Identifikasi Escherichia coli Pada Pada Sampel Urin Hari/Tanggal
Hari Ke-1: 28 Mei 2013 Hari Ke-2: 29 Mei 2013 Hari Ke-3: 30 Mei 2013 Tujuan Praktikum
Memahami gambaran koloni Escherichia koloni Escherichia coli pada coli pada media MC dan media selektif lainnya dan memahami ara identifikasi serta isolasi Escherichia isolasi Escherichia coli. Teori Dasar
!dentifikasi dan determinasi s"at" biakan m"rni bakteri yang diperoleh dari hasil isolasi dapat dilak"kan dengan ara pengamatan sifat morfologi koloni# morfologi sel bakteri# peng"$ian sifat-sifat fisiologi dan biokimianya% &ert"mb"han bakteri di alam dipengar"hi dipengar"hi oleh beberapa faktor l"ar seperti s"sbtrat# s "sbtrat# pert"mb"han # pH# temperat"r# dan bahan kimia% 'akteri yang nampak dapat memiliki morfologi yang sama# nam"n keperl"an n"trisi dan persyaratan ekologinya berbeda% ( !rianto #200)*% 'eberapa media dib"at oleh ahli mikrobiologi "nt"k membedakan mikroorganisme# kelompok media biakan ini diseb"t dengan media selektif dan media diferensial% Media selektif adalah media biakan yang mengand"ng paling sedikit sat" bahan yang menghambat perkembangbiakan
mikroorganisme
yang
tidak
diinginkan
dan
membolehkan
perkembangbiakan mikroorganisme tertent" yang ingin di isolasi% +edangkan media diferensial dib"at agar dapat membedakan kelompok mikroorganisme tertent" yang t"mb"h pada media biakan% Media diferensial ini biasanya mengand"ng bahan kimia yang dapat dig"na dig"nakan kan oleh oleh kelom kelompok pok mikroo mikroorga rganis nisme me terten tertent"% t"% ,pabil ,pabilaa beberap beberapaa mikroo mikroorga rganis nisme me t"mb t"mb"h "h pada pada medi mediaa difer diferen ensi sial al## maka maka dapa dapatt dibe dibeda daka kan n kelo kelomp mpok ok mikr mikroo oorg rgan anism ismee berdasarkan per"bahan pada media biakan ata" penampilan koloninya koloninya ( ay# 199. *% Karakt Karakteri eristik stik mikroo mikroorga rganis nisme me dapat dapat dilak" dilak"kan kan dengan dengan beberap beberapaa metode metode sepert sepertii pengamatan mikroskopik koloni# pe/arnaan mikroba "nt"k mengetah"i penampakan mikr mikros osko kopi pik k
sel
ma"p ma"p"n "n
memb membed edak akan an
golo golong ngan an-go -golo long ngan an
mikr mikroo oorg rgan anis isme me##
serta serta
karakteristik dengan serangkaian "$i-"$i biokimia yang menerminkan aktiitas metabolisme
enimatik mikroorganisme% eaksi-reaksi biokimia bagi mikroorganisme dapat dikatakan sebagai sidik $ari biokimia (biohemial fingerprints*# sebagaimana sidik $ari pada man"sia yang men$adi pembeda antara sat" orang dengan orang lainnya% +at" spesies mikroba akan memiliki sidik $ari4 biokimia ata" karakter biokimia identitas yang berbeda dengan spesies mikroba lainnya ( ay# 199. *% 5sherihia oli (5% oli* mer"pakan salah sat" spesies bakteri 6ram negatif% 'akteri ini hid"p pada sal"ran penernaan# ata" dikenal dengan bakteri 5nterobateriiae (anin# 2007*% 5sherihia oli mer"pakan salah sat" spesies gen"s 5sherihia yang bersifat 6ram negatif# fak"ltatif anaerob# tidak berspora# motil# berbent"k batang pendek (kokobasil* "k"ran 0#.