LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA ISOLASI DAN IDENTIFIKASI PIPERIN DALAM SIMPLISIA LADA HITAM
Diajukan sebagai salah satu syarat nilai akhir praktikum fitokimia
Kelompok
: 5C – 2014 2014 // jam 07.00-10.00
Asisten
: Julia Ratnawati, Dra., MS., Apt,
Ketua
: Rizqi Irfan Anshory
(3311141090) (3311141090)
Anggota
Nurhayat i Kurnia : Lisna Nurhayati
(3311141109) (3311141109)
Derawati Derawa ti Gustiani Gustia ni
(3311141112) (3311141112)
Inggi Novitasari Novita sari
(3311141115) (3311141115)
Wurityas Armiyanti Armi yanti
(3311141116) (3311141116)
Rahmi Islamy Islam y
(3311141122) (3311141122)
Feby Anisa Fitrianti Suwito
(3311141 (3311141126) 126)
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS AKULTAS FARMASI ARM ASI UNIVERSIT UNIVERSI TAS JENDERAL J ENDERAL ACHMAD YANI YANI CIMAHI 2017
DAFTAR ISI
DAFTAR DAFTAR ISI ............................................. .......................................................... ............. Error! Bookmark not defined. BAB I PENDAHULUAN ............................ ................................................... ............................................. .................................... .............. 1 1.1 Latar Belakang ............................. ................................................... ............................................ ............................................ ...................... 1 1.2 Rumusan Masalah ........................ .............................................. ............................................ ............................................ ...................... 2 1.3 Tujuan ............................................................ ................................................................................... .............................................. ......................... .. 2 BAB II TINJAUAN PUSTAKA PUSTAKA ................................. ....................................................... ............................................ ...................... 3 2.1 Tinjauan Botani Tanaman Lada Hitam ............................................... .......................................................... ........... 3 2.2 Senyawa Alkaloid ........................................... ................................................................. ............................................ ......................... ... 6 2.3 Senyawa Piperin ............................................. ................................................................... ............................................ ......................... ... 7 2.4 Proses Isolasi............................................... Isolasi..................................................................... ............................................ ............................. ....... 7 2.5 Identifikasi karakteristik ................................... ......................................................... .......................................... .................... 10 BAB III ALAT ALAT DAN BAHAN ............................................ ................................................................... .................................. ........... 12 3.1 Alat ............................ ................................................... ............................................. ............................................ ...................................... ................ 12 3.2 Bahan ............................................................. .................................................................................... .............................................. ....................... 12 BAB IV METODE PENELITIAN .................................... .......................................................... .................................. ............ 13 BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................ ................................................................ .................... 17 5.1 Hasil ........................................................ .............................................................................. ............................................. ............................... ........ 17 5.2 Pembahasan ............................................ .................................................................. ............................................ ............................... ......... 26 BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN .......................................... .............................................................. .................... 34 6.1 Kesimpulan .................................................... ........................................................................... .............................................. ....................... 17 6.2 Saran ............................................ .................................................................. ............................................ .......................................... .................... 26 DAFTAR DAFTAR PUSTAKA PUSTAKA ........................................... ................................................................. ............................................ ........................... ..... 36 LAMPIRAN .......................................... ................................................................ ............................................ .......................................... .................... 38
i
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Lada atau sering disebut merica ( Piper Piper nigrum L) secara empiris dikenal sebagai tanaman yang berkhasiat yang digunakan sebagai bahan obat alternative seperti analgetik, antipiretik, memperlancar proses pencernaan dan diduga juga sebagai pencegah kanker karena bersifat antioksidan, tetapi masyarakat sering juga menggunakan buah lada hitam sebagai bahan penyedap rasa untuk makanan. makanan. Berbagai manfaat lada tersebut sangat berhubungan erat dengan senyawa metabolit sekunder terutama alkaloida. Peperin merupakan senyawa metabolit sekunder yang juga merupakan suatu senyawa alkaloid utama yang terkandung dalam buah lada hitam. Piperin adalah komponen pembentuk oleoresin berupa campuran antara mintak atsiri dan resin (damar) yang diperoleh dengan isolasi. Isolasi dalam percobaan ini yaitu mengambil senyawa piperin yang terdapat dalam lada hitam melalui ekstraksi refluks dengan menggunakan pelarut organik seperti metanol. Piperin merupakan senyawa polar begitupun dengan metanol sehingga metanol mampu melarutkan piperin yang terdapat dalam lada sesuai dengan prinsip like dissolved like. Berdasarkan Literatur bahwa piperin merupakan senyawa alkaloid yang dapat larut dalam alkohol yaitu metanol, dimana antara piperin dengan metanol meta nol mampu untuk membentuk ikatan hydrogen. Berdasarkan latar belakang di atas, maka dilakukanlah percobaan ini untuk mengetahui metode isolasi piperin dari lada (Piper ningrum L.).Percobaan yang dilakukan yaitu yaitu meliputi meliputi penafisan fitokimia fitokimia sebagai uji pendahuluan, kemudian dilakukan proses isolasi dengan memperoleh ekstrak dengan cara refluks menggunakan metanol, kemudian dilakukan pemantauan KLT terhadap ekstrak kental yang didapat. Selanjutnya dilakukan proses kristalisasi dan rekristalisasi untuk memurnikan kristal yang didapat. Setiap kristal yang sudah di rekristalisasi dilakukan proses KLT hingga hasil menunjukan bahwa kristal
1
piperin sudah murni.Kristal yang diperoleh diidentifikasi dengan menggunakan alat diantaranya Spektrofotometer UV-V UV-Visible isible dan Spektrofotometer Inframerah. Inframerah. 1.2 Rumusan Masalah
Bagaimanakah cara penafisan fitokimia, proses isolasi dan identifikasi senyawa piperin yang terkandung pada buah lada hitam? 1.3 Tujuan
Penelitian ini dilakukan, bertujuan untuk mengetahui cara penafisan fitokimia, proses isolasi dan identifikasi senyawa piperin yang terkandung pada buah lada hitam.
2
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tinjauan Botani Tanaman Lada Hitam 2.1.1 Klasifikasi Tanaman
Klasifikasi tanaman lada adalah sebagai berikut : Kingdom
: Plantae
Divisi
: Spermatophyta
Class
: Magnoliopsida
Ordo
: Piperales
Familia
: Piperaceae
Genus
: Piper
Species
: Piper nigrum L. (3)
2.1.2 Deskripsi Tanaman
Tanaman lada memiliki akar tunggang dengan akar utama dapat menembus tanah sampai kedalaman 1-2 m. Batang tanaman lada berbuku-buku dan berbentuk sulur yang dapat dikelompokkan menjadi empat macam sulur, yaitu sulur gantung, sulur panjat, sulur buah, dan sulur tanah. Daun lada merupakan daun tunggal dengan duduk daun berseling dan tumbuh pada setiap buku. Warna daun hijau muda pada waktu muda dan daun tua berwarna hijau mengkilat pada permukaan atas. Pertulangan daun melengkung dengan tepi daun bergelombang atau rata. Bunga-bunga terdapat pada cabang plagiotrophic (horizontal) yang tersusun dalam bulir ( spica) atau untai (amentum). Buah lada temasuk buah buni berbentuk bulat berwarna hijau dan pada waktu masak berwarna merah. Buah lada berwarna putih cokelat dengan permukaan licin. Bila dikeringkan kulitnya hingga kulit keriput dan berwarna hitam. (4)
3
bersama
Gambar . Tanaman lada (5)
2.1.3 Karakteristik Sifat
Lada memiliki rasa pedas, berbau khas dan aromatik. Rasa pedas dari buah lada hitam, 90-95 % disebabkan oleh adanya komponen trans-piperin yang ada dalam buah lada hitam yang kering kadarnya 2-5 % dan terdiri atas senyawa asam amida piperin dan asam piperinat. Rasa pedas juga disebabkan oleh adanya chavicine yang merupaka salah satu isomer dari piperin, selain chavicine terdapat juga Isopiperin dan Isochavicine yang merupakan isomer dari piperin.
