Universidad Nacional
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Escuela de Química Laboratorio Laboratorio de Bioquímica Nombre: Lauren Campos Campos
Pro!: "na #alindo Bernab$u
%ema: Extracci&n del "'N del (í)ado de pollo
Fec*a: +,- .unio- /0+, 1 2emestre3 /0+,
Extracción de ADN del hígado de pollo Objetivo •
Extraer ADN de células animales, observando su estructura fibrilar y el grado de enrollamiento de la cadena.
Marco teórico
El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina. Así, para extraerlo será necesario omogenei!ar el te"ido y romper las células para separar el núcleo, romper también la envoltura nuclear para liberar su contenido, luego separar el ADN de las proteínas #ue lo protegen y, por último, precipitarlo para extraerlo de la
soluci$n. %na ve! reali!ado esto, el ADN aparecerá como un agregado de fibras blan#uecinas #ue se adieren a la varilla de vidrio. &or último, se puede situar sobre un porta, te'irlo con un colorante básico y observarlo al microscopio. El ADN es un polímero de nucle$tido. %n polímero es un compuesto formado por mucas unidades simples conectadas entre sí. En el ADN, esta conectados por varios nucle$tidos, y cada nucle$tido, a su ve!, está formado por un a!úcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (#ue puede ser adenina A, timina, citosina o guanina) y un grupo fosfato #ue actúa como engance de cada vag$n (*cribd +--).
o #ue distingue a cada nucle$tido de otro es su base nitrogenada, y por ello la secuencia del ADN se especifica nombrando s$lo la secuencia de sus bases. En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucle$tidos, en la #ue las dos ebras están unidas entre sí por unas conexiones denominadas puentes de idrogeno (/ortes +--). Existen dos tipos de ácidos nucleicos los cuales son el ácido desoxirribonucleico (ADN) y el ácido ribonucleico (A0N). El ADN contiene la informaci$n genética de un organismo y controla el crecimiento y divisi$n de las células y a su ve! el A0N encargado de transferir la informaci$n vital durante la síntesis de proteínas (1ruice +2) Es posible extraer el ADN de las células por medio de las propiedades fisico#uímicas de dicos compuestos, las cuales son3 PROPIEDADES DEL ADN
4 5nsoluble en soluciones diluidas de Na/l, 4 *oluble en soluciones concentradas de Na/l.
4 5nsoluble en alcool. 4 &uede ser disociado de la proteína por tratamiento con un detergente o un fenol
Materiale • •
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6e"ido animal (7ígado de pollo) Detergente lí#uido. 1atidora Embudo
• •
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&apel filtro. Alcool 89: *oluci$n de Na/l. ;ugo de papaya.
Procedi!iento
-. 6riturar en frío la muestra de = g ígado de pollo y a'adir unos > ml de agua destilada o, en su defecto, agua mineral, agregar media cucaradita de sal, esto tiene varios efectos. En primer lugar provoca un co#ue osm$tico #ue es capa! de romper algunas membranas no afectadas por el tratamiento anterior. Además, las cargas positivas de los iones Na? atraerán luego las cargas negativas del ADN manteniéndolo en la disoluci$n.
+. /olocar en una batidora para omogenei!ar el te"ido. Este procedimiento también rompe mucas células liberando su contenido. &arecer ser más efica! el empleo de una batidora, con la #ue se obtiene una me!cla más omogénea y fácil de filtrar después.
@. iltrar varias veces el resultado de la me!cla. Este filtrado es lento y difícil, pero se retendrá el s$lido.
>. A'adir aora > ml de detergente lí#uido y remover suavemente, me!clando
bien
pero
evitando
#ue
se
forme
espuma.
El detergente completa la rotura de las membranas plasmática y nuclear al disolver y separar los lípidos de las mismas. 6ambién interviene en la separaci$n de las proteínas #ue rodean al ADN. *i es posible volver a filtrar, se obtendrá una soluci$n más limpia de restos.
5.
Agregar @ cucaradas de "ugo de papaya, #ue contienen un en!ima, la papaína, #ue contribuye a eliminar las proteínas #ue puedan contaminar el ADN.
9. Aora se a'aden unos = ml de alcool !"# $río, teniendo cuidado de acerlo ladeando el tubo o vaso de precipitados y de"ando resbalar muy lentamente el alcool por la pared de a#uel para formar una capa sobre la soluci$n anterior. Es muy importante evitar #ue se me!clen ambas soluciones, pues será en la interfase donde precipitará el ADN. 2. El ADN irá apareciendo poco a poco en la interfase aguaBalcool en forma de grumos blancos. *e favorece la precipitaci$n y recolecci$n si
se va recogiendo mediante la varilla de vidrio, u otro instrumento similar, introduciéndola ligeramente ba"o la interfase y aciéndola girar suavemente mientras se extrae. Así se irán pegando en la varilla unas ebras blancas #ue corresponden a miles de fibras de ADN.
Re$erencia
;osé A. /ortes +--. Extracci$n casera de ADN CEn ttp3FFGGG."oseacortes.comFpracticasFextraccionADN.tmH C;unio +--.
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4 1ruice, &. +2. undamentos de uímica Lrgánica. Kéxico. Editorial &EA0*LN. =+B=+- pp.
