2012
DOWNSTREAM PROCESSING Industri hilir : industri yang mengolah lebih lanjut produk industri antara menjadi produk setengah jadi dan selanjutnya melalui proses pabrikasi dan pengerjaan akhir menjadi produk jadi. Di dalam dunia industri fementasi terdiri dari dua proses yaitu upstream processing
(USP) atau proses hulu dan downstream processing (DSP) atau proses hilir. USP meliputi semua faktor dan proses awal seperti fermentasi yang terdiri dari 3 aspek penting. Aspek utama yang penting ialah cara memprodeuksi organisme yang meliputi semua strategi awal dalam memperoleh mikroorganisme yang yang cocok, meningkatkan meningkatkan daya produktivitas dan hasil hasil dalam industri, melakukan pemurnian atau (purity), persiapan inoculums yang cocok dan perkembangan untuk memajukan perekonomian yang efisien dalam industry. industry. Aspek kedua dalam dalam USP ialah damlam media fermentasi, terutama dalam pemilihan atau penentuan harga dan sumber karbon dan sumber energy yang cocok dan efisien, yang berhubungan dengan nutrisi esensial. Media ini mengoptimisasi aspek penting dalam perkembangan proses dalam memaksimalkan hasil dan keuntungan dalam industry. Aspek ketiga dalam USP yaitu semua hal yang berhubungan dengan fermentasi, yang biasanya ditampilkan dibawah kondisi terkontrol,perkembangan optimasi pertumbuhan mikroorganisme atau produksi dalam target produk mikroorganisme. mi kroorganisme. Downstream Processing (DSP) meliputi semua proses pegikutan, yang merupakan tujuan utama untuk mengefisiensi segala proses dalam industry seperti memproduksi dan memperbaiki dengan aman target product yang memerlukan spesifikasi atau tidakan khusus (misalnya biological activity, purity, dll), ,memaksimalkan penghasilan produk dengan dan meminimalkan biaya. Perbaikan targetan produk bisa dilakukan dengan cara memproses cell. Atau menggunkan medium yang tergantung pada intraselular atau extraselular dalam suatu produk. Dalam tahap pemurnian harus mencapai atau sesuai dengan standard atau tetapan spesifik produk yang digunakan. Pada umumnya pemurnian product akan mnunjukkkan hasil yang lebih baik daripada sebelumnya. Sebagai contoh pemurnian enzyme, tidak hanya itu, yang penting juga adalah pengurangan masa product, tapi hal lain seperti penyimpanan produk biological activity juga sangat penting.
1
Dalam semua tingkatan, semua pemulihan atau pengambilan kembali sangat kuat bergantung pada fermentasi terdahulu. Fakto fermentasi sangay mempengaruhi proses hilir atau
downstream
process
dalam
sebuah
industry
yang
meliputi
komponen
dari
mikroorganisme, morfologi umum, karakteristik flocculation , serta ukuran dan dinding sel. Faktor faktor itu sangat berdampak dalam filterability, sedimentasi, dan efisiensi homogenization. Dalam fermentasi produk, adanya penambahan bahan tambahan dan media yang tidak steil dapat mengganggu tahap tahap DSP dan mengganggu proses analisis. konsekuensi holistic approach dibutuhkan ketika perkembangan strategi pemurnia industri baru.. dalam keseluruhan proses, faktor upstream processing( proses hilir) dan downstream processing (proses hulu) sangat membutuhakan pertimbangan. Sebagai contoh pada pemilihan substrate dalam proses fermentasi sangat mepengaruhi proses atau langkah berikutnya dalam dproses hilir (down stream process / DSP). Karbon yang murah dan sumber energy akan menentukan atau memberikan nilai awal dalam
penyelamatan atau