4
O
O O
O
H
H
H H H
H H
H
O N
O N
Isochavisin
Isopiperin
O O H
H
O O
H
O H
H
N
H N H H
Chavisin
O
Piperin
2.1.4 Kandungan Kimia dan Kegunaan 1. Kandungan kimia
Menurut Williamson (6), kandungan kimia lada hitam terdiri dari: Minyak atsiri ( Essential oil ) Lada hitam kering mengandung 1,2 – 2,6% minyak atsiri yang terdiri dari sabinine (15-25%), caryophyllene, α- pinene, β - pinene, β -ocimene,δ-guaiene, farnesol, δ-cadinol, guaiacol, 1-phellandrene, 1,8 cineole, pcymene, carvone, citronellol, α- thujene, α-terpinene, bisabolene, dllimonene, dihydrocarveol, camphene dan piperonal. Alkoloids dan amides Amides merupakan senyawa yang memberikan aroma tajam terdiri dari piperine, piperylin, piperolein A dan B, cumaperine, piperanine, piperamides, pipericide, guineensine dan sarmentine.
5
Alkoloids terdiri dari chavicine, piperidine dan piperretine, methyl caffeic acid, piperidide dan β -methyl pyrroline. Amino acids Lada hitam kering kaya akan kandungan β -alanine, arginine, serine, threonine, histidine, lysine, cystine, asparagines dan glutamic acid. Vitamin dan mineral Lada hitam kering mempunyai kandungan ascorbic acid, carotenes, thiamine,riboflavin, nicotinic acid, potassium, sodium, calsium, phosporus, magnesium, besi, tembaga dan seng.
2. Kegunaan
Buah lada hitam dapat digunakan untuk mencegah kanker karena bersifat antioksidan, sebagai obat anti inflamasi, antiarthritik, analgetik, antipiretik, dan memperlancar proses pencernaan, depresan sistem saraf pusat dan antikonvulsan. Timing dari London mengadakan penelitian bahwa lada hitam ternyata bukan saja bermanfaat sebagai rempah penyedap makanan. Menurut sebuah penelitian lada hitam juga memiliki potensi menjadi obat baru penyakit pigmen kulit yang disebut vetiligo. Dalam istilah medis, vetiligo dikenal sebagai kondisi dimana sebagian wilayah kulit kehilangan pigmen normal, sehingga permukaan kulit memutih. 2.2 Senyawa Alkaloid
Alkaloid merupakan salah satu senyawa yang berasal dari tumbuhan yang dapat disintesis, megandung nitrogen yang bersifat basa yang terikat dalam cincin heterosiklik dan memiliki aktivitas biologi. Menurut Hegnauer (13),merupakan system klasifikasi yang paling banyak diterima: Alkaloida sesungguhnya Alkaloida ini merupakan racun, senyawa tersebut menunjukkan aktivitas fisiologis yang luas, hampir tanpa terkecuali bersifat basa, umumnya mengandung nitrogen dalam cincin heterosiklik, diturunkan dari asam amino, biasanya terdapat dalam tanaman sebagai garam asam organik. Ada pengecualian “aturan” tersebut adalah kolkhisin dan asam aristolokhat 6
yang bersifat bukan basa dan tidak memiliki cincin heterosiklik dan alkaloid quartener, yang bersifat agak asam daripada bersifat basa. Protoalkaloida Protoalkaloid merupakan amin yang relatif sederhana dimana nitrogen dan asam amino tidak terdapat dalam cincin heterosiklik. Protoalkaloida diperoleh berdasarkan biosintesis dari asam amino yang bersifat basa. Pengertian ”amin biologis” sering digunakan untuk kelompok ini. Contoh, adalah meskalin, ephedin dan N,N-dimetiltriptamin. Pseudoalkaloida Pseudoalkaloid tidak diturunkan dari prekursor asam amino. Senyawa biasanya bersifat basa. Ada dua seri alkaloid yang penting dalam khas ini, yaitu alkaloid steroidal (contoh: konessin) dan purin (kaffein) Sifat fisika alkaloid pada umumnya tidak berwarna kecuali berberin dan betanin dan sebagian besar berbentuk kristal atau amorf. Dalam isolasi , kelarutan alkaloid bebas atau garamnya sangatlah penting, umumnya basa akan larut dalam pelarut organik dan pseudoalkaloid, protoalkaloid juga yang mengandung ammonium kuartener akan larut dalam air. 2.3 Senyawa Piperin
Piperin termasuk dalam senyawa alkaloid golongan piridin, isomer dari piperin yaitu kavisin merupakan senyawa yang berasa pedas. Piperin merupakan senyawa yang banyak terdapat pada lada dan cabe. Senyawa ini memiliki banyak efek farmakologi yaitu sebagai antiinflamasi, antimikroba, hepatoprotektor, antikanker dan meningkatkan efek antioksidan sel. Piperin lada merupakan konsentrat yang diperoleh melalui proses ekstraksi lada hitam dengan menggunakan pelarut organic seperti aseton, etanol, etilen, etil asetat, n-heksan dan pelarut organik lainnya. 2.4 Proses Isolasi 2.4.1 Penafisan Fitokimia
Uji fitokimia terhadap kandungan senyawa kimia metabolit sekunder merupakan langkah awal yang penting dalam penelitian mengenai tumbuhan obat atau dalam hal pencarian senyawa aktif baru yang berasal dari bahan alam yang
7
dapat menjadi precursor bagi sintesis obat-obat baru atau menjadi prototype senyawa aktif tertentu. Oleh karenanya, metode uji fitokimia harus merupakan uji sederhana tetapi terandalkan. Metode uji fitokimia yang banyak digunakan adalah metode reaksi warna dan pengendapan yang dapat dilakukan di lapangan atau di laboratorium (14) 2.4.2 Ekstraksi
Ekstraksi adalah metode ekstraksi kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam suatu simplisia tumbuhan dengan menggunakan pelarut-pelarut dalam suasana asam, basa, ataupun netral, dengan metode-metode yang tertentu dan khas sesuai dengan sifat fisik dan kimia dari kandungan kimianya. Pelarut pelarut yang biasanya dipergunakan untuk senyawa-senyawa organik diantaranya adalah eter, etanol, karbon, tetra klorida, aseton, metanol, heksan, petroleum eter dan lain sebagainya.(8) Ekstraksi
umumnya
didasarkan
pada
prinsip
perpindahan
massa
komponen zat ke dalam pelarut dimana memiliki tujuan untuk menarik komponen kimia yang terdapat pada simplisia. 2.4.3 Refluks
Refluks adalah salah satu metode dalam ilmu kimia untuk mensintesis suatu senyawa, baik organik maupun anorganik. Umumnya digunakan untuk mensintesis senyawa-senyawa yang mudah menguap atau volatile. Pada kondisi ini jika dilakukan pemanasan biasa maka pelarut akan menguap sebelum reaksi berjalan sampai selesai. Prinsip dari metode refluks adalah pelarut volatil yang digunakan akan menguap pada suhu tinggi, namun akan didinginkan dengan kondensor sehingga pelarut yang tadinya dalam bentuk uap akan mengembun pada kondensor dan turun lagi ke dalam wadah reaksi sehingga pelarut akan tetap ada selama reaksi berlangsung.(19) 2.4.4 Kristalisasi dan Rekristalisasi
Kristalisasi adalah proses pembentukan bahan padat dari pengendapan larutan, melt (campuran leleh), atau lebih jarang pengendapan langsug dari gas. Kristalisasi juga merupakan teknik pemisahan kimia antara bahan padat-cair, dimana terjadi perpindahan massa (mass transfer) dari suatu zat terlarut (solute) dari cairan larutan ke fase kristal padat.
