LAB N°2:MICROSCOPIO Y COLORACIÓN GRAM
MICROSCOPIO Y COLORACION GRAM
Presentado por: PAREJA MENDOZA WILLIAM
PROFESOR: TELLO TELLO CEBRELLOS, CEBRELLOS, JORGE GILBERTO
CURSO:
MICROBIOLOIA SANITARIA 1
LABORATORIO NO 2
2016
LAB N°2:MICROSCOPIO Y COLORACIÓN GRAM
LAB N°2:MICROSCOPIO Y COLORACIÓN GRAM
1. OBJETIVO •
•
Identificar el GRAM, forma y agrupación al que pertenecen las muestras que se analizaran en laboratorio utilizando el microscopio compuesto. Reconocimiento de las partes del microscopio, así como utilizarlo para observar muestras con la lente de !".
2. FUNDAMENTO TEORICO
Microscopio compuesto #s un microscopio óptico que tiene m$s de una lente de ob%etivo. &os microscopios compuestos s e utilizan especialmente para e'aminar ob%etos transparentes. #l microscopio óptico com(n est$ conformado por tres sistemas) •
•
•
#l sistema óptico comprende las partes del microscopio permiten un aumento de los ob%etos que se pretenden observar mediante filtros llamados *de antigel subsecu ente*. #l sistema mec$nico est$ constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y detener los instrumentos a observar. El sistema de iluminación comprende un con%unto de instrumentos, dispuestas de tal manera que producen las ranuras de luz.
A. RECONOCIMIENTO DEL MICROSCOIO ARTE !TICA"
ARTE MEC#NICA"
•
2cular) 3e encuentra situado en la parte superior del tubo.
•
•
3u nombre se debe a la cercanía de la pieza con el o%o del observador. 2b%etivos) !", 45" y 67") se disponen en una pieza
•
iratoria denominada revólver
roducen el aumento de
B. ENFO$UE a. +rimero buscar el ob%etivo de menor aumento !" y colocarlo en el tubo del revólver, el ob%etivo ar$ su ruido característico al estar en posición correcta.
•
•
•
#l pie y soporte) /onstituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de 0 &a columna o brazo) llamada tambi1n asa, es una pieza en forma de /, unida a la base por su parte inferior mediante una carnela. #l tuvo portal ente) tiene forma cilíndrica y est$ ennegrecido internamente para evitar los refle%os de la luz. #l tornillo macro m1trico) girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio. #l tornillo microm1trico) mediante el a%uste fino con
b. Acomode la cara del espe%o -plana para la luz natural y cóncava para la luz artificial a fin de iluminar todo el campo que se observa por el ocular. c.
+repare el ob%etivo que va a observar, en nuestro caso es el portaob%etos con muestra de bacterias.
d. +oner el portaob%etos en la abertura de la platina y centrar el ob%eto a observar.
LAB N°2:MICROSCOPIO Y COLORACIÓN GRAM e. Mirando por el costado ba%ar el ob%etivo utilizando el tornillo microm1trico asta que est1 muy cerca de la l$mina. f.
2bservar por el ocular del microscopio y levantar el ob%etivo utilizando el tornillo macro m1trico asta ver la imagen.
g. 8sar el tornillo microm1trico para enfocar con mayor nitidez. . Abrir o cerrar el diafragma para me%orar la calidad de imagen.
Recome%&'cio%es p'r' e( cui&'&o &e( microscopio. Al sacar el microscopio de su compartimiento para trasladarlo de un lugar a otro. /oloque el microscopio suavemente sobre la mesa que se desa%uste la parte óptica. Antes de usar el microscopio observe si todas sus partes se encuentran limpias y en buen estado. &impie suavemente la parte óptica con el papel de seda especial -papel de lente. Mientras no est1 observando una preparación mantenga apagada la fuente luminosa. /uide que sus ob%etivos no se umedezcan cuando se observan preparaciones liquidas. /oloque el ob%etivo de menor aumento en su sitio cuando vaya a guardar el microscopio.
Co(or'ci)% &e *'cteri's I&e%ti+ic'ci)% &e B'cteri's por Ti%ci)% ,RAM" Mor+o(o-' B'cteri'%' 0a emos visto que la tinción de GRAM aporta dos ideas b$sicas para la deficinión *ta'onómica* de las bacterias) el color que adquieren tras la tinción y la forma que presentan las c1lulas bacterianas.
Cocos Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la división celular. 9iplococos, aparecen por pares. #streptococos, tienden a unirse formando cadenas. #stafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tama:o
B'ci(os Grandes variaciones morfológicas) fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos
LAB N°2:MICROSCOPIO Y COLORACIÓN GRAM
Espir'(es 8tilizamos el t1rmino +leomorfismo para referirnos a la adopción de diferentes formas en una misma especie.
B'cteri's -r'm%e-'ti/os #n microbiología, se denominan bacterias gramnegativos aquellas que no se ti:en de azul oscuro o de violeta por la tinción de Gram, y lo acen de un color rosado tenue) de aí el nombre de *gramnegativos* o tambi1n *gramnegativos*.
B'cteri's ,r'm positi/'s En microbiología, se denominan bacterias Gram positivas, o bacterias Gram;positivas, aquellas bacterias que se ti:en de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram.
0. ROCEDIMIENTO .
8sar laminas limpias y pasarlas varias veces cortando la llama del mecero bunsen.
<.
9e%ar enfriar la l$mina y colocar sobre ella una gotita de suero fisiológico con el inoculador.
5.
4. =.
?. 7.
