(a(- #(ta( &uede' e(tar ya &re(e'te( e' la mi(ma mue(tra o (er &roducida( &or lo( microorga'i(mo( 5ue crece' e' la mi(ma- *?a((er 199, Mucho( Mucho( e(tudi e(tudio( o( de Biolog Biología ía Molecu Molecular lar comie comie'za 'za' ' co' la e$trac e$tracci/ ci/' ' de :cido( :cido( 'ucleico( lo( cuale( re5uiere' de u'a (erie de eta&a( b:(ica(- *@ime'tel 201, - #l &roce(o de e$tracci/' de A%N em&ieza &or6 la li(i( celular 5ue libera la( molcula( e' u'a .a(e acuo(a 5ue e( (e&arada de lo( re(to( celulare( &or ce'tri.ugaci/'- >a( &rot &roteí eí'a 'a(( (o' (o' remo remo)i )ida da(( de la .a(e .a(e acuo acuo(a (a co' co' (ol) (ol)e' e'te te(( org: org:'i 'ico co(( *.e' *.e'ol ol cloro.ormo,- #l A%N 5ue &erma'ece e' la .a(e acuo(a &reci&ita +u'to al eta'ol y &o(t &o(ter erio iorm rme' e'te te e( &uri &uri.i.ica cado do *o&c *o&cio io'a 'al, l, &ero &ero e(te e(te &erm &ermitite e (e&a (e&ara rarr el %NA %NA de mate materi rial ale( e( co't co'tam ami' i'a' a'te te( ( como como NA NA y &rot &roteí eí'a 'a((- @or @or lti ltimo mo el %NA %NA 5ued 5ueda a (u(&e'dido e' u' bu..er adecuado *Mala+o)ich200!,-
'a tc'ica de e$tracci/' de %NA utiliza %NA ol egie'( *%NAzolD, 5ue e( u' com&leto reacti)o li(to &ara u(ar(e &ara el ai(lamie'to de A%N ge'/mico o )iral de mue(tra( (/lida( y lí5uida( de a'imal huma'o y orige' )egetal- #l &rocedimie'to (e ba(a e' el u(o de u'a i''o)adora (oluci/' de li(i( gua'idi'a – deterge'te 5ue hidroliza el AN y &romue)e la &reci&itaci/' (electi)a del A%N de la clula li(ada *1 2,- #(te mtodo de ai(lamie'to de A%N a)a'zado combi'a .iabilidad y e.icacia co' la (e'cillez de u' &rotocolo de ai(lamie'to r:&ido *Chomczy'(Ei 2013,4. MATE)IA-E! MTO*O!6 Materiales
" " " " "
E0ui&o 1e &rotecci% &erso%al: ma'dil gua'te(Muestras biol3icas: ho+a( de e(&i'acaE0ui&os: microce'tri.uga )eacti#os: Nitr/ge'o lí5uido %NA ol cloro.ormo eta'ol *100F, eta'ol *9F, bu..er #Otros materiales: tubo( e&&e'dor. *1m>, micro&i&eta( &u'ta( de micro&i&eta( &i(tilo mortero e(&:tula &i&eta( &a&el toalla marcador de )idrio-
Meto1olo3'a:
Pre&araci% 1e la muestra: o =e coloc/ la( ho+a( de e(&i'aca e' el mortero *(i' tallo(,o =e agreg/ 'itr/ge'o lí5uido e' el mortero y (e &rocedi/ a macerar la( ho+a( ha(ta &ul)erizarla(o =e tom/ u' &oco de mue(tra y (e coloc/ e' el tubo e&&e'dor.