ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
INFORME: GUÍA DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA HUMANA
ASIGNATURA
: Mic icrrob obiiol olog ogíía Hum uman anaa
DOCENTE
: Lic. Lic. Mari Marioo Mor Moren enoo Man Manti till llaa
ALUMNO
: Aycach cachii Inga Inga Róm Rómul uloo
CICLO
: 2008 - I
Lambayeque, 15 de setiembre de 2008.
PRACTICA Nº 01 Pasos Fundamentales en el Examen Microbiológico de Muestras Clínicas Observaciones:
Muestra: Orina Observaciones: Pseudohifas de levaduras.
Muestra: Secreción vaginal Observaciones: Bacilos Gram (+), bacilos de Doderlein.
Muestra: Secreción de oído Observaciones: Bacilos Gram (+) y (-), células epiteliales.
Muestra: Secreción uretral Observaciones: Cocos Gram (+) dentro de macrófagos, PMN.
Muestra: Esputo Observaciones: Partes de hifas, células epiteliales.
Muestra: Pústula Observaciones: PMN, macrófagos, cocos Gram (+) dentro de macrófagos
PRACTICA Nº 02 Cultivo de Secreción de Heridas Resultados: -
Toma de muestra:
-
Frot Frotis is-t -tin inci ción ón Gram Gram:: prese presenc ncia ia de PMN, PMN, bacil bacilos os Gram Gram ( - ), soli solita tari rios os y de a dos.
-
Crecim Crecimien iento to en en caldo caldo:: Pelíc Película ula,, turbi turbide dezz y sedi sedimen mento. to. Crecimien Crecimiento to en en agar agar sangre: sangre: Colonias Colonias oscuras, oscuras, bordes bordes irreg irregular ulares, es, aplana aplanadas, das, pigmentación oscura, olor característico (a frutas). Presencia de hemólisis.
Sembrar
Agar Sangre
Agar Sangre después de 24 horas
-
Pruebas bio bioquímicas: o Citrato: (+) o TSI: k/k -,-
Crecim iento en caldo -
Antibriograma: Antibiótico
Diámetro de halo (en mm)
Resultado
Amoxicilina (AXA) Gentamicina (GM10) Amikacina (AKA) Cefuroxima (XMC) Ciprofloxacino (CIP)
11 20 26 33
Resistente Sensible Sensible Resistente Sensible
Por lo tanto, con lo datos obtenidos por las pruebas realizadas, se pudo identificar a: Pseudomonas aeruginosa
Discusión: - P. aeruginosa presenta un crecimiento característico, tanto en la morfología de la colo coloni nia, a, su crec crecim imie ient nto o en medi medio o líqu líquid ido, o, como como su resis esiste tenc ncia ia-sensibilidad a determinados antibióticos. Así, podemos ver que en cuanto a su
-
-
colonia, la presencia de pigmentación (que se observa por colonias oscuras en agar sangre por la pigmentación verdosa que presenta la piocinacina secret secretada ada)) es una una caract caracterí erístic stica a típica típica de esta esta especi especie, e, además además de ser grandes (> a 5 mm), de bordes irregulares, aplanadas y que despiden un olor característico a frutas por la producción del 2-aminocetofenona y presencia de hemólisis. En cuant cuanto o su resis resiste tenc ncia ia-s -sen ensi sibi bililida dad d a los los anti antibi biót ótic icos os:: la Pseudomona es naturalmente resistente a los β-lactámicos y sus derivados, por tanto es natural su resistencia, en el antibiograma, a la amoxicilina y a cefuroxima (cefalosporina). Pero es sensible a antibióticos como gentamicina, amikacina (aminoglucósidos) (aminoglucósidos) y al ciprofloxacino (quinolona). Si se diera diera tratam tratamien iento to contra contra la bacte bacteria ria aisl aislada ada,, lo más recom recomend endabl able e sería sería usar ciprofloxacino, ya que presentó mayor halo de inhibición que las demás y por tanto es más sensible. Por último, último, por por el tipo de de muestra muestra (secr (secreción eción de herid herida a quirúrg quirúrgica) ica) y la zona zona de donde fue aislada (zona abdominal), una de las bacterias se esperaba aislar era Pseudomonas, ya que esta es típica de este tipo de muestras.
