UNIVERSIDAD: PRIVADA FRAN TAMAYO CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA CÁTEDRA: HEMATOLOGÍA I DOCENTE: DRA. MARILÚ ESCALANTE GONZALES
DETERMINACION DE LA SERIE ROJA PRACTICA Nº 3
ESTUDIANTE: Fernandez Paniagua Yhovana FECHA: 11- 04- 2017
DETERMINACION DE LA SERIE ROJA I.
OBJETIVOS:
Destreza y cuidado en la utilización de la cámara de neubauer
Conocer las propiedades de los anticoagulantes
Destreza en las determinaciones que comprende la serie roja
Conocer la formula de los índices eritrocitarios
Dominio en los valores referenciales
II. FUNDAMENTO TEÓRICO 1 .Característica Y Aplicacines De La Cámara De Cámara De Neubaue Es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar el recuento de esporas y células en un medio líquido, que puede ser; un cultivo celular, sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc. Esta cámara de recuento está adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas en cuyo fondo se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones conocidas. Se cubre la cámara con un cubreobjetos que se adhiere por simple tensión superficial (en especial una vez que se haya añadido la muestra líquida). Luego se introduce, por capilaridad entre la cámara y el cubre, el líquido con las células a contar, generalmente tras una dilución previa; puesto que la cámara tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultáneamente A partir del número de células contadas, conociendo el volumen de líquido que admite el campo de la retícula, se calcula la concentración de células en la muestra líquida aplicada .1 En la retícula central, la cámara de Neubauer tiene un cuadrado primario que contiene nueve cuadrados secundarios, 2.Caracteristicas De Los Anticoagulantes Mecanismo De Accion Anticoagulantes. Es a aquellas sustancias, ya sea exógena o endógena, que tienen la capacidad de inhibir la coagulación de la sangre. Esto es posible a partir de la creación de un
estado
denominado
prohemorrágico.
•
Anticoagulantes
de
acción
directa
•
Anticoagulantes de acción indirecta La función principal de cualquier anticoagulante es la de impedir que la sangre se coagule esto lo pueden conseguir a través de diferentes mecanismos de acción. Se divide en: Características Básicas de los Anticoagulantes Más Usados en Hematología - No alterar el tamaño de los hematíes, ni produce hemólisis. - Evita al máximo la agregación plaquetaria sin alterar la morfología de los leucocitos Según el mecanismo de acción los anticoagulantes se pueden clasifican así: 1. Anticoagulantes Sólidos: Wintrobe, Etilendiaminotetracetico (EDTA) y Heparina 2. Anticoagulantes Líquidos: Citrato trisódico y Oxalato sódico Anticoagulantes Anticoagulantes De Wintrobe: Es una mezcla de oxalato de amonio y potasio. Actúa por precipitación del calcio. Ventajas. • No afecta el volumen globular medio. • Con la proporción utilizada, los eritrocitos no se alteran, actúan por fijación de calcio. Desventajas. • En los extendidos queda limitada a los primeros minutos y produce
formación de agregados plaquetarios. • El oxala to de potasio solo se utiliza frecuentemente
como anticoagulante en bioquímicos. Anticoagulantes Anticoagulante Etilendiaminotetracetico (EDTA) Es la sal disódica o tripotásica del ácido etilendiaminotetracético. Ventajas: • No afecta la morfología de las células hemáticas ni modifica la velocidad de sedimentación globular. • Respeta la morfología eritrocitaria y leucocitaria. Facilita su recuento a partir del frotis. Desventajas: • Anticoagulantes Heparina Es un mucopolisacárido ácido. Ventajas: • Actúa inmediatamente. • Es apta para la protección de células. Desventajas: • Necesita frecuentes controles para ver cuánto de líquida está la sangre para ajustar la dosis. • Si no
se agita al momento de ponerla en el frasco, forma microcoagulos. Tipos de heparina: Heparina corriente o no fraccionada (HNF) Heparina fraccionada o de bajo peso molecular (HBPM) Anticoagulantes Citrato Trisódico • Es de elección para las pruebas de hemostasia y la velocidad de sedimentación. • Actúa a través de la precipitación del calcio. La concentración depende de la prueba por realizar. • Para pruebas de hemostasia se emplea en proporción de 1:9 (0,5 ml de an ticoagulante para 4,5 ml de sangre total). • Para la
