Desarrollo de métodos de ensayo cápsulas maleato de enalapril por espectrofotometría de absorción en el ultravioleta
Desarrollo de la metodología de ensayo para cápsulas Enalapril Maleato en espectrofotometría de absorción en el ultravioleta por Recibido el 04/05/2009 Aceptado en 11/02/2011 Irene Clemes Külkamp1 * , Bianca Ramos Pezzini2 , Luiz Alberto Kanis3 , Marcos Antonio Segatto de Silva4
1 Universidad Federal de Rio Grande do Sul , RS , Brasil 2 Universidad de la Región de Joinville, J oinville, SC , Brasil 3 Universidad del Sur de Santa Catarina , SC , Brasil 4 Universidad Federal de Santa Catarina , SC , Brasil
RESUMEN El objetivo de este estudio es validar un método simple mediante espectrofotometría de absorción ultravioleta para la determinación maleato de enalapril , también es aplicable al ensayo de cápsulas de la droga . Los parámetros evaluados fueron : linealidad, precisión, exactitud y especificidad , a raíz de las recomendaciones de la legislación brasileña. Se obtuvo el espectro de absorción entre 200 y 300 nm para identificar la longitud de onda de absorción máxima ( 202 nm ) . La linealidad fue evaluada por regresión lineal de la curva de calibración ( 8 a 28 μ g / ml ) . El método mostró un coeficiente de variación dentro
de plazo y entre distintas series por debajo de 1 y 5%, respectivamente. El porcentaje de recuperación obtenido en el método de adición estándar era cerca de 100 % , lo que indica la exactitud del método . La especificidad del método se verificó en presencia de excipientes , en cápsulas . Los resultados de la medición de las cápsulas tenían un alto porcentaje de acuerdo ( 101,14 % ) en comparación con los obtenidos por el método previamente validado por cromatografía líquida de alta eficiencia . Las cápsulas analizadas por el método propuesto mostraron adecuada uniformidad de contenido . El método de análisis validado en este trabajo es
una innovación y mejora de las técnicas para la determinación de maleato de enalapril, también puede ser aplicado a la cuantificación de la droga en cápsulas.
Palabras clave : Riqueza , espectrofotometría UV , maleato de enalapril
RESUMEN El objetivo de este trabajo es validar un método simple mediante espectrofotometría de absorción ultravioleta para la determinación de maleato de enalapril, y también para analizar este medicamento en cápsulas. Los parámetros evaluados linealidad , eran de precisión , exactitud y especificidad, acuerdo con la ley brasileña recomendación . El espectro de absorción entre 200 y 300 nm se obtuvo para identificar la longitud de onda de absorción máxima ( 202 nm ) . La linealidad fue evaluada por regresión lineal de la curva analítica ( 8 a 28 μ g / ml ) . El método que presenta coeficientes intra e inter - run de variación de menos del 1 y 5%, respectivamente . El porcentaje de recuperación Obtenido a partir del método de adición estándar era cerca de 100 % , proporcionando la exactitud del método . La especificidad fue verificada en presencia de los excipientes cápsulas . Los resultados del ensayo de cápsulas presentadas porcentaje de concordancia alta ( 101,14 %) en comparación con los obtenidos a partir del método validado anterior por cromatografía líquida de alto rendimiento. Las cápsulas analizadas por el método propuesto presenta uniformidad de contenido adecuado. El método validado de análisis en este trabajo representa una innovación y mejora de las técnicas de análisis cuantitativos de maleato de enalapril y también se puede aplicar para analizar dicha droga en cápsulas.
Palabras clave : ensayo analítico , espectrofotometría ultravioleta , Enalapril maleato
* Contacto: Irene Clemes Külkamp de la Facultad de Farmacia de la Universidad Federal de Río Grande do Sul (UFRGS ) , Porto Alegre , RS, Brasil, e- mail:
[email protected]
INTRODUCCIÓN
En este trabajo se propone una metodología para la determinación de enalapril, un profármaco, inhibidores del ECA . El mismo está disponible comercialmente en forma de maleato de enalapril ( CAS : 76095-16-4 ) y difiere estructuralmente por la presencia de enalaprilato un grupo etoxicarbonilo en lugar de un grupo carboxílico en la posición 1 de 1 - alanil - 1 - prolina , más la presencia de la sal de maleato ( Figura 1 ) . Estos cambios estructurales resultan en un aumento de la absorción gastrointestinal en comparación con enalaprilato enalapril , que se absorbe mal por el tracto gastrointestinal ( Delgado , 1998 ; Silva , 2002 ) .