Referencias: -
García R., J. A. y Juan, J. Picazo. 1996. Microbiología Médica. Tomo II: Microbiología Clínica. Edit. Mosby. Mosby. Madrid.
-
J. Ryan, Ryan, K. y Ray, Ray, C. Georg George. e. 2005. 2005. Sherr Sherris: is: Microb Microbiol iologí ogía a Médica Médica – Una Una Intr Introd oduc ucci ción ón a las las enfe enferm rmed edad ades es infe infecc ccio iosa sas. s. 4º Edic Edic.. Mc Graw Graw Hill Hill – Interamericana. Mexico D.F.
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W. Koneman, Koneman, E. y otros. 1992. Diagnóstico Microbiológico: Texto Texto y Atlas. Edit. Panamericana. Panamericana. 5º edic. Buenos Aires.
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Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
PRACTICA Nº 03 Cultivo de Secreción Faríngea Resultados: -
Toma de muestra:
-
Frotis-T Frotis-Tinció inción n Gram: Gram: Observa Observación ción de PMN, PMN, cocos cocos Gram (+), dispuesto dispuestoss solos, solos, en parejas o en cadenas de a 3.
-
Crec Crecim imie ient nto o en cald caldo: o: Crec Crecim imie ient nto o punt puntififor orme me,, leve leve turb turbid idez ez en la part parte e superior, resto del tubo transparente.
-
Crec Crecim imie ient nto o en agar agar sang sangre re:: colo coloni nias as punt puntififor orme mess (≤ 2mm) 2mm),, gris grisác ácea eas, s, circulares, bordes enteros, con β-hemólisis manifiesta. Catalasa: negativa
Crecimiento en agar sangre Crecimiento en caldo
-
Antibiograma: Diámetro de halo (en mm)
Antibiótico
Amoxicilina (AXA)
17
Penicilina (PPP)
16
Ciprofloxacino (CIP) Optoquina (OPO) Bacitracina (B) Trimetrop-sulfamet (SXS)
31 23 30
Prueba de Bacitracina
Prueba de susceptibilidad antimicrobiana
Resultado
Ligeramente sensible Ligeramente sensible Sensible Resistente Sensible Sensible
De acue acuerd rdo o a los los resu resultltad ados os obte obteni nido doss en las las prue prueba bass se susc suscep eptitibi bililida daddresistencia a los diversos antibióticos usados, se puede apreciar que la bacteria patógena aislada fue un Streptococcus del grupo B (grupos de Lancefield), entonces un: Streptococcus agalactiae
Discusión: - Entre lo los Streptococcus que producen β-hemólisis se encuentran los del grupo A (Strp. pyogenes ) y los del grupo B ( Strp. agalactiae ), ambos dentro del grupo de los estreptococos piógenos. - La difer diferenc encia ia entre entre ambos ambos es la resist resistenc encia ia a la bacitr bacitraci acina na ([+] ([+] para para grupo grupo A, [-] para grupo B). - Su dif diferencia ent entre ést éstos y Strp. pneumoniae es, además de la hemólisis (β en éstos y α en Strp. pneumoniae ), su resistencia a la optoquina ([+] en éstos y [-] en Strp. pneumoniae ). - La ca característica de de Strp. agalactiae es su sensibilidad a la bacitracina y al trimetrop-sulfamet, trimetrop-sulfamet, además de su β-hemólisis. - La proce procede denci ncia a de la muestr muestra a (secre (secreció ción n farínge faríngea) a) y las caract caracterí erísti sticas cas tanto tanto de la colonia como su tinción Gram, nos hace suponer que sea una bacteria del grupo de los estreptococos, y sus características de sensibilidad a los antibióticos tratados nos demuestran que es un Strp. agalactiae , uno de los agentes causales de la faringitis. - En la prácti práctica ca realiz realizada ada hubo hubo una confu confusió sión n en la identif identifica icació ción n realiza realizada, da, ya que primero se confundió el tipo de hemólisis presentada por las colonias seleccionadas (se confundió con una α-hemólisis, pensándose que era Strp. pneumonie o grupo viridans) viridans) y que eran eran características características del género, género, y luego, no se tuvo en cuenta la prueba con Trimetrop-sulfamet y se interpretaron mal las pruebas de bacitracina y optoquina. - En la la pr práctica se se re reportó Strp. pyogenes , en base a la prueba de bacitracina, ésta, debería ser resistente para Strp. pyogenes (como lo fue con optoquina), pero el tamaño del halo formado fue de 23 mm, lo que nos hace ver que es sensible, lo que es característico de Strp. agalactiae .
