1
MANUAL DE PRÁCTICAS DE FARMACOLOGÍA GENERAL
Dr. Francisco Javier Alarcón Aguilar
Universidad Autónoma Metropolitana Iztapalapa Trimestre 12-I
2
ÍNDICE Introducción
3
Práctica No. 1. Formas Farmacéuticas.
7
Práctica No. 2. Manejo de animales de laboratorio y vías de administración.
11
Práctica No. 3. Vías de absorción.
19
Práctica No. 4. Absorción. Influencia de la vía de administración en la concentración plasmática de un fármaco.
24
Práctica No. 5. Distribución.
30
Práctica No. 6. Excreción. Cuantificación de la eliminación renal del ácido acetilsalicílico.
35
Práctica No. 7. Efectos de las drogas sobre el ojo del conejo.
40
Práctica No. 8. Efecto de algunas drogas sobre el corazón aislado de rana.
43
Práctica No. 9. Bioensayo de la histamina sobre el íleon de cobayo.
46
Práctica No. 10. Efecto de fármacos sobre la motilidad ciliar en el esófago de rana.
49
Agradecimientos
52
Apéndice 1. Curva de calibración del sulfatiazol sódico.
53
Apéndice 2. Prueba de t de Student para muestras independientes.
54
2
ÍNDICE Introducción
3
Práctica No. 1. Formas Farmacéuticas.
7
Práctica No. 2. Manejo de animales de laboratorio y vías de administración.
11
Práctica No. 3. Vías de absorción.
19
Práctica No. 4. Absorción. Influencia de la vía de administración en la concentración plasmática de un fármaco.
24
Práctica No. 5. Distribución.
30
Práctica No. 6. Excreción. Cuantificación de la eliminación renal del ácido acetilsalicílico.
35
Práctica No. 7. Efectos de las drogas sobre el ojo del conejo.
40
Práctica No. 8. Efecto de algunas drogas sobre el corazón aislado de rana.
43
Práctica No. 9. Bioensayo de la histamina sobre el íleon de cobayo.
46
Práctica No. 10. Efecto de fármacos sobre la motilidad ciliar en el esófago de rana.
49
Agradecimientos
52
Apéndice 1. Curva de calibración del sulfatiazol sódico.
53
Apéndice 2. Prueba de t de Student para muestras independientes.
54
3
Introducción Para poder entender los procesos farmacocinéticos y farmacodinámicos que tienen lugar cuando un fármaco ingresa al organismo, es importante analizarlos tanto desde el punto de vista teórico, en el salón de clase, como desde el punto de vista experimental, en el laboratorio. En este último sentido, los manuales de prácticas de farmacología existentes, así como los experimentos sugeridos en la literatura, están dirigidos principalmente a estudiantes de medicina, odontología y de ciencias químico-farmacéuticas, de manera que, en la mayoría de los casos, no cumplen con las exigencias requeridas por la Licenciatura en Biología Experimental. De aquí surge la necesidad de elaborar un manual que satisfaga las necesidades y exigencias propias de dicha Licenciatura y, al mismo tiempo, se ajuste a los periodos trimestrales y a la infraestructura con que contamos en la Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Iztapalapa. Este Manual de Prácticas de Farmacología se elaboró de acuerdo con las necesidades del programa teórico de la Unidad de Enseñanza Aprendizaje de Farmacología General y tiene un enfoque esencialmente experimental. Se compone de 10 prácticas, las cuales son: Práctica No. 1. Formas Farmacéuticas. Práctica No. 2. Manejo de animales de laboratorio y vías de administración. Práctica No. 3. Vías de absorción.
4
Práctica No. 4. Influencia de la vía de administración en la concentración plasmática de un fármaco. Práctica No. 5. Distribución. Práctica No. 6. Cuantificación de la eliminación renal del ácido acetilsalicílico. Práctica No. 7. Efectos de fármacos sobre el ojo del conejo. Práctica No. 8. Efecto de fármacos sobre el corazón aislado de rana. Práctica No. 9. Bioensayo de la histamina sobre el íleon de cobayo. Práctica No. 10. Efecto de fármacos sobre la motilidad ciliar en el esófago de rana. Cada práctica consta de: 1) Introducción, cuya finalidad es servir de marco teórico al trabajo que va a realizar el estudiante. 2) Objetivos. 3) Material y métodos, en donde se describen de manera clara y sencilla los procedimientos a seguir. 4) Cuestionario, con el propósito de que el estudiante investigue y se adentre en el tema y los fundamentos de la metodología utilizada, complementando de manera importante el conocimiento y logrando el cumplimiento de los objetivos planteados en cada práctica. Además, se agregó una breve explicación, a manera de guía, para la elaboración del reporte de las prácticas por parte de los alumnos, acerca de la información que deben contener las secciones de Resutados y Discusión. Al final de cada práctica se anexa también literatura de consulta (bibliografía). Por último, en el Manual podemos encontrar apéndices con fórmulas e información de utilidad para la obtención y manejo estadístico
5
sencillo de los datos surgidos de los experimentos realizados en las prácticas, así como el instructivo para la instalación del programa Expharm, con cuatro prácticas virtuales (Prácticas 7-10). Tomando en cuenta que el trimestre consta de 11 semanas, el Manual incluye 10 prácticas, incluyendo las cuatro prácticas virtuales. Si por alguna razón una de estas prácticas no puede llevarse a cabo, se sugiere complementar el curso con películas de drogas de abuso, de acuerdo con la disponibilidad de tiempo. En lo que respecta a las prácticas virtuales, éstas se basan en un paquete de aprendizaje asistido por computadora (Expharm), el cual puede descargarse fácil y gratuitamente de internet.. Contiene 4 programas, los cuales simulan experimentos farmacológicos en animales: 1. Efectos de las drogas sobre el ojo del conejo. 2. Efectos de las drogas sobre el corazón de rana. 3. Efectos de las drogas sobre el esófago de rana. 4. Bioensayo de histamina usando íleon de cobayo. Estos programas están diseñados para estudiar las acciones de varios fármacos en diferentes sistemas animales. El paquete es amigable, altamente interactivo y lleno de secuencias animadas que hacen que la simulación parezca real. Es especialmente útil en los casos en los que el uso de animales para el aprendizaje no es esencial o esté restringido por varias razones éticas. Los programas de Expharm se recomiendan especialmente para estudiantes de licenciatura. Su principal aporte es ayudar a entender, recordar y nombrar las acciones de las drogas. Cabe señalar que los detalles técnicos de los experimentos se ignoran
6
en gran medida. Ciertos procedimientos están simplificados. Sólo se da información esencial y se hacen algunas observaciones adicionales con la finalidad de no confundir a los estudiantes. Debido a que el paquete simula experimentos de laboratorio, el autoaprendizaje por parte de los estudiantes puede resultar difícil. Por lo tanto, se sugiere que el estudiante tenga un conocimiento previo del marco teórico para que tenga una idea clara de lo que se está simulando. Aunque se da información suficiente en los archivos de ayuda “Instruction”, se sugiere que el profesor demuestre y explique cada experimento a los estudiantes al menos una vez. Después, los estudiantes deberán repetir los experimentos por sí solos cuantas veces sea necesario.