-0#) g 1#. g% +eara normal hid"p dalam sal"ran penernaan he/an dan man"sia% 5sherihia oli t"mb"h baik pada temperat"r 3) C tetapi $"ga dapat t"mb"h pada s"h" 1C- .C% Koloni berbent"k b"lat emb"ng# perm"kaan liin dengan pinggiran rata dan dapat t"mb"h s"b"r pada biakan n"trient agar (;ais dkk%# 1987*% +erta motil (sel-selnya peritrik"s# yait" flagela seara merata tersebar disel"r"h perm"kaan sel* dan ada $"ga yang non motil% Ciri-iri biokimia/inya adalah banyak sekali ter$adi per"bahan pada s"bstrat% Media yang dig"nakan "nt"k reaksi biokimia adalah : a% erri s"lfat "nt"k mendeteksi prod"ksi H2+# protein dan indiator phenol red% +almonella bersifat alkali aid# alkali terbent"k karena adanya proses oksidasi dekarboksilasi protein membent"k amina yang bersifat alkali dengan adanya phenol red maka terbent"k /arna merah# 5sherihia oli memfermentasi gl"kosa# s"krosa dan laktosa yang bersifat asam sehingga terbent"k /arna k"ning pada dasar dan lereng dan menghasilkan gas% (,smil# 2011* b% +"lf"r !ndol Motility (+!M* Media +!M adalah perbenihan semi solid yang dapat dig"nakan "nt"k mengetah"i pembent"kan H2+# indol dan motility dari bakteri% 5sherihia oli membent"k indol dan motility positif% (,smil# 2011*
% Citrate 'akteri yang memanfaatkan sitrat sebagai s"mber karbon akan menghasilkan natri"m karbonat yang bersifat alkali# dengan adanya indiator brom thymol bl"r menyebabkan ter$adinya /arna bir"% &ada 5sherihia oli tidak memanfaatkan sitrat# sehingga pada penanaman media sitrat hasilnya negatif% (,smil# 2011* d% ?rea 'akteri tertent" menghidrolisis "rea dan membent"k ammonia dengan terbent"knya /arna merah karena adanya indiator phenol red# 5sherihia oli pada media "rea memberikan hasil negatif karena 5sherihia oli tidak menghidrolisis "rea dan tidak membent"k ammonia% (,smil# 2011* e% Metil ed Media ini bert"$"an "nt"k mengetah"i kemamp"an dari beberapa bakteri yang memprod"ksi asam sebagai hasil fermentasi dari gl"kosa dalam media ini# yang dapat dit"n$"kkan dengan penambahan indiator metal red% 5sherihia oli memprod"ksi asam k"at sehingga pada penambahan lar"tan metal red akan terbent"k /arna merah% (,smil# 2011* f% @oges proska"er 'akteri tertent" dapat memprod"ksi aetyl methyl arbinol dari fermentasi gl"kosa yang data diketah"i dengan penambahan lar"tan oges proska"er# 5sherihia oli tidak memprod"ksi aetyl metal arbinol sehingga penanaman pada media ini memberikan hasil negatif% (,smil# 2011* g% >ermentasi karbohidrat Media ini berf"ngsi "nt"k melihat kemamp"an bakteri memfermentasikan $enis karbohidrat# $ika ter$adi fermentasi maka terlihat /arna k"ning karena per"bahan pH men$adi asam% 5sherihia oli memfermantsi gl"kosa men$adi asam dan gas# memfermentasi laktosa# s"krosa# maltosa dan mannitol dengan ata" tanpa gas% (,smil# 2011* Keterangan ini memberikan ara-ara dasar "nt"k membedakannya dengan yang lain% Habitatnya pada lingk"ngan aA"atik# tanah# makanan# air seni dan tin$a (&elar# 1987*%