Rojas, N.; E. Chaves y García, F. 2006. Bacteriología Diagnóstica. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. pp 83.
Referencias: -
W. Koneman, Koneman, E. y otros. 1992. Diagnóstico Microbiológico: Texto Texto y Atlas. Edit. Panamericana. Panamericana. 5º edic. Buenos Aires.
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Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
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García R., J. A. y Juan, J. Picazo. 1996. Microbiología Médica. Tomo II: Microbiología Clínica. Edit. Mosby. Mosby. Madrid.
PRACTICA Nº 04 Cultivo de Esputo Resultados: -
Toma de muestra:
-
Frotis-Tinción Gram: Bacilos Gram (-), cocos Gram (+), células epiteliales, PMN.
-
Crecimiento en caldo: Turbidez y sedimento, ligera pigmentación oscura. Crecimiento en agar sangre: Colonias oscuras, bordes irregulares, aplanadas, pigmentación oscura, olor característico (a frutas). Presencia de hemólisis.
-
-
Pruebas bioquímicas: o o
-
Citrato: (+) TSI: k/k -,-
Antibriograma: Antibiótico
Diámetro de halo (en mm)
Resultado
Amoxicilina (AXA) Gentamicina (GM10) Amikacina (AKA) Ciprofloxacino (CIP) Cefotaxima (CTX)
19 25 42 25
Resistente Sensible Sensible Sensible Sensible
De acuerdo con los resultados obtenidos, logramos aislar (de la muestra de esputo BK [-]):
Pseudomonas aeruginosa
Discusión: -
-
Aunque en las muestras de esputo es más común el aislamiento aureu s , o algún tipo de bacterias Gram (+), como por ejemplo S. aureus de estreptococos, o, en el mejor de los casos, bacterias a na n a er e r ob o b ia i a s o f lo l o ra r a a co c o mp m p añ a ñ an a n te t e ( si s i s e r ea e a lil i z ó m al a l a t om om a d e muestra); P. aeruginosa , es también una bacteria que podría ser hallada en este tipo de muestras, debido a su ubicuidad en todo tipo de medios y su capacidad de colonizar muchas zonas del cuerpo, y en este caso, de colonizar para causar daño. S i s e l e t ra r a ta t a ra r a d e d ar ar t ra r a ta t a mi m i en en to t o a e st st a p er er so so na n a c on o n tr t r a P. aeruginosa , el antibiótico de elección sería una quinolona, es este caso el ciprofloxacino, que demostró tener en el antibiograma una gran actividad contra esta bacteria.
Referencias: -
García R., J. A. y Juan, J. Picazo. 1996. Microbiología Médica. Tomo II: Microbiología Clínica. Edit. Mosby. Mosby. Madrid.
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Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
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W. Koneman, Koneman, E. y otros. 1992. Diagnóstico Microbiológico: Texto Texto y Atlas. Edit. Panamericana. Panamericana. 5º edic. Buenos Aires.
PRACTICA Nº 05 Baciloscopía y Cultivo de BAAR Resultados: -
Toma de muestra:
-
F ro r o tit i ss - tit i nc n c i ón ón G ra r a m: m : s e r ea e a lil i za z a e n b as a s e a l a t in i n ci c i ón ó n d e Z ie i e hl hl Neelsen, Neelsen, se observaron observaron en la muestra muestra muy pocos bacilos bacilos (1 – 10 por campo) y algunas células epiteliales (<10). Calificando a la muestra en base a la cantidad de bacilos por campo sería: Bacilos/campo = ++
Proceso de tinción de Zielh Neelsen
Observación baciloscopía – coloración Zielh Neelsen
-
Luego se sembró en el medio Ogawa, en base a la técnica de Petroff modificada, realizada en la práctica. Pasadas Pasadas las 3 semanas, se empezó empezó a observar el crecimient crecimiento o de las colonias características en el medio Ogawa. Pasadas las 4 semanas se observó la morfología típica de las coloni colonias as de Mycobacterium ; é st s t as a s s on o n c ol o l on o n ia i a s a ma m a ri r illl l en e n ta ta s a cremosas, duras, brillantes, de bordes irregulares. Pasado más tiempo, las colonias perdieron su color y se volvieron opacas y se agregaron en forma de “migas de pan”.
