UNIVERSIDAD CATÓLICA LOS ÁNGELES DE CHIMBOTE
IV CICLO
ESCUELA PROFESIONAL: Farmacia Y Bioquímica. CURSO: Instrumental Análisis Instrumental CICLO: IV TEMA: Cromatografía en papel. INTEGRANTES:
ANALISIS INSTRUMENTAL INSTRUMENTAL
Bocanegra García Dirse. Gutiérrez Ortiz Melissa. Lozada Castillo Josselyn. Milla Hoyos Carlos Neyra Vargas Luis. Paredes Velásquez Mercedes. Pedreros Cavero Anthony. Quispe Mejía Lilian. Román Hidalgo Ericka Ruiz Rosas Ericka Shijap Romero Belmer. Zavaleta Reyes Ayul.
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La
cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. La separación se realiza en función de la afinidad de los solutos con las dos fases, las más solubles en agua se quedarán cerca del punto donde se aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más solubles en el disolvente llegarán más lejos. Las sustancias separadas se identifican mediante diversos procedimientos físicos o químicos. La cromatografía en papel es una técnica utilizada para análisis inorgánico cualitativo, permite llevar a cabo la separación e identificación de iones, trabajando con cantidades mínimas de sustancia. Pertenece al tipo de “Cromatografía de partición” se fundamenta en que las sustancias problema, pueden tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel “fase estacionaria” generalmente en agua, la fase móvil constituida generalmente por una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos de cromatografía, la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel invertido), radial y de separación de zonas y sectores manchas características sobre el papel, generalmente, estas no son coloreadas y se revelan con una lámpara fluorescente, los contornos se marcan con lápiz. Como medida en cromatografía sobre papel se emplea el Rf (Retention factor ), el cual se define como el cociente de dividir el recorrido de la sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media desde el origen hasta el frente del disolvente ( S ). = [1] En la cromatografía en papel se utiliza como fase estacionaria una hoja de papel de celulosa de elevada pureza recubierta de una capa de agua asociada a las fibras de celulosa. La fase móvil, en la que irá disuelta la muestra, se forma por disolventes cuya naturaleza se elige en función de los componentes que se pretenden separar.
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Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen.
Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Analizar la influencia del solvente en la separación cromatografía.
Observar las diferentes características de la placa en la cromatografía.
Medir la distancia recorrida por el absorbente en el papel.
Calcular los RF para cada una de las sustancias separadas.
Separar los componentes de una mezcla.
La cromatografía en papel es a técnica de separación de identificación de sustancias químicas en la cual la fase estacionaria es el gua absorbida y adsorbida que hay en el papel (papel filtro hecho de celulosa) y el soporte es el mismo papel. La fase móvil es una solución que consiste en un disolvente de una mezcla de varios líquidos que contiene agua. La palabra cromatografía proviene de kromatos (color) y graphos (escrito). El nombre de la técnica deriva de los primeros ensayos d los que se separaron pigmentos de plantas como la clorofila, los cuales tienen colores definidos. Estos primeros pasos los dio el botánico Ruso de origen Italiano
Mijail Tswett cuando separo diversos
pigmentos en las plantas.
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Papel filtro de 22cm. de lardo por 13cm.de ancho
Horno de Secado
Lápiz
Capilares (4 unidades)
Pinza
Rociador para cromatografía
Tubo de ensayo
Cubeta para cromatografía
Solución de Fenol
Ninhidrina
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Alanina Glutamato Acido malónico Succinato de sodio al 0.2M
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En un papel filtro de 22 x 13 cm, trazamos una línea superior a 2.5 cm (que será nuestra línea de referencia del corrido cromatográfico), en la parte inferior trazamos otra línea a 1.5 cm de la base (en donde colocaremos las muestras) ubicamos las muestras de Alanina y Glutamato en ambos extremos.
Luego enrollamos el papel y lo grapamos en ambos extremos sin sobreponerlo (sino juntándolo solo en los extremos) y lo ponemos sobre la solución de fenol con agua.
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Luego esperamos que las muestras migren hasta la línea de referencia y de ahí ponemos a secar en la estufa a 80° C por 1 minutos, luego retiramos.
Una vez secado el papel procedemos a realizar el revelado con la sustancia reveladora: Ninhidrina, rociándola suavemente hasta cubrir el papel hasta donde se ha realizado la migración. Después de esto volvemos a poner a secar en la estufa a 80° por 10 minutos.
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Luego del segundo secado procedemos a retirar las grapas del papel y observaos las manchas que se han producimos y procedemos a realizar el barrido cromatográfico utilizando la formula s iguiente:
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RF= 4.8 =0.50 9.5
RF= 2.5 = 0.26 9.5
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De acuerdo con los resultados obtenidos, llegamos a la conclusión que el aminoácido como la Alanina tiene un RF de 0.50 y el Glutamato tiene un RF de 0.26, por lo tanto afirmamos que el desplazamiento es mayor en la Alanina, lo que
nos quiere decir que tiene un menor peso
molecular, al contrario del Glutamato, eso nos quiere decir que su desplazamiento es menor por poseer mayor peso molecular y que las soluciones no se rebelan ante la ninhidrina por no ser aminoácidos.
http://www.slideshare.net/honey61187/cromatografa-de-papel#btnNext
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