Laporan Praktikum Penyakit Infeksius 1
Tangg Tanggal al
: Sel Selas asa, a, 17 17 Febr Februa uari ri 2015 2015
elompok: 7 !11"00#1$"$0 %I&' (uangan (uang an : (P" it)an 2 *osen
: +r" -sama .fif, /"S
IDENTIFIKASI BAKTERI GRAM NEGATIF ( Salmonella sp.) DAN GRAM POSITIF ( Micrococcus sp.) PADA SAMPEL SUSU SAPI
anti (ami Fauiya
&0120125
Sara /i /inarni Tampubolon
&0120123
4oor Isan .nary .nary &"
&0120127
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2015
PENDAHULUAN Lata B!"a#a
%$Susu merupakan sala satu baan pangan yang kaya akan at gii" an+ungan protein, glukosa, lipi+a, garam mineral, +an itamin +engan p6 sekitar 3,0 menyebabkan mikroorganisme mu+a tumbu +alam susu" Pro+uksi susu seara nasional belum memenui permintaan susu +ikarenakan pro+uktiitas sapi pera +i In+onesia yang masi ren+a seara kuantitas maupun kualitas !(osena 2010'" Penemaran pa+a susu ter8a+i se8ak proses pemeraan, +apat berasal +ari berbagai sumber seperti kulit sapi, ambing, air, tana, +ebu, manusia, peralatan +an u+ara !(ombaut" 2005'" /ikroorganisme yang masuk ke susu mampu berkembang biak +engan epat" Sala satu penyebab penyakit yang ber+ampak pa+a pro+uksi susu sapi a+ala mastitis" /astitis merupakan suatu pera+angan pa+a 8aringan interna ambing yang +isebabkan ole berbagai penyebab +iantaranya karena trauma atau gangguan fisiologis,
infeksi bakteri
+iantaranya Staphylococcus
aureus, Streptococcus
agalctiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis !9uin et a l. 2002'" Penyebab mastitis subklinis yang paling sering ter+eteksi a+ala Staphylococcus aureus !S. aureus' +an beberapa 8enis bakteri lain seperti Streptococcus agalactiae +an Eschericia coli !%iba)an et al., 17'" Isolasi +an i+entifikasi merupakan meto+e konensional +alam pemeriksaan bakteri yang +i+asarkan pa+a reaksi biokimia" *alam isolasi +an i+entifikasi bakteri +iperlukan me+ia yang selektif" Setela +ilakukan pe)arnaan ;ram +ilan8utkan +engan u8i biokimia pa+a berbagai me+ia seperti karboi+rat" &akteri yang su+a +iisolasi +an +ii+entifikasi selan8utnya +iu8i seara serologis untuk menentukan serotipenya"
T&'&a$
Tu8uan +ari praktikum ini a+ala maasis)a mengetaui ara i+entifikasi bakteri pa+a susu serta mengetaui 8enis bakteri yang +i i+entifikasi pa+a susu yang +i+uga +ari ambing sapi mastitis"
BAHAN DAN METODE A"at Baa$
.lat yang +igunakan untuk i+entifikasi a+ala ose, nee+le, mikroskop, api bunsen, larutan kristal iolet, larutan safranin, lugol, a
Taap pertama yang arus +ilakukan +alam i+entifikasi ini a+ala mengisolasi bakteri +ari se+iaan susu untuk +ibuat preparat ulas" >ara yang +ilakukan iala mengambil sampel susu +engan ose, kemu+ian menggoreskan pa+a kaa ob8ek" Preparat kemu+ian +ifiksasi +engan +ile)atkan +i atas api bunsen" Taap ke+ua a+ala melakukan pe)arnaan ;ram pa+a kaa ob8ek yang tela +iberi sampel susu" Larutan kristal iolet +iteteskan pa+a sampel yang tela +ifiksasi +an +ibiarkan selama 1 menit, lalu +ibersikan +engan a
+ilakukan
pe)arnaan
gram,
i+entifikasi
+ilan8utkan
+engan
membiakkan sampel pa+a me+ia />. +an &." &eberapa ari kemu+ian asilnya +iamati, +an bakteri tersebut +ibiakkan +alam agar miring untuk kemu+ian +iu8i +engan berbagai u8i biokimia)i" Setela beberapa ari asil +apat +iamati, kemu+ian +ilakukan i+entifikasi lebi lan8ut +engan u8i#u8i kimia)i" -8i kimia)i yang +ilakukan pa+a bakteri gram negatie a+ala u8i I.?TSI.@ u8i fermentasi karboi+rat meliputi glukosa, manitol, laktosa, sukrosa, +an maltosa@ u8i motilitas +an u8i In+ol@ u8ia urea@ +an u8i sitrat" Se+angkan pa+a gram positif, u8i kimia)i yang +ilakukan a+ala u8i katalase, u8i fermentasi glukosa, u8i koagulase, +an membiakkan pa+a Mannitol Salt Agar !/S.'"