8
Pemisahan dengan teknik kristalisasi didasari atas pelepasan pelarut dari zat terlarutnya dalam sebuah campuran homogen atau larutan, sehingga terbentuk kristal dari zat terlarutnya. Proses ini adalah salah satu teknik pemisahan padatcair yang sangat penting dalam industri, karena dapat menghasilkan kemurnian produk hingga 100%. Rekristalisasi adalah salah satu cara pemurnian zat padat dimana zat-zat tersebut dilarutkan dalam suatu pelarut kemudian dikristalkan kembali. Cara ini bergantung pada kelarutan zat dalam pelarut tertentu dikala suhu diperbesar.(20) Ada tujuh metode dalam rekristalisasi yaitu : memilih pelarut, melarutkan zat
terlarut,
menghilangkan
warna
larutan,
memindahkan
zat
padat,
mengkristalkan larutan, mengumpul dan mencuci kristal, serta mengeringkan produknya.(21) 2.4.5 Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah salah satu metode pemisahan komponen menggunakan fasa diam berupa plat dengan lapisan bahan adsorben inert. KLT merupakan salah satu jenis kromatografi analitik. KLT sering digunakan untuk identifikasi awal, karena banyak keuntungan menggunakan KLT, di antaranya adalah sederhana dan murah. KLT termasuk dalam kategori kromatografi planar, selain kromatografi kertas. Kromatografi juga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan sangat sedikit, baik penyerap maupun cuplikannya. KLT dapat digunakan untuk memisahkan senyawa – senyawa yang sifatnya hidrofobik seperti lipida – lipida dan hidrokarbon yang sukar dikerjakan dengan kromatografi kertas. KLT juga dapat berguna untuk mencari eluen untuk kromatografi kolom, analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara kromatografi, dan isolasi senyawa murni skala kecil (15)
. Prinsip KLT adalah adsorbsi dan partisi dimana adsorbsi adalah
penyerapan
pada
pemukaan,
sedangkan
partisi
adalah
penyebaran
atau
kemampuan suatu zat yang ada dalam larutan untuk berpisah kedalam pelarut yang digunakan. Kecepatan gerak senyawa-senyawa ke atas pada lempengan tergantung pada
(16)
9
2.4.6 Kromatografi lapis tipis dua dimensi (KLT-2D)
Kromatografi lapis tipis dua dimensi adalah
salah satu metode yang
telah banyak digunakan untuk pemisahan sejumlah besar senyawa yang tidak dapat
dipisahkan
dalam
meningkatkan resolusi mempunyai karakteristik juga
dimensi tunggal dan juga bertujuan
sampel kimia
ketika
yang hampir
untuk
komponen-komponen solute sama,
karenanya
nilai
Rf
hampir sama sebagaimana dalam asam-asam amino. Selain itu, 2 sistem
fase gerak yang sangat
berbeda dapat digunakan secara berurutan sehingga
memungkinkanuntuk melakukan pemisahan analit yang mempunyai tingkat polaritas yang berbeda. Prinsip dari KLT dua dimensi adalah adsorpsi dan partisi dengan menggunakanlempeng
GF
254
sebagai
fase
diam
dan
perbandingan eluen pada profil KLT dimana akan memperpanjang lintasan noda (Rf) dengan menunjukkan seyawa tunggal yang terdapat pada sampel . 2.5 Identifikasi karakteristik 2.5.1 Spektrofotometri UV-Visible
Spektrofotometri UV-Visible adalah bagian teknik analisa spektroskopi yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780 nm) dengan memakai instrument spektrofotometer. (10) Spektrum UV-Vis mempunyai bentuk yang lebar dan hanya sedikit informasi tentang struktur yang bisa didapatkan dari spektrum ini. Tetapi spektrum ini sangat berguna untuk pengukuran secara kuantitatif. Konsentrasi dari analit di dalam larutan bisa ditentukan dengan mengukur absorban pada panjang gelombang tertentu dengan menggunakan hukum Lambert-Beer.
(11)
2.5.2 Spektrofotometri inframerah (IR)
Spektrofotometri inframerah (IR) merupakan salah satu alat yang dapat digunakan untuk menganalisa senyawa kimia. Spektra inframerah suatu senyawa dapat memberikan gambaran dan struktur molekul senyawa tersebut. Spektra IR dapat dihasilkan dengan mengukur absorbsi radiasi, refleksi atau emisi di daerah IR. Daerah inframerah pada spektrum gelombang elektromagnetik mencakup bilangan gelombang 14.000 cm-1 hingga 10 cm-1. Daerah inframerah sedang ( 4000-400 cm-1) berkaitan dengan transisi energi vibrasi dari molekul yang 10
memberikan informasi mengenai gugus-gugus fungsi dalam molekul tersebut. Daerah inframerah jauh (400-10cm-1) bermanfaat untuk menganalisis molekul yang
mengandung
atom-atom
berat
seperti
senyawa
anorganik,
namun
membutuhkan teknik khusus yang lebih baik. Daerah inframerah dekat (12.5004000cm-1) yang peka terhadap vibrasi overtone (18)
11
BAB III
ALAT DAN BAHAN
3.1 Alat
Timbangan analitik, satu set alat refluks, erlenmeyer, tabung reaksi, seperangkat alat kromatografi lapisan tipis, pipet tetes, botol vial, beaker glass, cawan porselen, rotary evaporator, chamber, cawan penguap, Indicator universal Lampu
uv
254
nm
atau
365
nm,
Spektrofotometer
UV-Visible
dan
Spektrofotometer Inframerah, alat titik lebur tester digital WRS-100, pipa kapiler titik leleh, lemari 40º C. 3.2 Bahan
Simplisia lada hitam, KOH 10% , aethanol 96%, methanol, n-heksan, etil asetat, kloroform, butanol, aseton, toluen pereaksi dragendorf, plat silika gel 60 GF254.
12
BAB IV
METODE PENELITIAN 1. Persiapan sampel
Sejumlah 250 g Simplisia kering buah lada hitam yang diperoleh, dihaluskan hingga diperoleh ukuran yang lebih kecil. 2. Pemeriksaan senyawa alkaloid
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 1 g kemudian ditambahkan masing masing 5 ml kloroform dan ammonia, saring diambil lapisan kloroform ditambahkan 5 ml asam klorida 2 N dikocok kuat lalu selanjutnya diambil lapisan kloroforn disaring. Pada filtrate masing-masing ditambahkan 2 tetes , Dragendorf dan mayer. Alkaloid positif jika terjadi endapan merah
untuk
pereaksi dragendorf dan endapapan putih atau kekeruhan pada pereaksi mayer. 3. Pembuatan ekstrak
Serbuk simplisia buah lada hitam 250 g direfluks dengan pelarut methanol selama 1,5 jam . Kemudian dilakukan penyaringan dan direfluks kembali dengan memakai methanol yang baru. Kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental. kemudian dihitung rendemen ekstrak yang didapat. 4. Uji pemantauan ekstrak dengan KLT
Ekstrak yang di peroleh dilakukan uji pemantauan dengan KLT menggunaka fase diam menggunakan plat silika gel 60GF254, fase gerak campuran nheksan: etil asetat (7:3) , sebagai penampak noda Dragendorf.