Siembra en medio Ogawa, incubación a 37 ºC x 28 a 35 días
Crecimiento característico en medio Ogawa
Discusión: -
-
P ar a r a l a d et et ec e c ci c i ón ó n d e Mycobacterium p or o r b ac a c ili l os o s co c o pí pí a e s m u y importante la buena toma de muestra. Otro aspecto importante impor tante se basa en la buena tinción a realizarse realizarse ( fif ija j a ci c i ón ó n d e l a m ue u e st s t ra r a , c ol o l or o r ac a c ió i ó n e n s í) í ) y t am a m bi b i én é n h ay a y q ue ue c al a l ifif ic i c ar ar l a m ue u e st s t ra r a . U na n a b ue ue na n a m ue ue st s t ra r a d eb eb e t en e n er e r p oc oc a o ninguna célula epitelial. Otro factor que influye en la detección de bacilos tuberculosos es la concentración de estos en la muestra. E n l a p rá rá ct ct ic ic a r e al al iz i z a da da s e u titi lili zó zó u n m ét ét od od o n u ev ev o ( pa pa ra ra nosotros), en la que no se centrifugó la muestra para concentrar las estructuras bacterianas ni tampoco se neutralizó el pH de la
muestra para su siembra. Aquí se pudo observar que el medio Ogawa Ogawa es más efectivo efectivo para la siembra de este tipo de bacterias bacterias exigentes exigentes ya que, a diferencia diferencia del medio Lowestein Lowestein Jensen, este tiene glicerina y glutamato de sodio. Referencias: -
W. Koneman, Koneman, E. y otros. 1992. Diagnóstico Microbiológico: Texto Texto y Atlas. Edit. Panamericana. Panamericana. 5º edic. Buenos Aires.
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Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
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Ministerio de Salud Pública. 1999. Procedimiento para el examen de esputo, cultivo e identificación de cepa. Programa Nacional de Tuberculosis. Tuberculosis. MINSAP. MINSAP. La
Habana.
Obtenido
el
15
de
setiembre
de
http://aps.sld.cu/bvs/materiales/programa/tub http://aps.sld.cu/bvs/materia les/programa/tuberculosis/anexo1.p erculosis/anexo1.pdf df
2008
en
PRACTICA Nº 06 Urocultivo Resultados: -
Toma de muestra:
-
O bs b s er e r va v a ci c i ón ó n d e s ed e d im i m en e n to t o : b ac a c te t e ri r i as a s – v ar a r io i o s p or o r c am a m po po , n o presencia de leucocitos, varios piocitos por campo (++), células epiteliales escasas, hematíes de 0 – 1 por campo.
-
Crecimiento en caldo: Turbidez y sedimiento. Recuento (conteo de colonias) en agar Tripticasa soya: 684 UFC.
-
C re r e ci ci mi m i en e n to t o e n a ga ga r M cC c C on o n ck ck ey e y : c ol ol on o n ia ia s l ac ac to t o sa s a ( +) + ) , c on on precip precipitad itado o alrede alrededor dor de la coloni colonia, a, grande grandes, s, bordes bor des enter ent eros, os, brillantes, semielevados.