Figura 1 . Estructura química de maleato de enalapril ( A) y enalaprilato ( b )
La droga tiene monografía oficial de la Farmacopea de Estados Unidos, británicos, portugueses y brasileños . La Farmacopea Británica y portugués método de ensayo que se presente para que el fármaco valoración potenciométrica en medio acuoso, mientras que la Farmacopea de Estados Unidos indica Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC ) . ( Portugués , 2003 Farmacopea , USP, 2008 ; Farmacopea Británica , 2008 ) . La Farmacopea brasileña presenta como la valoración potenciométrica y métodos de ensayo de HPLC ( Brasil 2010 Farmacopea ) . Hay varios métodos descritos usando HPLC para la determinación de enalapril solo o en composiciones farmacéuticas (Al - Omari et al , 2001 ; . Stanisz , 2003 ; Bhushan et al , 2006 ; . Bonazzi et al , 2007 ) ..
Otros métodos se han descrito para la determinación de maleato de enalapril , por ejemplo , diferencial polarografía de pulso ( Elmali et al . , 2003 ) y electroforesis capilar ( Hillaert y Bossche , 2001 ) . Algunos trabajos abordan el desarrollo de métodos espectrofotométricos en el ( UV )
región ultravioleta por técnicas indirectas , tales como reacciones de oxidación , el emparejamiento de iones y la formación de complejos con enalapril colorimétrico ( Kato , 1985 ; Ayad et al , 2002 ; .. Ayad et al , 2003 Shama et al. , 2011 ) . Espectrometría UV se describe para el análisis simultáneo de enalapril y los comprimidos de losartán (Thomas et al. , 2009 ) y espectrofotometría UV derivado para la determinación de la materia prima maleato de enalapril y formas farmacéuticas ( Bonazzi et al. , 2007 ) , o incluso en combinación con otros fármacos ( Walily et al , 1995 ; . Prasad et al , 1999 . ) .
Sin embargo, ningún método por espectrofotometría de la absorción UV se encontró para la lectura directa
aislado para la determinación de maleato de enalapril como una sustancia pura o se transporta en cápsulas . El objetivo de este trabajo es presentar un método simple, preciso y exacto para la determinación de la droga maleato de enalapril con adecuada para la dosificación de cápsulas por UV especificidad espectrofotometría de absorción , a pesar de la baja capacidad de absorción molar del fármaco.
MATERIALES Y MÉTODOS Materiales El patrón de trabajo utilizado fue comprado al proveedor de Galena ® ( Brasil ), perteneciente al lote 20010405 y declaró contenido igual a 99,80 %. La identidad de la norma de trabajo fue confirmado por análisis de infrarrojos y el contenido fue confirmado por valoración potenciométrica ( Farmacopea Británica , 2007 ) , debido a que es un método absoluto que no requiere de la sustancia de referencia , y HPLC.
La materia prima utilizada para las pruebas de dosificación y manejo de las cápsulas fue adquirido al proveedor de Galena ® ( Brasil ) para el lote 5111-00 -042- A y el contenido declarado igual a 99,60 % . Las soluciones se prepararon con agua destilada de grado analítico y reactivo de ácido clorhídrico .