Hasilnya
diamati dan catat harga Rf dan di amati dibawah sinar uv 254 nm atau 365 nm. 5. Kristalisasi dengan pelarut KOH 10%
Ekstrak yang diperoleh ditambahkan 10 ml KOH 10 % kemudian didiamkan sebentar dilakukan pemisahan antara filtrate dan residu dengan teknik dekantasi. Filtratnya Disimpan pada lemari pendingin didiamkan semalaman, hingga
terbentuk Kristal. Kemudian
Kristal yang terbentuk dipisahkan
dikeringkan dan kemudian di timbang , lalu disimpan dalam botol vial.
13
6. Uji kemurnian kristal dengan KLT
Kristal yang di peroleh dilakukan uji kemurnian dengan KLT menggunakan fase diam menggunakan plat silika gel 60GF254, fase gerak campuran etil asetat-n-heksan (7:3) , sebagai penampak noda Dragendorf. Hasilnya diamati dan catat harga Rf dan di amati dibawah sinar uv 254 nm atau 365 nm. 7. Rekristalisasi dengan pelarut Aethanol 96%
Kristal yang belum murni disimpan dalam cawan porselen kemudian dilarutkan dengan aetanol 96%, dipisahkan filtrate dan residu,
kemudian
disimpan di dalam lemari dengan suhu 40 oC sampai terbentuk Kristal, Kristal yang diperoleh dikeringkan dan ditimbang , dimasukkan kedalam botol vial. 8. Uji kemurnian kristal dengan KLT
Kristal yang di peroleh dilakukan uji kemurnian dengan KLT menggunakan fase diam menggunakan plat silika gel 60GF254, fase gerak campuran etil asetat-n-heksan (7:3) , sebagai penampak noda Dragendorf. Hasilnya diamati dan catat harga Rf dan di amati dibawah sinar uv 254 nm atau 365 nm. 9. Uji pemantauan kristal dengan KLT berbagai pelarut tunggal
Kristal yang di peroleh dilakukan uji pemantauan dengan KLT menggunakan fase diam plat silika gel 60GF254, fase gerak kloroform, aethanol 96% , butanol, n-heksan, etil asetat, masing-masing dengan konsentrasi 100%, sebagai penampak noda Dragendorf. Hasilnya diamati dan catat harga Rf dan di amati dibawah sinar uv 254 nm atau 365 nm. 10. Rekristalisasi dengan pelarut campuran N-Heksan dan Etil Asetat (7:3)
Kristal yang belum murni disimpan dalam cawan porselen kemudian dilarutkan dengan pelarut campuran n-heksan dan etik asetat, dipisahkan filtrate dan residu, kemudian disimpan di dalam lemari dengan suhu 40 oC sampai terbentuk Kristal, Kristal yang diperoleh dikeringkan dan ditimbang , dimasukkan kedalam botol vial. 11. Uji kemurnian kristal dengan KLT
Kristal yang diperoleh dilakukan uji kemurnian dengan KLT menggunakan fase diam menggunakan plat silika gel 60GF254, fase gerak campuran etil asetat-n-heksan (7:3) , sebagai penampak noda Dragendorf. Hasilnya diamati dan catat harga Rf dan di amati dibawah sinar uv 254 nm atau 365 nm.
14
12. Uji pemantauan kristal dengan KLT berbagai pelarut campuran
Kristal
yang
menggunakan
di
peroleh
fase
dilakukan
diam
plat
uji
silika
pemantauan gel
60GF254,
dengan fase
kloroform:aseton (7:1) toluene:aseton (1:1) klorofom:etil (7:3),
KLT gerak sebagai
penampak noda Dragendorf. Hasilnya diamati dan catat harga Rf dan di amati dibawah sinar uv 254 nm atau 365 nm. 13. Uji kemurnian Kristal dengan KLT dua dimensi
Kristal yang diperoleh dilakukan uji kemurnian secara KLT dua dimensi Fase gerak etil asetat: n-heksana (7:3) dan toluene:aseton (4:3) fase diam plat silika gel 60GF254, sebagai penampak noda Dragendorf.
Hasilnya
diamati dan catat harga Rf dan di amati dibawah sinar uv 254 nm atau 365 nm. 14. Uji pemantauan Kristal yang diperoleh dan Kristal pembanding dengan KLT
Kristal yang diperoleh dan kristal pembanding dilakukan uji pemantaun secara KLT
Fase gerak etil asetat: n-heksana fase diam plat silika gel
60GF254, sebagai penampak noda Dragendorf. Hasilnya diamati dan catat harga Rf dan di amati dibawah sinar uv 254 nm atau 365 nm. 15. Pengujian Titik Leleh Kristal
Kristal dimasukkan ke dalam pipa kapiler, kemudian Pipa kapiler dimasukkan ke dalam alat titik lebur tester digital WRS-100 kemudian di atur suhu . bila suhu kristal masih diatas rentang menandakan bahwa Kristal tersebut belum murni 16. Identifikasi karakteristik kristal
Karakterisasi Isolat Alkaloid : Untuk mengetahui struktur dari senyawa alkaloid
murni
yang
didapatkan,
maka
isolat
alkaloid
dianalisis
menggunakan spektrofotometer UV-Vis, spektrofotometer FTIR. 1) Spektrofotometri uv-visible Kristal dilarutkan dengan metanol, sampel yang diduga sebagai senyawa utama diamati pada panjang gelombang 200-600 nm, direkam dan dicatat hasilnya
15
2) Spektrofotometri FTIR Sampel berbentuk cair diletakkan diantara 2 lempeng NaCl dengan konsentrasi sampel 1-5% diamati spektrumnya.