Pa+a u8i fermentasi karboi+rat sub kultur pa+a agar +iambil +engan mata ose +an +imasukkan ke +alam airan glukosa yang ber)arna mera" 6al yang sama +iulangi pa+a airan manitol, laktosa, sukrosa, +an maltosa" -ntuk u8i urea, sub kultur +iambil +engan u8ung ose, kemu+ian +ioleskan pa+a agar miring urea yang ber)arna kekuningan" -8i sitrat +ilakukan +engan mengoleskan sub kultur pa+a u8ung mata ose pa+a agar miring sitrat ber)arna i8au" -8i I.?TSI. +ilakukan +engan ara mengambil biakan +ari agar miring menggunakan nee+le kemu+ian +itusukkan pa+a me+ia agar I.?TSI. +an +ilan8utkan +engan goresan pa+a bagian miring me+ia tersebut" -ntuk u8i motilitas, +ilakukan penusukan pa+a me+ia agar lalu +ialn8utkan +engan u8i In+ol, yaitu menuangkan reagen Arli pa+a biakan asil u8i motilitas" /e+ia yang +igunakan untuk u8i in+ol a+ala me+ia agar tegak" Setela semua me+ia u8i berisi sub kultur +ari agar miring" Selan8utnya me+ia u8i tersebut +ibiarkan +an +ilakukan i+entifikasi +an pemeriksaan tera+ap seluru me+ia u8i pa+a ari ketiga"
HASIL DAN PEMBAHASAN ,!$-s U'-T!#$-# I+!$t-/-#asPe)arnaan gram
/e+ia >onkey !/>.'
Has-" U'-
;ram positif !B' +an ;ram negatif !#'
/a Tumbu koloni .gar bakteri be)arna seperti me+ia?bening"
Gaa
K!t!a$%a$
Terliat bakteri ber)arna ungu berbentuk ous +an terliat pula bakteri mera +engan bentuk basil pen+ek -kuran koloni besar, bentuk koloni bulat, permukaan koloni alus, aspek koloni mengkilat, tepi koloni rata, eleasi timbul, bersifat tembus aaya, pigmentasi ber)arna bening?sama +engan me+ia
/e+ia &loo+ Tumbu koloni .gar !&.' ber)arna puat
-kuran koloni se+ang, bentuk koloni bulat, permukaan koloni alus, aspek koloni mengkilat, tepi koloni bersemak, eleasi timbul, bersifat opa
-8i Cksi+ase
Positif
-8i I.?TSI.
Positif
-8i In+ol
4egatif
Ti+ak terbentuk inin mera mu+a setela +ireaksikan +engan pereaksi Arli
-8i Sitrat
Positif
%arna me+ia beruba +ari i8au men8a+i biru
-8i -rea
Positif
%arna me+ia beruba +ari kekuningan men8a+i pink
-8i Fermentasi Fermentasi arboi+rat a" ;lukosa B
;as B
Ter8a+i perubaan )arna +ari mera men8a+i kuning@ ter+apat gelembung gas"
b" /altosa
B
B
" /anitol
B
B
+" Sukrosa
B
B
e" Laktosa
#
B
-8i atalae
Positif
Ter+apat gelembung gas
-8i Fermentasi ;lukosa
4egatif
Ti+ak ter8a+i perbuaan )arna
-8i oagulase
4egatif
Plasma tetap air
/embiakkan Positif pa+a Mannitol Salt Agar !/S.'