-isis 4 homo3e%i5aci%: o =e aGadi/ 1m> de %NA ol &or cada 2"0 mg de mue(trao =e mezcl/ a .o'do co' la ayuda de u' &i(tiloo =e i'cubo &or "10 mi'uto( a tem&eratura ambie'te mezcla'do &or i')er(i/'o =e aGadi/ 300 u> de cloro.ormoCe%tri(u3aci%: o =e ce'tri.ugo &or 10 mi'uto( a 10000 r&m a HC =e tra'(.iri/ el (obre'ada'te a u' 'ue)o tubo e&&e'dor.Preci&itaci%: o =e &reci&ito el (obre'ada'te 0 m> co' eta'ol 100F &or 1Ml de %NA olo =e mezcl/ &or i')er(i/' y (e de+/ re&o(ar &or 3 mi'uto(o =e elimi'/ 'ue)ame'te el (obre'ada'te de+a'do 'icame'te el %NA-a#a1o: o =e la)/ el &reci&itado 2 )ece( co' 1 m> de eta'ol 9F o #' cada la)ado (e i')irti/ el tubo de 3"! )ece(=e almace'/ lo tubo( e&&e'dor. e' .orma )ertical &ara &reci&itar el o %NA y (e elimi'/ el eta'ol!us&e%si%: o =e de+/ (ecar el %NA a tem&eratura ambie'te &or u'o( 3 mi'uto(o
2
=e di(ol)i/ el &ellet e' bu..er # agit:'dolo co' u'a &u'ta &ara 5ue (e homoge'ice5. )E!+-TA*O! OB!E)ACIONE! 6 o
A; -isis 4
Foto 6: eci&ie'te de 'itr/ge'o lí5uido y ho+a( de e(&i'aca e' morteroToma1a &or: Myriam Abad
Foto 8: Coloca'do el &ol)o de e(&i'aca e' el tubo e&&e'dor.Toma1a &or: Myriam Abad
Foto 2: =e coloca el 'itr/ge'o lí5uido e' el mortero co' la( ho+a( de e(&i'acaToma1a or: M riam Abad
Foto 9: Jomoge'izaci/' de la mue(tra co' %NA ol utiliza'do u' &i(t/' &ellet e&&e'dor.-
Foto 7: ritura'do r:&idame'te la( ho+a( de e(&i'acaToma1a &or: Myriam Abad
Foto : =e aGadi/ cloro.ormo a la mue(tra homoge'izadaToma1a &or: Nathaly Cruz
=e utilizaro' mue(tra( muy .re(ca( de ho+a( de e(&i'aca &or5ue e( 'ece(ario el bue' e(tado de la mue(tra &ara co'(eguir co' $ito la e$tracci/' #l &roce(o de trituraci/' debe (er r:&ido debido a 5ue (e 'ece(itaría' gra'de( ca'tidade( de 'itr/ge'o lí5uido &ara ma'te'er la mue(tra y la mue(tra tie'e 5ue (er triturada ha(ta 5uedar e' u' .i'o &ol)o Al aGadir el %NAzol a la mue(tra (e utiliz/ u' &i(t/' &ellet e&&e'dor. &ara homoge'eizar la mue(tra &ara de(&u( aGadir el cloro.ormo
3
B; Ce%tri(u3aci%:
Foto =: =e ce'tri.ug/ lo( tubo( e&&e'dor.-
Foto >: 8a(e( obte'ida( de(&u( de la ce'tri.ugaci/' del tubo e&&e'dor.Toma1a or: M riam Abad
Foto ?: =e e$tra+o el (obre'ada'te obte'ido de la ce'tri.ugaci/'Toma1a or: M riam Abad
#l &roce(o de ce'tri.ugado 'o( da como re(ultado u' (obre'ada'te el cual tra'(.erimo( a u' 'ue)o tuboC; Preci&itaci%:
Foto 6@: =e coloc/ el (obre'ada'te e' otro tubo e&&e'dor. Toma1a &or: Nathaly Cruz
Foto 66: =e coloc/ eta'ol 100F al tubo co' el (obre'ada'teToma1a &or: Nathaly Cruz
Foto 62: =e ce'tri.ug/ u'a (egu'da )ez y (e obtu)o el &reci&itado Toma1a &or: Myriam Abad
'a )ez obte'ido el (obre'ada'te (e realiz/ la &reci&itaci/' e' la cual aGadimo( eta'ol a la mue(tra mezclamo( y ce'tri.ugamo( (e &udo ob(er)ar u' &reci&itado color bla'co lecho(o-
4
D) -a#a1o:
Foto 67: =e elimi'/ la &arte lí5uida del tubo e&&e'dor. &rocura'do de+ar (olame'te el &elletToma1a &or: Myriam Abad
Foto 68: =e coloc/ eta'ol al 9F e' el tubo e&&e'dor. Toma1a or: Nathal Cruz
Foto 69: =e ce'tri.ug/ lo( tubo( e&&e'dor.-