16
BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil
A. Hasil randemen ekstrak dan Kristal Jumlah Sampel
Berat
Rendemen (%)
Simplisia
250 g
-
Ekstrak
120 g
48 terhadap jumlah simplisia
Kristal total
1,267 g
-
1,05 terhadap jumlah ekstrak
-
0,50 terhadap jumlah simplisia
Kristal murni
67,25 mg
-
5,3 terhadap jumlah Kristal total
-
0,05 terhadap jumlah ekstrak
-
0,0269 terhadap jumlah simplisia
Kristal tidak murni
14,39 mg
-
0,0113 terhadap jumlah Kristal total
-
0,011 terhadap jumlah ekstrak
17
-
0,005 terhadap jumlah simplsia
Kristal tidak murni +
81,64 mg
-
Kristal murni
0,064 terhadap jumlah Kristal total
-
0,068 terhadap jumlah ekstrak
-
0,032 terhadap jumlah simplisia
B. Hasil Organoleptik Kristal Murni Pengujian
Hasil
Literarur (wiryowidadgo dan sumaali,2007)
Bentuk
Kristal seperti
Kristal seperti jarum
jarum warna
Kuning
Kuning
Bau
Tidak berbau
Tidak berabau
C. Hasil penapisan fitokimia alkaloida Golongan
Foto
Keterangan
senyawa
18
Hasil
alkaloida
Pereaski dragendorf
Endapan
+ alkaloida
merah bata
1. Pereaski mayer
Keruh
19
+ alkaloida
D. Hasil pengamatan KLT
Pengujian
Visual
Uv 254 nm
Uv 365 nm
Spot
Nilai
Fase gerak
Rf
Ekstrak metanol
Banyak
0,71
spot
n-heksan : etil asetat
Kristal (rekistralis
3 spot
asi KOH
0,46
n-heksan : etil asetat
10 %)
20
Kristal (rekistralis
2
0,46
asi
n-heksan : etil asetat
Aethanol 96 %)
Pemantaua
2
0,71
Kloroform
1
0,73
Aethanol
n kristal
Pemantaua n kristal
96%
21
Pemantaua
1
0,86
Butanol
Pemantaua
Tidak
0
n-heksan
n kristal
adanya
0,75
Etil asetat
n kristal
elusi
Pemantaua
2
n kristal
Kristal (rekristalis asi nheksan : etil asetat )
22
1
0,44
n-heksan: etil asetat (7:3)
Pemantua
1
0,77
n kristal
Kloroform :aseton (7:1)
Pemantaua
1
n kristal
0,68
Toluene:as eton (1:1)
23
Pemantaua n kristal
1
0,71
Kloroform : etil asetat (7:3)
Kristal
n-
dengan klt
1
0,37
2 dimensi
heksan:et il asetat dan toluene : aseton
Kristal
Pipe
dengan
rin
pembandi
1
ng standar
uji =
N
0,44
heksan:etil
piperin
asetat Pipe Kiri : kristal
Kiri : kristal uji
uji
0,44
Kanan :
Kanan : kristal piperin
kristal piperin
standar
standar 24
rin =
(7:3)
E. Hasil Titik Leleh Pengujian
Titik leleh
Literature
Hasil
129-135 º C
128-130oC
Tidak sesuai
(rekristalisasi
(Adosraku,
dengan
aethanol 96 %)
et al., 2013)
literatur
128-130oC
Tidak sesuai
(rekristalisasi n-
(Adosraku,
dengan
heksan : eti asetat )
et al., 2013)
literatur
Kristal
Kristal
125 – 131 º C
F. Data Hasil Spektrofotometer uv-visible
No.
Wavelength nm.
Abs.
Wavelenght nm.
Keterangan
(P.n.Shingate.,2013).
1
339.8
0.3005
343.5
Tidak sesuai
2
310.4
0.1879
310
Tidak sesuai
3
253.2
0.1036
-
-
4
245.4
0.1048
-
-
G. Data Hasil Spektrofotometer FTIR Nilai standar IR
Hasil isolasi
No.
Data analisis gugus fungsi
1
regang C-H aromatik
3000
3008,95
regang simetrik dan
1635
1633,71
asimetrik C=C (diene)
1608
1612,49
1608
1612,49
1580
1583,56
1495
1490,97
2
3
regang C=C romatik
25
(P.n.Shingate.,2013).
4
Regang -CO-N Regang CH2 simetrik dan
5
asimetrik, Regang C-H alifatik
6
Lentur CH2
7
regang asimetrik =C-O-C,
regang simetrik =C-O-C, Regang C-O, Lentur C-H
8
pada trans –CH=CH-
1,2,4-trisubtitusi fenil pada
9
lentur C-H
1635
1633,71
2925
2920,23
2840
2862,36
1450
1454,33
1250
1253,73
1190
1195,87
1030
1031,92
930
929,69
1132
1134,14
995
997,2
850
846,75
830
831,2
805
804,32
4.2 Pembahasan 1. Ekstraksi simplisia, Penapisan Fitokimia , dan Pemantaun KLT Dari ekstrak
Percobaan ini dilakukan untuk mengisolasi piperin dari lada hitam. Pada percobaan ini, 250 g lada hitam kering yang sudah digerus diekstraksi dengan menggunakan metode refluks, dan digunakan metanol sebagai pelarut. Proses refluks dilakukan sebanyak 2 kali sirkulasi selama 1,5 jam, hal ini dapat dianggap bahwa piperin yang terkandung dalam lada hitam telah terikat oleh metanol yang dapat dilihat dari perubahan warna larutan menjadi warna coklat. Digunakan batu didih pada labu alas bulat yang bertujuan untuk menjaga tekanan dan suhu larutan supaya tetap stabil dan tidak terjadi booming selama proses ekstraksi berlangsung. Hasil tadi kemudian dievaporasi yang bertujuan untuk memisahkan hasil ekstrak dengan pelarutnya, yakni metanol. Dalam evaporator akan terjadi
26
pemisahan ekstrak dari pelarutnya (metanol) dengan prinsip pemanasan yang dipercepat oleh putaran labu bundar, pelarut dapat menguap 5-10 oC di bawah titik didih pelarutnya disebabkan adanya perubahan tekanan. Dengan bantuan pompa vakum, uap larutan pelarut metanol akan menguap naik ke kondersor dan mengalami kondensasi menjadi molekulmolekul cairan pelarut metanol murni yang ditampung dalam labu bundar sebagai penampung pelarut. Sehingga diperoleh ekstrak larutan coklat dengan kristal jarum kecil setelah didapat ekstrak larutan dilakukan penapisan fitokimia dan pemantaun KLT. Pada pengujian untuk mengidentifikasi alkaloid yaitu dengan penambahan HCl 1 %. penambahan HCl berfungsi untuk membentuk garam alkaloid, karena alkaloid yang bersifat basa dapat larut dalam pelarut yang bersifat asam. Pemanasan dalam uji alkaloid bertujuan utnuk membentuk garam alkaloid yang stabil. Penambahan dragendorf pada pengujian alkaloid bertujuan untuk mengendapkan alkaloid karena dalam senyawa alkaloid terdapat gugus nitrogen yang memiliki satu pasang elektron bebas yang menyebabkan senyawa alkaloid bersifat nukleofilik (basa). maka dari itu , senyawa alkaloid mampu mengikat ion logam berat (dragendorf) yang mempunyai muatan positif sehingga terbentuk endapan jingga. Larutan yang ditambahkan pereaksi mayer membentuk endapan putih . pereaksi mayer bertujuan untuk mendeteksi alkaloid dimana pereaksi ini berikatan dengan alkaloid melalui ikatan koordinasi antara atom N alkaloid dengan Hg pereaksi mayer sehingga menghasilkan senyawa kompleks merkuri yang non polar mengendap berwarna putih. atom N menyumbangkan pasangan elektron bebas dan atom Hg sehingga membentuk senyawa kompleks yang mengandung atom N sebagai ligannya. Tahap selanjutnya, uji pemantauan ekstrak untuk mengetahui banyaknya komponen senyawa dalam ekstrak dengan metode KLT. Pada percobaan ini dilakukan dengan menggunkaan KLT fase normal dimana pada fase diamnya menggunakan silica gel yang cenderung lebih polar yang dapat dapat membentuk ikatan hidrogen dipermukaannya, karena
27
pada permukannya terikat gugus hidroksi, sedangkan untuk fase geraknya digunakan campuran pengembang antara n-heksan yang bersifat non polar dan etil asetat bersifat semipolar (7:3). Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti etil asetat ke dalam pelarut non polar seperti nheksan akan meningkatkan harga Rf secara signifikan. Digunakan fase gerak tersebut karena sifat piperin yang cenderung non polar sehingga akan terbawa oleh fase gerak sedangkan zat lain dan pengotor yang memiliki polaritas berbeda akan tertahan oleh silika gel. Sebelum proses elusi dimulai, chamber terlebih dahulu harus di jenuhkan dengan pelarut. Tujuan penjenuhan dengan eluen ialah untuk menjaga reprodusibilitas dari proses KLT. Selain itu, untuk menyamakan tekanan uap eluen dalam chamber agar dapat merata sehingga proses elusi dapat seragam kecepatannya dan penjenuhan dilakukan untuk mengoptimalkan proses pengembangan didapat hasil hasil Rf
0,71 dan tandai secara visual
dengan lampu uv 254 dan 365 yang menyatakan masih banyak terdapat senyawa yang belum diketahui. 2. Kristalisai, Rekristalisasi dan KLT kristal
Penambahan larutan KOH dalam metanol bertujuan untuk memperoleh piperin dari ekstrak tersebut, dimana di dalam ekstrak tersebut terdapat komponen lain ketika ditambahkan KOH-alkohol yang menyebabkan piperin yang ada dalam ekstrak tersebut bereaksi menjadi garam asam piperat dan dengan penambahan KOH-alkohol dapat mengeliminasi senyawa lainnya, karena dalam ekstrak tersebut masih ada zat pengotor. Masih terdapatnya zat pengotor ini disebabkan senyawa piperin, merupakan senyawa alkaloid golongan amida yang dapat mengalami reaksi hidrolisis baik dalam suasana asam maupun basa. Jadi penambahan larutan KOH-alkohol ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa piperin dalam bentuk garamnya, karena senyawa golongan alkaloid sering kali diisolasi dalam bentuk garamnya yaitu garam asam piperat.