5sherihia oli dapat dim"snahkan dengan pendinginan (s"h" es* dalam /akt" 120 menit% (;ais dkk%# 1987*% &ada media differential dan selektif (+oemarno# 2000*: 'lood ,gar &late : Koloni sedang# ab" B ab"# smooth# keeping# haemolytis ata" anhaemolytis Ma Conkey : Koloni sedang# merah bata ata" merah t"a# metalli# smooth# keeping ata" sedikit emb"ng 5M' ,gar : Koloni sedang# smooth# keeping kehi$a" B hi$a"an# metali 5ndo ,gar : Koloni besar# b"lat# smooth# mera B merah t"a# metali (+oemarno#2000*% 5sherihia oli mer"pakan bagian dari mikrobiota normal sal"ran penernaan% 5sherihia oli dalam "s"s besar bersifat patogen apabila melebihi dari $"mlah normalnya% 6al"r-gal"r
tertent"
mamp"
menyebabkan
peradangan
selap"t
per"t
dan
"s"s
(gastroenteritis*% 'akteri ini men$adi patogen yang berbahaya bila hid"p di l"ar "s"s seperti pada sal"ran kemih# yang dapat mengakibatkan peradangan selap"t lendir (sistitis* (&elar dan Chan# 1988*% Alat, Bahan, dan Metode Alat
Ca/an petri# ink"bator# ose b"lat dan ose $ar"m# pembakar spirt"s# rak tab"ng# tab"ng d"rham# tab"ng reaksi# tiss"e% Bahan
,lkohol )0=# kertas label# KH .0=# Mac Conkey Agar (MC,*# media g"la-g"la air (gl"kosa# laktosa# maintol# s"krosa*# media M ( Methyil Red *# media +!M (Sulfit Indol Motility*# media +C (Simmons Citrate*# media "rease# media @& (Voges Proskauer *# reagen Koaks# reagen M#sampel "rin# Triple Sugar Iron Agar (<+!,*# D-naftol% Metode
Metode yang dig"nakan pada praktik"m ini adalah metode streak plate# metode agar miring goresan# metode t"s"kan agar tegak# dan metode ad"kan pada medi"m agar air%
Hasil Pengamatan
Hari &ertama : !solasi pada media MC Hari Ked"a : Tael !" Hasil !solasi pada Media +elektif
Eo% 1 2 3 .
Ciri Koloni : 'ent"k ?k"ran Farna 5leasi &inggiran
7
Ciri khas lainnya
Media : MC '"lat 1-3mm Merah m"da emb"ng rata &erm"kaan kering
Hari Ketiga : Tael #" Hasil &engamatan ?$i 'iokimia
Eo% 1
Eama ?$i 6"la-g"la air : 6l"kosa
aktosa
Manitol
+"krosa 2
M
3
@&
.
+!M
<+!,
&engamatan
Hasil (G-*
fermentasi : ter$adi per"bahan /arna media dari "ng" men$adi k"ning% 6as : menghasilkan gelemb"ng% fermentasi : ter$adi per"bahan /arna media dari "ng" men$adi k"ning% 6as : menghasilkan gelemb"ng% fermentasi : ter$adi per"bahan /arna media dari "ng" men$adi k"ning% 6as : menghasilkan gelemb"ng% fermentasi : tidak ter$adi per"bahan% 6as : menghasilkan sedikit gelemb"ng% ter$adi per"bahan /arna media dari k"ning men$adi merah setelah ditambahkan reagen M%
G
G
G
G G
-
G G G
7 )
+C ?rease
;asar : ber"bah dari merah men$adi k"ning H2+ : tidak terbent"k /arna hitam 6as (G* : terbent"k gas
G -
Pemahasan