penghematan, tetapi berkemungkinan mengharuskan untuk menambah harga atau kerugian dalam DSP. Oleh sebab itu semua cost saving mungkin akan mencapai sukses lebih mahal, tetapi substrat yang lebih murni. Juga pengambilan metode yang digunakan harus sesuai dengan peralatan yang sudah ada, hal itu kan lebi efektif daripada harus membeli peralatan baru yang akan menambah investasi.Physical and chemical properties dalam produk yang meliputi konsentrasi dan lokasi, adalah benar benar faktor kunci utuk menentukan awal langkah pemisahan dan semua strategi pemurnian. DSP dapat dibagi dalam bagian bagian yang jelas dalam unit proses yang berhubungan dengan keberhasilan dalam pemurnian produk. Sebagai contoh strategi pemurnian untuk dua produk. (7.3). biasanya tahap penomoran dimulai dari yang terkecil. Ini tidak hanya disebabkan oleh cost , tetapi biasanya disebabkan oleh tahap individu yng bertujuan untuk memperoleh hasil yang maksimal, the overall losses of multistage purification proses, bisa menjadi penghalang . pemilihan tahap unit yang spesifik akan berdampak ekonomi dalam suatu proses, syarat kemurnian pada produk, hasil dapat dicapai pada setiap tahap dan safety aspek. Di beberapa kejadian , integrasi pada fermentasi dan DSP sekarang lebih banyak disukai. Integrasi dapat sering meningkatkan produktivitas, mengurangi point dalm unit operasi dan mengurangi keseluruhan waktu proses dan costs. Integrasi proses fisik
akan berhasil jika menempatkan unit separasi atau unit
pemisahan di dalam fermenter atau sacara langsung yang berhubungan dengan dus sistem yang bersamaan. Dimana perubahan produk berhubungan dengan pertumbuahan. Yang utama 2
sepeti metabolism, produktivitas yang tinggi akan tercapai dengan meggunakan sistem integrasi yang tinggi dan akan mempertahankan kepadatan sell melalui penyimpanan sell atau memproduksi ulang. Dimana produk akan terhambat, dengan penyusunan metode yang bermacam macam akan menimbulkan pemisah atau sekat pada bioreacto r yang menyediakan penghilangan in situ pada produk dengan menggunakan ekstraksi, adsorpsi, atau pelepasan, seiring dengan bertabahnya hasil dan pruktivitas. Alternative, proses dapat dengan ex situ, dimana produk akan berpindah keluar dari fermenter dan proses medium yang kembali pasa fermentasi. Seperti proses yang sudah sukses sebelumnya pada peminahan atau pemisahan alcohol dan solvent (pelarut). Tetapi sekarang juga kemungkinan untuk mengekstrak beberapa protein.
3
1.3 Sentr if ugasi
Untuk memisahkan suspensi partikel dapat menggunakan gaya gravitasi. Sentrifugasi digunakan untuk pemisahan solid-liquid dengan signifikan dan banyak partikel kecil dapat terpisah. Sentrifugasi dapat digunakan untuk pemisahan partikel kecil dengan diameter 0,1 µm dan dapat juga untuk pemisahan liquid-liquid. Ini sangat efektif berdasarkan ukuran partikel, perbedaan densitas antara cell dengan medium, dan viskositas medium. Sentrifugasi kecepatan tinggi dibutuhkan untuk pemisahan mikroorganisme terkecil, seperti bakteria. Contohnya, sentrifugasi lambat efektif untuk memperoleh residu sisa yeast dalam beer setelah tersedimentasi. Keuntungan sentrifugasi meliputi adanya sistem yang terus menerus dan sistem dengan cepat proses volume besar dalam volume kecil sentrifugasi. Sentrifugasi mengikutkan proses steril dan tidak membutuhkan biaya untuk membran, bantuan kimia atau filter. Akantetapi, kekurangan dari sentrinfugasi adlah modal yang mahal, kebisingan selama proses berlangsung dang biaya untuk listrik. Juga, pemecahan fisik sel akan terjadi dan temperatur akan menjadi sulit di kontrol, yang akan mempengaruhi sensitifitas tempetarur produk. Pebembentukan bioaerosol adalah kekurangan terbesar selanjutnya, terutama ketika sentrifugasi digunakan untuk memastikan DNA rekombinan dan patogen.