#' el &roce(o de la)ado .ue 'ece(ario ce'tri.ugaci/' de 'ue)o &or do( mi'uto( ya 5ue el A%N 'o te'ía la te$tura de(eada=e elimi'/ el (obre'ada'teE) !us&e%si%:
Foto 6: =e dio la )uelta el tubo e&&e'dor. y de+o (ecar Toma1a or: Nathal Cruz
Foto 6=: =e aGadi/ el bu..er # al tubo (eco Toma1a &or: Myriam Abad
Foto 6>: =e homoge'izo co' la micro&i&etaToma1a or: Nathal Cruz
=e &rocedi/ a (ecar lo( tubo( @or ultimo a lo( tubo( (eco( 5ue co'te'ía' el &ellet (e le( aGadi/ # y (e homoge'eizo co' la &u'ta de la micro&i&eta-
5
. *I!C+!I,N >a obte'ci/' de %NA í'tegro y &uro e( u'a &arte .u'dame'tal &ara el bue' de(em&eGo de la( tc'ica( utilizada( e' Biología Molecular *a'g et al- 200 ?a'g et al- 200,- #' la &r:ctica realizada (e e$tra+o el %NA de e(&i'aca co' u' &rotocolo e(&ecí.ico &ara e(te &rocedimie'to &ero adem:( de &la'ta( (e &uede e$traer %NA de a'imale( algu'a( bacteria( y )iru( e' lo( cuale( (e a&lica u'a metodología o u' mtodo di.ere'te &or e'de e( muy im&orta'te co'ocer a 5ue orga'i(mo (e le e$traer: %NA y 5ue &rotocolo (e debe u(ar &ara e(te (i e( u' mtodo tradicio'al o u' mtodo e' el cual u(amo( Eit( de e$tracci/'I'de&e'die'teme'te del mtodo de e$tracci/' 5ue (e utilice lo im&orta'te e( realizar cada &a(o co' cuidado &ara obte'er A%N í'tegro y &uro 5ue &ermita lle)ar a cabo la( tc'ica( &o(teriore(- >a( tc'ica( actuale( de biología molecular 'o re5uiere' de gra'de( ca'tidade( de material ge'tico- *Kel:z5uez (-.-,- Al realizar cada eta&a de la e$tracci/' de %NA de e(&i'aca (e lo hizo e' lo( tiem&o( e$acto( e(&eci.icado( e' el &rotocolo'a de la( )e'ta+a( de utilizar mtodo( tradicio'ale( e( (u ba+o co(to a(í como u' alto re'dimie'to- =i' embargo e' oca(io'e( el material obte'ido e(t: .ragme'tado- #(to( mtodo( (o' (u(ce&tible( de co'tami'aci/' )ariaci/' y errore( &or lo( mlti&le( &a(o( de ma'i&ulaci/' *=tLrmer et al- 200,- #l re'dimie'to de lo( Eit de e$tracci/' de&e'de de la calidad de la mue(tra e$traída la ca'tidad de mue(tra tomada y la ca&acidad 5ue tie'e' la( membra'a( &ara u'ir(e a lo( reacti)o(#l .e'ol y el agua *(oluci/' acuo(a do'de (e e'cue'tra el A%N, 'o (e &uede' mezclar &or lo 5ue el A%N 5ue e( muy &olar debido a (u carga 'egati)a &erma'ecer: e' la .a(e acuo(a de la (oluci/' mie'tra( 5ue la( &roteí'a( *.ormada( &or gra'de( cade'a( cuyo( com&o'e'te( eleme'tale( (o' ami'o:cido( algu'o( &olare( y otro( 'o, 5uedar:' tra( la ce'tri.ugaci/' e' la i'ter.a(e y e' la .a(e org:'ica debido a (u &olaridad *@oto(í 200,#( 'ece(ario el u(o de reacti)o( como .e'ol cloro.ormo y alcohol i(oamilico o eta'ol e' algu'o( ca(o( &ara la elimi'aci/' de &roteí'a(- Jay 5ue e$traer el (obre'ada'te co' cuidado &ara 'o arra(trar la( &roteí'a(-
=. CONC-+!IONE!