Se prepararon cápsulas que contienen el equivalente de 360 20 mg de enalapril en forma de maleato de enalapril , el método de encapsulación por llenado manual y tapado . Los excipientes utilizados y sus cantidades fueron: bicarbonato de sodio ( 5 % w / w ) lauril sulfato de sodio ( 1 % w / w ) , estearato de magnesio ( 1 % w / w ) , dióxido de silicio coloidal ( 1 % w / w ) y lactosa ( 82 % w / w ) . La proporción del fármaco correspondiente al 10 %
( w / w ) de la formulación . Esta misma composición y proporción de excipientes se utilizaron en la preparación de placebo se utiliza en las pruebas de validación .
equipo
Un espectrofotómetro bomen Hartmann & Braun, Modelo MB - 100 , para los análisis en la región del infrarrojo y un espectrofotómetro modelo Shimadzu UV - 1601PC , se utilizó para la exploración espectrofotométrica en el intervalo de 300-200 nm . Todo otro modelo lambda epectrofotométricas análisis 10 se realizaron en un espectrofotómetro Perkin - Elmer UV / VIS . Los análisis de HPLC se llevaron a cabo en un equipo Shimadzu , que comprende una bomba LC 10AD VP y UV- Vis detector SPD- 10AV VP , controlados por el regulador SCL- 10AVP , acoplado a una computadora Mega Corp, y operados por el programa Class- VP .
Preparación de soluciones estándar y obtener el espectro de absorción UV
Una solución madre que contiene 1 mg / ml se preparó de la solución patrón de trabajo de ácido clorhídrico en 0,1 N. Esta solución madre se usó para preparar el
solución de ensayo a una concentración de 20 μ g / ml usando el mismo vehículo . Obtenido el
espectro de absorción en la región UV entre 300 y 200 nm de la solución de ensayo que contiene 20 μ g / ml de la droga para determinar la longitud de onda a la que la absorción es más grande .
Validación del método
Se determinó la linealidad , rango , exactitud , precisión y especificidad del método . A partir de diluciones de la solución madre para la construcción de una curva de calibración en el rango de 8 a 28 g / ml (n = 11 ) fueron hechas . La absorbancia de cada punto se midió en tres días diferentes por triplicado para cada día , en una longitud de onda igual a 202 nm . La ecuación de la recta se determina a partir de la media de las lecturas de los tres días . La curva a nalítica se utilizó para determinar el contenido de maleato de enalapril .
Se evaluó la linealidad por cálculos de regresión lineal de los tres réplicas de la curva de calibración por el método de los mínimos cuadrados . Los datos obtenidos a partir de la regresión lineal matemático se utilizó para estimar el grado de linealidad . Los cálculos se realizaron el coeficiente de correlación , la ecuación de la recta con su pendiente y la intersección del eje y. La pista también fue uno determinado a partir del estudio de parámetro de linealidad .
Para estimar con precisión los parámetros intra - e inter- run run de precisión de repetibilidad y precisión intermedia , respectivamente , se evaluó . Repetibilidad se evaluó a partir de 6 determinaciones en concentración de ensayo ( 20 mg / ml) . Para evaluar la exactitud de inter -run esta prueba se repitió por triplicado , la evaluación de la precisión intermedia a partir del coeficiente de variación entre los tres días de análisis diferentes .
La precisión en la determinación de la materia prima se analizó por el porcentaje de recuperación obtenido a partir de una cantidad conocida de estándar de trabajo añadido a la muestra de las materias primas , utilizando tres concentraciones diferentes con determinaciones por triplicado para cada uno. De una solución madre de 100 μ g / ml enalapril , se hicieron diluciones en solución de ácido clorhídrico 0,1 N a fin de lograr una concentración final de 12 μ g / ml . A partir de una solución madre que contiene 100 μ g / ml de alícuotas de trabajo estándar se tomaron y se añade a
las diluciones que contienen 12 μ g / ml de materia prima con el fin de obtener concentraciones finales de 16 , 20 y 24 μ g / ml .
La especificidad del método fue verificada por comparación de los resultados obtenidos en el ensayo de muestras de ensayo preparadas con la concentración de las muestras en las que se añadió el excipiente equivalente a la cantidad presente en una cápsula . Análisis estadístico se realizó mediante la prueba de ANOVA y Tukey. La adquisición del espectro de absorción en el ultravioleta ( 300 a 200 nm ) placebo también se utilizó para evaluar el efecto de los excipientes en el análisis .