determinación de la VSG (Velocidad de Sedimentación Globular) es 1:4 (0,5 ml de anticoagulante para 2 ml de sangre). Citrato Trisódico en polvo Anticoagulantes Oxalato Sódico • Recomendado también para l as pruebas de hemostasia. Se emplea en proporción de un volumen de anticoagulante para 4 vol. de sangre. 3. Componentes Generales De La Sangre, Plasma Suero Y Célula Sanguíneas
La sangre. Está compuesta por la mezcla de varios elementos. Los diferentes componentes de la sangre cumplen numerosas funciones dentro del organismo. El corazón bombea la sangre en un circuito cerrado, denominado circulación sanguínea. Los adultos tienen un volumen sanguíneo de entre 4,5 a 6 litros de sangre, lo que supone entre el 6 y el 8% del peso corporal total. La sangre se compone de glóbulos, plaquetas y una parte líquida llamada plasma (suero sanguíneo y factores de coagulación). Un litro de sangre de un hombre está compuesto por 0,46 litros de glóbulos. Glóbulos rojos (eritrocitos) Lo eritrocitos se forman en la médula ósea. En neonatos (feto) se forman, sin embargo, en el hígado y en el bazo. Ciertas hormonas como la eritropoyetina, que se produce en el riñón cuando la disminución de oxigeno cae en sangre, estimula la producción de eritrocitos en la medula ósea. Cuando se normaliza de nuevo la cantidad de oxígeno sanguíneo la producción de eritropoyetina vuelve a descender.Los glóbulos rojos son células con forma de una rodaja circular con doble depresión que carecen de núcleo, las únicas células sin núcleo del cuerpo humano. Función principal de los glóbulos rojos es el transporte de oxígeno (O 2) y de dióxido de carbono (CO2) entre los pulmones y los órganos. Lo eritrocitos se forman en la médula ósea., sin embargo, en el hígado y en el bazo., que se produce en el riñón cuando la disminución de oxigeno cae en sangre, estimula la producción de eritrocitos en la medula ósea. El oxígeno debe desprenderse de la hemoglobina cuando llega a los tejidos que lo requieren, y necesitan desechardióxido de carbono. Es importante el equilibrio sanguíneo entre la concentración de oxígeno y la concentración de dióxido de carbono,
La vida del eritrocito es de 100 a 120 días, aproximadamente. Los glóbulos rojos circulan por el cuerpo hasta que cumplen su ciclo vital. En este momento, el bazo se encarga de apartarlos de la circulación general y de degradarlos. Este proceso se conoce como regeneración eritrocítica. En este proceso se liberan sustancias, que el cuerpo o bien sigue descomponiendo
Glóbulos blancos (leucocitos), los leucocitos son un componente muy importante del sistema inmunitario. Su principal misión es identificar y destruir agentes patógenos (quimiotaxis). Gracias a su movilidad autónoma pueden llegar al foco de infección a través de las hendiduras de los vasos capilares (diapédesis), fagocitar las bacterias y destruirlas. También se las conoce como células limpiadoras. Los leucocitos no llevan pigmento rojo (hemoglobina) y se diferencian de los eritrocitos, a través de un microscopio, por su falta de color. Los glóbulos blancos se dividen en granulocitos, monocitos y linfocitos. Los dos primeros se forman en la médula ósea, mientras que los últimos lo hacen en los órganos y tejidos
Plasma sanguíneo El plasma sanguíneo se compone en un 90% de agua y no contiene células sanguíneas. Además, contiene proteínas plasmáticas (60-50 gr. proteína/l) a las que pertenecen la albúmina y las globulinas. Las globulinas y el fibrinógeno son responsables de la coagulación., se elimina el fibrinógeno del plasma sanguíneo hablamos de suero sanguíneo. Las proteínas plasmáticas tienen numerosas funciones La presión osmótica, sirve para mantener la diferencia de presión a uno y otro lado de una membrana semipermeable. Si desciende el contenido proteínico de la sangre, por ejemplo, por una alimentación pobre en proteínas, se puede dar una acumulacion de líquido en el tejido y surgen los edemas por hipoproteinemia. Otra de las funciones de las proteínas plasmáticas reside en su capacidad para unirse a diferentes sustancias.. y evita por otro lado su rápida eliminación a través de los riñones o hígado Las sales juegan un papel vital, porque definen las propiedades físico-químicas de la sangre. Junto al cloruro de sodio (sal común), que compone el 75% del contenido en sales, hay disponibles en pequeñas cantidades sales de potasio, calcio y magnesio en la sangre. El potasio y el calcio, que solo se encuentran en la sangre pequeñas cantidades, son esenciales para la excitabilidad nerviosa y la contracción de los músculos.
