LAPORAN PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI (ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI PADA KULIT)
OLEH
NAMA NIM KELOMPOK KELAS
: MELINA RAHMAN RAHMAN : 16 3145 353 100 : IV (EMPAT) :C
D.IV ANALIS KESEHATAN STIKes Mega Resky Makassar 2016 / 2017
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Penyakit infeksi merupakan salah satu penyakit yang disebabkan oleh mikroorganisme. Mikroorganisme terdapat di mana-mana di lingkungan ini. Sebenarnya seseorang telah terinfeksi sejak lahir, tetapi terinfeksi bagi seseorang tidak selamanya berarti penyakit. Penyakit akan timbul bila mikroorganisme menyebabkan kerusakan fungsional dan struktural. Mikroorganisme tersebut diantaranya adalah bakteri. Penyebaran dan penularan penyakit infeksi pada manusia pada dasarnya terjadi melalui tiga cara, inhalasi, ingesti, dan melalui vektor hewan atau manusia lain. Cara penularan inhalasi melalui sistem respirasi. Cara penularan ingesti, melalui makanan atau minuman yang dimakan. Dalam cara penularan melalui vektor hewan atau manusia lain ada vektor atau tuan rumah perantara bagi mikroorganisme penyebab yang berupa hewan atau manusia sebagai karier sebelum menjalar ke manusia lain dan menimbulkan penyakit. Keadaan sistem pertahanan tubuh pada individu menentukan kerentanannya terhadap penyakit infeksi. Penekanan sistem pertahanan tubuh memudahkan orang terkena infeksi. Keadaan dan respon sistem imun dapat dipengaruhi oleh keadaan nutrisi terutama status protein individu yang bersangkutan. Dengan melihat kondisi tersebut maka perlu upaya lebih lanjut dalam penanganan masalah infeksi. Upaya yang perlu diperhatikan adalah meliputi upaya preventif atau usaha pencegahan, kuratif atau pengobatan dan rehabilitasi atau pemulihan kondisi seperti keadaan semula. Upaya pencegahan dan pengobatan penyakit dengan antibiotik merupakan suatu kemajuan dalam pelayanan kesehatan. Antibiotik merupakan suatu obat yang dapat membunuh ataupun menghambat pertumbuhan bakteri. Akan tetapi antibiotic juga merupakan kelompok obat yang termasuk sering memberikan efek samping misalnya reaksi alergi baik ringan maupun berat, mual dan muntah. Masalah yang penting adalah masalah resistensi atau kekebalan bakteri terhadap antibiotik. Saat ini seluruh dunia telah mengalami berbagai masalah akibat resistensi antibiotik. Penyalahgunaan antibiotik, berupa pemberian antibiotik yang tidak tepat, tidak sesuai dosis dan tanpa pengawasan dokter ternyata telah membuat jenis bakteri menjadi kebal terhadap antibiotik tersebut. Hal ini dapat terjadi karena tern yata bakteri
lama-kelamaan dapat mengubah dirinya sehingga dapat bertahan terhadap antibiotik yang menyerangnya. Infeksi staphylococcus pada manusia cukup sering terjadi, tetapi biasanya bersifat lokal pada tempat masuknya kuman. Tempat masuknya kuman tersebut antara lain pada folikel rambut dan saluran pernafasan. Tiga staphylococcus yang berkaitan dengan medis adalah
Staphylococcus
aureus,
Staphylococcus
epidermidis,
dan
Staphylococcus
saprophyticus. Staphylococcuskoagulase negatif merupakan flora normal manusia dan kadang-kadang menyebabkan infeksi. Kira-kira 75% infeksi disebabkan oleh staphylococcus koagulase negative. Staphylococcus saprophyticus merupakan spesies staphylococcus yang koagulasenya negatif dan pada umumnya menyebabkan infeksi saluran urin yaitu sebesar 1020% setelah E. coli (80-90%). Staphylococcus mudah resisten terhadap antibiotik, sehingga perlu dilakukan uji sensitivitas antibiotik agar antibiotik yang dipilih tepat.