7
Práctica No.1. Formas farmacéuticas Introducción Antes de que los fármacos puedan ser administrados a los pacientes deben ser sometidos a una serie de procesos de manufactura, dando lugar a lo que conocemos como formas farmacéuticas, las cuales, en su multiplicidad de formas y presentaciones, son de importancia capital para el cuidado y preservación de la salud. La introducción de las formas farmacéuticas en la terapéutica permite controlar la dosificación racional y, por lo tanto, la velocidad y la cantidad de absorción del fármaco, todo lo cual es determinante para lograr el efecto farmacológico deseado. Para lograr lo anterior, se deben analizar en detalle las características fisicoquímicas del fármaco y las posibles vías de administración, así como validar la o las presentaciones que ofrezcan mayores ventajas para su administración. Las formas farmacéuticas se pueden clasificar en: sólidas (grageas, tabletas, cápsulas, etc.), semisólidas (pomadas, cremas, ungüentos, etc.), líquidas (soluciones, suspensiones, etc.) y gaseosas (aerosoles, entre otros).
Objetivos 1) Establecer la relación entre las formas farmacéuticas y sus vías de administración. 2) Conocer el manejo de la bibliografía relacionada con los medicamentos y fármacos
en general.
Material y métodos Material: medicamentos en varias presentaciones farmacéuticas y libro de especialidades farmacéuticas.
8
Metodología Seleccione 5 formas farmacéuticas diferentes y realice lo siguiente: 1) Identifíquelas en el libro de especialidades farmacéuticas (PLM). 2) Complete la Tabla 1 con los datos que se piden:
Resultados Tabla 1. Características principales de las formas farmacéuticas seleccionadas. Forma Nombre Farmacéutica genérico
Vía de administración
Efecto Nombre Monofármaco/ farmacológico comercial Polifármaco
Grageas
Butilhioscina
Oral
Espasmolítico Espacil
Monofármaco
Tabletas
Paracetamol
Oral
Analgésico
Monofármaco
Tempra
Discusión Indique el o los criterios seguidos para la selección de sus 5 formas farmacéuticas. ¿Cuál es la importancia en farmacología de las formas farmacéuticas y cómo se relacionan éstas con la vía de administración? Asocie esta información con los datos de la Tabla 1 de resultados. ¿Cuál es la importancia de conocer la bibliografía relacionada con la farmacología?
Cuestionario 1. De acuerdo con el PLM mencione los principales efectos secundarios y contraindicaciones de los 5 medicamentos seleccionados. 2. Mencione cinco ejemplos de formas farmacéuticas de administración tópica. 3. ¿Cuál es el objetivo de los índices del diccionario de especialidades farmacéuticas?
9
4. ¿Cuál es la diferencia entre la información que proporciona el P.L.M. con respecto a la que proporciona el Index-Merck? 5. ¿Cuál es la diferencia entre la información que proporciona el P.L.M. con respecto a la que proporcionan los libros de farmacología citados en la bibliografía del curso? 6. Defina el término Farmacopea.
Bibliografía •
Litter, M. Farmacología Experimental y Clínica. 7ª ed. Ed. El Ateneo. Buenos Aires. 1988.
•
Cejudo, V.B.L., Hernández, L.A., Soria, A.O., Vázquez, R.M.L. Metodología para el desarrollo de un medicamento con calidad biofarmacéutica. Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco. México. 1994.
•
MacVan, B. Referencias Farmacéuticas. 1ª ed. El Manual Moderno. México, 1995.
•
Rosenstein, E. Diccionario de Especialidades Farmacéuticas (PLM). 47ª ed. México, 2001.
10
11
Práctica No. 2. Manejo de animales de laboratorio y vías de administración Introducción La farmacología es una ciencia experimental que obtiene gran parte de la información
de
sus
dos
diferentes
áreas
de
trabajo
(Farmacocinética
y
Farmacodinamia) a partir del momento en que se administran los fármacos a diferentes animales de laboratorio. Por ello es importante recordar algunas de las normas internacionales que nos obligan a tratar adecuadamente a los animales empleados en el laboratorio: razonamiento y propósito del uso que se dará a los animales; justificación de la especie y número de animales requeridos, disponibilidad y conveniencia del uso de procedimientos menos invasivos; calidad de entrenamiento y experiencia del personal en los procedimientos usados; sedación, analgesia y anestesia apropiados, así como métodos de eutanasia adecuados. Las especies que más se utilizan con fines experimentales en el laboratorio son el ratón albino, la rata albina, el cobayo, el hámster y el conejo. De estas especies, quienes ofrecen mayor dificultad en su manejo son las dos primeras, las cuales, al sentirse capturadas, con frecuencia muerden. Sin embargo, si dichas especies se manejan adecuadamente no representan ningún problema, a menos que se les lastime o estrese.
12
Por otro lado, la variabilidad es una característica intrínseca de los seres vivos. Entre los caracteres variables se encuentran las respuestas a ciertos estímulos (ambientales, farmacológicos, etc.). Desde el punto de vista farmacológico, si pensamos que estas respuestas son el resultado de una serie de procesos tales como absorción, distribución, interacción a nivel de receptores, metabolismo, etc., se entenderá que las mismas pueden variar, no sólo de individuo a individuo, sino también dentro de un mismo organismo en diferentes momentos de su ciclo vital. La variabilidad de las respuestas biológicas introduce imprecisión en los resultados que se obtienen. Por esta razón, para obtener respuestas homogéneas, los animales deben mantenerse en condiciones ambientales especiales y deben manipularse cuidadosamente a través de una técnica adecuada. Es importante considerar también que las acciones farmacológicas en última instancia son el resultado de reacciones químicas entre una droga y sus receptores celulares. Sin embargo, el número de reacciones químicas depende de la concentración de las sustancias reaccionantes, por lo tanto, los efectos farmacológicos dependerán de la relación entre el peso de la droga y el peso corporal (dosis), pues dicha relación condiciona la concentración que la droga alcanza en el organismo. En farmacología, consecuentemente, debe considerarse la dosis en mg de principio activo/kg de peso corporal, aunque en ocasiones también se usa la superficie corporal (área superficial). Por otro lado, se denominan vías de administración de las drogas los lugares del organismo donde son aplicadas, ya sea para ejercer una acción local en el sitio de aplicación o bien una acción general o sistémica después de su absorción. Las vías de administración se pueden clasificar de la siguiente manera:
13
1. Enterales. Involucran tracto digestivo o sistema gastrointestinal: bucal u oral, sublingual y rectal. 2. Parenterales. No involucran tracto digestivo: a. Con efracción de epitelios (inyección): i.