Los resultados de la medición de las cápsulas se compararon con los obtenidos por el método de HPLC validado previamente : columna Lichrospher RP- 18 ( 5μ m) x 125
4mm . La fase móvil fue acetonitrilo / agua ( 20 : 80 ) se ajustó a pH 3,8 con ácido acético , con un flujo isocrático de 1 ml / min . La detección se realizó con UV 215 nm .
La aplicación del método para la determinación de cápsulas
Se determinó la uniformidad de contenido de las cápsulas de ingeniería del método propuesto y validado . Se realizó la prueba para el análisis de uniformidad del contenido de 10 unidades de cápsulas individuales . Cada concentración teórica cápsula de 20 mg se sometió a diluciones en serie en solución de HCl 0,1 N , la obtención de la concentración teórica final de 20 μ g / ml y se
cuantificó por 202 nm . Estas mediciones se realizaron por triplicado y el contenido de maleato de enalapril en cada cápsula calculado a partir de la curva de calibración .
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Droga maleato de enalapril tiene la máxima capacidad de absorción en el rango de longitud de onda del límite inferior del espectro UV. Para seleccionar la longitud de onda se haría donde se obtuvo el análisis del espectro de absorción entre 200 y 300 nm en la región UV de la solución de ensayo . La solución tenía una máxima absorción cerca de la longitud de onda de 202 nm , como se muestra en la Figura 2 .
Figura 2 . Espectro de Absorción Infrarrojo ( 300-200 nm ) en el espectro UV de la solución de la región de prueba de maleato de enalapril .
Tanto la Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria (Brasil, 2003 ) como la guía de la Conferencia Internacional de Armonización (ICH , 2005 ) para la determinación cuantitativa de un medicamento que no abogan por la necesidad de evaluar todos los parámetros de validación , y la elección de los métodos debe basarse en la finalidad prevista del método . Dado que el método propuesto tiene como objetivo la determinación de maleato de enalapril en la materia prima y cápsulas , se han propuesto parámetros : linealidad , exactitud gama ,
precisión ( repetibilidad y precisión intermedia ) y especificidad.
Tabla 2 . Análisis de la precisión
se muestra en la Tabla 1 . Los coeficientes de variación entre el Inter - día linealidad de los puntos de la curva están por debajo de 5 % , tal como se recomienda ( Brasil , 2003 Randau , 2005 ) .
Tabla 1 . Los datos de la curva de calibración : absorbancia medio , la desviación estándar y el coeficiente de variación
inter - raza 99,65 ± 0,91 0,92
El porcentaje medio de recuperación obtenido en el método de adición estándar de trabajo, fue cercano al 100% , como se muestra en la Tabla 3 , que indica la proximidad a el verdadero valor y la precisión del método (Brasil, 2003 ) .
concentración ( Μ g / ml ) Absorbancia
(Promedio ) Desviación Coeficiente estándar variación
Tabla 3 . Prueba de Recuperación para Maleato (% ) Enalapril obtenidos por espectrofotometría de absorción 8 0,320 1,54 0,0049 UV
10 12 0.445 0.536 0.0091 0.0254 2.06 Añadió 4.75 Estándar ( mg / ml ) Estándar recuperado (% ) Coeficiente variación ( %) 14 0.609 0.0102 1.67 4 105.66 0.01 ± 1.09
16 0,722 0,0314 4,35 8 97,50 0,03 ± 3,15 18 0,799 0,0323 4,04 12 97,76 ± 0,01 0,89 20 0.0411 0.889 4.63 ± 4.65 4.64 Promedio 100,29 22 0,999 0,0466 4,66 Cada valor representa la media de tres determinaciones 24 1.134 0.0148 1.31 26 0,0148 1,20 1,237 El método de análisis mostró especificidad para 28 4,87 1,304 0,0635 presencia de excipientes examinó , como puede ser
Cada valor es la media de tres mediciones realizadas en días diferentes.