B. Tujuan Praktikum Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui dan mempelajari cara identifikasi dan isolasi pada media dengan sampel kulit yang alergi.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
A. Pus Eksudat yang mungkin paling sering dijumpai adalah eksudat yang terutama terdiri netrofil polimorfonuklear dalam jaringan yang begitu banyak sehingga bagian cairan dan protein kurang mendapat perhatian. Infeksi bakteri sering menyebabkan konsentrasi netrofil yang luar biasa tingginya di dalam jaringan, dan banyak dari selsel ini mati dan membebaskan enzim-enzim hidrolisis mereka kesekitarnya. Dalam keadaan ini enzim-enzim netrofil secara harfiah mencernakan jaringan dibawahnya dan mencairkannya. Kombinasi agregasi netrofil dan pencairan jaringan di bawahnya ini disebut supurasi. Supurasi merupakan pembentukan pus, suatu campuran dari netrofil dan bakteri (yang hidup, dalam proses mati dan yang mati), debris seluler dan kadangkadang gelembung minyak. Penyebabnya benar-benar harus ditemukan, dan selalu merupakan suatu agen infektif. Agen tersebut biasanya bakteri piogenik (misalnya Staphylococcus aureus, Streptokokus piogenes, Neiseria atau organisme koli). Sekali pus mulai tertimbun dalam jaringan, pus akan dikelilingi oleh “membrane piogenik” yang terdiri dari pertumbuhan anyaman kapiler, netrofil dan kadangkadang fibroblast. Jika timbul supurasi lokal didalam jaringan padat, kerusakan yang diakibatkan disebut abses. Abses adalah lesi yang sulit untuk diatasi oleh tubuh karena kecenderungannya untuk meluas kejaringan yang lebih luas dengan pencairan, kecenderungannya untuk membentuk lubang, dan resistensinya terhadap penyembuhan.
B. Bakteri Bakteri adalah prokaryosit, DNAnya tidak terletak di dalam nukleus. Banyak bakteri mengandung lingkaran DNA ekstrakromosomal yang disebut plasmid. Di dalam sitoplasma tidak terdapat organel lain selain ribosom, yang berukuran lebih kecil dibandingkan sel-sel eukaryotik. Bakteri selain mikoplasma, dikelilingi oleh suatu dinding sel kompleks, yang berbeda antara bakteri Gram positif dan Gram negatif. Banyak bakteri memiliki flagella, pili atau kapsul eksternal pada dinding sel. Berdasar bentuk morfologis bakteri dapat digolongkan menjadi 3 yaitu:
a. Basil ( Bacillus) berbentuk tongkat pendek, silindris, sebagian besar bakteri berbentuk basil. Basil dapat bergandeng gandengan panjang (Streptobasil), bergandengan dua-dua (Diplobasil) atau terlepas astu sama lain. b. Kokus (Coccus) adalah bakteri serupa bola-bola, golongan ini tidak sebanyak golongan basil, kokus ada yang bergandengan panjang serupa tali leher (Streptococcus), bergandengan
dua-dua
(Diplococcus),
mengelompok
berempat
(Tetracoccus),
mengelompok (Stafilococcus), mengelompok seperti kubus (Sarsina). c. Spiril (Spirilium) yaitu bakteri berbentuk bengkok/ berbengkok-bengkok serupa spiral. Bakteri bentuk spiral ini tidak banyak terdapat dan merupakan golongan paling kecil.
Berdasarkan pengecatan Gram, bakteri dapat dibedakan atas: a. Bakteri Gram Positif adalah bakteri yang pada pengecatan Gram tahan terhadap alkohol, sehingga tetap mengikat cat pertama (Gram A) dan tidak mengikat warna yang kedua sehingga bakteri akan berwarna ungu. Contoh bakteri Gram positif adalah Streptococcus dan Staphylococcus. b. Bakteri Gram Negatif adalah bakteri yang pada pengecatan Gram tidak tahan terhadap alkohol sehingga warna cat pertama (Gram A) akan dilunturkan dan bakteri akan mengikat warna yang kedua, sehingga bakteri akan berwarna merah. Contoh bakteri Gram negatif adalah Shigella, E. coli, Salmonella, Klebsiella.