&ada pengamatan ini dig"nakan berbagai maam medi"m yait" medi"m tegak# medi"m air# medi"m agar miring# dan medi"m a/an petri% Masing-masing medi"m yang dig"nakan memberikan hasil yang berbeda-beda /ala"p"n spesies yang dig"nakan sama% Hal terseb"t berkaitan dengan iri khas dan sifat masing-masing bakteri dan medi"mnya# medi"m yang lembab memiliki bent"k koloni yang berbeda dengan medi"m kering (Clifton#198*% &ada pengamatan koloni bakteri pada medi"m MC dengan metode streak plate didapatkan koloni dengan bent"k b"lat# "k"ran 1-3mm# /arna koloni merah m"da dengan eleasi emb"ng dan pinggiran koloni yang rata serta perm"kaan koloninya kering% Koloni E. coli pada media Ma Conkey : koloni sedang# merah bata ata" merah t"a# metalli# smooth# keeping ata" sedikit emb"ng (+oemarno# 2000*% &ada pengamatan medi"m air g"la-g"la laktosa# gl"kosa# manitol# /arna akhir medi"m adalah k"ning dan terbent"k gas sehingga men"n$"kkan hasil positif# sedangkan pada medi"m s"krosa /arna akhir pada medi"m tidak ter$adi per"bahan /arna tetapi hasilnya positif karena terbent"k gas dari tab"ng d"rham% ,danya per"bahan /arna pada medi"m yang berisi biakan bakteri sampel yang memb"ktikan bah/a bakteri terseb"t memp"nyai enim "nt"k meng"bah str"kt"r g"la men$adi prod"k fermentasi% Media g"la-g"la berf"ngsi "nt"k melihat kemamp"an bakteri memfermentasikan $enis karbohidrat# $ika ter$adi fermentasi maka terlihat /arna k"ning karena per"bahan pH men$adi asam% Escherichia coli memfermantsi gl"kosa men$adi asam dan gas# memfermentasi laktosa# s"krosa# maltosa dan mannitol dengan ata" tanpa gas% (,smil# 2011* &ada medi"m M setelah ditambahkan reagen M /arna akhir medi"m men$adi merah% Hal ini men"n$"kan adanya fermentasi asam amp"ran% Media M bert"$"an "nt"k mengetah"i kemamp"an dari beberapa bakteri yang memprod"ksi asam sebagai hasil fermentasi dari gl"kosa dalam media ini# yang dapat dit"n$"kkan dengan penambahan indiator metal red% Escherichia coli memprod"ksi asam k"at sehingga pada penambahan lar"tan metal red akan terbent"k /arna merah% (,smil# 2011*
&ada medi"m @& setelah ditambahkan D-naftol dan KH .0= tidak terbent"k inin merah keoklatan men$adi "ng"# hal ini men"n$"kan bah/a bakteri ini tidak dapat memfermentasikan 2#3-b"tanadiol% 'akteri tertent" dapat memprod"ksi aetyl methyl arbinol dari fermentasi gl"kosa yang data diketah"i dengan penambahan lar"tan oges proska"er# Escherichia coli tidak memprod"ksi aetyl metal arbinol sehingga penanaman pada media ini memberikan hasil negatif% (,smil# 2011* &ada pengamatan "$i +!M bakteri ini tidak menghasilkan gas Hidrogen +"lfit (H 2+* karena tidak terbent"k /arna hitam% Hasil "$i indol positif karena terbent"k lapisan (inin* ber/arna merah pada perm"kaan# artinya bakteri ini membent"k indol dari tryptopan sebagai s"mber arbon# yang dapat diketah"i setelah menambahkan reagen koaks% Hasil "$i mortility positif ter$adi pergerakan bakteri ke perm"kaan karena pada bekas t"s"kan tidak terdapat adanya bakteri% 'akteri E. coli motil (sel-selnya peritrik"s# yait" flagela seara merata tersebar disel"r"h perm"kaan sel* dan ada $"ga yang non