/on el inoculador est1ril, tocar ligeramente el cultivo que a de ser e'aminado y transferir un poquito del sobre la gotita de suero fisiológico. #sterilizar el inoculador y de%arlo enfriar. >rotar el cultivo con el inoculador asta e'tenderlo sobre la parte central del porta;ob%eto, de%ando que se forme una película muy delgada. 9e%ar que la película seque al aire. >i%ar la preparación sobre pota;ob%eto pas$ndola por la llama del mecero tres veces, manteniendo la película acia arriba de la llama. 9e%ar enfriar.
@.
&avar el colorante de la l$mina con la solución lugol -Gram < durante un minuto.
6.
&avar la l$mina con agua.
!.
9ecolorarla con alcool;acetona -Gram 5 asta que quede incolora.
.
&avar la l$mina con agua.
<.
/ontra colorear con safranina -Gram 4 y de%ar que se ti:a por minuto.
LAB N°2:MICROSCOPIO Y COLORACIÓN GRAM 5. 4.
&avar la l$mina con agua. 9e%ar de secar y e'aminar el microscopio la preparación. 8n organismo gram positivo retendr$ el color cristal violeta y aparecer$ te:ido de azul y un oragnismo gram negativo tendr$ el color ro%o del a safranina.
E( mto&o &e O*ser/'ci)% co% microscopio) .
+rimero buscar el ob%etivo de menor aumento !" y colocarlo en el tubo del revólver, el ob%etivo ar$ su ruido característico al estar en posición correcta.
<.
Acomode la cara del espe%o -plana para la luz natural y cóncava para la luz artificial a fin de iluminar todo el campo que se observa por el ocular.
5.
+repare el ob%etivo que va a observar, en nuestro caso es l portaob%etos con muestra de bacterias.
4.
+oner el portaob%etos en la abertura de la platina y centrar el ob%eto a observar.
=.
Mirando por el costado ba%ar el ob%etivo utilizando el tornillo microm1trico asta que este muy cerca de la lamina.
?.
2bservar por el ocular del microscopio y levantar el ob%etivo utilizando el tornillo macrometrico asta ver la imagen.
7.
8sar el tornillo microm1trico para enfocar con mayor nitidez.
@.
Abrir o cerrar el diafragma para me%orar la calidad de imagen.
. RESULTADOS GRUPO
AMBIENTE
Huella digital
co(or'ci)% &e *'cteri's CARÁCTERES DE LAS COLONIAS
N° 1
#noculador "o est$ril
&ard'n F#(
N° 2
%aboratorio de !icrobiolog'a
Huella digital
Borde: lobular Elevación: convexo Car. ptico: Opaco Pig!entación: Cre!a Borde: %iso Elevación: convexa Caract. pticos: Opaco Pig!entación: Cre!a Borde: liso Elevación: Convexa Caract. pticos: Opaco Pig!entación: anaran)ado Borde: %iso Elevación: Convexa Caract. pticos: Opaco pig!entación: blanca Borde: punti,or!e Elevación: convexa
FORMA
AGRUPACION
GRAM
Bacilos
Estreptobacilos
"egativo
Estreptococos
"egativo
*iplococos Estreptococos +$tradas
"egativo
Bacilos Cocos
"egativo Cocos
Esta,ilococos estreptococos *iplococos
Cocos
"egativo
LAB N°2:MICROSCOPIO Y COLORACIÓN GRAM
N° 3
%aboratorio de -icrobiolog'a
Carac. pticos: Opaco Pig!entación: blanca Borde: %iso Elevación: convexa con botón. Caract. pticos: Opaco Pig!entación: blanca
"egativo Cocos
Estreptococos Esta,ilococos
3. DISCUSIONES
4. CONCLUSIONES Co(or'ci)% ,r'm
&a razón de descoloración de las Gram negativas se debe a que la membrana e'terior es soluble en solventes org$nicos. 0 como su capa es demasiado delgada para retener el comple%o de cristal violeta, este se escapa perdiendo la coloración. 3e llegó a la conclusión que en el inoculador ay bacterias de estreptococo. #n la uella digital ay bacterias de tipo estreptococos de Gram positivo #n el %ardín >IA ay diplococos #n laboratorio de microbiología ay estafilococos, y no estreptotocos
Microscopio
&a ubicación de la luz en la parte inferior del microscopio ayuda a la resolución del mismo, como la abertura. Gracias a estos se pudieron observar las muestras con gran nitidez. 3e reconoció adecuadamente las partes del microscopio y pudo utilizarse para la observación y reconocimiento de las bacterias en cada muestra analizada.
5. RECOMENDACIONES Microscopio
3ostener de manera adecuada el microscopio. 0 seguir las instrucciones de las o%as sobre el mane%o del mismo. Bratar, en lo posible, que el cultivo no sea vie%o pues eso podría ocasionar que al acer la coloración, las Gram positivas se decoloren. #s conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión pr$ctica y, al acabar el curso, encargar a un t1cnico un a%uste y revisión general de los mismos.
Co(or'ci)% ,r'm
3eleccionar la colonia menos viscosa. Ale%ar del mecero sustancias org$nicas que se utilizaran en la tinción ya que son combustibles.
6. BIBLIO,RAF7A
LAB N°2:MICROSCOPIO Y COLORACIÓN GRAM
ttp)CCDDD.unavarra.esCgenmicCmicrogralCBemaE
+#&/FAR. Microbiología. 4ta edición
A/B#RIA3ttp)CCes.scribd.comCdocC7!<<5?C4;&A2RAB2RI2;9#;MI/R2I2&2GIA;I
ttp)CCimaging.arl.arizona.edu
ttp)CCDDD.arraHis.esClluengoCbiología.tml