C. Staphylococcus Staphylococcus berasal dari perkataan staphyle yang berarti kelompok buah anggur dan kokus yang berarti benih bulat. Kuman ini sering ditemukan sebagai kuman flora normal pada kulit dan selaput lendir pada manusia. Dapat menjadi menjadi penyebab infeksi baik pada manusia atau hewan. Beberapa jenis kuman ini dapat membuat enterotoksin yang dapat menyebabkan keracunan makanan. Kuman ini dapat diasingkan dari bahan-bahan klinik, carriers, makanan dan dari lingkungan.
D. Isolasi Bakteri Isolasi bakteri digunakan untuk memisahkan biakan atau bakteri campuran dengan menggunakan media kultur sehingga diperoleh isolat atau biakan murni.
Metode atau cara isolasi dapat dilakukan dengan berbagai cara antara lain: a. Cara goresan (Streak Plate Methode) Cara ini dilakukan dengan menggoreskan bahan yang mengandung bakteri pada permukaan media agar yang sesuai dalam cawan petri. Setelah diinkubasi maka pada media bekas goresan akan timbul koloni terpisah. b. Cara Taburan ( Pour Plate Methode) Cara ini dilakukan dengan menginokulasikan media agar yang sedang mencair pada suhu 500C dengan suspensi bahan yang mengandung bakteri atau memasukkannya ke dalam cawan petri steril. Setelah diinkubasi akan terlihat koloni-koloni tersebar di semua bagian agar.
BAB III METODE PRAKTIKUM
A. Waktu dan Tempat Hari/Tanggal : Jam
:
Tempat
:
B. Alat dan Bahan 1. Alat a. Mikroskop
h. Incubator
b. Kaca preparat
i. Neraca analitik
c. Ose bulat
j. Autoclave
d. Cawan petri
k. Erlenmeyer
e. Ose lurus tabung reaksi
l. Hot plate
f.
m. Batang pengaduk
Spoit
g. Gelas kimia
n. Mag Stirer
2. Bahan a. Donat gula
n. KOH 40% 0,2 ml
b. bMedium NA
o. Naftol 5% 0,6
c. Medium MC
p. Aquadest
d. Medium BA
q. Darah
e. Medium KIA/TSIA
r. Gentian violet
f.
s. Lugol
Medium MIO
g. Medium MR-VP
t. Air fuchsin
h. Medium SCA
u. Alkohol 70%
i.
Medium LIA
v. Kapas
j.
Medium UREA
w.Bungsen
k. Medium MSA l.
Reagen kovash
m. Reangen MR
C. Prinsip Kerja Dengan menggunakan sampel ulasan pada kulit yang alergi (gatal-gatal) dengan menggunakan media pemupuk, media selektif, pewarnaan gram, dan uji biokimia agar dapat melihat bentuk dan jenis bakteri apa yang terdapat pada kulit pasien. D. Prosedur Kerja I. Isolasi sampel Swab kulit ke media
Isolasi dan identifikasi bakteri pada swab kulit jerawat dan ba gian alergi 1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan 2. Kapas Swab yang telah di sterilkan, diugunakan untuk mengambil swab kulit. 3. Pada Swab yang pertama langsung diisolasi ke media BHIB, untuk swab yang kedua diisolasi kedalam NaCl 0,85% dan di goreskan ke media Nutrient Agar. 4. Kedua media diinkubasi dalam incubator selama 1x24 jam dengan 37oC. 5. Hasil dari pertumbuhan specimen bakteri ini adalah media akan nampak keruh jika positif dan negative jika tidak ada perubahan apa-apa pada media.
II. Bakteri yang telah tumbuh di media BHIB, kemudian diinokulasikan pada media Blood Agar (BA), yaitu media agar darah adalah media untuk menilai pertumbuhan kelompok bakteri yang dapat melisiskan sel darah. Diinkubasi dalam incubator selama 1x24 jam dengan suhu 370c. III.
Hasil yang tumbuh yaitu Beta Hemolisis- Lisis total koloni nampak bening, Alpha Hemolisis- lisis sebagian koloni tumbuh berwarna hijau, dan gamma hemolysis-tidak lisis-bakteri tumbuh berarna merah.