28
Reaksi:
Filtrasi dilakukan untuk
memisahkan senyawa piperin dari
pengotornya. Filtrat yang diperoleh berwarna cokelat. Filtrat yang diperoleh dimasukkan ke dalam cawan penguap kemudian dimasukkan ke dalam
lemari
pendingin
dan
didiamkan
selama
semalam
untuk
mempercepat proses kristalisasi. Kristal berwarna coklat yang terbentuk dilakukan uji KLT.Kristal tersebut dilakukan uji kemurnian senyawa piperin dengan KLT dengan fase diam dan pengembang yang sama didapat hasil profil dengan 3 spot dan Rf 0,46 menandakan
Senyawa tersebut belum murni dan belum
sampai pada daerah Rf piperin Kristal yang terbentuk
selanjutnya
direkristalisasi menggunakan etanol, rekristalisasi ini berdasarkan prinsip perbedaan dalam kelarutan. Selain itu, etanol juga bersifat vollatil (mudah menguap) sehingga mempermudah proses pemisahan antara etanol dengan piperin. Piperin dalam suhu kamar berbentuk Kristal. Piperin dan etanol memiliki kepolaran yang sama yaitu bersifat polar sehingga etanol mampu melarutkan piperin sesuai dengan prinsip like dissolved like, dimana antara piperin dengan etanol mampu untuk membentuk ikatan hidrogen. Diperoleh Kristal berwarna kuning agak kecoklatan yang terbentuk dilakukan uji KLT dengan pelarut dan pengembang yang sama, hasilnya masih terdapat 2 spot di Rf 0,46 ini menandakan senyawa tersebut belum murni ditandai adanya 2 spot, pot yang paling bawah menandakan pengotor yang larut dalam aethanol dan dilakukan uji titik leleh untuk mengkonfirmasi adanya pengotor dengan hasil 129-135 0C. Kristal dilakukan rekristalisasi lanjutan dengan n-heksan:etil asetat 29
(7:3). Pengembang tersebut digunakan berdasarkan pemantauan KLT dengan beberapa pengembang tunggal yaitu klroform, aethanol, butanol, n-heksan, dan etil asetat, ini dikarenakan untuk membantu pada proses pemurnian kristal, dilihat dari bentuk polaritasnya, spot dan berdasarkan pemisahan yang baik , hal ini dikarenakan berbagai senyawa fitokimia memeberikan nilai Rf yang berbeda pada system eluen yang berbeda. Variasi nilai Rf pada fitokimia memberikan petunjuk penting dalam memhami polaritas senyawa serta membantu untuk memilih system pelarut untuk memisahkan senyawa murni sehingga akan didapat Kristal yang lebih murni. Didapat hasil KLT berturut-turut dari kloroform yaitu terdapat 2 spot di Rf 0.71, aethanol 96% 1 spot Rf 0,73, butanol 1 spot Rf 0,86 , n-heksan 1 spot Rf 0, dan etil asetat 2 spot di Rf 0,75. Pada etanol, butanol, dan n-heksan tidak terjadi pemisahan ini menandakan bahwa senyawa pengotor yang terdapat pada Kristal larut dalam dalam aetanol dan butane tetapi pada pelarut n-heksan tidak terjadi pemisahan karena n-heksan tidak dapat melarutkan pengotor dan tidak dapat dipisahkan, pada pelarut etanol yang diamati pada proses elusi, waktu elusinya sangat cepat
bila dibandingkan dengan butanol ini
menandakan bahwa gugus polar pada etanol dapat berkompetisi dengan senyawa untuk terikat pada permukaan silica gel, dan hanya menyisakan sedikit tempat bagi senyawa untuk terikat pada silica gel, akibatnya senyawa akan bergerak cepat melewati fase diam tanpa pemisahan, pada butanol waktu elusinya sangat lama karena butanol tersebut bersifat pelarut yang lemah dibandingkan dengan ethanol hal ini dikarenakan ada beberapa faktor seperti tetapan dielektrik , momen dipol pelarut semakin besar tetapan tersebut maka semakin besar polar pelarut tersebut. Pada pelarut kloroform dan etil asetat didapat hasil terdapat 2 spot ini menandakan pelarut tersebut dapat memisahkan pengotor dari senyawanya. Maka untuk memilih pelarut pada proses rekristalisasi dilakukan pertimbangan atas dasar profil klt yang diperoleh, digunakan pelarut yang dapat memisahkan pengotor, tidak melarutkan pengotor dan bentuk spot yang baik, maka di digunakan pelarut campuran n-heksan dan etil asetat
30
(7:3) karena pada bentuk spot etil asetat yang baik dan terjadi pemisahan pengotor sedangkan digunakannya n-heksan karena dia tidak melarutkan pengotor. Kristal yang terbentuk dilakukan uji KLT, hasilnya sudah terdapat 1 spot ini menandakan Kristal yang sudah direkristalisai dengan n-heksan dan asetat sudah murni kemudian
dilakukan uji titik leleh untuk
menyatakan Kristal yang di peroleh benar-benar murni atau tidak.