A. Mc Conckey para aislamiento del patógeno
TSA para conteo de colonias -
Pruebas bioquímicas: o o o o o
-
Citrato (+) Indol (-) VP (-) TSI → A/A ++, LIA (+)
Antibiograma: Antibiótico
Diámetro de halo (en mm)
Resultado
Amoxicilina (AXA) Cefuroxima (XMC) Cefotaxima (CTX) Amikacina (AKA) Gentamicina (GM10) Trimetrop-sulfamet (SXS)
30 36 29 23 -
Resistente Sensible Sensible Sensible Sensible Resistente
D e a cu c u er er do d o c on o n l os os r es es ul u l ta t a do do s o bt bt en e n id id os os a b as as e d e l as a s p ru ru eb eb as as b io io qu qu ím ím ic i c as as y l as as p ru ru e ba ba s d e r es es is is te te n ci ci aa- su su sc sc e pt pt ib i b i lili da da d a l os os antibióticos, logramos aislar: Klebsiella ozaenae
Discusión: -
-
-
Las Entero Enterobac bacter terias ias son la princi principal pal causa causa de las infecc inf eccion iones es u ri ri na n a ri ri as a s . D e é st s t as a s , l as as p ri ri nc nc ip i p al al es e s s on on E . c ol o l i,i , K le le bs b s ie ie lll l a, a, Proteus, Enterobacter, Citrobacter. En la presente práctica, la gran mayoría de los grupos de práctica aislaron enterobacterias, lo que demuestra la elevada prevalencia de estas bacterias en este tipo de infecciones. E n e st s t e c as as o, o , h ay a y b ac ac te t e ri ri as a s p oc oc o c om o m un un es e s q ue u e p ue u e de de n s er er aisladas, p. ej. Pseudomonas, mas característicos de infección urinaria intrahospitalaria.
Referencias: -
Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
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García R., J. A. y Juan, J. Picazo. 1996. Microbiología Médica. Tomo II: Microbiología Clínica. Edit. Mosby. Mosby. Madrid.
PRACTICA Nº 07 Cultivo de Exudado Uretral Resultados: -
Toma de muestra:
Toma de muestra - mujer - Examen directo:
Toma de muestra - hombre
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A l n o p od od er e r r ec e c ol o l ec e c ta t a r l a m ue u e st s t ra r a n ec e c es e s ar a r ia i a p ar a r a l a p rá r á ct c t ic ic a correspondiente, no se lo logró realizar ningún aislamiento. Las muestras para esta práctica, fueron por lo demás escasas.
Referencias: -
Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
PRACTICA Nº 08 Cultivo de Secreción Vaginal Resultados:
Examen directo:
Células claves – “Clue cells” -
En esta práctica no se llegó a aislar ningún patógeno, ya que se tuvo la muestra necesaria para desarrollar tales procedimientos. Entre los patógenos aislados por otros grupos de práctica estuvo Gardenera vaginalis, caracteristico de las vaginosis.
Referencias: -
Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
PRACTICA Nº 09 Coprocultivo - Enterobacterias Resultados: -
Toma de muestra:
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Examen directo: No realizó. En vez de eso, se observaron las características macroscópicas de las heces. En este caso, la muestra conseguida tenía aspecto pastoso, con moco, color amarillo verdoso. Procedimiento de siembra y aislamiento: Método directo, se sembró y aisló por el método directo, usando agar XLD. Se sembró de la mucosidad. En este método es muy importante la técnica de siembra, para que las colonias que vayan a crecer salgan aisladas y se las pueda identificar con facilidad.
-
Colonia 01: Transparente
-
Colonia 02: Negrita
Pruebas bioquímicas: o o o o o
TSI: K/A, -, ++ LIA: K/K -, ++ Citrato: + VP (-) Indol (-)
LIA
-
TSI
Citrato
Antibiograma: Antibiótico
Diámetro de halo (en mm)
Resultado
Amoxicilina (AXA) Cefuroxima (XMC) Amikacina (AKA) Penicilina (PPP) Trimetrop-sulfamet (SXS)
30 28 30 30
Sensible Sensible Sensible Resistente Sensible
En base a las pruebas bioquímicas realizadas, se logró aislar (solo como género): Salmonella sp.
