BAB I PENDAHULUAN 1.1
Latar Belak lakang
Bakteri adalah kelompok organisme yang tidak memiliki membran inti sel. Organisme ini termasuk ke dalam domain prokariota dan berukuran sangat kecil (mikroskopik), serta memiliki peran besar besar dalam kehidupan di bumi. Beberapa kelompok bakteri dikenal sebagai agen penyebab infeksi dan penyakit, sedangkan kelompok lainnya dapat memberikan manfaat dibidang pangan, pengobatan, dan industri. Struktur sel bakteri relatif sederhana: tanpa nukleus/inti sel, kerangka sel, dan organel-organel lain seperti mitokondria dan kloroplas. al inilah yang men!adi dasar perbedaan antara sel prokariot dengan sel eukariot yang lebih kompleks ("olome, #$$%). &!i biokimia merupakan salah u!i yang digunakan untuk menentukan spesies kuman yang tidak diketahui sebelumnya. Setiap kuman memiliki sifat biokimia yang berbeda sehingga tahapan u!i biokimia ini sangat membantu proses identifikasi. Setelah sampel diinokulasikan pada media differensial atau selektif, kemudian koloni kuman diinokulasikan pada media u!i biokimia. 'da %# !enis u!i yang sering digunakan dalam u!i biokimia alaupun sebenarnya masih banyak lagi media yang dapat digunakan ('dam, #$$%). entingnya dilakukan praktikum ini adalah untuk melakukan teknik identifikasi dan karakterisasi !enis bakteri melalui u!i biokimia. 1.2
Tujuan
rakti raktikum kum ini bertu! bertu!uan uan agar mahasi mahasisa sa mampu mampu menget mengetahui ahui,, teknik teknik melakuk melakukan an identifikasi dan karakterisasi bakteri melalui u!i biokimia. 1.3
Manfaat
*anfaat yang dapat diambil dalam praktikum ini adalah mahasisa biologi mampu melakukan melakukan identifikasi dan karakterisasi bakteri melalui u!i biokimia. Selain itu u!i biokimia ini dapat digunakan untuk mencari bakteri yang mampu menguraikan misalnya limbah urea, nitrat, asam-asam kuat dan basa kuat hal tersebut dapat dimanfaatkan dalam bidang industri sebagai pengolahan limbah yang dihasilkan oleh pabrik.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1
Uj B!k"a
&!i biokimia adalah pengu!ian larutan atau +at-+at kimia dari bahan-bahan dan proses-proses yang ter!adi dalam tubuh makhluk hidup, sebagai upaya untuk memahami proses kehidupan dari sisi kimia (ehninger, %). Biokimia adalah ilmu yang mengenal dasar molekuler kehidupan. i seluruh dunia biokimia dianggap sangat menggairahkan kerena berbagai alasan0 pertama,mekanisme kimia banyak sentral pada kehidupan kini mulai dipahami. 1edua, pola dan prinsip-prnsip molekular yang umum mendasari penampilan. 1etiga, biokimia sangat mendasari ilmu kedokteran. 1eempat, perkembangan yang cepat (Stryer, %). &!i fisiologi bisanya identik dengan u!i biokimia. &!i biokimia yang biasanya dipakai dalam kegiatan identifikasi bakteri atau mikroorganisme yang antara lain u!i katalase, koagulase, dan lain-lain. engu!ian biokimia merupakan salah satu hal yang sangat penting dalam dunia mikrobiologi (im, %2). &!i-u!i biokimia yang biasanya dipakai dalam kegiatan identifikasi bakteri atau mikroorganisme yaitu antara lain adalah u!i *3-4, u!i gula-gula, u!i S5*, &!i 6S5', &!i 5ndol, da n &!i Simmons "itrate (id!oseputro, %7). 2.2
Ma#a" Uj B!k"a
Berikut beberapa u!i biokimia yang digunakan untuk identifikasi bakteri, antara lain: %. Uji gula-gula (Glukosa, Laksota, Sukrosa, dan Manitol) &!i ini dilakukan untuk mengidentifikasi bakteri yang mampu memfermentasikan karbohidrat. ada u!i gula-gula hanya ter!adi perubahan arna pada media glukosa yang berubah men!adi arna kuning, artinya bakteri inimembentuk asal dari fermentasi glukosa !uga terbentuk gelembung pada tabung durham yang diletakan terbalik didalam tabung media, artinya fermentasi berbentuk gas (8uli, #$%%).
