LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PANGAN PEMERIKSAAN PEMERIKSAAN ANGKA KUMAN AEROB DAN SPORA BAKTERI
KELOMPOK A3 GIZI NONREGULER ANGGOTA KELOMPOK: 1. DIAN EKA KURNIA 2. DEVI MELIANTI 3. INDAH SEPTIA 4. RIA SEPTIANA
POLTEKKES KEMENKES TANJUNG KARANG JURUSAN GIZI 2013/2014
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Kuantitasi mikroba menunjukan jumlah koloni yang mampu di bentuk oleh mikroba tertentu. Beberapa koloni bakteri ini, bagi tubuh manusia akan menyebabkan penyakit. Seteril dari bakteri untuk maknan terutama minuman, sangat perlu di ketahui demi menjaga kesehatan. Air minum dari berbagai tempat memepunyai jenis-jenis bakteri yang tidak sama untuk air minum hasil penyulingan diharapkan sudah terbebas dari bakteri. Menghitung atau menentukan banyaknya mikroba dalam suatu bahan (makanan, minuman, dan lain-lain) dilakukan untuk mengetahui sampai seberapa jauh bahan itu tercemar oleh mikroba. Dengan mengetahui jumlah mikroba, maka dapat diketahui kualitas mikrobiologi dari bahan tersebut. Bahan yang dapat dikatakan baik jika jumlah mikroba yang terkandung dalam bahan tersebut masih di bawah jumlah standar yang ditentukan oleh suatu lambaga. Kandungan mikroba pada suatu bahan juga sangat menentukan tingkat kerusakannya, serta dapat ditentukan oleh tingkat kelayakan untuk dikonsumsi. Uji angka lempeng total merupakan metode yang umum digunakan untuk menghitung adanya bakteri yang terdapat dalam sediaan yang diperiksa. Uji angka lempeng total dapat dilakukan dengan dua teknik, yaitu teknik cawan tuang (pour plate) dan teknik sebaran (spread plate). Pada prinsipnya dilakukan pengenceran terhadap sediaan yang diperiksa kemudian dilakukan penanaman pada media lempeng agar. Jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada lempeng agar dihitung setelah inkubasi pada suhu dan waktu yang sesuai. Perhitungan dilakukan terhadap petri dengan jumlah koloni bakteri antara 30-300. Angka lempeng total dinyatakan sebagai jumlah koloni bakteri hasil perhitungan dikalikan faktor pengencer. Angka kapang/khamir menunjukkan adanya cemaran kapang/khamir dalam sediaan yang diperiksa. Setiap sediaan mensyaratkan batas angka kapang/khamir tertentu yang masih dianggap aman. Perhitungan dilakukan terhadap petri dengan
jumlah koloni 40-50 buah. Angka kapang/khamir dinyatakan sebagai jumlah koloni kapang/khamir hasil perhitungan dikalikan faktor pengenceran.
1.2 Tujuan
Menghitung koloni pada pengenceran media plate count agar (PCA) dengan sampel tempe.
BAB II METODOLOGI
2.1 Waktu dan Tempat
Hari, Tanggal : Selasa, 19 November 2013 Waktu
: Pukul 08.00 s.d Selesai
Tempat
: Laboratorium Terpadu
2.2 Alat dan Bahan
2.2.1 Alat Alat yang digunakan dalam praktikum ini yaitu : timabangan (kemampuan sampai 300 gram), labu Erlenmeyer yang berskala, pipet takar, petridish, lampu spiritus, dot karet (bulbl/spin), inkubator 37 0C dan 55 0C.
2.2.2 Bahan, Bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah : plate count agar/ glucose yeast axtract agar, quarter strength ringer s olution, air garam 0,85%, dan tempe.
2.3. Cara Kerja
2.3.1 Pengenceran Sampel Padat Ditimbang labu Erlenmeyer steril yang berskala.
Diambil sampel secara steril, dan dimasukkan ke dalam Erlenmeyer steril tersebut, dan ditimbang sebanyak 1 gram sampel.
