INFORME DE LABORATORIO MICROBIOLOGIA PRACTICA 1 PRESENTADO POR: María Nelcy León Ramírez 28271828 Cod: 28271828 Diana Yaneth Villamizar 1098623003 Cod: 1098623003 Diego Alexander Rodríguez Cod:1098626229 Diana santos 90082650414 Cod: 90082650414 Blanca Luz Urrego Piedraita 60351225 Cod: 60351225
PRESENTADO A: Ludy Janeth Mendoza
Universidad Nacional Abierta y a Distancia (UNAD) Bucaramanga (Abril del 2009)
INFORME DE LABORATORIO Nº 1 MICROBIOLOGIA OBJETIVOS 1. Establecer normas y principios básicos de comportamiento en el laboratorio. 2. Aprender y utilizar los métodos de esterilización disponibles en el laboratorio. 3. Conocer los materiales y equipos utilizados en el laboratorio de microbiología. 5. Aplicar criterios disciplinares para la intervención segura en ambientes de laboratorio.
Cuestionario de entrada 1. ¿Que es bioseguridad? Las normas de bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud y seguridad de las personas que realizan actividades en el laboratorio frente a riesgos procedentes del manejo de agentes biológicos, físicos o químicos, estas normas de bioseguridad están destinadas a reducir el riesgo de transmisión de microorganismos de fuentes reconocidas o no reconocidas de infección en Servicios de Salud vinculadas a accidentes por exposición a sangre y fluidos corporales.
2. ¿Cuáles serían para usted las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología? Uso adecuado de materiales. Uso de dotación: bata, cofia y gafas. No ingerir alimentos, bebidas, no fumar en el área de laboratorio. Mantener el área de trabajo organizada
3. ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud?
Tener cuidado con los materiales inflamables como alcohol etílico evitando contacto con mechero. Manipular correctamente el mechero para evitar quemaduras Manipular cuidadosamente las sustancias químicas evitando el contacto con los ojos, se recomienda el uso de gafas. Lavar muy bien las manos para evitar irritaciones por sustancias, en caso de sufrir de alergias utilizar guantes quirúrgicos. Evitar distracciones puesto que en un descuido, se nos puede partir algún elemento ocasionando cortaduras.
4. Mencione las clases de esterilización, cuales son los agentes de esterilización con más uso en el laboratorio; en que consiste cada uno de ellos y para qué materiales se utilizan. 1. Calor seco: se efectúa en estufas de aire seco u hornos Pasteur y se manejan temperaturas entre 160 – 180°C, por un espacio de dos horas aproximadamente. Este método se utiliza para esterilizar el material de vidrio generalmente: tubos, cajas de Petri, pipetas y erlenmeyers. No se debe emplear para esterilizar medios de cultivo o agua pues se evaporan hasta secarse. Previo al horneado el material de vidrio se recubre con papel Kraf y se sella con cinta indicadora de esterilidad, una vez realizado el proceso de esterilización se revisa la cinta la cual debe tornarse de color café oscuro lo que indica una correcta esterilización. El calor seco también se utiliza para secar material de vidrio como tubos y pipetas, este material se deja en el horno por dos horas a 60°C. Las láminas y laminillas se secan con un trapo suave. Los demás materiales se secan a temperatura ambiente.
2. Calor húmedo en autoclave: se utiliza para esterilizar medios de cultivo preparados, escobillones, gasas entre otros. Adicionalmente se tiene otra autoclave para descontaminar cultivos antes de ser desechados. La autoclave es un recipiente en el que se consigue exponer el material a esterilizar a temperaturas superiores a la de ebullición del agua, gracias al aumento de la presión. El autoclave se opera a presión de 15 lb. Y a
121°C. El tiempo de exposición depende del material y volumen que se esterilice, pero en general esta comprendido entre 15 y 30 minutos.
3. Flameado: usado principalmente para asas, es otro método de esterilización común usado en el laboratorio. Consiste en poner el asa con la cual se va a hacer el cultivo, durante unos minutos en la llama del mechero.
4. Radiaciones Ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleícos, estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos.
Rayos Ultravioletas: Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilización en quirófanos.
Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energía atómica. Este tipo de esterilización se aplica a productos o materiales termolábiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibióticos vacunas y alimentos
5. Filtración Se usan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado. El tamaño del poro dependerá del uso al que se va a someter las muestras. Los filtros que se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos últimos
están en el límite de separación según el diámetro de poro que se utilice. La filtración se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolábiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftálmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnósticas, radiofármacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibióticos y vitaminas. Existen tres tipos básicos de filtros: -Filtros profundos o Filtros de profundidad: -Membranas filtrantes: -Filtros de huella de nucleación (Nucleoporo)
5. Establezca las diferencias entre esterilización y desinfección. La implica la esterilización destrucción de todos los microorganismos, incluyendo los esporos. La desinfección supone la destrucción de los microorganismos vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de las industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones. La desinfección no mata necesariamente a los esporos.
Tabla 1. Características tipo de Esterilización.
Tipo de Esterilización
Agente de esterilización
Temperatura de uso (si se aplica)
Esterilización con calor seco.
Calor
160- 180 °C
Esterilización con calor húmedo.
Calor
121°C
Radiaciones
Energía(ondas magnéticas)
110 a 115 º C
Equipo utilizado
Material que se puede esterilizar por este método.
Estufas de aire seco u horno Pasteur
Tubos, cajas de Petri, pipetas y erlenmeyers.
Autoclave
Cultivos preparados
Diafragnometro
Materiales termolábiles Como jeringas, sondas. Antibióticos, vacunas, alimentos
Filtros Filtración
Presión Aspiración
- Filtros profundos o Filtros de profundidad -Membranas filtrantes -Filtros de huella de nucleación(Nucleoporo)
Líquidos y gases
En una primera parte se hizo énfasis en las normas de bioseguridad que se deben tener en cuenta en el laboratorio, estas son:
NORMAS GENERALES: El acceso al laboratorio estará limitado solo al personal autorizado. No se debe pipetear con la boca. El personal que trabaje en el laboratorio debe cumplir a cabalidad las normas de bioseguridad. Toda área debe estar marcada con la respectiva señal de riesgo biológico y su nivel de contención. Al ingresar al laboratorio se debe tener en cuenta el debido porte de la bata manga larga, abotonada y limpia, así mismo una vez se ingrese se debe colocar los abrigos libros y demás objetos, en sitios adecuados para evitar un posible accidente y NUNCA sobre los bancos o mesones. Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas durante la sesión de laboratorio para evitar la contaminación por corrientes de aire. Al inicio y término de una práctica se debe limpiar la superficie de trabajo con una solución desinfectante. El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado, durante el trabajo o el término del mismo. Lévese las manos a la hora de entrar y al término de cada sesión de trabajo, secándolos con toallas de papel.
El personal con cabello largo deber recogerlo para trabajar dentro del laboratorio. Así como usar todos los implementos necesarios para la protección según el nivel de riesgo biológico. Durante la práctica no se deben guardar ni consumir alimentos y bebidas dentro del laboratorio. Se debe colocar un calzado adecuado para las prácticas en el laboratorio. Hable en tono bajo y evite al máximo el movimiento dentro del laboratorio. Emplee los equipos según las instrucciones o los procedimientos operativos estandarizados, al igual que emplee los protocolos correspondientes a la practica. El trasporte de materiales o de muestras entre los laboratorios se realizara de manera tal que en caso de caídas no se produzca salpicadura. Todo personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto con materiales potencialmente infecciosos sin la debida protección. Los derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente el supervisor de laboratorio. Se usaran mascaras faciales si existe el riesgo de salpicaduras o aerosoles. Apagar los instrumentos eléctricos antes de manipular las conexiones.
PASOS LLEVADOS A CABO EN LA PRÁCTICA: Una vez ya preparados, se ingresa al área de laboratorio, el tutor nos da las instrucciones y recomendaciones necesarias para llevar a cabo la práctica. Muestra a cada equipo que elementos se usaran durante la práctica, a continuación mostraremos algunos de los elementos utilizados en la práctica.
Cuenta colonias: Se utiliza para observar el número de colonias presentes en la muestra.
Horno microondas para hongos. Se utiliza para esterilizar material de vidrio, por ejemplo, cajas de Petri, matraces, tubos de ensayo, pipetas a través de circulación de aire caliente (calor seco) a temperaturas que varían entre 120 y 180°C por un lapso de tiempo de 20 minutos a 8 horas.
a) b) Figura 1.Horno microondas para Hongos.
Horno microondas bacterias
para
Figura 3.Cuenta Colonias.
