LABORATORIO DE LEVADURAS

UNIVERSIDAD METROPOLITANA DE CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS. DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

LABORATORIO DE LEVADURAS 1. Intr Introd oduc ucci ción ón Se denomina levadura a cualquiera de los diversos hongos microscópicos unic unicel elul ular ares es que que son son impo import rtan ante tess por por su capa capaci cida dad d para para real realiz izar ar la descomposición mediante fermentación de divers diversos os cuerpo cuerposs orgáni orgánico cos, s, principalmente los azúcares o hidratos de carbono, produciendo distintas sustancias como anhídrido carbónico o CO2. Por esa razón se han utilizado desde hace miles de años las levaduras que existen en la Naturaleza en la elaboración del pan y de bebidas como el vino y la cerveza. Cuando se elabora el pan el CO2 forma burbujas en la masa, que entonces es más liviana y apetitosa. El vino y la cerveza, en cambio, contienen alcohol que se forma durante la l a fermentación. Las levaduras se reproducen asexualmente por gemación o brotación y sexu sexual alme ment nte e medi median ante te asco ascosp spor oras as o basi basidi dioe oesp spor oras as.. Dura Durant nte e la reproducción asexual, una nueva yema surge de la levadura madre cuando se dan las condiciones adecuadas, tras lo cual la yema se separa de la madr madre e al alca alcanz nzar ar un tama tamaño ño adul adulto to.. En cond condic icio ione ness de esca escase sezz de nutrie nutriente ntess las levadu levaduras ras que son capac capaces es de reprod reproduci ucirse rse sexual sexualmen mente te formarán ascosporas.

2. Objet bjetiv ivos os -

Observ Observar ar leva levadur duras as media mediante nte el el método método de tinc tinción ión simp simple. le. Recono Reconocer cer que que en en un cult cultivo ivo las las bact bacteri erias as se se encue encuentra ntran n vivas vivas y que por lo tanto ocurre muerte y reproducción.

3. Mater ateria iale les s -

Culti ultivvo pu puro de leva levad dura ura Azul de metileno Port Portao aobj bjet etos os y cub cubre reob obje jeto toss Pize Pizeta ta con con agua agua dest destililad ada a Micr icroscopio óptico Asa de inoculac lación ión Mechero

4. Procedim Procedimient iento o expe experime rimental ntal 4.1 Limpiar con cuidado un portaobjetos con etanol. Evaporar el residuo de alcohol del portaobjeto pasando este rápidamente por la llama del mechero. 4.2 Depositar en el portaobjeto una gota de agua destilada. Esterilizar  a la llama del mechero un asa en argolla, dejar enfriar y tomar una pequeña cantidad de muestra de levadura. Emulsionar la muestra en

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la gota de líquido del portaobjeto y extender con el asa. Incinerar el asa después de cada extensión del preparado. 4.3 Secar el portaobjeto pasándolo de manera rápida y repetida por la parte mas alta de la llama del mechero evitando el sobrecalentamiento del portaobjeto. Para esto controlar la temperatura del portaobjeto con el dorso de la mano. 4.4 Poner sobre la muestra una o dos gotas de azul de metileno cuidando recubrir toda la muestra. Dejar actuar de 1 a 2 minutos. Luego lavar el exceso de colorante con agua destilada desde un extremo del portaobjeto, nunca sobre la muestra en si. 4.5 Secar el exceso de agua cuidadosamente con papel absorbente y poner  sobre la muestra un cubreobjeto. 4.6 Observar al microscopio enfocando inicialmente con el lente de aumento menor hasta enfocar, luego aplicar aceite de inmersión y proceder a observar con el lente de inmersión.

5. Índice de viabilidad y gemación El índice de viabilidad se refiere al porcentaje de células vivas de la muestra, esto se puede apreciar viendo el número total de células y el número de células teñidas dentro de un cuadrante. Las células que se tiñen son aquellas q están muertas I.V = número de células teñidas x 100 número total de células

I.V = 100

todas las células muertas

El índice de gemación se refiere al porcentaje de células en proceso de gemación en la muestra, esto se puede apreciar contando el número total de células y el número de células en proceso de gemación. I.G = número de células gemando x 100 I.G = 100 número total de células

cultivo joven