Sentrifugasi industri Sentrifugasi dapat dibagi menjadi skala kecil unit laboratorium dan sekala besar lab dan sekala industri. Laboratiry batch centrifuges include, in ascending order of speed attainable: bench top, high speed and ultracentrufuges. Walaupun industrial sentrifuges tersedia, banyak indusrti terdiri dari semikontinu dan kontinu sentrifugasi dibutuhkan untukproses volume besar. 4 tipe industrial centrifuges yang umum di gunakan 1. Tubular centrifugal biasanya menghasilkan gaya sentrifugal tinggi 13000-17000g. Itu memiliki wadah hollow tubular rotor yang menyediakan saluran panjang untuk suspensi yang memompa masuk dari bawah dan mengalirkan ke atas melewati rotor. Partikel material telempar ke sampung wadah dan membersihkan liquid keluar melewati atas untuk selanjutnya di tampung. Partikel material terkumpul di samping 4
bowl, sehingga mengurangi diameter operasi. Konsekuensinya, padatan yang terbentuk harus di bersihkan secara periodik. 2. Multi chamber bowl terdiri dari bowl yang membagi secara vertikal menjulang di sambungan dalam silinder dan mampu beroperasi di 5000-10000g. Liquid masuk melalui tengah melewati setiap chamber dan partikel kecil akan terkumpul di outer bowl 3. Disc stack centrifuges dapat beroprasi di 5000-13000g. Centrifuge bowl terdiri dari tumpukan disc kerucut yang membantu proses pemisahan. Cairan masuk sentrifugasi, partikel material terlempar keluar dan menyangkut di luar disc kerucut. Partikel kemudian berjalan keluar ke dan terkumpul di dinding bowl. Sentrifuges ini biasanya memiliki fasilitas untuk mengeluarkan partikel yang terkumpul selama operasi berlangsung. 4. Screw decanter centrifuges broperasi terus menerus di 1500-5000g dan cocot untuk dewatering material solid kasar di konsentrasi solit tingggi. Itu juga digunakan dalam pembuangan kotoran untuk pemisahan lumpur dan untuk memanen yeast dan fungal mycelium.
1.4 F il trasi
Filtrasi konvensional dari liquid yang mengandung suspended solid menggunakan filter dalam yang tersusun dari porous media (cloth, glass woll or cellulose) yang menahan solid dan membersihkan liquid untuk terus di alirkan. Proses filtrasi mengumpulkan solid diatas media filter, hambatan filtrasi meningkat dan aliran menurun. Teknik ini umumnya digunakan untuk memanen filamentous fungi, tetapi kurang efektif untuk menyaring bakteria. Dua tipe filtrasi konvensional yang umum digunakan dalam industri adlah sebagai berikut. 1. Plate and frame filters or filter presses, ini umumnya dalam bentuk rak horisontal yang bersaelang-seling dari plate penyerap dan kerangka berlubang. Rak menjulang dalam penyangga yang terikat dengan hidrolik atau screw ram. Filter cloth ditempatkan di antara plat yang terdapat saluran aliran untuk feed dan menyerap aliran. Bentuk utama ini rangkaian cloth line dalam chamber yang cell suspension bekerja dalam tekanan. Mengikuti batch filtration, peralatan harus dibongkat untuk mengambil filter cake yang terkumpul. Sistem ini digunakan untuk memanen
5
mikoorganisme dari fermentasi, termasuk mempersiapkan blok baker’s yeast, mengembalikan endapan protein dan dewatering kotoran. 2. Rotary vacum filter adalah sitem filtrasi terus menerus yang sederhana, ini digunakan dalam beberapa proses industri, terutama untuk memanen fungal mycelium selama pembuatan antibiotik, untuk produksi baker yeast dan dalam dewatering kotoran selama treatmen air limbah. Peralatannya terdiri dari drum berlubang yang didukung dengan media filter. Drum ini berotasi lambat terusmenerus dalam tangki yang menganding suspensi yang akan disaring. Solid terkumpul dalam media filter sedangkan filtrat merembes dalam tekanan vakum, melewati medium filter masuk ke dalam drum berlubang lalu ke vessel. Selama drum berotasi, solid yang terkumpul di medium filter dibersihkan dengan pisau yang
melepasnya ke dalam vessel
pengumpul. Media filter akan dilapisi dengan filter aid contohnya kieselguhr yang akan terus menerus mengisi.rate filtrasi (aliran filtrat), untuk tekanan konstan(vakum) dan cake yang tidak dapat dikompres, adalah deermined dengan hambatan cake dan medium filtrasi. Tidak ada sistem filtrasi yang cocok untuk proses produk beracun, patonen atau DNA rekombinan mokroorganisme dan produknya.