Destilador de agua Permite la obtención de agua destilada, es decir, agua a la que se le han eliminado iones e impurezas. Mediante el proceso de destilación el agua es sometida al calor hasta su ebullición para separar sus componentes líquidos, luego sus vapores son recogidos y condensados.
Se afirma que el horno microondas es ideal para esterilizar los implementos de laboratorio, al igual que el horno para hongos, solo que este ataca las bacterias presentes. a) b) Figura 4. Desfibrilador de agua.
a) b) Figura 2.Hono microondas para Bacterias.
Microscopio El microscopio, de micro - (pequeño) scopio y (observar), es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. El tipo más común y el primero que se inventó es el microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico. Que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refrección.
a)
b)
c) Figura 6. Autoclave y olla de Presión.
Balanza: Este un instrumento indispensable en el libatorio para tomar pesos de los diferentes materiales o elementos utilizados en el laboratorio. a) Figura 5.Microscopio.
b)
El autoclave u olla de presión: La autoclave es un recipiente utilizado para esterilizar: medios de cultivo, agua destilada, tierra etc. mediante calor húmedo. El material a esterilizar se expone a temperaturas superiores a la de ebullición del agua, gracias al aumento de la presión. El vapor de agua difunde por ósmosis a través de las esporas coagulando su protoplasma. Generalmente se esteriliza a temperaturas que van entre 107-126°C por un tiempo de 520 minutos con presiones que varían entre 5 y 20 libras por pulgada cuadrada (p.s.i).
a) Figura 7.Balanza.
b)
Cocina eléctrica: Esta es muy importante en el laboratorio puesto que requiere calentar sustancias en el momento de cualquier práctica.
a) b) Figura 8. Cocina Eléctrica.
Incubadora: Permite obtener temperaturas de incubación constante, en procesos como el cultivo de microorganismos y de tejidos, para determinaciones microbiológicas. La limpieza y la desinfección, periódicas y sistemáticas, son recomendables para reducir los riesgos derivados de la contaminación accidental del personal del laboratorio.
que se utilizan en el laboratorio debe anularse la lámpara de la luz.
a) Figura 10.Nevera.
a)
b)
c) Figura 9. Incubadora
Neveras Es necesario un adecuado mantenimiento, limpieza y desinfección para reducir los riesgos asociados a su utilización. Sin embargo, aún en estas condiciones, hay que tener en cuenta lo siguiente: • No deben almacenarse cultivos de microorganismos patógenos por inhalación, en recipientes que no estén convenientemente cerrados. • No deben almacenarse reactivos que contengan compuestos volátiles inflamables (éter etílico, por ejemplo) en neveras que no posean un sistema de protección anti deflagración. • En los aparatos de tipo doméstico
b)
Cámara de flujo laminar Es un receptáculo con una única cara libre (la frontal) que permite el acceso a su interior, donde se localiza la superficie de trabajo. Permite realizar, aislar, manipular cultivos en condiciones de esterilidad. La esterilidad de la zona de trabajo se consigue porque se hace circular a través del interior de la cámara una corriente de aire que previamente ha sido microfiltrada o tratada con luz ultravioleta para eliminar todo agente contaminante.
Figura11. Cámara de flujo Laminar.
Asas bacteriológicas:
Las asas bacteriológicas básicamente son alambres unidos a un mango que permite manipularlas. El alambre puede ser de diferente material, (ferro níquel, nicromo, platino, etc.) y la forma (recta, curva, etc.,)
Las cajas de petri
Figura12.ASAS Bacteriológicas.
Figura 15.Cajas de Petri.
Durante la práctica de laboratorio la tutora nos enseño todos los implementos que necesitaremos para las prácticas, como son:
Pipetas
a) Figura 13. Pipetas.
b)
Tubos de ensayo
a) b) Figura 14.Tubos de Ensayo.
Asas de Hockey Asas rectas Isopos
Una vez familiarizados con los implementos, procedemos a desinfectarlos y lavarlos con jabón e hipoclorito de sodio, teniendo especial cuidado en no maltratar el material (partirlo). Después de lavado el material se secan con papel absorbente el exterior de los implementos. Después de desinfectados procedemos a envolverlos o a empacarlos con papel kraf, los tubos y los frascos se deben tapar la boca con tapones de algodón luego se sella con cinta indicadora de esterilidad o cinta de enmascarar. Se debe tener especial cuidado cuando se envuelven los frascos, los tubos de ensayo y las pipetas, dejando indicado con cinta la boca de estos para cuando sean destapados se evite contaminar. Las cajas de petri se empacan en grupos de cinco, se envuelven con papel kraft y se amarran con cinta de enmascarar.