Sistémicas: intramuscular, intravenosa, subcutánea, intraósea, intraperitoneal.
ii.
Locales: intradérmica, intraarterial, intracardiaca, intraraquídea o subaracnóidea.
b. Sin efracción de epitelios: i) Local y/o sistémica: Vía inhalatoria ii) Local o tópica. Vía cutánea iii) Local. Mucosas: ocular, uretral, nasal, bucal, vaginal, ótica. Cuando el fármaco administrado ejerce su acción directamente en el lugar donde fue depositado se habla de vías de administración locales. El término tópico se aplica para indicar uso externo y local.
Objetivos generales 1. Conocer los principios elementales para el manejo adecuado de uno de los animales de laboratorio más frecuentemente utilizados (ratón). 2. Practicar las diferentes vías de administración. Objetivo particular Determinar el tiempo del efecto sedante o anestésico y el tiempo de recuperación del pentobarbital sódico administrado por diferentes vías (subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intragástrica e intravenosa) a
14
ratones.
Material y métodos 1) Material biológico: 6 ratones adultos por equipo (cepa CD-1). 2) Material necesario: i)
Solicitar por equipo 1 jeringa de 1 ml con aguja y pliegos de papel en rollo.
ii)
Proporcionado por el profesor: cánula metálica para administración intragástrica.
iii)
Por estudiante: marcador, guantes y tapabocas.
3) Soluciones: pentobarbital sódico. Desarrollo de la práctica: A. Marcar a los animales. Administre pentobarbital sódico a razón de 27.5 mg/kg de peso corporal por las vías de administración indicadas en la siguiente tabla.
No. de
Vía de
animal
administración
Volumen a administrar (ml)
1
Intragástrica
0.12
2
Intramuscular
0.06 x 2
3
Intraperitoneal
0.12
4
Intravenosa
0.12
5
Subcutánea
0.12
B. Tomar el tiempo que tarda en manifestarse el efecto (sedación), así como el tiempo que tarda en recuperarse. Además, indique si se presenta estado de somnolencia y
15
en qué grado se presenta (anote como + si el animal presenta pesadez o torpeza; ++ si permanece inmóvil y parece dormido; +++ si ya no responde a estímulos externos; ++++ muerte). El ratón número 6 servirá como control. C. Recopile los datos de todo el grupo en la Tabla 1 de Resultados.
Resultados Reportar los resultados en forma de tablas y gráficas correspondientes: vía de administración con respecto al tiempo de inicio del efecto; vía de administración con respecto al tiempo de recuperación (duración del efecto); y vía de administración con respecto a la intensidad del efecto (grado de somnolencia).
Tabla 1. Efectos producidos por la administración de pentobarbital sódico por diferentes vías de administración (n= 6). Ratón No./Vía de administración
Tiempo de inicio (seg)
Duración del efecto (min)
Grado de somnolencia (+)
1. Intragástrica 2. Intramuscular 3. Intraperitoneal 4. Intravenosa 5. Subcutánea
Discusión ¿Corresponden los resultados obtenidos en la práctica con los reportados en la bibliografía? Explique ampliamente.
Cuestionario 1. ¿Qué son los barbitúricos y cómo se suelen clasificar?
16
2. Mencione las ventajas y desventajas de las vías de administración enterales y parenterales.
Bibliografía •
Borchard, R.E., Barnes, C.D. Drug Dosage in Laboratory Animals. A Handbook. 3th ed. Ed. Telford Press, Inc. New Jersey. 1991.
•
Goodman-Gilman. Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. IX ed. Ed. McGraw-Hill Interamericana. México. 1996.
•
Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Prepared by the Comité on Care and Use of Laboratory Animals of the Institute of Laboratory Animal Resources Comisión Life Sciences. Public Health Service National Institutes of Health Nit Publication.
•
Levine, D.R. Pharmacology: Drug actions and reactions. IV ed. Little Brown and Company. Boston. 1991.
•
Norma Oficial Mexicana. PROY-NOM-062ZOO-1999.
•
Reyes-Sánchez, J.C. y Jaramillo-Juárez, F. Manual de ejercicios experimentales de farmacología. I ed. Sociedad Mexicana de Ciencias Fisiológicas. Programa Nacional de Formación de Profesores en el Área Biomédica (PRONFOPAB). 2000.
•
Litter, M. Farmacología Experimental y Clínica. VII ed. Ed. El Ateneo. Buenos Aires. 1988.
17
18
19
Práctica No. 3. Vías de absorción Introducción Con el nombre de vías de absorción se entienden los lugares de penetración de las drogas, que no deben confundirse con las vías de administración de los medicamentos, pues no siempre se absorben los mismos en el lugar por donde se les administra. Por ejemplo, si se suministra una droga por la boca (vía bucal de administración), la absorción se realiza mayormente en la mucosa del intestino delgado (vía de absorción). La vía de absorción es importante porque de ella depende la vía de administración, la rapidez de la acción y la dosis de la droga, ya que la dosis puede variar con las distintas vías por diferencias de absorción. Las vías de absorción se clasifican como sigue: 1. Indirectas o mediatas: la penetración de la droga en el organismo se realiza a través de los epitelios de las mucosas y de la piel, sin efracción o ruptura de los mismos. Pueden ser de dos tipos: a) Mucosas: digestiva, respiratoria, genitourinaria y conjuntival. b) Cutánea (piel). Esta vía es muy utilizada para obtener un efecto tópico. 2. Directas, inmediatas o parenterales: se introduce el medicamento por efracción de los epitelios de la mucosa o de la piel para colocarlo en el sitio de absorción. Pueden designarse de la siguiente manera: subcutánea, muscular, peritoneal, ósea, cardiaca, etc.
Objetivo general
20
Determinar las diferentes vías de absorción y practicar las vías de administración.
Objetivo particular Observar y esquematizar la distribución de un colorante (azul de metileno al 1%) administrado por las siguientes vías: subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intragástrica e intravenosa en ratones.
Material y métodos 1. Material biológico: 5 ratones adultos por equipo (cepa CD-1). 2. Material de laboratorio: i)
Solicitar por equipo: microscopio de disección, estuche y charola de disección, 1 jeringa de 1 ml con su respectiva aguja.
ii)
Proporcionado por el profesor: cánula metálica para administración intragástrica.
iii)
Por estudiante: marcador, cinta adhesiva, guantes y tapabocas.
Soluciones : azul de metileno al 1% y pentobarbital sódico. Desarrollo de la práctica 1.
Administre azul de metileno al 1% a los ratones por las vías de administración y a los volúmenes indicados a continuación:
No. de ratón 1
Vía de administración Intraperitoneal
Volumen (ml) 0.12
2
Intramuscular
0.06
21
3
Intragástrica
0.12
4
Subcutánea
0.12
5
Intravenosa
0.12
2. Espere 30 minutos. 3. Sacrifique a los animales por inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico y disectarlos para observar las regiones en donde se absorbió el azul de metileno, según las diferentes vías. NOTA: La disección del ratón número 5 (vía intravenosa) se recomienda realizarla inmediatamente después de la administración del colorante.