#. Uj In$!l *edia yang dipakai adalah pepton %9. &!i indol digunakan untuk mengetahui apakah kuman mempunyai en+im triptophanase sehingga kuman tersebut mampu mengoksidasi asam amino triptophan membentuk indol. 'danya indol dapat diketahui dengan penambahan reagen hrlich/1o;ac
>. Uj M!tlta% *edia yang dipakai adalah media yang bersifat semi solid dengan kandungan agar-agar $,#-$,79. 6u!uan dari u!i ini adalah untuk mengetahui gerak kuman, bisa memakai media *O (*otilitas Ornitin) atau S5* (Sulfida 5ndol *otility). ada media S5* selain untuk melihat motilitas bisa !uga untuk test indol dan pembentukan #S. 5nterpretasi hasil : negatif (-) : terlihat adanya penyebaran yang berarna putih seperti akar hanya pada bekas tusukan inokulasi. ositif (=) : terlihat adanya penyebaran yang berarna putih seperti akar disekitar inokulasi. al ini menun!ukan adanya pergerakan dari bakteri yang diinokulasikan, yang berarti baha bakteri ini memiliki flagel (Burros, #$$7).
7. Uj M& *edia yang digunakan adalah pepton glukosa phosphat. &!i ini digunakan untuk mengetahui adanya fermentasi asam campuran (metilen glikon). 5nterpretasi hasil : negatif (-) : 6idak ter!adi perubahan arna media men!adi merah setelah ditambah meth yl red %9. ositif (=) : 6er!adi perubahan arna media men!adi merah setelah ditambahkan methyl red %9. 'rtinya bakteri menghasilkan asam campuran (metilen glikon) dari proses fermentasi glukosa yang terkandung dalam media *3 ("oan, #$$7).
. Uj 'P *edia yang dipakai adalah pepton glukosa phosphat. &!i ini digunakan untuk mengetahui pembentukan asetil metil karbinol (asetoin) dari hasil fermentasi glukosa. 5nterpretasi hasil : negatif (-) : tidak ter!adi perubahan arna media men!adi merah setelah ditambahkan a naphtol 9 dan 1O 7$9. ositif (=) : ter!adi perubahan arna media men!adi merah setelah ditambahkan a naphtol 9 dan 1O 7$9, artinya hasil akhir fermentasi bakteri adalah asetil metil karbinol (asetoin) ("olome, #$$%).
?. Uj (trat *edia yang dipakai adalah Simons citrat. 6u!uan dari u!i ini adalah untuk mengetahui apakah kuman menggunakan sitrat sebagai sumber karbon. ada media Simons citrat berisi indikator B6B (Brom 6ymol Blue). 'pabila bakteri menggunakan sitrat sebagai sumber karbon maka media berubah men!adi basa dan berubah arna men!adi biru. 5nterpretasi hasil : negatif (-) : tidak ter!adinya perubahan arna media dari hi!au men!adi biru. 'rtinya bakteri ini tidak mempunyai en+im sitrat permease yaitu en+im spesifik yang membaa sitrat ke dalam sel. Sehingga kuman tidak menggunakan citra sebagai salah satu/satu-satunya sumber karbon. ositif (=) : ter!adinya perubahan arna media dari hi!au men!adi biru, artinya kuman menggunakan citrat sebagai salah satu/satu-satunya sumber karbon (3atna, #$%#).
@. Uj TSIA )Tr*le Sugar Ir!n Agar+ 6u!uan dari tes ini adalah untuk mengetahui kemampuan kuman untuk memfermentasikan karbohidrat. ada media 6S5' berisi > macam karbohidrat yaitu glukosa, laktosa dan sukrosa. 5ndikatornya adalah phenol red yang menyebabkan perubahan arna dari merah orange men!adi kuning dalam suasana asam. 8lukosa berada di dasar media sedangkan laktosa dan sukrosa berada di bagian lereng. 5nterpretasi hasil : hanya memfermentasi glukosa : Bila pada dasar (butt) media berarna kuning (bersifat asam) dan lereng (slant) berarna merah (bersifat basa) A 'l/'c atau 1/'. *emfermentasi semua karbohidrat : bila pada dasar (butt) media berarna kuning (bersifat asam) dan lereng (slant) berarna kuning (bersifat asam) A 'c/'c atau '/'. 6idak memfermentasi semua karbohidrat : bila pada dasar (butt) media berarna merah (bersifat basa) dan lereng (slant) berarna merah (bersifat basa) A 'l/'l atau 1/1. ermentasi pada 6S5' !uga disertai dengan pembentukan gas "O# yang dapat dilihat dari pecahnya dan terangkatnya agar. *edia 6S5' !uga dapat digunakan untuk mengetahui pembentukan #S yaitu melihat apakah kuman memfermentasi metionin dan sistein ('sam amino yang mempunyai gugus S). ada media 6S5' terdapat asam amino metionin dan sistein, !ika kuman memfermentasi kedua asam amino ini maka gugus S akan keluar dan gugus S akan bergabung dengan #O membentuk #S. Selan!utnya #S bergabung dengan e#= membentuk eS berarna hitam dan mengendap (Buchanan, #$$>).