3. KLT 2 dimensi dan Uji Titik Leleh
Pada tahap ini kromatografi lapis tipis dua dimensi, kristal dilarutkan pada metanol lalu ditotolkan pada lempeng Dua Dimensi (5x5). Digunakan perbandingan n-heksan:etil asetat (7:3) untuk mengelusi. Pada KLT Dua Dimensi, digunakan 2 cara penotolan pada satu lempeng dimana penotolan ke-2, salah satu arahnya diputar berlawanan arah jarum jam. Kemudian dielusi dengan toluene :acetone (4:3), dimana pada penentuan pengembang toluene dan aseton didasarkan pada hasil pemantaun KLT dengan berbagai pengembang campuran diantaranya, kloroform : aseton (7:1) toluene : aseton (1:1) dan kloroform : etil (7:3) masing-masing memiliki nilai Rf yaitu, 0,77, 0,68 dan 0,71 kemudian dipilih nilai Rf yang lebih kecil dan diamati dibawah sinar UV 366nm dan 254nm. Pada 366 nm noda akan berflouresensi dan lempeng akan berwarna gelap. Penampakan noda pada lampu 366 nm karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan gugus kromofor yang terikat oleh auksokrom yang ada pada noda tersebut. Flouresensi cahaya yang tampak merupakan emisi cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang tereksitasi dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian kembali ke keadaan semula sambil melepaskan energi. Sehingga noda yang tampak padalampu UV 366nm terlihat terang karena silika gel yang digunakan tidak berfluoresensi pada sinar UV 366 nm. Adapun hasil yang didapatkan yaitu didapatkan noda berwarna
31
kuning tunggal. Dimana noda tunggal ini merupakan suatu senyawa piperin. Pada pengujian titik leleh pertama hasil rekristalisasi dengan menggunakan aethanol 96% didapat hasil 129-135 0C ini masih jauh bila dibandingkan dengan literature maka Kristal tersebut dinyatakan belum murni karena masih terdapat senyawa pengotor yang belum hilang secara sempurna sehingga masih ikut terelusi atau merupakan senyawa piperin yang belum terhidrolisis sempurna oleh KOH etanolik. Pada pengujian titik leleh kedua
hasil rekristalisasi dengan n-heksan dan etil asetat
didapat hasil 126-131 0C. Sedangkan dalam literatur titik leleh piperin adalah 128-130 ºC. Hal ini titik lebur kristal yang diperoleh sesuai pada acuan yaitu 128-130 oC (Adosraku, et al., 2013). Namun, kristal yang murni memiliki rentang temperatur sempit yaitu 1-2oC (Hart H, et al., 2012) sedangkan kristal yang diperoleh memiliki rentang yang lebar, yaitu 126-1310C. Pelebaran rentang temperatur di atas 5oC mengindikasikan kristal kurang murni. Kontaminan megacaukan kosistensi dan bentuk ikatan kristal pada level molekuler. Gangguan tersebut melemahkan struktur ikatan lebih mudah terurai sehingga batas bawah temperatur turun dan rentang temperatur menjadi melebar (Hart H, et al., 2012). Kristal yang diperoleh berwarna kuning dengan rendemen sebesar 0,0269 % dalam 250 gram lada hitam. Kristal yang terbentuk sangat sedikit disebabkan terjadi kesalahan pada penggunaan pelarut sebelumnya yang mengakibatkan banyaknya senyawa terdegradasi. menyatakan bahwa kristal belum .
4. Analisis data Spektrofotometri UV-Visible
Kristal Piperin yang diperoleh dilakukan analisis data dengan menggunakan alat spektrofotometer uv-vis. Abdorban dan panjang gelombang piperin dapat ditentukan dengan alat spektrofotometer uv-vis karena dari strukturnya piperin memiliki gugus kromofor (ikatan rangkap terkonjugasi). Filtrat yang sudah diencerkan kristal hasil isolasi dilarutkan dalam pelarut methanol p.a kemudian diukur absorbansi pada panjang
32
gelombang serapannnya,
200-400
nm.
Dilihat
bentuk
spektrum
dan
daerah
secara kimia spektrum ultraviolet piperin menunjukan
adanya kespesifikan dalam bentuk pita dan panjang gelombangnya, yaitu panjang gelombang maksimumnya pada 343.5 dan lamda max ke 2 pada panjang gelombang 310 nm (P.n.Shingate.,2013). Hasil analisa dengan spektrofotometri UV-Visible terhadap piperin memberikan puncak-puncak pada panjang gelombang yaitu 339,8 nm, 310,4 nm, 253,2 nm, dan 245,4 nm. Pada puncak pertama lamda maximal nya tidak sesuai dengan literature ini menandakan bahwa kristal yang kita peroleh dinyatakan sedikit kurang murni . 5. Analisis data Spektrofotometer FTIR
Analisis lebih lanjut dengan spektrofotometri inframerah (IR) menunjukan adanya regang C-H aromatik pada peak 3008,95 , regang simetrik dan asimetrik C=C (diene) pada peak 1633,71 dan 1612,49 regang C=C romatik pada peak
1612,49, 1583,56 , dan 1490,97 ,
Regang -CO-N pada peak1633,71 , Regang CH 2 simetrik dan asimetrik, Regang C-H alifatik pada peak 2920,23 dan 2863,36 , Lentur CH 2 pada peak 1454,33 , regang asimetrik =C-O-C pada peak 1253,73 dan 1195,87 , regang simetrik =C-O-C ada peak 1031,93 Regang C-O, Lentur C-H pada trans – CH=CH-
pada peak
929,69 dan 997,2 , 1,2,4-
trisubtitusi fenil pada lentur C-H pada peak 846,75831,2 dan 804,32dari analisa data menyatakan bahwa Gugus-gugus yang terbaca merupakan daerah bilangan yang mendekati piperin yang menduga bahwa Kristal yang kita peroleh sudah sedikit murni.
33
BAB VI
KESIMPULAN DAN SARAN
4.1 Kesimpulan
1. Pada hasil penapisan fitokimia alkaloid pada ekstrak lada hitam positif menandakan adanya senyawa alkaloid dalam lada hitam. 2. Pada hasil rekristralisasi yang paling efesien dan optimal digunakan pelarut n-heksan dan etil asetat (7:3) dibuktikan dengan uji kemurnian dengan klt yang menandakan Kristal tersebut murni ditandai dai adanya 1 spot dan Rf 0,44. 3. Kristal yang diperoleh berwarna kuning dengan rendemen sebesar 0,0269 % dalam 250 gram lada hitam. 4. Pada
pengujian
titik
leleh
pertama
hasil
rekristalisasi
dengan
menggunakan aethanol 96% didapat hasil 129-135 0C sedangakn pengujian titik leleh kedua
hasil rekristalisasi dengan n-heksan dan etil asetat
didapat hasil 126-1310C pada keduanya masih belum memenuhi literatur. 5. Kristal yang diperoleh memiliki daerah serapan dengan memberikan puncak-puncak pada panjang gelombang yaitu 339,8 nm, 310,4 nm, 253,2 nm, dan 245,4 nm panjang gelombang tersebut tidak memenuhi literatur. 6. Dari analisa dataspektrofotometri FTIRmenyatakan bahwa Gugus-gugus yang terbaca merupakan daerah bilangan yang mendekati piperin yang menduga bahwa Kristal yang kita peroleh sudah sedikit murni. 7. Pada pengujian Titik Leleh, serta Uv Visible , dan FTIR didapat bahwa Kristal yang kita peroleh dinyatakan masih kurang murni, dikarenakan masih adanya sedikit pengotor.
34
4.2 Saran
1. Pada saat melakukan proses rekristalisasi harus diperhatikan dari pemilihan pelarut, temperature, serta perlakuan. Diharapkan kristal yang diperoleh memiliki rendemen yang besar. 2. Pengadaan peralatan laboratorium lebih banyak, agar praktikum dapat diselesaikan dengan jangka waktu yang lebih cepat.