4. Fundamento Del Metodo Optico Para Recuento De Eritrocitos Y Mecanismo De Acción De La Solución Isotónica Fundamento. La membrana plasmática de los eritrocitos -igual que sucede con la de otras células tiene la propiedad de ser una membrana semipermeable, es decir, que permite la difusión de agua a través de ella, pero no la de las sales minerales disueltas en el agua.
Por el fenómeno de la ósmosis, el agua tiende a pasar del medio en el que se encuentran las sales más diluidas, al medio en el que se encuentran más concentradas, hasta igualar la concentración (y por tanto la presión osmótica) de ambos medios. concentración de sales minerales) que es el plasma sanguíneo. Si los introducimos en un medio hipotónico (con una concentración salina inferior a la de su citoplasma), el agua tenderá a entrar en el eritrocito a través de su membrana plasmática para igualar ambas concentraciones, y la célula reventará.
Método Preparamos una solución salina isotónica con cloruro sódico (sal común) al 9 por 1000 en agua destilada (es decir, 9 g de NaCl en cada 1000 de disolución); una solución salina hipotónica, sólo con agua destilada; y una solución salina hipertónica, con NaCl al 18 por 1000. Cada una en un pequeño tubo de ensayo. Diluimos una gota de sangre en 5 ml de cada una de estas disoluciones, y a los 5 min. Observamos muestras de las tres al microscopio: Sólo en la muestra con solución salina isotónica se verán eritrocitos normales (con aspecto redondeado). En la muestra con solución salina hipotónica no veremos nada (pues las células habrán reventado). Ni siquiera hace falta utilizar el microscopio con esta muestra: se ve que han reventado todos los eritrocitos porque es la única transparente -lo que demuestra que no hay células en suspensión- de las tres, aunque sí tenga cierto color sanguinolento debido a la hemoglobina. (Pasado un tiempo, en el fondo de los dos tubos que tenían células enteras (el “iso” y el “hipertónico”) se verá un puntito de color rojo: los eritrocitos han sedimentado: se pued e
explicar esto a los alumnos como el fundamento del hematocrito (% de glóbulos rojos en sangre, que se calcula en un capilar fino de vidrio en el que se introduce la sangre y se deja reposar: es una práctica que también se puede hacer si tenemos algún anticoagulante para evitar los “trombos” en el tubo de cristal).