6
2. GANGGUAN SEL
Beberapa target hasil adalah intraseluler, terdiri dari beberapa enzim dan protein rekombinan, beberapa …………………... oleh karena itu dibutuhkan metode untuk mengganggu mikroorganisme dan melepaskan produknya. Menembus dinding sel dan membrane sitoplasma dapat dilakukan untuk mengatasi masalah ini, terutama ketika sel menyerang dinding sel dengan kuat. Misalnya, dibutuhkan tekanan 650bar untuk mengganggu yeast, walaupun mungkin agak banyak variasi di waktu yang berbeda selama alur pertumbuhan dan tergantung berlangsungnya kondisi spesifik pertumbuhan. Masalah pada umumnya bercampur dengan gangguan sel yang terdiri dari pembebasan DNA yang dapat meningkatkan suspense viskositas. Hal ini juga mungkin mempengaruhi proses yang terjadi selanjutnya, seperti pemompaan suspensi di unit proses selanjutnya dan aliran melalui kolom kromatografi. Timbulnya langkah asam nukleat atau penjumlahan DNA dapat membantu mencegah masalah tersebut. Jika digunakan gangguan mekanikal maka akan selalu menghasilkan panas, yang mana akan mengubah sifat protein kecuali kalau diterapkan ukuran pendinginan yang tepat. Produk dapat dibebaskan dari sel eukariotik yang persoalan yang sering untuk penurunan dengan enzim hidrolitik (protease, lipase) dibebaskan dari lisosom yang mengganggu. Kerusakan ini dapat dikurangi dengan penambahan enzim penghambat, mendinginkan ekstrak sel dan mempercepat proses. Alternatifnya, percobaan dapat dibuat untuk memproduksi mutant strain dari produser mikroorganisme yang kekurangan enzim rusak. Gangguan sel dapat dijangkau dengan metode mekanik dan metode non mekanik. Proses gangguan sering diukur memantau perubahan absorbansi., ukuran partikel, total konsentrasi protein atau aktifitas dari enzim interseluler khusus yang dibebaskan ke suspensi gangguan. 2.1 M etode M ekanik Gangguan Sel
Beberapa metode mekanik tersedia untuk gangguang sel, berdasarkan pada soli d shear yang meliputi (menyangkut) tekanan persiapan pembekuan sel yang melewati lubang tipis di tekanan yang tinggi. Pendekatan ini dapat digunakan di skala kecil atau laboratorium tapi tidak untuk operasi skala besar. Metode yang menggunakan liquid shear umumnya lebih efektif. The French press ……………………………………………. Mereka mungkin digunakan untuk bakteri dan yeast cell, dan jamur miselium. Di alat ini suspensi sel menarik melalui katup pengawas ke pompa silinder. Di titik ini dibuat dibawah tekanan (hingga 1500 bar) melalui annulus yang sangat sempit atau katup pemberhentian, yang akan berakhir ketika tekanan telah menurun ke atmosfer. Gangguan sel dicapai terutama dengan liquid shear yang tinggi ketika di lubang dan tekanan mendadak jatuh di pemberhentian yang menyebabkan letusan sel. Kecepatan dari pelepasan protein (efisiensi gangguan) bebas dari konsentrasi sel tetapi ini adalah fungsi digunakannya tekanan, banyaknya putaran melewati homogenizer dan suhu. Gangguan dari persiapan yeast cell, misalnya pada umumnya membutuhkan 3kali melewati tekanan sel di 650 bar, mengingat Escherichia coli tipe liar umumnya butuh 1100 7
o
1500 bar. Selama proses berlangsung kenaikan suhu berkisar antara 2,2 - 2,4 C per 100 bar kira-kira 20oC diatas satu kali lewat di 800 bar. Akibatnya biasanya dibutuhkan persiapan sebelum mendinginnya sel. Kira-kira dibutuhkan energy input sebesar 0,35 kW per 100 bar dan seluruhnya sampai dengan 6000 L/h. Masalah yang timbul akibat metode ini adalah tercairnya material intraseluler. Sebagai hasilnya, produk yang penting harus dipisahkan dari protein yang campurannya kompleks, asam nukleat dan pecahan dinding sel. Beberapa pecahan dari runtuhan sel tidak mudah dipisahkan, hal ini menyebabkan solusi susah untuk diklarifikasikan. Protein mungkin diubah sifat jika perlengkapannya tidak cukup mendinginkan dan mikroorganisme filamentous mungkin menghalangi katup pemberhentian. Ketika digunakan untuk mikroorganisme kategori pasti, the homogenizers dapat dimasukkan untuk mencegah aerosol. Di skala kecil, penggerindaan sel secara manual dengan abrasif, biasanya oksid aluminium, manik-manik gelas, tanah kerikil dapat menjadi cara untuk mengatasi gangguan tetapi mungkin hasilnya tidak dapat direproduksi. Di industry, gilingan manik-manik kecepatan tinggi dilengkapi dengan sampul pendingin, seringkali