Resultados Indique y esquematice la localización anatómica del colorante describiendo brevemente los tejidos epiteliales involucrados en cada una de las vías de absorción
Discusión Comente ampliamente si la localización del colorante corresponde con el sitio de absorción de cada una de las vías de administración, de acuerdo con lo esperado y con lo reportado en la literatura, indicando las características morfológicas del tejido o tejidos involucrados en cada vía de absorción.
Cuestionario 1. ¿Cuáles son las propiedades físicas y químicas del azul de metileno y cuáles son sus efectos farmacológicos principales? 2. Explique los mecanismos de absorción de los fármacos a través de las membranas celulares.
Bibliografía
22 •
Borchard, R.E., Barnes, C.D. Drug Dosage in Laboratory Animals. A Handbook. 3th ed. Ed. Telford Press, Inc. New Jersey. 1991.
•
Goodman-Gilman. Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. IX ed. Ed. McGraw-Hill Interamericana. México. 1996.
•
Graham, R., Robert, Z., Harris, D. Medicinal Research Reviews 21 (5): Sept. 2001.
•
Litter, M. Farmacología Experimental y Clínica. VII ed. Ed. El Ateneo. Buenos Aires. 1988.
•
Manual del Ingeniero Químico. VI ed. Ed. McGraw Hill. México. 1992.
•
Merck Index. XII ed. Ed. Merck and Co. Inc., U.S.A. 1996.
•
Mycek, M.J., Harvey, R. A. Lippincott´s illustrated reviews: Pharmacology. II ed. Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA. 1997.
23
24
Práctica No. 4. Absorción. Influencia de la vía de administración en la concentración plasmática de un fármaco.
Introducción El proceso por el cual un fármaco alcanza los líquidos de distribución se denomina absorción. La velocidad de este proceso depende de la vía de administración, de la solubilidad y de las propiedades fisicoquímicas del fármaco. Dicha velocidad determina el comienzo de su acción. Además, son varios los factores que modifican el paso de las moléculas del fármaco desde su sitio de entrada hasta que alcanza el torrente sanguíneo, incluyendo la permeabilidad de la membrana al agente (mecanismos de transporte a través de las membranas biológicas), la cual estará determinada por la solubilidad del mismo y el tamaño de sus partículas. Por otro lado, debido a que los fármacos en solución por lo general son electrolitos débiles, que se disocian en proporción variable, es necesario mencionar también los factores que alteran dicha disociación, pues de ella depende si los fármacos se absorben o no. Estos factores dependen básicamente de las características bioquímicas del organismo receptor y están relacionadas principalmente con los procesos de absorción a través del tubo digestivo. Dichos factores son el pH y la concentración del fármaco en su sitio de administración (mientras más elevada sea, más rápido se absorberá el compuesto). Otros factores son la circulación sanguínea en el área y la magnitud de la superficie de absorción. En esta práctica se hará énfasis en la influencia de la vía de administración en la concentración plasmática de un fármaco.
Objetivos 1.
25
Determinar la cantidad de sulfatiazol sódico presente en el plasma de ratas a diferentes intervalos de tiempo.
2.
Comparar las cinéticas de absorción del sulfatiazol sódico suministrado por diferentes vías de administración (intragástrica y subcutánea).
Material y Métodos 1. Material biológico: 2 ratas adultas por equipo (cepa Wistar). 2. Material y equipo necesario: i)
Solicitar por equipo: 8 tubos de ensayo, una gradilla para tubos de ensayo, 2 embudos de vidrio, una piceta, 3 pipetas de 10 ml y 3 pipetas de 1 ml, Un vaso de precipitados de 50 ml, equipo y charola de disección, 1 jeringa de 2-5 ml y aguja, papel filtro, algodón. Equipo necesario: fotocolorímetro y celdas. Proporcionado por el profesor: cánula metálica para administración intragástrica.
ii)
Por estudiante: marcador, guantes, tapabocas, cinta adhesiva.
3. Substancias necesarias: sulfatiazol sódico, agua destilada, ácido tricloroacético al 15%, nitrito de sodio al 0.1%, sulfamato de amonio al 0.5%, Nnaftiletilendiamina al 0.1%. Pentobarbital sódico. 4. Otros: curva de calibración de sulfatiazol sódico. Desarrollo de la práctica 1. Cada equipo trabajará con 2 ratas. Después de pesarlas y marcarlas, administre 200 mg/kg de sulfatiazol sódico a las ratas por las siguientes vías de administración:
26
No. de rata
Peso (kg)
1
Vía de administración Intragástrica
Volumen administrado 2 ml
2
Subcutánea
2 ml
2. Una vez administrado el sulfatiazol sódico, obtenga muestras sanguíneas por punción del seno orbital del ojo o punción cardiaca (previa anestesia con pentobarbital por vía intraperitoneal) de cada una de las ratas en los siguientes tiempos:
3.
No. de equipo
Tiempo (min)
1
15
2
30
3
45
4
60
5
90
Después de tomar la muestra sacrifique al animal con una sobredosis de pentobarbital por vía intraperitoneal.
4.
Las muestras sanguíneas serán procesadas de acuerdo con la técnica modificada de Bratton-Marshall, como se indica a continuación:
•
Mezclar 1 ml de sangre con 9 ml de agua destilada en un tubo de ensayo para constituir lo que será nuestra muestra.
•
Tomar 1 ml de la muestra anterior y mezclar con 15 ml de agua destilada y 4 ml de ácido tricloroacético.
27 •
Filtrar y proceder a realizar la técnica para desarrollar color (Nota: procesar junto con el blanco, el cual contendrá 4 ml de agua destilada y 1 ml de ácido tricloroacético): a. Tome 5 ml del filtrado y agregue 1 ml de nitrito de sodio. b. Después de 3 minutos adicione 1 ml de sulfamato de amonio y deje reposar tres minutos más. c. Por último, adicione 1 ml de N-Naftiletilendiamina, filtre y lea a 545 nm contra el blanco.
4. Recopile los datos de todo el grupo.
Resultados Utilizando la curva de calibración para sulfatiazol sódico, determine la concentración plasmática del sulfatiazol sódico administrado en µg/5ml de acuerdo con el siguiente cuadro: Tabla 1. Concentración plasmática de sulfatiazol sódico ( µg/ml) a diferentes tiempos Vía de administración intragástrica/subcutánea Tiempo
Absorbancia
g/5 ml Factor de dilución
µ
15
40
30
40
45
40
60
40
Discusión
g/ml
µ
28
¿Cuál es el objetivo de que se empleen dos vías de administración en la práctica? ¿Concuerdan los resultados obtenidos con los esperados teóricamente?