5.Cambios En Los Eritrocitos En La Soluciones Hipo e Hipertónica En biología, una solución hipertónica (gr. hypér , en exceso yton(o), tensión) es aquella que tiene mayor concentración desoluto en el medio externo, por lo que una célula en dicha solución pierde agua (H2O) debido a la diferencia de presión, es decir, a la presión osmótica, llegando incluso a morir por deshidratación. La salida del agua de la célula continúa hasta que la presión pencótica del medio externo y de la célula sea igual. Fenómenos similares ocurren al conservar alimentos en salmueras o jarabes concentrados de azúcar.. 6. Fundamento Del Método Para La Determinación Delvelocidad De Eritrosedimentación (Ves) El análisis de sangre llamado velocidad de eritrosedimentación (VES), o velocidad de sedimentación globular (VSG), mide lo rápido que se asientan los glóbulos rojos (eritrocitos) en un tubo de ensayo en una hora. Entre más glóbulos rojos caen hacia el fondo del tubo de ensayo en una hora, mayor será la velocidad de eritrosedimentación. Cuando hay inflamación en el cuerpo, ciertas proteínas hacen que los glóbulos rojos se unan y caigan más rápido de lo normal al fondo del tubo. Estas proteínas son producidas por el hígado y el sistema inmunitario bajo muchas condiciones anormales, tales como una infección, una enfermedad autoinmunitaria o cáncer. Hay muchas posibles causas de una velocidad de eritrosedimentación elevada. Por este motivo, la velocidad de eritrosedimentación se hace con otras pruebas para confirmar un diagnóstico. Después de que se ha hecho un diagnóstico, se puede hacer una velocidad de
eritrosedimentación para ayudar a evaluar la enfermedad o ver lo bien que está funcionando el tratamiento.
7. Fundamento De La Determinación De Hemoglobina Hemoglobina La hemoglobina es una proteína que contiene hierro y que le otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxígeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos.La hemoglobina también transporta el dióxido de carbono, que es el producto de desecho del proceso de producción de energía, lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire. . Determinación de Hemoglobina
Se preparó el reactivo CMHb con la mezcla de dos reactivos de los frascos con tapa azul 25 ml y tapa blanca 25 ml, y con agua destilada 450 ml (500 ml). Extraer una muestra de sangre total realizando una punción con la lanceta en el dedo gordo en la periferia. Con una micropipeta automática tomar 20 ul de sangre extraída. En dos cubetas marcadas B (Blanco) y M (Muestra), colocar : Leer la absorbancia de cada tubo y calcular los resultados con una cantidad estándar de 36.8.
Valores normales de Hemoglobina: 12 – 16 g/dl Varones
14 – 18 g/dl Mujeres
8. Fundamento de la Determinación del hematocrito Hematocrito Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente, y otro nivel del plasma total. La relación porcentual entre ambos es lo que describe el hematocrito y describe el porcentaje de células transportadoras de oxígeno con respecto al volumen total de sangre. El análisis del hematocrito se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetría, con el recuento de glóbulos rojos o hematíes.
Determinación del valor de hematocrito
Muestra de sangre
Tubos capilares de vidrio
Centrífuga de Hematocrito
Lector de microhematocrito
Plastilina
Lanceta
Algodón y alcohol
Lectura del valor de hematocrito Determine el valor de hematocrito mediante el disco delectura que, a su vez, es la tapa del
Valores normales de Hematocrito: 38 – 50% II PROCEDIMIENTO-(flujograma)
IV. CÁLCULOS Y RESULTADOS 1) Vol total 4Mi + 20 Ul 400 Ul + 20 Ul 4020 Ul 1) 4020 Ul disusolu 20 Ul sol
=
1 201
2) Vol = a.h Vol = 0,04. 5 mm2 0,1 mm Vol = 0,2 m m2 . 0,1mm Vol= 0,3 mm 3
Fd = dil .u Fd = 1 . 0,02 mm3 201 Fd = 201
3)
0,02 mm3 Fd = 10050 mm 3
4) # GR = fd . total o rojas # GR = 10050. 475
10050 . 563 5658150 cel./mm3