=e a&lic/ y a&re'di/ correctame'te el &roce(o de e$tracci/' de %NA ayud:'do'o( de la tc'ica de %NA ol ege't e' u'a mue(tra )egetal de ho+a( de e(&i'aca=e co'(igui/ e$traer u'a mue(tra )egetal de calidad media ya 5ue la( ho+a( (e e'co'traba' u' &oco mo+ada( y e(o ge'ero la .ormaci/' de cri(tale( y e(to &ro)oco 5ue 'o (e &ueda triturar com&letame'te la( ho+a(=e ide'ti.ic/ la( eta&a( del &roce(o de e$tracci/' de %NA re(&eta'do el tiem&o de cada u'a de ella( ya 5ue la mue(tra &uede daGar(e o e' el ca(o del la)ado de(&erdiciar(e#l cloro.ormo ayuda a la remoci/' de lí&ido( e( &or ello( 5ue al colocarlo e' lo( tubo( (e ob(er)a la (e&araci/' de tre( .a(e(-
>. )ECOMEN*ACIONE! Cua'do (e &rocede a obte'er el &ol)o del material ge'tico (e debe tomar e' cue'ta el cambio de coloraci/' ya 5 e(to i'dica 5ue (e &roduce o$idaci/' *coloraci/' )erde o(curo,#( recome'dable utilizar mue(tra( de ho+a( bie' (eca( .re(ca( y (i' tallo( &ara lograr triturarla( com&letame'te y e)itar la .ormaci/' de cri(tale(-
6
#' el &roce(o de la)ado el A%N (e mue(tra e' .orma lecho(a e(ta debe e(tar adherida a la( &arede( del tubo y 'o de(lizar(e e' ca(o de 'o &re(e'tar e(a te$tura (e debe realizar 'ue)ame'te la ce'tri.ugaci/'Medir y colocar correctame'te lo( )olme'e( 'ece(ario( de reacti)o( e(&ecialme'te al mome'to de &i&etear@rocurar o&timizar y e)itar de(&erdiciar la mue(tra dura'te lo( &roce(o( de la)ado o cambio de e')a(e-
?. ANEO! Cuestio%ario I.
Cuál es la función que cumple el DNA Zol Reagent?
#l %NA ol e( u' com&leto reacti)o li(to &ara u(ar(e &ara el ai(lamie'to de A%N ge'/mico o )iral de mue(tra( (/lida( y lí5uida( de a'imal huma'o y orige' )egetal- #l &rocedimie'to (e ba(a e' el u(o de u'a i''o)adora (oluci/' de li(i( gua'idi'a – deterge'te 5ue hidroliza el AN y &romue)e la &reci&itaci/' (electi)a del A%N de la clula li(ada *1 2,- #(te mtodo de ai(lamie'to de A%N a)a'zado combi'a .iabilidad y e.icacia co' la (e'cillez de u' &rotocolo de ai(lamie'to r:&ido *Chomczy'(Ei 2013,i&o( de %NA ol6 %NA ol6 (e lo utiliza &ara mue(tra( como clula( te+ido( y mue(tra( lí5uida( %NA ol #=6 (e lo utiliza e(&ecí.icame'te &ara mue(tra( de %NA de &la'ta(%NA ol B%6 (e lo u(a e(&ecí.icame'te &ara mue(tra( de %NA ge'/mico o )iral de (a'gre *Chomczy'(Ei MacEey %re( ?il.i'ger 199,
II.