La ecuación resultante de la línea de regresión lineal de los datos presentados pendiente igual a 26,51 y el coeficiente lineal de 0,037 . El coeficiente lineal cerca de cero es una adicional para hacer la linealidad de los criterios del método . El coeficiente de correlación determinado fue 0,99868 (R2 = 0,99736 ) . ANVISA aboga por un coeficiente mínimo de correlación de 0.99 para dar fe de la linealidad del método (Brasil, 2003 ) .
La Tabla 2 muestra el coeficiente de variación para la determinación de la concentración de las soluciones de maleato de enalapril a una concentración de 20 g / ml llevado a cabo en tres días diferentes y cada día por sextuplicado . Las seis determinaciones realizadas cada día mostraron coeficiente de variación inferior al 1% , con buena precisión intra - run ( repetibilidad) . Del mismo modo , los coeficientes de variación entre las diferentes carreras fue 0,92 % , con una buena precisión intermedia método . La precisión dentro de plazo, también llamada repetibilidad , precisión expresa las mismas condiciones de funcionamiento dentro de un mismo día , mientras que la precisión inter -run expresa la variación en diferentes condiciones, tales como la variación de la jornada de análisis. Estos valores están de acuerdo con el método recomendado por la ANVISA , que no admite ninguna variación de más del 5 % (Brasil, 2003 ) .
visto en la figura que muestra el espectro de absorción
los excipientes ( Figura 3 ) . El análisis mediante la prueba de ANOVA y de Tukey mostró ninguna diferencia estadísticamente significativa entre las muestras en la ausencia y presencia de excipientes utilizados ( Tabla 4 ) .
Figura 3 . Espectro de absorción infrarrojo ( 200-300 nm ) en la región UV de la solución de placebo
Además , los resultados se compararon con los obtenidos por HPLC para el mismo lote de cápsulas . La determinación de las cápsulas por HPLC mostró un contenido promedio de 98,70 % , presentando así un porcentaje de 101,14 % de concordancia con los resultados obtenidos por espectrofotometría ultravioleta ( 97,58 % , como se muestra en la Tabla 5 ) . Es de destacar , sin embargo , que el
especificidad del método en presencia de productos de degradación y sustancias relacionadas no se ha evaluado específicamente , y la especificidad fue evaluado sólo en presencia de excipientes . Cabe señalar también que los relativamente altos coeficientes de variación puede ser debido a la longitud de onda de análisis, que es susceptible de variaciones , tales como disolvente de interferencia , en vista de las longitudes bajas análisis de la especificidad de onda inferior , ya que la absorción de diferentes grupos funcionales puede ocurrir en la misma región .
Tabla 4 . Especificidad de la prueba para la concentración de maleato de enalapril en el ensayo en presencia de excipientes cápsulas *
CONCLUSIÓN
La determinación de maleato de enalapril por espectrofotometría de absorción UV mostró linealidad en el intervalo dado, así como la exactitud , precisión y especificidad y se puede aplicar de forma sencilla y rápidamente . No se técnicas de aislamiento determinación de maleato de enalapril se encontraron como una sustancia pura o en cápsulas por espectrofotometría UV directa . Las técnicas descritas anteriormente utilizando complejo colorimétrico , derivación de los resultados o el enfoque sobre la determinación simultánea de enalapril y otras drogas . Por lo tanto , la validación de la técnica presentada en este trabajo es una innovación y la mejora de técnicas de ensayo para este fármaco , y también se puede aplicar para el ensayo de cápsulas .
Enalapril ( materia prima )
Enalapril ( materia prima en la presencia de excipientes )
F - valor de p - valor
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* N = 3 , p < 0,01
Las cápsulas analizadas por el método propuesto tenían buena uniformidad de contenido , como puede verse a partir de los resultados en la Tabla 5 . Existen especificaciones de la farmacopea de los contenidos de las cápsulas maleato de enalapril . Sin embargo , los resultados de la determinación de las concentraciones individuales de cada cápsula se encontraban dentro de los límites especificados por la Farmacopea de los comprimidos de maleato de enalapril , que es de 90 a 110 % del contenido declarado (USP , 2005 ) .
Tabla 5 . Determinación de la uniformidad del contenido de las cápsulas de maleato de enalapril
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