Lakukan pengenceran dengan menanmbahkan 9 ml aquades ke dalam tabung reaksi lalu homogenkan.
Diambil 1 ml dari hasil penceran masukkan ke dalam tabung ke 2, lalu ditambahkan 9 ml aquades, lalu homogenkan.
Demikian seterusnya hingga pengenceran ke 6.
2.3.2 Penuangan Plate Count Agar Diambil 1 cc dari
pengenceran ke empat, lima, dan enam, lalu dimasukkan
masing-masing ke dalam petridish steril yang sudah diberi nomer sampel, penenceran, dan tanggal pelaksanaan pemeriksaan.
Dibuat plate control (Petridish diisi pelarut sebanyak 1 cc), tujuanya untuk mengetest sterilisasi alat, reagensia, ruangan, dan cara kerjanya.
Dituangi plate count agar suhu 45-50 0C sebanyak 15-20cc pada masing-masing petridish yang sudah berisi sampel.
Diamkan diatas meja sampai agar-agar membeku.
Kumpulkan, dibalik, dan diinkubasi 37 0C selama 48 jam.
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1 Hasil Pengamatan
Tabel 1 Perhitungan koloni pada plate Plate
Pengenceran
Nomer 1.
10 -
2.
10 -
3.
10 -6
Control 1x
Gambar
3.2 Pembahasan
Pada praktikum pemeriksaan angka kuman aerob dan bakteri (total plate count) dengan sampel tempe bertujuan untuk menghitung koloni pada pengenceran media plate count agar (PCA). Langkah pertama yang dilakukan adalah mensterilisasi alat-alat yang akan digunakan, kemudian melakukan pengenceran sampel padat, yakni dengan mengambil sampel secara steril sebanyak 1 gram, lalu menambahkan 9 ml aquades, dan dihomogenkan. Selanjutnya, penuangan plate count agar ke dalam petridish , yakni 1 cc sampel dan 15-20 cc plate count agar, diamkan hingga membeku dan diinkubasi selama 48 jam. Dan dari tabel 1 diatas, didapatkan jumlah koloni yang sangat banyak (tak terhingga), hal ini dapat dilihat dari banyaknya koloni pada control, yakni lebih dari 5 koloni, karena jumlah maksimal control 5 koloni. Dan untuk pengenceran ke 10 -6 didapatkan hasil lebih banyak dibandingkan dengan 10
-5
dan 10
-4
, hal
ini sesuai dengan Tingkat pengenceran yang lebih tinggi menghasilkan jumlah koloni
yang
lebih
banyak
(Fatmarina,
2000).
pensuspensian pada pengenceran rendah, seperti 10
Dan
apabila
dilakukan
-1
, maka mikroorganisme
menjadi sangat banyak dan sulit untuk dihitung. (Fardiaz, 1989) Dan hasil praktikum tersebut dinyatakan galat, karena banyaknya jumlah koloni pada control lebih dari 5 dan ketidaksterilan alat yang digunakan, serta adanya kontaminan dari sumber lainnya, yakni udara,sampel (tempe), alumunium foil (digunakan saat menutup erlenmeyer setelah pemanasan PCA). Perhitungan diatas dengan asumsi bahwa satu koloni berasal dari satu sel mikroorganisme. Sehingga pemahaman lebih lanjut pada penelitian berikutnya tidak menyimpang dari asumsi sebelumnya, yakni koloni bakteri pada suspensi pengenceran kecil lebih banyak dibandingkan suspensi pengenceran tinggi. Faktor lingkungan yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri yang optimal diantaranya adalah suhu, udara, pH, kelembaban. (Fatmarina, 2000) Syarat koloni yang ditentukan untuk dihitung adalah sebagai berikut: satu koloni dihitung 1 koloni, dua koloni yang bertumpuk dihitung 1 koloni, beberapa koloni yang berhubungan dihitung 1 koloni, dua koloni yang berhimpitan dan masih dapat dibedakan dihitung 2 koloni, koloni yang terlalu besar (lebih besar)