Con qué otros reactivos se puede realiar e!tracción de DNA " descri#a #revemente un protocolo? Con qué otros reactivos se puede realiar e!tracción de DNA " descri#a #revemente un protocolo?
*escri&ci% Protocolo 1e PoresbsiD et al 6??=;: Etractio% &rotocol (or &la%ts co%tai%i%3 hi3h &ol4sacchari1e a%1 &ol4&he%ol com&o%e%t. -
-
omar el material )egetal *0 mg de te+ido (eco, y triturarlo e' u' mortero co' ayuda de 'itr/ge'o lí5uidoMacerar co' mg de @K@ ha(ta te'er u' &ol)o .i'al AGadir 00 u> de bu..er de e$tracci/'6 100 mM ri(-Cl &J 0; 1-HM NaCl 20 mM #%A &J -0; CAB 0-2F; 2b"merca&toeta'ol 03F a ! C y )ol)er a macerar la mue(tra e' el mi(mo mortero@o(teriorme'te (e toma la mezcla y (e la coloca e' tubo( e&&e'dor. de 1- ml e(trile( co' la ayuda de e(&:tula( de &oli&ro&ile'o tambi' e(trile(I'cubar e' baGo maría a ! C &or 1 hora co' agitaci/' cada 20 mi'uto(ermi'ada la li(i( de+ar e'.riar cada tubo &or mi'uto( AGadir u' )olume' de cloro.ormo6 alcohol i(oamílico *2H61, mezclarlo &or mi'uto(Ce'tri.ugar la mezcla a 000 r&m &or 10 mi'uto(ra(ladar el (obre'ada'te a u' 'ue)o tubo e&&e'dor.e&etir la &uri.icaci/' &or CIA ha(ta 'o te'er i'ter.a(e de(&u( de la ce'tri.ugaci/' AGadir la mitad del )olume' de NaCl M y 2 )olme'e( de eta'ol .río al 90FCe'tri.ugar a 000 r&m &or 20 mi'uto(-
7
-
%e(cartar el (obre'ada'te y la)ar el &ellet co' eta'ol .río al 0F%e+ar (ecar dura'te 20 mi'uto(e (u(&e'der e' # a H C dura'te toda la 'oche AGadir 3 ul de NA *10 mgOul,I'cubar e' baGo maría dura'te 30 mi'uto( a 3 C al trmi'o del mi(mo aGadir 3 ul de &rotei'a(a P e i'cubar a 3 C &or trei'ta mi'uto( m:(Colocar .e'ol"cloro.ormo"i(oamílico *262H61, y ce'tri.ugar a 000 r&m &or 20 mi'uto(@a(ar el (obre'ada'te a u' e&&e'dor. e(tril y aGadir la dcima &arte del )olume' co' Acetato de (odio 2Me&o(ar toda la 'oche a "0 C- Ce'tri.ugar a 1H000 r&m &or 10 mi'uto(>a)ar el &ellet co' eta'ol .río al 0F e (u(&e'der co' 200 – 300 ul de # Almace'ar a "20 C-
Tris hi1roimetil ami%o;: Bu..er Biol/gico ma'tie'e el &h de la (oluci/' e'tre "
E*TA etile% 1iami%o tetracGtico;: age'te 5uela'te 5ue ca&tura io'e( de Mag'e(io
Alcoholes: eta%olD iso&ro&a%ol6 &ermite' 5ue (e &reci&ite el %NA-
Otros reacti#os utili5a1os e% la etracci% 1e *NA *:rate 200,
PP Poli#i%il &orroli1o%a;: deterge'te ca&az de elimi'ar com&ue(to .e'/lico(
NaCl 4 Cl: e(tabiliza' la( carga( I/'ica(
CTAB
8
BH Merca&toeta%ol : de(truye lo( &ue'te( di(ul.uro
!arosil -aurel sarcosi%a;: %eterge'te 5ue i'hibe he$o5ui'a(a( y bue' (ol)e'te-
Cloro(ormo: (ol)e'te org:'ico ca&az de elimi'ar lí&ido(
III.