Se procede a esterilizarlo en el Horno a temperatura de 160 - 180 ºC, esto se hace con la supervisión de la tutora marque y rotule adecuadamente los materiales, estos deben llevar claramente escrito en un lugar visible, el nombre o identificación del grupo de trabajo, el ensayo o experiencia realizada, la fecha.
LABORATORIO 2 PREPARACION Y MANIPULACION DE MEDIOS DE CULTIVO OBJETIVOS Aprender la presentación manipulación de los medios cultivo.
MATERIALES Frasco con medio de cultivo PDA. Frasco de Pires. Balanza. Papel Kraf. Plancha de calentamiento Elemeyer de 100ml. Cinta de indicadores de pH.
PROCEDIMIENTO PDA 39grs -------------1 litro Para preparar 200ml utilizamos 7.8grs.
y de
7.8 grs de PDA + 100 ml de caldo nutritivo. Se revuelve. 100 ml de caldo nutritivo. Se revuelve. Se mide el pH. pH 3.4 se pone a hervir en la plancha de calentamiento. Se baja y se deja enfriar. Se pone a hervir en la olla a presión durante 15 minutos. Se saca y se deja enfriar. Se hecha en la caja de petri previamente marcadas. Se deja cuajar. Se cubre con cinta de enmascarar. Se lleva a la incubadora.
Papel Kraf. Plancha de calentamiento. Elemeyer de 100ml. a) Figura 15.PDA
Cinta de indicadores de pH.
b)
En esta práctica encontramos medios de cultivos simples como son: Leche Sangre diluida Caldo de pollo Agar peptona Papa en trozos Los medios de cultivo mencionados cuales son selectivos para hongos. Figura 16. PDA + Caldo nutritivo.
El pH para bacterias es de 7.5 El pH para hongos es de 5.0
En esta práctica preparamos a) b) Figura 17. PDA agregado a cajas Petri. Tabla 2.Ejemplo análisis medios de cultivo.
AGAR BACTERIOLOGICO MATERIALES Balanza.
Agar bacteriológico Caldo nutritivo Se prepararon un tubo de cada muestra: 1 tubo de agar nutritivos. 2. tubo con caldo nutritivo. 4 cajas de agar nutritivo. 50ml de caldo nutritivo. 400ml de agar nutritivo. 20gr por litro de agar 1000ml por 4gr. PDA medio cultivo para Hongos para hacer 10 cajas con 200ml/39g por litro = 7.8 4gramos de agar / 200ml de agua destilada. El pH para el agar nutritivo es de pH=7. Caldo nutritivo inclinado 10ml en 6 tubos. El agar se llevo al pH=7. Para lograr esto se le agrego 4
gotas de hidróxido de sodio el caldo de papa se filtro.
Agar de Tripticasa de Soja (TSA) Composición:
Triptosa, 15g. Peptona, 5g. Extracto de levadura, 3g. Glucosa, 5g. Cloruro sódico, 5g. Agar, 15g. Agua destilada, 1000 ml.
Figura 18. Agra Bacteriológico.
a)
Caldo Nutriente Composición:
Extracto de carne, 3g Peptona, 5g. Agua destilada hasta 1000 ml
b)
Figura 20. Caldo de pollo (Caldo Nutritivo)
Figura 19.Tubos con Agar nutritivo y caldo nutritivo.
Solución de lugol
Iodo re sublimado, 1g. IK, 2g. Agua destilada hasta 300 ml
CONCLUSIONES
Conocimos las normas de bioseguridad del laboratorio y la importancia de para realizar las practicas satisfactoriamente.
Conocimos los diferentes elementos y materiales utilizados en el laboratorio de microbiología.
Aprendimos a desinfectar materiales de vidrio, manipular y a empacar material para ser esterilizado.
Conocimos los diferentes métodos de esterilización.
Nos mostro la importancia que tienen los micro cultivos y sus diferentes compuestos.
Aprendimos a preparar y manipular los medios de cultivo utilizados en la práctica del laboratorio.
BIBLIOGRAFIA Doctora, Ludy Janeth Mendoza Curso completo contenido en línea Microbiología(Unad)