Cuestionario 1.
¿Cuál es la causa por la que se eligió tomar la muestra de sangre por punción cardiaca?
2.
¿Qué objetivo tiene adicionar a la muestra problema ácido tricloroacético al 15 %?
3.
Investigue cuál es el fundamento de la técnica de Bratton-Marshall para sulfonamidas.
4.
Investigue cómo se determina el factor de dilución para este método analítico.
Bibliografía •
Borchard, R.E., Barnes, C.D. Drug Dosage in Laboratory Animals. A Handbook. 3th ed. Ed. Telford Press, Inc. New Jersey. 1991.
•
Connors, A. Curso de Análisis Farmacéutico. Ed. Reverté, S.A. México, D.F. 1981.
•
Graham, R., Robert, Z., Harris, D. Medicinal Research Reviews 21 (5): Sept. 2001.
•
Harvey, R., Champe, P. Lippincott´s illustrated reviews: Pharmacology. II ed. Lippincott-Raven Publishers, New York. 1997.
•
Katzung, B.G. Farmacología Básica y Clínica. VIII ed. Ed. El Manual Moderno. 2002.
29
30
Práctica No. 5. Distribución El proceso de distribución consiste en el paso de un fármaco hacia los diferentes tejidos y líquidos intersticiales. Los fármacos se distribuyen en función de sus propiedades fisicoquímicas, del gasto cardiaco, del flujo sanguíneo regional y de su unión a proteínas plasmáticas. En el plasma, el fármaco puede encontrarse en forma libre o puede fijarse inespecíficamente a diversas proteínas, principalmente a la albúmina. Esta posibilidad de fijación adquiere importancia fundamental si se tiene en cuenta que sólo las moléculas libres del fármaco son las que pueden alcanzar los receptores en los sitios de acción, de llegar a los sitios de biotransformación y de ser eliminadas a nivel del glomérulo renal. La distribución de un fármaco se divide en tres fases: en la primera el fármaco se acumula en los órganos que tienen mejor irrigación. En la segunda fase el fármaco alcanza una distribución más general y en la tercera la distribución es lenta debido a que la irrigación de ciertas zonas es mínima. Otro factor que puede afectar la distribución del fármaco es el tamaño del órgano. El volumen de distribución es un parámetro farmacocinético importante en el cual se relaciona la cantidad de fármaco en el cuerpo con su concentración en el plasma.
Objetivo Determinar la concentración plasmática y en diferentes órganos del sulfatiazol sódico administrado por vía intragástrica a ratas normales.
Material y métodos 1. Material biológico. 1 rata adulta por equipo (cepa Wistar).
31
2. Material necesario i)
Solicitar por equipo: 4 portaobjetos, Equipo de disección, 16 tubos de ensayo, papel filtro, 4 embudos de vidrio, piceta con agua destilada, gradilla para tubos de ensayo, 4 pipetas de 10 ml y 4 de 1 ml. Equipo
necesario:
fotocolorímetro y celdas. ii)
Por alumno: navajas, marcador, guantes y tapabocas.
3. Substancias necesarias. sulfatiazol sódico, NaOH 0.25 N, ácido tricloroacético al 15%, nitrito de sodio al 0.1%, sulfamato de amonio al 0.5% y Nnaftiletilendiamina al 0.1%. Pentobarbital sódico. 4. Otros. Curva de calibración de sulfatiazol sódico. Desarrollo de la práctica. 1. Pese y marque a los animales. 2. Administre 200 mg/kg de peso de sulfatiazol sódico por vía intragástrica (2 ml/animal). 3. Sacrifique a los animales con pentobarbital sódico en los siguientes tiempos: No. de equipo
Tiempo (min)
1
0
2
15
3
30
4
45
5
60
32 4. Haga las disecciones necesarias para obtener un gramo de cada uno de los
siguientes órganos: hígado, riñón, cerebro y corazón. 5. Coloque las muestras por separado en un portaobjetos y desmenúcelas con una navaja o bisturí para procesarlas como se indica a continuación: •
Obtenga un gramo y mézclelo con 10 ml de NaOH 0.25 N.
•
Agite 3 veces durante el curso de 10 minutos y deje reposar 15 minutos.
•
Tome 2 ml del sobrenadante y agregue 2 ml de ácido tricloroacético y 6 ml
•
de agua destilada.
•
Filtre y proceda a realizar la técnica para desarrollar color, junto con un blanco que contenga 4 ml de agua destilada y 1 ml de ácido tricloroacético: a. Tome 5 ml del filtrado y agregue 1 ml de nitrito de sodio. b. Después de 3 minutos adicione 1 ml de sulfamato de amonio y deje reposar tres minutos más. c. Por último, adicione 1 ml de N-Naftiletilendiamina, filtre y lea a 545 nm contra el blanco 6. Recopile los resultados de todo el grupo.
Resultados 1. Utilizando la curva de calibración de sulfatiazol sódico determine la concentración de sulfatiazol en µg/5 ml de acuerdo con la Tabla 1. 2. Calcule el factor de dilución y determine la concentración del sulfatiazol sódico en µg/ml.
33
3. En una tabla recopile los resultados de todo el grupo y grafique la concentración de fármaco contra tiempo para cada uno de los órganos (en una sola gráfica). 4. Con los datos obtenidos calcule el volumen de distribución para este fármaco.
Tabla 1. Concentración de sulfatizol sódico ( µg/ml) en diferentes órganos. Concentración de sulfatiazol sódico a los _________ minutos Vía de administración subcutánea Muestra (peso) Absorbancia factor de µg/5 ml µg/ml dilución Hígado (1 g) Riñón (1 g) Cerebro (1 g) Corazón (1 g)
Discusión Explique extensamente si los resultados obtenidos concuerdan con los datos de la bibliografía.
Cuestionario 1. Indique las características químicas y farmacológicas principales de las sulfonamidas. 2. ¿Cuáles son las causas por las que en esta práctica se eligieron estos cuatro órganos?
Bibliografía
34 •
Goodman-Gilman. Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. IX ed. Ed. McGraw-Hill Interamericana. México. 1996.
•
Graham, R., Robert, Z., Harris, D. Medicinal Research Reviews 21 (5): Sept. 2001.
•
Katzung, B.G. Farmacología Básica y Clínica. VIII ed. Ed. El Manual Moderno. 2002.
•
Mycek, M.J., Harvey, R. A. Lippincott´s illustrated reviews: Pharmacology. II ed. Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA. 1997.