Setalah itu dilakukan pewarnaan gram untuk media BA :
Pewarnaan Gram : 1. Bakteri hasil inokulasi yang telah tumbuh pada media BA dilakukan pewarnaan gram. 1) Dimbil 1-2 koloni letakan pada objek glass difiksasi pada api Bunsen 1. Ditambahkan 1-2 tetes gention violet (diamkan 3 menit) kemudian dicuci dengan air mengalir 2. Ditammbahkan 1-2 tetes lugol (diamkan 1 menit) kemudiaan dicuci 3. Ditambahkan 1-2 tetes aqudest 96% kemudian dicuci dengan air mengalir
4. Ditambahkan 1-2 tetes air fuksin (diamkan 1 menit) kemudian dicuci dengan air mengalir 5. Dikeringkan dan diamati dibawah mikroskop (40X dan 100X) Jika bakteri gram positif coccus maka dilanjutkan dengan uji katalase dan ditanamkan pada media MSA. IV.
Uji katalase dilakukan dengan cara meneteskan 2-3 tetes larutan H2O2 pada koloni yang dipisahkan diatas kaca objek, hasil positif bila ada pembentukan gelembung udara pada koloni sekitarnya, dimana enzim tersebut mengkatalisis H2O2 dengan enzi katalase. V. Inokulasi bakteri ke TSIA (Triple Sugar Iron Agar)
Setelah bakteri dari media BA dibuat pewarnaan Gram dan uji katalase, lalu diinokulasikan ke media TSIA untuk diuji H2S, dan diinkubasi 24 jam suhu 37oC. Tabel hasil pengamatan Pertumbuhan bakteri media TSIA Butt bersifat Asam (Kuning)
Glukosa difermentasikan
Slant bersifat Basah (Merah) Pada
seluruh
media
terlihat
pembentukan asam. Seluruh media
Laktosa
atau
sukrosa
atau
keduanya difermentasikan.
berwarna kuning. Pembentukan gas di bagian butt
Pembentukan gas misalnya H2
media kadangkala terpecah.
dan CO2
Endapan hitam di bagian butt
Pembentukan H2S
Seluruh
media
berwarna
merah,
bagian butt dan slant berarna merah
Ketiga
macam
gula
tidak
difermentasikan.
(basah).
VI.
Setalah dilakukan uji pada media TSIA maka koloni diinokulasikan ke media uji IMVIC (Indol-methyl Red-Voges Proskauer-Citrate) yaitu uji Biokimia media MIO, MR, VP, SCA LIA, UREA diinkubasi pada inkubator.
MIO pada media MIO ditambahkan reagen kovacs 10-12 tetes dan diamati perubahan yang terjadi.
Uji MR pada uji ini setelah media diinkubasi, maka ditambahkan 5 tetes larutan Methyl Red positif jika larutan kaldu berwarna merah dan negative berwarna kuning.
Uji VP pada uji Voges-Proskauer kaldu ditambahkan 10 tetes larutan 40 % KOH dan 15 tetes larutan alpha-naphtol pada kaldu MR-VP hasil akan terjadi < 30 menit. Positif jika kaldu berwarna merah dan negative jika tidak ada perubahan warna.
Media SCA (Simon Citrate Agar) yaitu uji penggunaan citrate sebagai sumber karbon. Hasil positif jika media berubah warna menjadi biru dari warna hijau.
Media UREA adalah untuk uji bakteri yang menhasilkan enzim urease yang mengurai urea menjadi ammonia dan CO2. Hasil positif jika media berubah dari warna merah jingga menjadi merah ungu.
Media Lysin Iron Agar (LIA) media LIA positif jika media berubah dari warna biru menjadi warna keunguan.
VII.
Amati setiap perubahan dan catat setiap hasil koloni yang tumbuh pada masing-masing media dan semua uji.
BAB IV HASIL PENGAMATAN
A. Hasil Praktikum 1. Table CIRI-CIRI PERTUMBUHAN PADA KIA NO
SAMPEL
SLANK
1
BA
ALK
2
MC
A
BUTT
GAS
H2S
KETERANGAN
A
+
-
Gram (+) basil
A
+
-
Gram (+) coccus
CIRI-CIRI MEDIA NO
SAMPEL
KETERANGAN
MIO M I O
1.