Por 0uG es im&orta%te ma%te%er a tem&eratura ambie%te el *NA Kol )ea3e%tL
@ara &oder ma'te'er e(table el reacti)o %NA ol debe co'(er)ar(e e' u'a tem&eratura e'tre 1 y 30 C; e(ta tem&eratura e( a&ro$imadame'te la &romedio e' tem&eratura ambie'te- @or e'de (i (e co'(er)a el reacti)o a tem&eratura( mayore( o me'ore( a la( ya me'cio'ada( )a a ge'erar 5ue la e(tructura y lo( com&o'e'te( del %NA ol (e deteriore' hacie'do 5ue &ierda (u e.icie'cia y e(tabilidad- *ra)er(o 200, Adem:( e(te reacti)o e( ca&az de ma'te'er mue(tra( de %NA &or largo( &eriodo( de tiem&o de ha(ta m:$imo u' aGo-*Chomczy'(Ei MacEey %re( ?il.i'ger 199,-
6@. BIB-IO$)AFA @oto(í - A- *0 de Mayo de 200,- #$tracci/' de %NA co' 8e'ol"Cloro.ormo" Alcohol I(oamílico - 4bte'ido de #$tracci/' de %NA co' 8e'ol"Cloro.ormo"Alcohol I(oamílico 6 htt&6OO-ge'omica-ua(l&-m$O@rotocolo(O#$traccio'F20%NA F20@CI"CC-&d. Kel:z5uez >- @- *(-.-,- #$tracci/' y &uri.icaci/' de A%N- 4bte'ido de #$tracci/' y &uri.icaci/' de A%N6 htt&6OO2-i'ecc-gob-m$O&ublicacio'e(Olibro(O10Oe$traccio'-&d. =tLrmer M- P- Plee(ieE y Q- %reier- *200,- Jigh"Kolume #$tractio' o. Nucleic Acid( by Mag'etic Bead ech'ology .or ltra(e'(iti)e %etectio' o. Bacteria i' Blood Com&o'e't(- Cli'ical Chemi(try 36 10H–110a'g R- ?- =-#- =e.er( J- >i %- Q- Poh' y <-?- @roco&- *200,- Com&arati)e e)aluatio' o. three commercial (y(tem( .or 'ucleic acid e$tractio' .rom uri'e (&ecime'(- Qour'al o. Cli'ical Microbiology H36 H30"H33 Barrio @- *2012,- e)i(i/' de Mtodo( de #$tracci/' de A%N a @artir de e(to( S(eo( e' el >aboratorio 8ore'(e- Revista Española de Medicina Legal 1"1Chomczy'(Ei @- MacEey - %re( - ?il.i'ger ?- *22 de Marzo de 199, DNAzol: a reagent for the rapid isolation of genoic DNA! 4bte'ido de NCBI6 htt&6OO-'cbi-'lm-'ih-go)O&ubmedO90!03! %ora 8o'(eca J- M- *2010,- "racticas de La#oratorio de $iologia Molec%lar: S% Aplicacion en &enetica $asica! Bogot: %-C-6 'i)er(idad del o(ario
- - *200,- 'n N%evo Modelo para la (dentificación de la Diversidad &en)tica de *acao en *olo#ia! Colombia6 @almira Kalle del Cauca>i.eech'ologie(- *2! de 4ctubre de 200,- DNAzol Reagent: Standar Sheet 4bte'ido de >i.e ech'ologie(6 htt&6OO-tu.t(-eduOWmcourt01O%ocume't(O%NAzol F20&rotocolF20.orF20%NAF20e$tractio'-&d. M- ima " @er6 Ce'tro I'ter'acio'al de la &a&aMicrobial- *8ebrero de 2009,- Ne,sletter : (nforación so#re An-lisis Micro#iológicos! 4bte'ido de Ne(letter 6 I'.ormaci/' (obre A':li(i( Microbiol/gico(6 htt&6OO-microbial" (y(tem(-comOebOdoc(ONe(letterVMicrobialV03-&d. =cie'ti.ic - 8- *201,- therofisher!co- 4bte'ido de >a e$tracci/' de A%N u(a'do %NAzolD eacti)o6 htt&(6OO-thermo.i(her-comOecOe'OhomeOre.ere'ce(O&rotocol(O'ucleic"acid"
