FORMULA LEUCOCITARA
1. Examenu Examenull microsc microscopi opic c al sangelu sangeluii : o
Picatura groasa
o
Frotiul de sange
In vederea unui examen microscopic sangele este recoltat prin inteparea pulpei unui deget dupa prealabila dezinfectare.
o
Picatura groasa
Reprezinta o metoda de cercetare a parazitilor / bacterii spiralate din sange (plasmodiul malariei, Borrelia recurentis, etc.), din acest motiv acest subiect va fi tratat pe larg la capitolul corespunzator. corespunzator. Prin aceast mod de examinare a sangelui sangelui hematiile sunt lizate, preparatul preparatul este colorat Giemsa, observandu-se numai leucocitele si microorganismele.
o
Frotiul de sange
Definitia Reprezi Reprezinta nta modalitat modalitatea ea de studiere studiere a morfolo morfologiei giei elemente elementelor lor sangvine sangvine
si totodata totodata
orienteaza asupra numarului de leucocite, si trombocite din sange.
Picatura de sange obtinuta la inteparea pulpei degetului este depusa pe o lama de sticla curata si degresata, si apoi este intinsa cu ajutorul unei alte lame mentinute la un unghi de aproximativ 45° fata de prima. Preparatul astfel obtinut este uscat si colorat prin tehnica May Grunwald Giemsa, Giemsa , denumita si coloratie coloratie panoptica panoptica,, deoarece permite evidentierea tuturor elementelor figurate sangvine.
Exam Examina inarea rea frotiu frotiulu luii de sang sange e se efect efectuea ueaza za cu obiec obiectiv tivul ul cu imers imersie ie in ordin ordinea ea urmatoa urmatoare: re: eritroci eritrocit, t, tromboc trombocit, it, leucoci leucocitt cu realizar realizarea ea formulei formulei leucocit leucocitare are.. Frotiul Frotiul de sange sange
2
reprezinta componenta esentiala a unei hemograme, deoarece orienteaza medicul asupra tuturor elementelor figurate. 2. Morfologia elementelor normale din sange
Elementele figurate ale sangelui: o
Eritrocite 4-5 milioane / mm 3
o
Leucocite 4000 – 8000 / mm 3
o
Trombocite 150.000 – 300.000 / mm 3
Eritrocitele: au forma unui disc biconcav cu diametrul de ~ 7,2μm, de culoare roz portocalie cu centrul mai putin colorat.
Trombocitele : cele mai mici elemente figurate cu diametrul cuprins intre 2-4 μm, cu forma sferica si ovoidala, albastre cu granulatii rosii. De obicei se gasesc in grupuri suprapuse pe eritrocite.
Leucocitele se coloreaza diferit in functie de tipul lor o
Granulocite (prezinta granulatii in citoplasma) o
Nesegmentate – reprezinta neutrofilele tinere •
o
Nucleu in banda sau in forma literei “S”
Segmentate
Polimorfonucleare neutrofile •
Nucleu bi- sau polilobat , situat central, violet
•
Citoplasma roz, cu granulatii fine, brune
PMN eozinofile •
Nucleu bilobat
•
Citoplasma plina de granulatii mari, portocalii, care nu se suprapun peste nucleu
PMN bazofile •
Nucleul nu este net lobulat, situat central
•
Citoplasma contine granulatii rare, dar mari, care nu respecta limitele nucleului peste care se suprapun.
3 o
o
Monocite (fara granulatii) : •
nucleu reniform, usor excentric, aspect “pieptanat”
•
citoplasma albastra cenusie
Limfocite (fara granulatii) : •
nucleu rotund, violet cu condensari ale cromatinei
•
citoplasma – bleu, apare ca o zona ingusta, semilunara, nu are granulatii.
3. Formula leucocitara
Definitie Reprezinta exprimarea procentuala a diferitelor tipuri de leucocite in urma examinarii a cel putin 100 de leucocite pe un frotiu sange.
Tehnica Se parcurge frotiul cu obiectivul cu imersie, intr-un singur sens si in zig-zag deoarece limfocitele au tendinta sa se grupeze spre centru, in timp ce polimorfonuclearele stau mai mult la marginea frotiului (conform figurii de mai jos), mai intai pe o latura a lamei pana se intalnesc primele 50 de leucocite si pe latura opusa pentru celelate 50 de leucocite.
Figura 1. Examenul microscopic pentru stabilirea formulei leucocitare
Cu cat sunt examinate
un numar mai mare de leucocite (200-400) exactitatea
rezultatului creste. La o examinare a unui numar de leucocite mai mic de 100, valoarea testului este practic nula.
4
Valori normale – adult 3
Numar leucocite 4000 – 8000 / mm
PMN- polimorfonucleare
Nesegmentate neutrofile
1–4%
Segmentate neutrofile
60 – 70 %
Eozinofile
1–4%
Bazofile
0–1%
Limfocite
20 – 30 %
Monocite
4–8%
Modificari cantitative ale formulei leucocitare : Crestere o
↑
Neutrofilie
Normal – sarcina, efort muscular Patologic – infectii generale si locale, intoxicatii, leucemie granulocitara
Alergii, parazitoze
Leucemie, intoxicatie cu plumb
o
o
o
Eozinofilia Bazofilia Limfocitoza
o
Tuberculoza
Monocitoza
Scadere ↓ Neutropenie o
Mononucleoza infectioasa, febra tifoida, malarie
5
o
Eozinopenie
o
Normal – inanitie Patologic – febra tifoida, infectii virale, agranulocitoza Faza de debut boli infectioase, intoxicatii, dupa corticoterapie
Limfopenie
Infectii supraacute, postcorticoterapie
4. Dozarea complementului seric
Complementul seric (C seric ) reprezinta un important factor umoral al apararii nespecifice. Fractia C3b a complementului poate fi dozata prin tehnica Mancini. Metoda are la baza o reactie antigen – anticorp de precipitare prin imunodifuzie radiara simpla in geloza (I.D.R.S). Anticorpii anti-Cseric sunt incorporati in gel. Serul pacientului, din care se urmareste dozarea Cseric (Ag), este introdus intr-un godeu perforat in geloza, actiune urmata de difuzia radiara a acestuia in mediu. Prin legarea specifica a Ac la Ag, in zona de echilibru, rezulta complexe Ag – Ac insolubile ce formeaza un inel de precipitare. Diametrul inelului de precipitare se masoara cu rigla, fiind direct proportional cu cantitatea de Ag (C
seric
) existent in
proba, a carei valoare se afla prin consultarea unor tabele de interpretare.
5. Fagocitoza – inflamatia acuta – examinarea unor frotiuri din puroi si secretii vaginale
Frotiul este fixat pe masuta microscopului si este examinat cu obiectivul cu imersie de 90X. Se observa fagocite (PMN neutrofile , ± macrofage) surprinse in diferite etape ale fagocitozei : emiterea de pseudopode, formarea fagozomilor prin includerea bacteriilor in interiorul celulei.
6. Foliculul tuberculos - inflamatia cronica – examinarea unor preparate histopatologice
6
Preparatul histopatologic este examinat cu obiectivul cu imersie de 90 X, observanduse aspectul microscopic al folicului TBC , de la interior la exterior: o
celula giganta multinucleata Langhans , rezultata din fuzionarea mai multor macrofage, ce contine bacili Koch fagocitati dar care continua sa se multiplice , inconjurata de o :
o
coroana de limfocite.