35
DAFTAR PUSTAKA
1. Article in Journal: Ahmed, M. F., et al.,2012, Phytochemical Studies and Antioxidant Activity of Melia azedarach Linn Leaves By DPPH Scavenging Assay. Journal of Pharmaceutical Applications, 3(1), 271-276. 2. Article in Journal:Asadujjaman, e. a. (2013). Assessment of Bioactivities of Ethanolic Extract of Melia azedarach (Meliaceae) Leaves. Journal of Coastal Life Medicine, 1, 118-122. 3. Steenis, C.G. G. J` Van. 2006. Flora Pegunungan Jawa. Pusat Penelitian Biologi (LIPI). Bogor. 4. Wahid, P. 1996. Identifikasi Tanaman Lada. Monograf Tanaman Lada. Balittro: hal 27-32 5. Parthasarathy, U.,G.R. Asish., T.J. Zachariah., K.V. Saji., J.K. George., K. Jayarajan.,P.A. Mathew. 2008. Spatial Influence of the Important Biochemical Properties of Piper nigrum Linn. Leaves. Natural Product Radiance Vol.7(5),2008:444-447 6. Williamson, E.M. 2002. Major Herbs of Ayurveda. Churchill Livingstone. United Kingdom 7. Rismunandar,2000. Laju dekomposisi Serasah Daun Avicennia marina pada Berbagai Tingkat Salinitas (Studi kasus di Kawasan Hutan Mangrove Blanakan, RPH Tegal Tangkil, BKPH Ciasem- Pamanukan, KPH Purwakarta, Perum Perhutani Unit III Jawa Barat). 8. Ketaren, S.1985. Pengantar Teknologi Minyak Atsiri, Penerbit Balai Pustaka, Jakarta. 9. Soebagio. 2002. Kimia Analitik II. Malang. Universitas Negeri Malang. 10. Mulja, M. dan Suharman, 1995, “Analisis Instrumental”, Ed. 1, Erlangga University Press, Surabaya. 11. Dacriyanus. 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi. Padang: Universitas Andalas Press` 12. Silverstein,dkk. 1986. Penyidikan Spektrometri Senyawa Organik. Edisi keempat. Penerjemah A.J. Hartomo. Jakarta : Penerbit Erlangga. 13. Hegnauer, R., 1986, Chemotaxonomie der Pflanzen, Bhrkhauser Verlag,
36
Sturttgart. 14. Iskandar et al, 2003. Panduan Praktis Pencegahan dan Pengobatan Stroke. Jakarta : Bhuana Ilmu Populer 15. Fessenden dan Fessenden. 1997. Dasar-Dasar Kimia Organik. Jakarta : Binarupa Aksara 16. Soebagio. 2002. Kimia Analitik, Universitas Negeri Makasar Fakultas MIPA, Makasar. 17. Nasution M.N., 2010. Manajemen Mutu Terpadu (Total Quality Management), Ghalia Indonesia, Jakarta. 18. Schechter, I barzilai,I.L., anda Bulatov,V.,1997, Online Remote Prediction of Gasoline
Properties
by
Combined
Optical
Method,
Ana.Chim.
Acta,339,p,193-199 19. Kister, Henry Z. 1992. Distillation Design (1st ed.). McGraw-Hill. 20. Arsyad, M.Natsir,2001, Kamus Kimia Arti dan Penjelasan Istilah, Gramedia, Jakarta. 21. Williamson.1999.
Macroscale
and
Houghton Mifflin Company, U
37
Microscale
Organic
Experiments.
LAMPIRAN BAGAN PENELITIAN
-
Dilakukan penafisan fitokimia
-
Direfluks dengan methanol
-
Disaring
Dipantau dengan KLT
(n-heksan ; etil asetat)
Dipekatkan dengan rotary evaporator
Di Kristalisasi dengan KOH 10%
Diuji kemurnian dengan klt (nheksan:etil)
Direkristalisasi (aetanol 96%)
Kristal B
Diuji kemurnian dengan KLT (nheksan:etil asetat)
Dipantau dengan KLT dengan berbagai pelarut
Direkristalisasi
n heksan:etil asetat (7:3)
38
Diuji kemurnian dengan KLT (n-heksanettil asetat)
Dipantau dengan KLTdengan pelarut campuran
Dilakukan KLT 2 dimensi
Dilakukan uji pemantauan dengan pembanding
Diidentifikasi Kristal denganSpektrofotometriUV dan IR
HASIL
PERHITUNGAN
1.
Pemantauan KLT ekstrak etanol lada hitam Jarak spot : 1,5cm (>2spot) Rf =
2.
,5
= 0,33
4,5
Pemantauan KLT kristal (kristalisasi KOH 10%) (eluen n-heksan:etil asetat (7:3)) Jarak spot : 2,1cm (3spot) Rf =
3.
2,
= 0,46
4,5
Pemantauan KLT kristal (rekristalisasi Aethanol 96 %) (eluen n-heksan:etil asetat (7:3)) Jarak spot : 2,1cm (2spot) Rf =
4.
2,
= 0,46
4,5
Pemantauan KLT kristal (eluen Etanol) Jarak spot : 3,3cm (1spot) Rf =
5.
3,3
= 0,73
4,5
Pemantauan KLT kristal (eluen Kloroform 100%) Jarak spot : 3,2cm (2spot) Rf =
6.
3,2
= 0,71
4,5
Pemantauan KLT kristal (eluen Etanol) Jarak spot : 3,3cm (1spot) 39
Rf = = 0,73 7.
Pemantauan KLT kristal (eluen Butanol) Jarak spot : 3,9cm (1spot) Rf =
8.
3,9
= 0,86
4,5
Pemantauan KLT kristal (eluen n-hexan) Jarak spot : 0cm (1spot) Rf =
9.
=0
4,5
Pemantauan KLT kristal (eluen etil asetat) Jarak spot : 3,4cm (2spot) Rf =
3,4
= 0,75
4,5
10. Pemantauan KLT kristal (rekristalisasi n-heksan dan etil asetat) (eluen nhexan : etil asetat (7:3)) Jarak spot : 2cm (1spot) Rf =
2
= 0,44
4,5
11. Pemantauan KLT kristal (eluen Kloroform : Aseton (7:1)) Jarak spot : 3,5cm Rf =
3,5
= 0,77
4,5
12. Pemantauan KLT kristal (eluen Toluen : Aseton (1:1)) Jarak spot : 3,1cm Rf =
3,
= 0,68
4,5
13. Pemantauan KLT kristal (eluen Kloroform : Etil Asetat (7:3)) Jarak spot : 3,2cm Rf =
3,2
= 0,71
4,5
14. Pemantauan KLT 2 Dimensi kristal (eluen n-hexan : etil asetat (7:3)) dan (eluen Toluen : Aseton (1:1)) Jarak spot : 1.3cm
40
Rf =
,3
= 0,37
3,5
15. Pemantauan KLT kristal : pembanding (1) Jarak spot : 2,0cm Rf =
2,
= 0,44
4,5
16. Pemantauan KLT kristal : pembanding (2) Jarak spot : 2,0cm Rf = 1.
2,
= 0,44
4,5
Perhitungan Rendemen
Jumlah sample : 250g
Jumlah ekstrak : 120g
Rendemen ekstrak =
Jumlah kristal total : 1,267g
Rendemen kristal total =
Jumlah kristal belum murni : 14,39mg
Rendemen kristal belum murni=
Jumlah kristal murni : 67,25 mg
Rendemen kristal murni =
Rendemen 67,25+4,39
=
267
2 25
kristal
100% = 48%
,267 2
100% = 1,05%
4,39mg 267
67,25 mg 267
murni
100% = 6,4%
41
100% = 0,0113%
100% = 5,3%
dan
kristal
belum
murni
H. Sepktrum Spektrofotometer uv-visible
42