# GR = 4773750 cel. mm 3
# GR = 4773750 al .(1000)3 # GR = 4,77375 x 10 15 cel / L Hb: 0,496 . 109 / / dl = 18,50745 /dl 0,268 G/L
# GR = 5,55815 X 10 15 CEL /L 0,535 x 10 = 19,96269/dL 0,268
G/L
UCM = 0,45 c/C 4,77375 X 1012 CEL. / L UCM = 9,4265 X 10 4 C/C. 1CL 1015 L/ UCM = 9,4265 V. RESUMEN DE LA IMPORTANCIA DE LA PRÁCTICA
VI. CUESTIONARIO 1. explique el mecanismo dela bomba sodio y potasio Este mecanismo se produce en contra del gradiente de concentración gracias a la enzima ATPasa, que actúa sobre el ATP con el fin de obtener la energía necesaria para que los nutrientes puedan atravesar la membrana celular y llegar al citoplasma. La bomba de sodio y potasio actúa de la siguiente manera: 1: tres iones de sodio (3 Na+) intracelulares se insertan en la proteína transportadora. 2: el ATP aporta un grupo fosfato (Pi) liberándose difosfato de adenosina (ADP). El grupo fosfato se une a la proteína, hecho que provoca cambios en el canal proteico. 3: esto produce la expulsión de los 3 Na+ fuera de la célula. 4: dos iones de potasio (2 K+) extracelulares se acoplan a la proteína de transporte. 5: el grupo fosfato se libera de la proteína induciendo a los 2 K+ a ingresar a la célula. A partir de ese momento, comienza una nueva etapa con la expulsión de otros tres iones de sodio.
2 Explique EL fundamento del método de la cianometahemoglobina para la determinación de la hemoglobina Consiste en hacer reaccionar la sangre con un reactivo que contiene cianuro y ferrocianuro potásico (reactivo de Drabkins), que oxida la hemoglobina a metahemoglobina la cual a su vez pasa a cianometahemoglobina. La intensidad de color de este compuesto se mide fotocolorimétricamente. Los resultados se llevan a una curva estándar realizada con
soluciones de cianometahemoglobina comercial, de donde concentraciones de hemoglobina de las muestras problema.
se
extrapolan
las
3 Mencione Los Factores Que Influyen En La Determinación Del (Ves ) Cuando hay inflamación en el cuerpo, ciertas proteínas hacen que los glóbulos rojos se unan y caigan más rápido de lo normal al fondo del tubo. Estas proteínas son producidas por el hígado y el sistema inmunitario bajo muchas condiciones anormales, tales como una infección, una enfermedad autoinmunitaria o cáncer. Hay muchas posibles causas de una velocidad de eritrosedimentación elevada. Por este motivo, la velocidad de eritrosedimentación se hace con otras pruebas para confirmar un diagnóstico. Después de que se ha hecho un diagnóstico, se puede hacer una velocidad de eritrosedimentación para ayudar a evaluar la enfermedad o ver lo bien que está funcionando el tratamiento. 4 Explique El Fundamento Del Método para la determinación De Hematocritos Este examen mide el volumen (cantidad) de glóbulos rojos en la sangre, comparado con otros componentes. Los resultados del examen se informan como un porcentaje o como un fragmento decimal de sangre entera. Este examen puede ser usado para evaluar o manejar enfermedades como enfermedad renal (riñon) en estado terminal, o insuficiencia cardíaca El valor de hematocrito indica el porcentaje volumétrico de eritrocitos en sangre. El método de referencia para la determinación del hematocrito es la centrifugación. Mediante la centrifugación se separan los componentes sólidos de la sangre de los líquidos y se envasan herméticamente. Este método está establecido en la norma DIN 58933-1. A continuación, los tubos capilares de vidrio “… se centrifugan hasta que el producto alcance una aceleración centrífuga relativa mínima que actúe sobre los eritrocitos (RCF ≥ 5.000) y un valor numérico de tiempo de centrifugado en minutos de por lo menos 100.000 5 Determine Los Valores Heritrocitarios Con Los Valores Obtenidos En La Practica Compare Con Los De Referencia
VII.
BIBLIOGRAFÍA. Alpiner, L, Jerome, G, Técnicas Para La Determinación De Serie Roja México Editorial Panamericana Pennac O, Fundamento De la Serie Roja ( 3ra Edición) Anagrama