Penghitungan jumlah mikroorganisme dengan cara viable count atau disebut juga sebagai standard plate count (SPC) didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel mikroorganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh menjadi satu koloni setelah diinkubasi dalam media biakan dan lingkungan yang sesuai. Setelah masa inkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan atau dugaan dari jumlah mikroorganisme dalam suspensi tersebut. Berdasarkan hal tersebut digunakan istilah colony forming units (CFU/ ml). Koloni yang tumbuh berasal dari suspensi yang diperoleh menggunakan pengenceran bertingkat dari sebuah sampel yang ingin diketahui jumlah mikrobanya. 18 dari setengah luas cawan) tidak dihitung, koloni yang besarnya kurang dari setengah luas cawan dihitung 1 koloni. Penghitungan jumlah mikroorganisme hidup (viable count) adalah jumlah minimum mikroorganisme. Hal ini disebabkan koloni yang tumbuh pada lempengan agar merupakan gambaran mikroorganisme yang didapat. (Fardiaz, 1989). Seperti
gambar
disamping
perhitungan
koloninya, lihat koloni (bentuk lingkaran) yang besar di hitung satu koloni, dan yang kecil dihitung satu koloni, bahkan yang nampak seperti titikpun dihitung satu koloni. Dan untuk mempermudahkan menghitung dengan cara manual beri titik dengan spidol pada setiap koloni yang telah dihitung, atau buat area, lalu hitung salah satunya, dan kalikan dengan banyaknya area tersebut. Total Plate Count (TPC) merupakan salah satu metode yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam bahan pangan. Metode hitungan cawan (TPC) merupakan metode yang paling banyak digunakan dalam analisa, karena koloni dapat dilihat langsung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop. (Fardiaz, 1989) Perhitungan jumlah koloni dilakukan dengan hitungan cawan (Total Plate Counts) berdasarkan pertumbuhan dapat dilihat langsung tanpa mikroskop (Fardiaz, 1989).
Metode hitungan cawan cukup sensitif untuk menentukan jumlah mikroorganisme
yang
masih
hidup
dengan
menghitung
beberapa
jenis
mikroorgaisme sekaligus mengisolasi dan mengidentifikasi yang berasal dari suatu mikroorganisme yang mempunyai penampakan pertumbuhan spesifik. Dengan metode TPC jumlah koloni dalam contoh dihitung sebagai berikut : Koloni per ml atau per gram = jumlah koloni per cawan x 1/FP (faktor pengenceran) Selanjutnya cawan petri yang dipilih dan dihitung mengandung jumlah koloni antara 30-300 (Permana dan Kusmiati, 2007). Pengkuran pertumbuhan mikroorganisme dilakukan dengan metoda cawan. Prinsip dari metode ini adalah sel mikroba yang masih hidup ditumbuhkan pada medium sedemikian sehingga mikroba tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung tanpa menggunakan mikroskop. Jumlah koloni mikroorganisme dihitung berdasarkan Standard Plate Count (SPC). Metode ini cukup sensitif karena hanya sel mikroorganisme yang hidup yang dapat dihitung. Selain itu beberapa sel yang berdekatan dapat dihitung sekaligus sebagai suatu koloni (Hanafi, et al., 2006) Metode hitungan cawan merupakan metode yang paling sensitif untuk menentukan jasad renik, dengan prinsip jika sel jasad renik yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar maka sel jasad renik tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung tanpa menggunakan mikroskop (Fardiaz, 1992). Keuntungan menggunakan metode hitungan cawan dalam menghitung jumlah koloni pada medium agar adalah sebagai berikut:
Hanya sel yang masih hidup yang dihitung Beberapa jenis jasad renik dapat dihitung secara langsung Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi jasad renik karena koloni yang terbentuk mungkin berasal dari suatu jasad renik yang mempunyai penampakan pertumbuhan spesifik.