Discusión: -
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Las Las ente entero roba bact cter eria iass son son las las prin princi cipa pale less bact bacter eria iass caus causal ales es de de las las infecciones intestinales, estando entre ellas las más graves (salmonelosis y shigelosis). Su forma de contagio es muy fácil y muy común en paises subdesarrollados. Ya que es princ principa ipalme lmente nte por contam contamina inació ción n fecal fecal y, al haber haber una mala mala educación sanitaria, ausencia de servicios higiénicos (letrinas adecuadas, falta de agua potable), hace que estos tipos de infecciones sean por lo demás frecuentes. Una Una cara caract cte eríst rístic ica a comú común n es el aumen umento to de la inci ncidenc denciia de esta estass enfermedades enfermedades el épocas de verano, por el mismo motivo de la informalidad en la venta de la comida, refrescos, helados, y otros, preparados con mala higiene o no cuidados correctamente de la contaminación. Los más propensos a adquirir estas infecciones son los niños y las personas de la tercera edad, siendo en ellos también peligrosa por la gravedad que puede acarrear por la deshidratación y perdida de electrolitos que causan. En la mayoría de los grupos de práctica, se logró aislar como “patógeno” a E. coli, siendo necesario, para demostrar su patogenicidad, la realización de otro tipo tiposs de prue prueba bass (sex (sexol ológ ógic icas as p. ej.), j.), para para demo demost stra rarr a las las vari varian ante tess patógenas. La falta de sueros reactivos no permitió identificar de manera específica, los diferentes serotipos patógenos de las enterobacterias aisladas, y en el caso particular de la bacteria aislada por nosotros, no nos permitió identificar más allá del género.
Referencias: -
Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
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W. Koneman, Koneman, E. y otros. 1992. Diagnóstico Microbiológico: Texto Texto y Atlas. Edit. Panamericana. Panamericana. 5º edic. Buenos Aires.
PRACTICA Nº 10 Coprocultivo - Vibrio Resultados: -
Se realizó una practica demostrativa. La muestra facilitada por el profesor del curso. La muestra obtenida fue primero sembrada en caldo peptonado alcalino para su enriquecimiento. En este medio liquido se pudo observar su crecimiento característico: con formación de película.
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Luego se sembró en agar TCBS, donde crecerán colonias características de color amarillo, pequeñas, de bordes enteros y semielevadas. semielevadas.
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De esta se pasó a tubos con TSA, TSI y caldo peptonado. Se realizaron las sgtes. pruebas bioquímicas: o Utilización de azúcares (glucosa, sacarosa, lactosa) o Indol o Stream test o Detección de oxidasa TSI: K/A -,-
INDOL
TSA
Stream test +
Oxidasa (+) -
No se realizó antibiograma. Se demostró V. cholerae, por la presencia de Stream test (+), oxidasa (+), y las características de la colonia.
Discusión: -
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Dentro del alumnado existe una gran confusión a la hora de la identificación de V. cholerae, sobre todo en la realización del Stream test, que se pensaba realizar en placa, pero se reconocio que se realiza in Vitro, sobre una lamina. Existía también confusión en cuanto a la morfología de la colonia, se pensaba que era grande, a lo mucho colonias medianas y mucosas, datos errados que corregimos al observar el crecimiento característico de estas colonias en el agar TCBS.
-
Estos conocimientos son importantes para nosotros, ya que nos ayudarán en la identificación y detección rápida de V. chlolerae de una muestra clínica.
Referencias: -
Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
PRACTICA Nº 11 Cultivo de Anaerobios Resultados: -
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Se utilizó para el aislamiento de anaerobios cualquier tipo de muestra de las ya usadas. En nuestro caso usamos muestras de heces. S e m b r a m os os e n c a l do do t i o g l i c o l a t o e n a n a e r o b i o s i s ( b a j a concentración de O 2 y elevada concentración de CO 2 ) a 37 ºC por 24 h. S e o bs bs er e r va va rá r á c re r e ci c i mi m i en en to t o d e a na na er er ob o b io io s c ua ua nd n d o e l m ed e d io io , lig l i g er e r am a m en e n te t e r oj o j o e n e l f on o n do d o , s e v ue u e l va va t ra r a na n a sp s p ar a r en e n te t e , p or or e l desarrollo de anaerobios que producirán un medio reducido que hará virar al indicador rezarsurina.