35
Práctica No. 6. Excreción. Cuantificación de la eliminación renal del ácido acetilsalicílico Introducción La excreción se puede definir como el paso de los fármacos del interior al exterior de los organismos. Los fármacos son eliminados del organismo como compuestos no alterados o bien como metabolitos, siendo el riñón la vía de excreción de fármacos más importante. La excreción de fármacos y sus metabolitos por la orina comprende tres procesos: filtración glomerular, secreción tubular activa y reabsorción tubular pasiva. Así, la cantidad de fármaco que llega a los túbulos depende de su unión a las proteínas plasmáticas y del grado de filtración glomerular. Por otro lado, puesto que la orina es normalmente ácida, los fármacos débilmente ácidos requerirían mucho más tiempo para ser eliminados exclusivamente por el riñón. Afortunadamente, el metabolismo de los fármacos tiende a transformarlos en ácidos más fuertes, con lo cual aumenta la proporción de formas iónicas y disminuye la reabsorción tubular. Por lo tanto, la influencia de la modificación del pH urinario sobre la eliminación de los fármacos depende del grado y la persistencia de esa modificación. Este efecto es mayor para los ácidos y las bases débiles con valores de pK en el intervalo del pH urinario.
Objetivos
36 1)
Cuantificar la eliminación renal del ácido acetilsalicílico empleando la orina de sujetos voluntarios.
2)
Determinar si las características de diferentes formulaciones influyen sobre la eliminación del analgésico
Material y métodos Se requiere de un voluntario por equipo que no haya recibido ninguna medicación por lo menos 48 horas antes del ensayo, que no sean hipersensibles al fármaco, que no tengan problemas de sangrado gastrointestinal y que no se encuentren en periodo menstrual. De preferencia con ayuno mínimo de 8 horas. 1. Material necesario: 1. Solicitar por equipo: 15 tubos de ensayo, 5 pipetas de 2 ml, 5 pipetas de 5 ml, 2 pipetas de 1 ml, 1 pipeta de 10 ml, 1 probeta de 200 ml, 1 vaso desechable, una gradilla para tubos de ensayo, papel filtro, piceta con agua destilada, 2 embudos de vidrio y 1 propipeta. Equipo necesario: potenciómetro, fotocolorímetro y celdas. 2. Reactivos: ácido acetilsalicílico en diferentes presentaciones farmacéuticas, bicarbonato de sodio, HCl 0.1 N (200 ml), reactivo de Trinder. 3. Proporcionado por los alumnos: por equipo traer 5 frascos pequeños de vidrio limpios (estériles) y un vaso desechable de 250 ml. Desarrollo de la práctica. 1)
Determine y registre la talla, sexo y peso para cada voluntario.
2)
Cada voluntario colectará su muestra basal de orina en un recipiente limpio (antes de ingerir el medicamento)
3)
La administración del fármaco se realizará de la siguiente manera:
37
Voluntario 1
Presentación farmacéutica Tableta de 500 mg de Aspirina con 500 ml de agua
2
Tableta efervescente de 500 mg de Aspirina con 500 ml de agua Tableta de 500 mg de Aspirina con 250 ml de agua y 1 g de bicarbonato de sodio con otros 250 ml de agua Tableta de 500 mg de Aspirina con 250 ml de agua y 20 minutos después ingerir 1 g de bicarbonato de sodio con otros 250 ml de agua Disprina efervescente con 500 ml de agua
3 4 5
NOTA: en todos los casos anote la hora de ingestión del fármaco 4)
Colectar muestras de orina a los 20, 40, 80 y 120 minutos posteriores a la administración del fármaco.
5)
Determine la concentración del ácido acetilsalicílico en cada una de las muestras (incluyendo la basal) de acuerdo con la siguiente técnica: •
Para cada muestra mida el pH y el volumen de orina.
•
Tome una alícuota de 2 ml de orina, adicione 8 ml de HCl 0.1 N y filtre.
•
Tome 5 ml de filtrado y adicione 1 ml de reactivo de Trinder (reactivo altamente tóxico).
•
Calibre el fotocolorímetro con la muestra procesada de la orina basal y lea a 540 nm.
•
Registre los datos de todo el grupo en la Tabla 1 de resultados.
Resultados
38
1. Efectúe las correcciones para las diluciones realizadas y exprese los resultados del contenido de salicilato en µg/ml de orina. 2. Para encontrar la concentración de salicilatos, trace la curva de calibración para el ácido acetilsalicílico obtenida en el fotocolorímetro Spectronic 20 que se muestra a continuación: Concentración (µg/2 ml) 12.4
Absorbancia 0.123
25.0
0.210
50.0
0.413
100.0
0.820
3. Grafique concentración en µg/ml de ácido acetilsalicílico contra tiempo para cada voluntario (5 curvas en una gráfica). 4. Calcule la velocidad de excreción urinaria (cantidad de fármaco que se excreta por minuto) en cada individuo.
Discusión •
De acuerdo con los resultados que obtuvo relacione el pH urinario con la concentración del fármaco en orina para cada voluntario.
•
Relacione las propiedades farmacocinéticas de cada una de las formas farmacéuticas administradas con respecto a la eliminación de las mismas.
Cuestionario Calcule la depuración renal del ácido acetilsalicílico. Si esto no es posible, indique por qué.
39
Tabla No. 1. Volumen excretado de orina y pH para cada voluntario antes y después de la administración de ácido acetilsalicílico. T i e m p o (minutos) Voluntario Formulación
0 pH
20 Vol. pH
Vol. pH
40 Vol. pH
80 Vol. pH
120 Vol.
A B C D E
Bibliografía Goodman-Gilman. Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. IX ed. Ed. McGraw-Hill Interamericana. México. 1996. Katzung, B.G. Farmacología Básica y Clínica. VIII ed. Ed. El Manual Moderno. 2002. Litter, M. Farmacología Experimental y Clínica. 7ª ed. Ed. El Ateneo. Buenos Aires. 1988. Reyes-Sánchez, J.C. y Jaramillo-Juárez, F. Manual de ejercicios experimentales de farmacología. I ed. Sociedad Mexicana de Ciencias Fisiológicas. Programa Nacional de Formación de Profesores en el Área Biomédica (PRONFOPAB). 2000.
40
Practica 7. Efectos de las drogas sobre el ojo del conejo Introducción El iris está compuesto de dos tipos de fibras musculares, el circular y el radial. Las fibras circulares están inervadas por fibras nerviosas parasimpáticas y las radiales por fibras radiales simpáticas. La estimulación de nervios simpáticos y parasimpáticos producen midriasis y miosis respectivamente y su inhibición produce efectos opuestos. Las drogas que estimulan los efectos del sistema nervioso autonómico pueden producir los efectos mencionados arriba. Este experimento usa algunas de estas drogas sobre el ojo del conejo.
Objetivo Determinar los efectos de algunas drogas sobre el tamaño de la pupila, reflejo a la luz y tensión intraocular del ojo de conejo.