Selain keuntungan yang dimiliki seperti tersebut di atas, metode hitungan cawan juga memiliki kelemahan seperti yang termuat dalam (Dwidjoseputro, 1989) yaitu:
Hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel yang sebenarnya karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni
Medium dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang berbeda.
Jasad renik yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan membentuk koloni yang nampak dan jelas, tidak menyebar.
Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi relatif lama sehingga pertumbuhan koloni dapat dihitung. PCA Media Mikrobiology Plate Count Agar direkomendasikan untuk
menghitung angka lempeng total ( plate count ) mikroorganisme dalam makanan, air bersih dan air limbah. Plate Count Agar dengan Tween 80 dan Lecithin (Standar Methods Agar with Tween 80 and Lecithin ) dapat digunakan untuk menganalisa kualitas kebersihan dari permukaan. Plate Count Agar Spesial dapat digunakan untuk menghitung perkiraan jumlah bakteri pada raw milk dan produk susu lainnya, sesuai Netherlands Dairy Association. Plate Count Agar dengan BCP digunakan untuk menganalisa kultur Lactobacillus pada susu, yoghurt dan sour creams. (Anonim 1, 2009). Sampel yang digunakan pada saat praktikum ini adalah tempe, jamur tempe adalah salah satu mikroorganisme semi anaerob dan organism saprofit. Hal ini dapat dilihat akan kebutuhan jamur tempe akan udaradan summber makanannya. Jamur tempe merupakan organism yang membutuhkan sedikit sekali udara dan sumber makanan yang berasal dari jasad mati, oleh karena itu jamur tempe dapat diissolasi pada media PCA (Plate Count Agar). Jamur tempe (Rhizopus oryzae) termasuk ke dalam genus Rhizopus dan Famili
Mucoraceae.
Pengamatan
yang
dilakukan
dengan
menggunakan
mikroskop dapat dilihat bahwa misellium dari jamur tempe ini tidak bersekat. Misellium yang tidak bersekat merupakan cirri utama dari family Mucoraceae. Jamur tempe ini terdiri dari beberapa bagian utama yaitu misellium atau yang sering disebut stolon jamur, sporongiophore,sporangium dan spora yang menjadi organ perkembangbiakannya. (Jordy, 2011).
BAB IV KESIMPULAN
Dari hasil praktikum di atas dapat disimpulkan bahwa:
Hasil praktikum yang didapatkan galat, karena jumlah koloni pada control lebih dari 5.
Faktor penyebab galat adalah ketidaksterilan alat yang digunakan, adanya kontaminan yang berasal dari udara, dan alumunium foil yang digunakan untuk menutup Erlenmeyer saat praktikum.
Penghitungan total plate count di mulai dari 10 -4, karena pengsuspensian rendah bakteri yang didapat sangat banyak dan sulit di hitung.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim 1. 2009. Terdapat di
http://bhajaboounu.blogspot.com/2013. Diakses
tanggal 23 November 2013.
Dwidjoseputro, D.1989. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Malang: Djambatan.
Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan 1. Penerbit
PT. Gramedia
Pustaka Utama, Jakarta.
Fatmarina, 2000. Diakses di http://rizqanjb.blogspot.com. Pada tanggal 23 November 2013.
Hanafi, et al., 2006. Di akses di http://digilib.unimus.ac.id. Pada tanggal 24 November 2013
Jordy, 2011. Diakses di http://jordyanalcaff.blogspot.com. Pada tanggal 23 November 2013.
Permana dan Kusmiati, 2007. Di akses di http://repository.usu.ac.id. Pada tanggal 24 November 2013.
LAMPIRAN GAMBAR
Gb. 1 Pemanasan PCA
Gb. 3 Hasil Koloni 10 -4
Gb.5 Hasil Koloni 10 -6
Gb. 2 Pendinginan PCA
Gb. 4 Hasil Koloni 10 -5
Gb. 6 Hasil Koloni Control Plate