Medio Tioglicolato Este medio se usa para determinar el efecto del oxígeno sobre el crecimiento microbiano. Un tubo con medio semisólido contiene Tioglicolato para reducir el potencial redox del medio. Así sólo hay oxígeno en la superficie y no en el resto del tubo. Un indicador redox, resazurina, indica si hay oxígeno (rojo) o no (incoloro). -
-
Luego se paso a agar tanto en agar Mac Conckey como en agar sangre, dándole las mismas condiciones que para los tubos. J un u n to t o c on o n l a m ue u e st s t ra r a s em e m br b r ad a d a e n l os o s a ga g a re r e s u tit ilil i za z a do d o s, s, s e sembró sembró en las ¾ partes de la placa una cepa de E. coli (también (tambi én se podría haber utilizado Klebsiella). É st s t a, a , p or o r u tit ilil i za z a r l a r ut u t a b ut ut an a n od o d ió i ó lil i ca c a , p ro r o du d u ci c i rá r á n e le l e va v a da da s concentrac concentraciones iones de CO 2 , l o c u a l a u m e n ta r á e l m e d io r e d u c i d o d en en tr t r o d e l a p la la ca c a , l o q ue u e e st s t im i m ul u l ar ar á a l c re r e ci c i mi m i en en to t o d e l as as
bacterias anaerobias por encontrar un medio apropiado para su reproducción.
E. coli Anaerobios E. coli -
Se observó la presencia de colonias pertenecientes a bacterias anaerobias.
Discusión: -
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E n l a p ra ra ct ct ic ic a e s m u y t ed ed i os os o e l a is is la la m ie ie nt nt o d e b a ct ct er er ia ia s anaerobias, debido sobre todo al cuidado que ha y que tener, tanto c om o m o p ar a r a c on o n tr t r ol o l ar a r s us u s c on o n di d i ci c i on o n es e s a mb m b ie i e nt n t al a l es e s c om o m o p ar ar a sembrarlas sembrarlas,, ya uqe sobre todo, las anaerobias anaerob ias estrictas, si no se trabaja rápido, se destruyen fácilmente en aerobiosis (al pasarlas de una placa a otra o de un tubo a otro). Sería bueno contar con cámaras de anaerobiosis, para el mejor desarrollo en aislamientos de estos tipos de bacterias. Pero, al no existi exi stirr las posib po sibili ilidad dades es econó económic micas as para para conseg conseguir uir ambien amb ientes tes anóxicos, una buena alternativa (y barata) es la utilizada en la practica. D e e s te te t i po po d e t é c n i ca ca s s e e n c u e n t r a n m u c h o s , q u e s e fundamentan en la relativa anaerobiosis que existe en el fondo de un tubo con medio líquido o semisólido. En algunos se agrega un medio más denso para aumentar la anaerobiosis, p. ej, el agregar aceite en la parte superior predispone a la parte inferior a un ambiente reducido y anaerobio. En la practica solo se pudo llegar al aislamiento primario, ya que no se contó con los medios apropiados para poder tratar a las basterias anaerobias aisladas en las placas respectivas.
Referencias: -
Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf
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W. Koneman, Koneman, E. y otros. 1992. Diagnóstico Microbiológico: Texto Texto y Atlas. Edit. Panamericana. Panamericana. 5º edic. Buenos Aires.
PRACTICA Nº 12 y 13 Técnica de Hemocultivo y Inmunocromatografía -
Estas practicas solo fueron demostrativas. Es estas se pudo observar:
INMUNOCROMATOGRAFÍA Funndamento:
Reactivos y materiales utilizados:
Prueba rápida para VIH ½:
SUERO REACTIVO Prueba rápida para HB AgS:
SUERO NO REACTIVO
HEMOCULTIVO Materiales necesarios para un hemocultivo:
Medios para hemocultivo
Discusión: -
La falta de estos materiales en el laboratorio para desarrollar las pruebas es un factor limitante en el aprendizaje. Aunque son materiales costosos, lo visto en práctica nos sa una perspectiva de los métodos utilizados en clínica, y sobre estos dos métodos tan usados y de los cuales, por el momento, solo debemos observar como se realizan.
Referencias: -
Roja Rojas, s, N.; N.; E. Chav Chaves es y Garc García ía,, F. 2006 2006.. Bact Bacter erio iolo logí gía a Diag Diagnó nóst stic ica. a. Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología. Obtenido el 21 de enero de 2008 en http://d.scribd.com/docs/1v6kwqatosqmzff93vf.pdf