Material y Método 1. Material biológico: Conejos Nueva Zelanda. 2. Sustancias necesarias: solución salina, fisostigmina 0.5%, sulfato de atropina 1.0%, efedrina 0.5%, hidrocloruro de adrenalina 0.1%, hidrocloruro de lidocaína 1.0%. 3. Otros: cepos para conejo, regla de medición, goteros, lámparas de mano, pincel. Procedimiento: Inmovilizar a los conejos en un cepo y cortar las pestañas. Medir el diámetro de ambas pupilas. Note la tensión intraocular (baja, normal o alta). Pruebe los reflejos a la luz y corneal. No olvide anotar las lecturas.
41
Seleccione un ojo como control (izquierdo) y otro de prueba (derecho). Aplique solución salina en el ojo control y una droga en el ojo de prueba. Repita las mediciones: diámetro de pupilas, tensión intraocular y reflejos. Tabule sus resultados de acuerdo con la tabla incluida en el programa. Notas: 1. Tome las lecturas antes de adicionar solución salina o drogas. 2. Use solución salina como control para todas las drogas. 3. Las mediciones deben registrarse antes y después de adicionar solución salina o drogas. 4. Use sólo una droga por conejo. Para probar las drogas use solamente conejos que no hayan sido tratados previamente. 5. Use la escala dada para medir el tamaño de la pupila. Cada división es 1 mm.
Resultados Use la tabla suministrada para presentar sus datos.
Discusión Discuta sus resultados y obtenga conclusiones.
Cuestionario 1. ¿Cuál es la diferencia entre las midriasis inducida por agentes adrenérgicos y drogas anticolinérgicas? 2. Mencione algunos midriáticos y mióticos usados clínicamente. 3. ¿Cuáles son los usos terapéuticos de los midriáticos?
42
4. El fluido del estómago tomado de un caso de envenenamiento produjo pupila de alfiler cuando se instiló en el ojo del conejo. La tensión intraocular se encontró disminuida también. ¿Cuál es su probable diagnóstico? Traducida del sitio Web (2008): http://expharm.virtualave.net
43
Práctica No. 8. Efecto de algunas drogas sobre el corazón aislado de rana Introducción Existen muchos fármacos que actúan sobre el corazón. Las drogas adrenérgicas y colinérgicas producen efectos opuestos sobre él. Estos fármacos producen sus acciones a través de receptores específicos. Algunas drogas actúan también directamente sobre el corazón. Este experimento demuestra los efectos de algunas de estas drogas (agonistas, antagonistas, calcio y potasio) sobre el corazón aislado de rana.
Objetivo Determinar las acciones de ciertas drogas sobre el corazón aislado de rana.
Material y Método 1. Una rana de gran tamaño. 2. Soluciones y fármacos: ringer de rana, epinefrina (10 mcg/ml), norepinefrina (10 mcg/ml), isoprenalina (10 mcg/ml), acetilcolina (10 mcg/ml), propanolol (1 mg/ml), sulfato de atropina (100 mcg/ml), cloruro de calcio (10 mg/ml), cloruro de potasio (10 mg/ml). 3. Otros: transductor de fuerza, soporte, fisiógrafo con hoja de registro. Procedimiento. Desmedular y diseccionar la rana para exhibir el corazón. Canular el seno venoso usando una cánula de vidrio, asegurando con hilo. Aislar el corazón con la cánula y perfundir con la solución Ringer a través del seno venoso. Insertar un gancho en el
44
ápice y unirlo a un transductor de fuerza para registrar las contracciones sobre el fisiógrafo. Inyectar las drogas una por una dentro del tubo de hule donde penetra la solución Ringer y registrar las contracciones resultantes. Registrar también la frecuencia cardiaca (latidos/min). Las dosis de cada substancia
que deben administrarse,
disueltas en un volumen final de 0.2 ml con solución Ringer, son las siguientes: ringer de rana (0.2 ml), epinefrina (2 mcg/ml), norepinefrina (2 mcg), isoprenalina (2 mcg), acetilcolina (2 mcg), propanolol (200 mcg), sulfato de atropina (20 mcg), cloruro de calcio (2000 mcg), cloruro de potasio (2000 mg). Nota: Antes y después de la administración de las sustancias observe lo siguiente: a) Fuerza de contracción o amplitud (normal, incrementada o disminuida). b) Tono (normal, incrementado o disminuido). c) Frecuencia cardiaca (latidos por minuto). Los parámetros a y b se obtienen observando el registro. La amplitud de la contracción refleja la fuerza. Un cambio de posición del punto medio de las contracciones sistólicas y diastólicas indica el cambio en el tono. Estos parámetros deben registrarse en la tabla de resultados. Precauciones: a. Espere hasta que las contracciones aparezcan sobre la hoja antes de administrar las drogas. b. Espere el tiempo suficiente para que el corazón se recupere después de la administración de una droga. c. Siempre anote las lecturas de los parámetros antes y después de dar drogas.
45 d. No pueden mezclarse dos drogas. Éstas deben darse una por una. Observe la
señal que indica cuando una sustancia está actuando. Si otra droga es suministrada antes de que la acción de la primera termine, la interacción puede observarse. Así, la interacción entre agonistas y antagonistas puede observarse, sin embargo, la potenciación entre las drogas adrenérgicas no. e. Las dosis administradas son fijas. No dar una droga repetidamente con la finalidad de incrementar la dosis.
Resultados Reportar tabla de resultados y registro.
Discusión Interprete los datos y proporcione sus conclusiones.
Cuestionario 1. Mencione 7 estimulantes y 7 depresores cardiacos. 2. ¿Por qué las inyecciones intravenosas de potasio y calcio deben administrarse lentamente? 3. ¿Por qué la dopamina es preferida a la adrenalina en el shock cardiaco? 4. Mencione brevemente los usos y efectos adversos del propanolol, la digoxina y la adrenalina. 5. Un paciente con asma bronquial presentó palpitaciones e incremento en la presión arterial. Si el medicamento que estaba tomando era Brovon Inhaler, ¿cuál es la naturaleza probable de este medicamento? Traducido del sitio Web (2008): http://expharm.virtualave.net
46
Práctica No. 9. Bioensayo de la histamina sobre el íleon de cobayo Introducción Un bioensayo se define como la estimación de la concentración o potencia de una substancia a través de la medición de su actividad biológica sobre un sistema apropiado. Los bioensayos son principalmente usados para cuantificar sustancias biológicas para las cuales procedimientos químicos establecidos, u otros ensayos, no están disponibles. Este experimento muestra una curva dosis respuesta gradual y un ensayo de combinación para la histamina sobre el íleon de cobayo.
Objetivo Obtener una curva dosis respuesta gradual de histamina y determinar la concentración de la misma en una solución de concentración desconocida usando un ensayo de combinación.