2. Uj Urena%e 6u!uan dari u!i ini adalah untuk mengetahui apakah kuman mempunyai en+im urease yang dapat menguraikan urea membentuk amoniak. *edia urea berisi indikator phenol red. 5nterpretasi hasil : negatif (-) : tidak ter!adi perubahan arna media men!adi pink/merah !ambu, artinya kuman tidak memecah urea membentuk amoniak. ositif (=) : tidak ter!adi perubahan arna media men!adi pink/merah !ambu, artinya kuman memecah urea membentuk amoniak (im, #$$?).
,. Uj LIA )L-%n Ir!n Agar+ 6u!uan dari u!i ini adalah bakteri yang mengandung en+im dekarboksilase yang akan menguraikan lysine men!adi codaferin yang bersifat basa, karena adanya indicator B" (Brom "resol urple) tetap berarna ungu. (kumpulan makalah praktikum)
1. Uj PAD )P/enl Alann Da"na%e+ 6u!uan dari u!i ini adalah bakteri mampu menghasilkan en+im ' (henil 'lanin men!adi piru;at, setelah penambahan e"l> akan berarna ungu. (kumpulan makalah praktikum)
BAB III MET0D0L0I 3.2
Alat $an Ba/an
'dapun alat dan bahan yang di gunakan dalam praktikum kali ini yaitu : >.#.% 'lat %. 6abung reaksi #. 3ak tabung reaksi >. Bunsen 7. Carum ose needle . Carum ose loop ?. 6abung durham @.
andsprayer
2. 5nkubator >.#.# Bahan %. *asker
%>. *edium 4
#. 1apas
%7. *edium Sitrat
>. 1orek api
%. *edium &rea
7. 'lkohol @$9
%?. *edium 6S5'
. Sampel bakteri
%@. *edium '
?. *edium 8lukosa
%2. *edium 5'
@. *edium aktosa 2. *edium Sukrosa . *edium *anosa %$. *edium *anitol %%. *edium S5* %#. *edium *3
3.3 Pr!%e$ur Kerja
'dapun prosedur ker!a dalam praktikum praktikum k ali ini yaitu : %. *enyiapkan semua alat dan bahan yang akan digunakan dalam praktikum #. *enggunakan masker. >. *enyalakan bunsen menggunakan korek api. 7.
*emfiksasi !arum ose (needle) sampai merah, dan di dinginkan terlebih dahulu.
. *embuka tabung yang berisi bakteri dengan !ari kelingking lalu memfiksasi permukaan tabung, menusukkan !arum ose (needle) sampai dibaah, tetapi !angan sampai mengenai dasar tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. ?. *engambil media gluk!%a , membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (loop), mengocok tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. @. *engambil media lakt!%a , membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (loop), mengocok tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. 2. *engambil media %ukr!%a, membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (loop), mengocok tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. . *engambil media "an!%a, membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (loop), mengocok tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas.
%$. *engambil media "ant!l , membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (loop), mengocok tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. %%. *engambil media SIM, membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (needle) sampai dibaah, tetapi !angan sampai mengenai dasar tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. %#. *emfiksasi !arum ose (needle) sampai merah, dan di dinginkan lalu di simpan. %>. *emfiksasi !arum ose (loop) sampai merah, dan di dinginkan terlebih dahulu. %7. *engambil tabung yang berisi bakteri, membuka tabung dengan !ari kelingking lalu memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (loop) sampai dibaah, tetapi !angan sampai mengenai dasar tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. %. *engambil media M& , membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (loop), mengocok tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. %?. *engambil media 'P, membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menusukkan !arum ose (loop), megocok tabung dan menutup kembali tabung dengan kapas. %@. *emfiksasi !arum ose (loop) sampai merah, di dinginkan. %2. *engambil tabung yang berisi bakteri, membuka tabung dengan !ari kelingking lalu memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) pada sampel bakteri yang ada pada tabung dan menutup kembali tabung dengan kap as.
%. *engambil media %trat , membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) dari baah keatas dengan metode +ig-+ag, tetapi !angan sampai merusak agar dan menutup kembali tabung dengan kapas. #$. *emfiksasi !arum ose (loop) sampai merah, lalu di dinginkan. #%. *engambil tabung yang berisi bakteri, membuka tabung dengan !ari kelingking lalu memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) pada sampel bakteri yang ada pada tabung dan menutup kembali tabung dengan kap as. ##. *engambil media urea, membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) dari baah keatas dengan metode +ig-+ag, tetapi !angan sampai merusak agar dan menutup kembali tabung dengan kapas. #>. *emfiksasi !arum ose (loop) sampai merah, di dinginkan.