digunakan untuk menggerakkan sel suspensi dengan manik-manik kecil (diameter 0,5-0,9 m) dari gelas, zirconium oxide or titanium carbide. Hasil kerusakan sel dari perangkat gunting, menggerinda diantara manik-manik dan bertabrakan dengan manik-manik. Efisiensi dari kerusakan sel adalah fungsi dari kecepatan pengadukan, konsentrasi, densitas dan diameter manik-manik selain itu ada densitas air daging, kecepatan aliran dan suhu. Konsentrasi sel juga merupakan factor utama (jumlah maksimum 30-60% dry weight), yang merupakan perbedaan penting dari liquid shear homogenizers yang telah diuraikan diatas. Output maksimum di jaringan ini adalah sebesar 2000 l/h. Gangguan ultrasonic sel melibatkan peronggaan gelembung yang sangat kecil atau lubang yang dihasilkan dari tekanan gelombang. Hal ini dilakukan oleh alat penggetar ultrasonic yang menghasilkan suara berfrekuensi tinggi dengan rata-rata densitas gelombang 20 kilohertz/s. a transducer mengubah gelombang menjadi osilasi mekanik melalui pemeriksaan titanium di pusat suspensi sel. Bagaimanapun, teknik ini juga menghasilkan panas protein thermolabile. Bentuk (potongan) bakteri seringkali mudah untuk dipatahkan daripada cocci dan organisme gram-negatif lebih mudah diganggu daripada sel gram-positif. Sonication efektif di skala kecil tapi itu tidak selalu digunakan dalam operasi skala besar, dengan masalah tenaga pengiriman dan hilangnya panas. Gangguan sel adalah area yang sedikit terbengkalai dari bioproses. …………………………………………… tetap secara rutin digunakan, disusun metode mekanik yang aslinya dipikirkan untuk tujuan lain. Bagaimanapun, beberapa system gangguan terbaru adalah wujud dikembangkan untuk meningkatkan gangguan skala besar, yang seringkali dengan pemahaman utuh. Mereka memasukkan desain gilingan bola terbaru yang beroperasi hingga 2700 bar dan dua sistem dengan tidak adanya penggeseran bagian. …………………………………………………………… …………………………………………………………………….. ini metode yang relatif lebih halus yang bekerja pada prinsip dari pengurangan nitrogen dan tidak membangkitkan
8
panas. Nitrogen terlarut di sel dibawah tekanan tinggi dan mendadak melepaskan tekanan lalu menyebabkan meledaknya sel. 2.2 Metode Gangguan Sel Non M ekani k
Alternatif metode mekanik dari gangguan sel untuk menyebabkan their permeabilization. Ini dapat diselesaikan dengan autolisis, goncangan osmotic, perpecahan dengan kristal es atau goncangan panas. Autolisis misalnya telah digunakan untuk produksi of yeast extract dan produk yeast lain. Hal ini memiliki keuntungan yaitu harga lebih rendah dan menggunakan mikroba enzim yang sebenarnya, jadi tidak ada zat asing yang masuk menjadi produk. Goncangan osmotic sering berguna untuk merilis produk dari ruang periplasmic. Ini mungkin dapat dijangkau dengan menyeimbangkan sel 20% (W/V) sukrosa buffer, kemudian dengan cepat memanen kemudian menggantungkan kembali di air bersuhu 40C. Lebar jarak dari teknik lain telah dikembangkan untuk gangguan mikroba skala kecil menggunakan bermacam bahan kimia dan enzim. Bagaimanapun, …………………………………… Pelarut organic biasanya aseton, butanol, methanol telah digunakan untuk melepaskan enzim dan zat lain dari mikroorganisme dengan menciptakan saluran melewati membran sel. Perlakuan sederhana dengan alkali atau detergen, seperti ……………………………. Beberapa enzim penurunan dinding sel telah digunakan dengan sukses pada gangguan sel. Contoh, lisosom yang mana hidrolisis β -1,4 hubungan glycosidic dalam peptidoglikan dari bakteri dinding sel, berguna untuk lysing organisme gram-positif. Tambahan EDTA untuk ion logamjuga memperbaiki efektifitas lisosom dan perlakuan lain di bakteri gramnegatif. Ini dikarenakan EDTA punya kemampuan untuk menyita kation divalent yang menstabilkan struktur dari membrane sebelah luar. Penghancuran enzim dari yeast dinding sel dapat terjangkau dengan snail gut enzymes yang mengandung campuran β -glucanases. Persiapan enzim juga berguna untuk memproduksi living yeast protoplas. Antibiotic penisilin dan cycloserin mungkin digunakan untuk lyse yang dengan aktif tumbuh sel bakteri, seringkali dikombinasikan dengan osmotic shock. Teknik permeabilisasi lain termasuk menggunakan basic protein seperti protaminekation kitosan polisakarida efektif untuk sel yeast, dan streptolisin permeabel sel mamalia.