Ter8a+i perubaan )arna +ari mera men8a+i kuning@ ter+apat gelembung gas" Ter8a+i perubaan )arna +ari mera men8a+i kuning@ ter+apat gelembung gas" Ter8a+i perubaan )arna +ari mera men8a+i kuning@ ter+apat gelembung gas" Ti+ak ter8a+i perubaan )arna@ ter+apat gelembung gas"
Tetapi me+ia
)arna
seperti
Pa+a taap pertama i+entifikasi bakteri +alam sampel susu +ari sapi yang +i+uga mastitis, +ilakukan bakteri +ari sampel susu +itanam terlebi +aulu pa+a me+ia &loo+ .gar +an /a >onkey .gar !/.>'" oloni yang +i+apatkan +ari
sampel susu yang +itanam +i me+ia &loo+ .gar a+ala ukuran koloni se+ang, bentuk koloni bulat, permukaan koloni alus, aspek koloni mengkilat, tepi koloni bersemak, eleasi timbul, bersifat opaonkey .gar !/>.' +an +i+apatkan koloni +engan ukuran besar, bentuk koloni bulat, permukaan koloni alus, aspek koloni mengkilat, tepi koloni rata, eleasi timbul, bersifat tembus aaya, +an pigmentasi ber)arna bening?sama +engan me+ia" oloni yang terpisa +ibiakkan pa+a agar miring untuk kemu+ian +iu8i +engan berbagai u8i biokimia)i" Selan8utnya +ilakukan u8i pe)arnaan ;ram" 6asil yang +i+apatkan a+ala terliat a+anya bakteri ber)arna ungu berbentuk ous yang sementara menun8ukkan ba)a bakteri tersebut merupakan gram positif" Ter+apat 8uga bakteri mera +engan bentuk basil pen+ek yang sementara menun8ukkan ba)a bakteri tersebut merupakan bakteri gram negatif" &er+asarkan pe)arnaan ;ram yang sementara menun8ukkan ba)a bakteri tersebut termasuk +alam bakteri gram positif, +ilakukan u8i lan8ut yaitu u8i katalase untuk membe+akan bakteri yang berebntuk ous +an basil" 6asil yang +i+apatkan +ari u8i katalase a+ala positif +engan a+anya gelembung u+ara +an +apat +itentukan ba)a bakteri tersebut termasuk +alam Micrococcaceae" Selan8utnya +ilakukan u8i fermentasi glukosa untuk mengi+entifikasi genus bakteri tersebut" *ari u8i yang +ilakukan +i+apatkan asil ba)a ti+ak ter8a+i perubaan )arna" Pa+a u8i pembiakkan pa+a /S. menun8ukkan ba)a )arna koloni seperti me+ia +an koloni bakteri tetap tumbu" 6asil ini menun8ukkan ba)a bakteri tersebut termasuk +alam genus Micrococcus" Pa+a pe)arnaan ;ram +i+apatkan 8uga bakteri mera +engan bentuk basil pen+ek yang +i+uga merupakan bakteri gram negatif" -ntuk mengi+entifkasi bakteri tersebut +ilakukan beberapa u8i lan8ut" Pertama, u8i oksi+ase +ilakukan untuk mengetaui apaka bakteri tersebut +apat menguraikan enim oksi+ase atau ti+ak +an asil yang +i+apatkan a+ala positif +engan terbentuk inin ber)arna ungu" Ter+apat beberapa u8i lan8ut untuk mengi+entifikasi bakteri tersebut" -8i I.?TSI. untuk membe+akan genus bakteri +alam famili Enterobacteriaceae +an membe+akan Enterobacteriaceae +engan bakteri batang alus ;ram negatif yang bersifat non#