motil (&elar# 1987*% Media +!M adalah perbenihan semi solid yang dapat dig"nakan "nt"k mengetah"i pembent"kan H2+# indol dan motility dari bakteri% Escherichia coli membent"k indol dan motility positif% (,smil# 2011* +elan$"tnya pada pengamatan medi"m agar miring# pada "$i <+!, didapatkan hasil lereng k"ning# dasar k"ning# H 2+ negatif dan menghasilkan gas% Hal ini men"n$"kan bah/a bakteri terseb"t mamp" memfermentasikan 3 maam g"la yait" laktosa# gl"kosa dan s"krosa sehingga &H nya men$adi asam dan menghasilkan /arna k"ning% Media <+!, terdiri dari 0#1= gl"kosa# 1 = s"krosa# 1 = laktosa% >erri s"lfat "nt"k mendeteksi prod"ksi H ₂+# protein dan indiator phenol red% Escherichia coli memfermentasi gl"kosa# s"krosa dan laktosa yang bersifat asam sehingga terbent"k /arna k"ning pada dasar dan lereng dan menghasilkan gas% (,smil# 2011* &ada "$i +C tidak terlihat adanya per"bahan /arna medi"m dari hi$a" men$adi bir" yang menandakan bah/a bakteri terseb"t tidak mengg"nakan sitrat sebagai sat"-sat"nya s"mber karbon dan energi% 'akteri yang memanfaatkan sitrat sebagai s"mber karbon akan menghasilkan natri"m karbonat yang bersifat alkali# dengan adanya indiator brom thymol bl"r menyebabkan ter$adinya /arna bir"% &ada Escherichia coli tidak memanfaatkan sitrat# sehingga pada penanaman media sitrat hasilnya negatif% (,smil# 2011*
&ada "$i ?rease men"n$"kan hasil negatif karena tidak ter$adi per"bahan /arna dari orange men$adi merah% 'akteri tertent" menghidrolisis "rea dan membent"k ammonia dengan terbent"knya /arna merah karena adanya indiator phenol red# Escherichia coli pada media "rea memberikan hasil negatif karena 5sherihia oli tidak menghidrolisis "rea dan tidak membent"k ammonia% (,smil# 2011* ;ari hasil pengamatan dapat disimp"lkan bah/a bakteri yang diidentifikasi ialah bakteri E. coli karena terdapat kesamaan antara teori dasar dengan hasil pengamatan# $esimpulan
'erdasarkan hasil pengamatan yang telah dilak"kan pada sampel "rin no% 9 didapatkan 100= men"n$"kkan bakteri E. coli% Daftar Pustaka
,smil# 2011# 'akteriologi !!# http:asmil-artihid"p%blogspot%om201103bakteriologi-iiteori-$"r"san-analis%html (diakses 2 I"ni 2013* ;ais# '%;%# % ;"lbeo# H%E 5isen and 6insberg (1987*% Mirobiokogy% 5d% .# ipoott Company# &hiladelphia% !rianto# K# 200)# Mikrobiologi% Iilid 1% 'and"ng: C@% Jra ma Fidya% anin# ! ( 2007* 5sherihia oli% http: /ekipedia%org20080203% ay# 'ibiana F% 199.% ,nalisis Mikroba di aboratori"m%Iakarta: &<% a$a 6rafindo &ersada% &elar# M% I% dan Chan# 5% C% +% 1988% ;asar-dasar Mikrobiologi% ?! &ress% Iakarta% &elar# M% 1987% ;asar-;asar Mikrobiologi !% 5rlangga : Iakarta%
%ampiran
&amar !" (Kiri* Koloni 'akteri pada media MC% (
+"mber : ;ok"mentasi &ribadi
(a*
(b*
(*
(d*
&amar #" Hasil ?$i 6"la-6"la" (a* 6l"kosa% (b* aktosa% (* Manitol% (d*
+"krosa% +"mber : ;ok"mentasi &ribadi
(a*
(b*
(*
(d*
&amar '" (a* ?$i M# (b* ?$i @ (* ?$i +C# (d* ?$i <+!,
+"mber : ;ok"mentasi &ribadi