#7. *engambil tabung yang berisi bakteri, membuka tabung dengan !ari kelingking lalu memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) pada sampel bakteri yang ada pada tabung dan menutup kembali tabung dengan kap as. #. *engambil media TSIA, membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) dari baah keatas dengan metode tusuk +ig-+ag, tetapi !angan sampai merusak agar dan menutup kembali tabung dengan kapas. #?. *emfiksasi !arum ose (loop) sampai merah, di dinginkan. #@. *engambil tabung yang berisi bakteri, membuka tabung dengan !ari kelingking lalu memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) bakteri yang ada pada tabungsampel dan menutup kembali tabung dengan kapas. #2. *engambil media PAD membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) dari baah keatas dengan metode +ig-+ag, tetapi !angan sampai merusak agar dan menutup kembali tabung dengan kapas. #. *engambil media LIA, membuka kapas penutup, memfiksasi mulut tabung, menggoreskan !arum ose (loop) dari baah keatas dengan metode +ig-+ag, tetapi !angan sampai merusak agar dan menutup kembali tabung dengan kapas. >$. *emfiksasi !arum ose (loop) sampai merah. >%. *ensterilkan tangan menggunakan handsprayer . >#. *emberikan label nama disetiap tabung, kemudian memasukkan sampel medium ke dalam inkubator selama #7 !am dengan suhu >@$" . >>. *engamati koloni bakteri yang terbentuk pada masing-masing medium setelah di inkubasikan.
BAB I'
PEMBAHASAN .1 Pe"4a/a%an
&!i biokimia adalah pengu!ian larutan atau +at-+at kimia dari bahan-bahan dan proses proses yang ter!adi dalam tubuh makhluk hidup, sebagai upaya untuk memahami proses kehidupan dari sisi kimia (ehninger, %). Biokimia adalah ilmu yang mengenal dasar molekuler kehidupan. i seluruh dunia biokimia dianggap sangat menggairahkan kerena berbagai alasan0 pertama,mekanisme kimia banyak sentral pada kehidupan kini mulai dipahami. 1edua, pola dan prinsip-prnsip molekular yang umum mendasari penampilan. 1etiga, biokimia sangat mendasari ilmu kedokteran. 1eempat, perkembangan yang cepat (Stryer, %).
BAB ' PENUTUP 5.1 Ke%"*ulan
Cadi pada makalah ini kita dapat mengetahui u!i biokimia diantara : %. &!i 8lukosa #. &!i aktosa >. &!i *altose 7. &!i *anosa . &!i Sakarosa ?. &!i S5* @. &!i *3 2. &!i 4 . &!i "itrate %$. &!i 6S5' %%. &!i &rea %#. &!i 5' %>. &!i '
&!i 8ula#
5.2 Saran
Sebaiknya untuk para praktikan lebih berhati-hati dalam penggoresan !arum ose ke medium. 1arena !ika medium rusak, pada saat melakukan pengamatan akan sulit untuk melihat pertumbuhan koloni bakteri tersebut.
DA6TA& PUSTAKA
id!oseputro. %7. Dasar-Dasar Mikrobiologi. !ambatan : *alang http://nunil$2.student.ipb.ac.id/#$%$/$?/%/u!i-biokimia-metabolisme-bakteri/ (iakses pada: #> 'pril #$%7, pukul: #%.$$ D56')
adioetomo. %>. Mikrobiologi Kedokteran. Salemba *edika, Cakarta. http://nunil$2.student.ipb.ac.id/#$%$/$?/%/u!i-biokimia-metabolisme-bakteri/ (iakses pada: #> 'pril #$%7, pukul: #%.$$ D56')
ehninger. %. Microbiology: a Laboratory Manual.Adison-Wesley. ublishing company: "alifornia. http://nunil$2.student.ipb.ac.id/#$%$/$?/%/u!i-biokimia-metabolisme-bakteri/ (iakses pada: #> 'pril #$%7, pukul: #%.$$ D56')
im. %2. Microbiology: a Laboratory Manual.Adison-Wesley ublishing company: "alifornia. http://nunil$2.student.ipb.ac.id/#$%$/$?/%/u!i-biokimia-metabolisme-bakteri/ (iakses pada: #> 'pril #$%7, pukul: #%.$$ D56')
*urray. #$$. Buku Ajar Mikrobiologi. enerbit Buku 1edokteran 8": Cakarta.
elc+ar. #$$2. Dasar-dasar Mikrobiologi. !ambatan, *alang. http://nunil$2.student.ipb.ac.id/#$%$/$?/%/u!i-biokimia-metabolisme-bakteri/ (iakses pada: #> 'pril #$%7, pukul: #%.$$ D56')
4olk and Dheleer. %>. Analisis raktiku! Mikrobiologi "!u! untuk erguruan #inggi. &8* ress, Eogyakarta.
http://nunil$2.student.ipb.ac.id/#$%$/$?/%/u!i-biokimia-metabolisme-bakteri/ (iakses pada: #> 'pril #$%7, pukul: #%.$$ D56')