Air bassang
2. Gambar
-
-
-
MR
VP
+
-
SCA -
UREA
LIA
-
+
Staphylococcus safrotikus
3. Pembahasan Pada praktikum ini, kami melakukan pengamatan bakteri pada sampel sputum. Hal pertama yang dilakukan itu adalah melakukan pewarnaan ziehl neelsen untuk melihat apakah positif atau negative ada BTA nya. Kemudian, setelah hasilnya negative kami membuat media sebagai wadah untuk diisolasi sampel sehingga menghasilkan biakan. Setelah sampel tersebut diinkubasi 1×24 jam dalam suhu 37oC maka sampel ini diinokulasi dari media NA ke media MC dan BA. Setelah itu, dilakukan pewarnaan gram dan pada hasil untuk media MC didapatkan hasil gram (-) basil, BA gram (-) basil, dan pada media AC gram (+) coccus. sehingga kami mengambil dua biakan saja untuk isolasi yaiu media BA dan AC. Karena pada media AC didapatkan gram (+) coccus, maka sampel tersebut yang diambil untuk dilakukan uji katalase. Katalase yaitu enzim yang mengkatalisasikan penguraian hydrogen peroksida (H2O2) meenjadi air dan O2. Hydrogen peroksida bersifat toksik terhadap sel karena bahan ini mengaktifkan enzim dalam sel. Uji katalase berguna dalam identifikasi kelompok bakteri tertentu. Padabentuk coccus, uji ini digunakan untuk membedakan staphylococcus dan streptococcus. Staphylococcus bersifat katalase-positif, dan streptococcus bersifat katalase-negatif. Penentuan ini dilakukan dengan uji larutan 3% H2O2 pada koloni terpisah. Pada bakteri yang bersifat katalase-positif terlihat pembentukan gelembung udara sekitar koloni. Dan pada uji ini kami mendapatkan hasil katalase-positif. Selanjutnya, dilakkan inokulasi dari media Ba dan AC ke media KIA/TSIA, dimana pada prosedur ini menggunkan 2 teknik yaitu teknik gores dan tusuk namun pada saat melakukan penusukan tidak boleh sampai dasar. Setelah diinubasi selama 1×24 jam dalam suhu 37oC maka dilakukan pengamatan pada media KIA/TSIA tersebut. Pada hari berikutnya pada saat mengamati jikan pada slank tabung yang sudah ditanam koloni pada media KIA/TSIA berwarna merah maka sifatnya alkali, dan pada butt nya berwarna kuning maka sifatnya acid. Jika pada bekas tusukannya berwarna hitam maka itu menunjukkan mengandung belerang (H2S), sedangkan jika berbentuk gelembung, pecah pecah pada tususkannya maka menunjukkan kalau itu mengandung gas. Hal ini dapat terjadi karena sewaktu diinokulasi tabung yang berisi kaldu dikocok terlalu keras atau bila digunakan kaldu yang disimpan dalam lemari es. Daya larut oksigen berkurang
dalam kaldu yang dingin, namun sewaktu diinkubasika pada suhu 37oC oksigen dapat terperangkap dalam tabung durham.
BAB V PENUTUP
A. Kesimpulan Pada praktikum ini dapat disimpulkan bahwa hasil yang didapat pada isolasi dan identifikasi pada kulit yang alergi(gatal-gatal) yaitu didpatkan jenis bakteri staphylococcus Epidermidis. Yang diambil dari biakan MC yang gram (+) berbentuk coccus. Yang didapat dari uji katalase yakni pada katalase positif terlihat pembentukan gelembung udara sekitar koloni.
B. Saran Pada praktikum ini, memerlukan ketelitian dan kesabran yang tinggi pada pengerjaan isolasi dan inokulasi supaya hasil yang didapatkan akurat dan sesuai dengan yang diinginkan.
DAFTAR PUSTAKA
Ambarwati R,2007. eprints..ums.ac.id/16819/3/BAB_I.pdf .