9
Destilasi Destilasi di gunakan untuk memperoleh alkohol, acetone, dan solven lain dari media fermentasi. Batch distilasi dalam pot masih terus digunakan untuk memproduksi whiski. Dengan etanol contohnya, sistem continu menghasilkan produk dengan konsentrasi etanol maksimum sebesar 96,5%(v/v). Campuran azeotropic ini adalah konsentrasi tertinggi yang bisa diperoleh dari etanol encer. Kecuali memasukkan tahap dehidrasi menggunakan water entrainer seperti bezena atau cyclohexane. Bebrapa penyulingan mungkin dalambnetuk empat atau lima kolom pemisah, tetapi Coffey-type tetap terdiri dari dua kolom, rectifier dan analiyser, setiap berisi tumpukan 30-32 plat berlubang. Air fermentasi masuk pemanasan melewati bawah pipa melingkar dengan kolom rectifier, by ascending hot vapour produced by the analyser coloum. Lalu kuah panas naik menuju bak atas analyser coloum dan itu turun ke kolom dengan dipanaskan oleh uap. Menghasilkan uap panas sampai dari atas kolom analyser ke bawah kolom rectifier. Uap melawati atas lalu di embunkan di gulungan pembawa menjadi kuah. Di sana termpetaru gradien dalam kolom rectifier dan setiap campuran uap terkondensasi ini di level yang tepat, dari dimana fraksi ini terkumpul. Finishing step Crystallization Produk cristalisasi diperoleh dengan evaporasi, perlakuan suhu rendah atau penambahan bahan kimia reaktif terlarut. Kelarutan produk dapat dihasilkan dengan penambahan pelarut, garam, polimer dan polielektrolit atau mengubah pH. Drying Pengeringan melibatkan transfer panas ke material basah dan menghilangkan uap seperti uap air. Biasanya, ini ditunjukan seperti jalan menahan aktivitas biologis produk. Parameter efektifitas pengeringan adalah physical prperties dari solid-liquid sistem. Intrinsic properties dari larutan, kondisi lingkungan pengering dan parameter transfer panas. Transfer panas mungkin kontak langsung, konveksi atau radiasi. Rotary drum driers menghilangkan air dengan konduksi panas. Film tipis larutan digunakan untuk uap panas perrmukaan drum, yang bergesekan dengan pisau untuk mengambil produk yang kering. Dalam vakum tray pengering material yang akan dikeringkan ditempatkan dalam chamber yang vakum.ini diperbolehkan dlam temperatur rendah untuk digunakan ke titik didih rendah dari air di penurunan tekanan. Ini cocok untuk batch kecil material mahal, seperti di farmasi. Spray drying melibatkan atomization dan spraying larutan produk kedalam chamber panas, dan pertikel kering karena penyebaran dari gas menggunakan cyclone. Pneumatic conveyor driers menggunakan udara panas itu suspends dan transport particle. Freeze drying (lyophilization) sering digunakan ketika produk akhir dalam bentuk cell, in starter culture preparation, atau untuk produk thermolabile. Ini khususnya digunakan untuk beberapa enzim, vaksin dan obat-obatan lain, dimana ingatan aktivitas biologi adalah sangat penting. Dalam metode ini, larutan beku antibiotik, enzim atau cell mikrobial disiapkan dan air dihilangkan dengan
10
sublimasi dalam vakum, langsung dari solid ke bentuk uap. Metode ini mengeliminasi thermal dan kerusakan osmotik. Inclusion bodies and the role of genetic ingineering in downstream processing
Mengingat kembali, banyak protein rekonbinan membentuk inclusion bodies, wich are insoluble inactive aggregates of over-expresseds polypeptides. Mereka tumbuh disebabkan karena akumulasi lipatan sebagian polipeptida mulai timbul y ang telah terkena permukaan hidrofobik. Hasil interaksi hidrofobik menyebabkan mereka membentuk kumpulan tak larut. Ini sering tidak sengaja karena itu memberikan konsentrasi bentuk protein, kumpulan mungkin terdiri dari blebih 50% protein target.
11