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&uri.icatio'"a'd"a'aly(i(Od'a"e$tractio'"&rotocol(Oe$tractio'"o."d'a"u(i'g" reage't-html =il)a C- *200!,- .ecnico Especialista en La#oratorio! #(&aGa6 #ditorial MA%-=->=omma M- *12 de No)iembre de 200H,- An-lisis de la "resencia de Organisos &en)ticaente Modificados en M%estras de Alientos! 4bte'ido de QC #uro&ea' Commi((io'6 htt&6OOgmo" crl-+rc-ec-euro&a-euOca&acitybuildi'gOma'ual(OMa'ualF20#=O=e(iFC3FB3'H-&d. hermo8i(her- *10 de Qu'io de 2012,- Extraction of DNA fro "lants 'sing "lant DNAzol Reagent 4bte'ido de hermo8i(her =cie'ti.ic6 htt&(6OO-thermo.i(her-comOecOe'OhomeOre.ere'ce(O&rotocol(O'ucleic"acid" &uri.icatio'"a'd"a'aly(i(Od'a"e$tractio'"&rotocol(Oe$tractio'"o."d'a".rom"&la't(" u(i'g"&la't"d'azol"reage't-html ?#BMa(ter- *1999,- http://peces!ens!%a#c!x/ - 4bte'ido de Biología Celular y Molecular6 htt&6OO&ece(-e'(-uabc-m$ObcymO&racticaOA%N-html :rate =- *200,- $0s1%eda de los genes de resistencia Mi23 4 Mi25 al ne-todo forador de n%do eloidog4ne spp! en varias especies silvestres de la failia solanaceae del Ec%ador! =a'gol5uí6 #=@#Chomczy'(Ei @- MacEey - %re( - ?il.i'ger ?- *22 de Marzo de 199,DNAzol: a reagent for the rapid isolation of genoic DNA! 4bte'ido de NCBI6 htt&6OO-'cbi-'lm-'ih-go)O&ubmedO90!03! 8erreira Q- *1 de Ago(to de 200,- El ADN 6 Estr%ct%ra 4 7%nciones- ecu&erado el 1 de #'ero de 201 de htt&(6OOad'e(tructuray.u'cio'e(-ord&re((-comO200O0O1Oad'O Mala+o)ich M- A- * 200!,- Extracción de ADN 2Experiento A#ig%o- ecu&erado el 1 de #'ero de 201 de htt&6OO-bteduc-bio-brO @ime'tel Q- *201,- Extracción de ADN - ecu&erado el 1 de #'ero de 201 de htt&6OO-+&ime'tel-comOcie'cia(Ve$&erime'tale(O&agebcie'cia(O&agebOlaVcie 'ciaVaVtuValca'ceVIIO5uimicaO#$&erie'cia(V5uimicaVe$traccio'VdeVad'-htm <="I'ter'atio'al #F20#CJNIX#=F20" F20=&a'i(h-&d. ?a((er =- P- * 199,- .echni1%es for application of faecal DNA ethods to field st%dies of 'rsids! Mol Ecol :3;<323;<=! 4bte'ido de htt&6OO-ildli.ege'etic(-caO&age(O(am&le( ra)er(o - Baum B- *199,- Modi.icatio' o. CAB %NA e$tractio' &rotocol .or &la't( co'tai'i'g high &oly(accharide a'd &oly&he'ol com&o'e't@la't Molecular Biology e&orter- 1*1,6 "1iorredo$i'a( de gui(a'te *@i(um (ati)um,-'i)er(idad de
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