fermenter" *ari u8i I.?TSI. +i+apatkan asil bagian slant +an butt ber)arna kuning +an a+a gas yang berarti glukosa +an laktosa +ifermentasi" Pa+a u8i in+ol ti+ak ter8a+i penguraian triptofan al ini +apat terliat +ari ti+ak terbentuknya inin mera mu+a setela +ireaksikan +engan pereaksi Arli" emu+ian +ilakukan u8i sitrat yang menun8ukkan )arna me+ia beruba +ari i8au men8a+i biru, artinya bakteri tersebut menggunakan sitrat sebagai satu#satunya sumber karbon" -ntuk mengetaui apaka bakteri tersebut urease maka +ilakukan u8i urea +an +i+apatkan asil positif yaitu )arna me+ia yang kekuningan beruba men8a+i pink" 6al ini menun8ukkan ba)a bakteri tersebut mengasilkan urease yang mampu mengi+rolisa urea" -8i terakir yaitu u8i fermentasi karboi+rat, pa+a glukosa, sukrosa, maltosa, +an manitol ter8a+i perubaan )arna +ari mera men8a+i kuning@ ter+apat gelembung gas" Se+angkan pa+a laktosa ti+ak ter8a+i perubaan )arna pa+a me+ia" &er+asarkan u8i yang tela +ilakukan terutama pa+a u8i fermentasi glukosa, bakteri yang +itanam pa+a me+ia />., +an u8i sitrat" Pertama pa+a u8i fermentasi karboi+rat +iketaui ba)a bakteri tersebut memfermentasikan glukosa yang berarti bukan termasuk kelompok bakteri ;ram negatif yang bersifat non#fermenter melainkan famili Enterobacteriaceae" Ter+apat beberapa bakteri yang termasuk +alam famili tersebut +iantaranya Escherichia coli, Salmonella sp", Proteus sp", +an lain#lain" Pa+a />. +iketaui ba)a )arna koloni bakteri seperti )arna me+ia yang merupakan iri kas +ari Salmonella Typimurium !laktosa negatif'" Pa+a asil u8i sitrat menun8ukkan ba)a me+ia tersebut beruba )arna +ari biru men8a+i i8au yang berarti bakteri menggunakan sitrat sebagai satu#satunya sumber karbon" >onto bakteri sitrat positif a+ala Salmonella sp" 6agka, .ma+i, ;eisari +an a+iar !2011' menyatakan ba)a bakteri mastitis subklinis yang +itemukan pa+a 3 peternakan sapi sapi pera yang a+a +i sekitar Sira yaitu Stapyloous aureus !27,D', Streptoous agalatiae !20,5D', Streptoous +ysgalatiae !10,2D', >orynebaterium bois !7,$5D', Stapyloous epi+ermis !5,D', Aseriia oli !,1D', &aillus lentus !,1D', /iroous spp !,1D', Anteroous faealis !,1D', &aillus ereus
!2,D', >orynebaterium psu+otuberlosis !2,D', Latobaillus spp!1,7D', Streptoous
bois
!1,7D',
+an
>orynebaterium
renale
!1,7D'"
Ea+i
kemungkinan penyebab bakteri mastitis pa+a sapi yang +i u8i melalui sampel susunya a+ala Micrococcus sp" KESIMPULAN
6asil yang +iperole +ari isolasi +an i+entifikasi bakteri +itemukan +ua bakteri ;ram negatif +an positif" I+entifikasi bakteri tersebut +ilakukan +engan serangkaian u8i untuk bakteri ;ram positif +iantaranya a+ala u8i katalase, u8i glukosa mikroaerofilik, u8i koagulase, +an u8i pa+a /S." &er+asarkan serangkaian u8i tersebut +apat +isimpulkan ba)a bakteri penyebab mastitis merupakan Micrococcus sp" DAFTAR PUSTAKA
6agka /, /( .ma+i, 6( ;eisari an+ . a+iar" 2011" Preliminary &aterial Stu+y on Sublinial /astitis an+ Teat >on+ition in *airy 6er+s .roun+ Sira" Eurnal of eterinary .nimal Siene $5!3': $7#$ 9uinn PE, & /arkey, /A >arter, %E *onnely an+ F> Leonar+" 2002" Veterinary Microbiology and Microbial Disease" -: &lak)ell Siene Lt+" (ombaut (" 2005" Dairy Microbiology and Starter Cultures" &elgium: ;ent -niersity" (oosena Gusuf" 2010" an+ungan Protein Susu Sapi Pera Friesian 6olstein .kibat Pemberian Pakan yang /engan+ung Tepung atu !Sauropus an+rogynus !L"' /err' yang &erbe+a" Samarin+a: Eurusan Peternakan Fakultas Pertanian -niersitas /ula)arman %iba)an I%T, >" LHmmler, an+ F6 Pasaribu" 17" (ole of y+ropobi surfae proteins in me+iating a+erene of group & streptooi to epitelial ells" E" ;en /irobiol" 1$:12$7#122"