Material y método Material: Baño de circulación, baño de órganos, íleon de cobayo, fisiógrafo y hoja de registro, transductor de fuerza. Soluciones y fármacos: Histamina y solución de Tyrode. Desarrollo. Sacrificar un cobayo, abrir el abdomen y aislar el íleon. Retirar el tejido mesentérico unido al íleon, cortarlo transversalmente y colocarlo en una caja petri conteniendo solución de Tyrode. Cortar un pequeño segmento de íleon (de 5 cm), limpiarlo y fijarlo
47
por uno de sus extremos a un gancho de tejidos con ayuda de un hilo. Atar un hilo al otro extremo e introducir el tejido al baño de órganos. Fijar el hilo a un transductor de fuerza conectado al fisiógrafo. El baño de circulación se llena de agua, la cual debe mantenerse a una temperatura de 37 C con ayuda de un termostato. El baño de órganos lleno de solución de Tyrode debe conectarse a un reservorio. El tejido se fija apretadamente con abrazaderas y se conecta aire a través de un tubo de hule. Las burbujas de aire deben salir a un lado de la solución de Tyrode. Con este sistema seguir con el procedimiento siguiente: 1. Elegir e inyectar una dosis de histamina. Obtener una curva dosis respuesta incrementando la dosis en progresión geométrica. La dosis de inicio puede ser 0.1 mcg. Si el tejido es muy sensible iniciar con 0.01 mcg. 2. Una vez alcanzada la respuesta máxima iniciar el ensayo de combinación. 3. Al inicio de este ensayo, dar una solución de concentración desconocida de histamina. Seleccionar una curva estándar de la curva dosis respuesta e ingresar la cantidad de histamina que produjo la curva estándar. La curva estándar se selecciona con base en que la respuesta producida por la curva es cerca del 50 % de la respuesta máxima (la respuesta máxima es aquella que no se incrementa más con un incremento de la dosis). 4. Inyectar la dosis estándar y la desconocida alternadamente. La desconocida es dada en ml. La dosis inicial puede ser de 0.1 ml. Ajustar la dosis desconocida hasta empalmarlas (o combinarlas bien) con la estándar. El empalme se alcanza a través de pruebas de ensayo y error.
48
5. El empalme puede confirmarse dando 2s o s/2 (el doble o la mitad de la cantidad de la estándar) y la mitad o el doble de la dosis desconocida que se empalma con la estándar. Después de que el empalme se haya confirmado, calcular la concentración de histamina en la solución desconocida.
Resultados Reportar el registro y los datos considerados en el cálculo de la concentración de histamina.
Discusión Discuta ampliamente sus resultados.
Cuestionario 1. ¿Qué es un bioensayo y cuál es su importancia? 2. ¿Qué otros tipos de bioensayos existen? Mencione algunos ejemplos. 3. Mencione algunos de los instrumentos modernos empleados en los bioensayos de concentración de fármacos en los fluidos del cuerpo, como por ejemplo la sangre. 4. ¿Cuáles son las acciones de la histamina sobre el tracto gastrointestinal?
Traducido del sitio Web (2008): http://expharm.virtualave.net
49
Práctica No. 10. Efecto de algunos fármacos sobre la motilidad ciliar en el esófago de rana Introducción El esófago de rana contiene cilios. La motilidad ciliar depende de la acción de la acetilcolina (Ach) en la membrana mucosa. La Ach produce la contracción de los cilios llevándolos a incrementar sus movimientos. Las drogas colinérgicas producen efectos similares, mientras que las anticolinérgicas paralizan los cilios produciendo una disminución de sus movimientos. En este experimento se usan algunas de estas drogas para poder observar sus efectos sobre el movimiento ciliar.
Objetivo Determinar la acción de ciertos fármacos sobre la motilidad ciliar del esófago de rana.
Material y método 1. Material biológico: una rana grande, semillas pequeñas. 2. Fármacos y soluciones: Ach 10%, fisostigmina 10%, Atropina 0.1%, Ringer de rana. 3. Otros: soporte de madera y cronómetro. Procedimiento. Descerebrar la rana y remover la mandíbula inferior. Descubrir el esófago desde la cavidad oral hasta el estómago y fijarlo a una charola con alfileres. El exceso de sangre debe limpiarse con algodón y solución Ringer de rana. La superficie debe mantenerse húmeda también con el mismo Ringer. Colocar una semilla de amapola en la parte
50
cefálica del esófago y determinar el tiempo que tarda en recorrer una distancia determinada (fija), procediendo como se indica a continuación: 1. Ubicar la distancia del movimiento de las semillas. El punto de inicio y el punto final se indican con los alfileres a la izquierda de la preparación. 2. Instilar ringer de rana sobre la superficie del esófago (control). Colocar una semilla en la terminal cefálica del esófago. La semilla comenzará a moverse debido a la movilidad de los cilios. Iniciar el cronómetro cuando las semillas crucen el punto inicial (alfiler en parte cefálica). Detener el cronómetro cuando la semilla alcance el alfiler caudal (distal). 3. Anotar el tiempo que tarda la semilla en recorrer la distancia. Repetir el paso 2 hasta obtener tres lecturas. Calcular el promedio. 4. Instilar Ach y tomar tres lecturas. 5. Repetir los pasos 2 y 3. 6. Instilar fisostigmina y tomar tres lecturas. 7. Repetir los pasos 2 y 3. 8. Instilar atropina y tomar tres lecturas. 9. Instile Ach (sin usar Ringer de rana después del paso 8) y observar sus efectos. Compare con el efecto obtenido con Ach sola (paso 4). 10. Tabule sus lecturas y obtenga conclusiones. NOTAS: 1. Use nuevas preparaciones (ranas) para cada fármaco. 2. Para observar interacciones las drogas se deben aplicar en la misma preparación sin usar Ringer.
51
Resultados
Compare las lecturas del Ringer con las lecturas de los fármacos usando una prueba estadística (prueba de t Student para muestras independientes), usando un nivel mínimo de significancia del 95%.
Discusión Discuta ampliamente sus resultados.
Cuestionario 1. Mencione por lo menos otros tres sitios del organismo en donde los movimientos ciliares tengan un papel importante. 2. ¿Cuáles son las acciones de la Ach sobre el tracto gastrointestinal? 3. Mencione 5 fármacos colinérgicos y 5 anticolinérgicos. 4. ¿Con qué finalidad se usan la
atropina y sus derivados en el tratamiento de
desórdenes gastrointestinales? 5. Mencione al menos 4 fármacos que no sean colinérgicos ni anticolinérgicos pero que se usen en el tratamiento de desórdenes gastrointestinales. 6. Explique el por qué del uso de drogas anticolinesterasa en la miastenia gravis.
Traducido del sitio Web (2008): http://expharm.virtualave.net
52
Agradecimientos Agradecemos el apoyo del Biol. Exp. Mauro López Armenta por la elaboración de los dibujos y a la también Biol. Exp. Ana Angélica Chávez Miranda por su contribución en la elaboración del presente manual. Además, nuestro más s incero agradecimiento a todos los alumnos de la Licenciatura en Biología Experimental que han cursado la U.U.E.E.A.A. de Farmacología General por sus valiosas observaciones y aportaciones al presente Manual.
53
54
