Manual de Banco de Sangre

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS

MANUAL DE BANCO DE

N°92

SANGRE INTEGRANTES DEL EQUIPO: CRISTIAN OSWALDO CANCINO URBINA #8

LABORATORISTA CLÍNICO

INGRID ANAHÍ DE LA TORRE MENDEZ #11 KARLA GÓMEZ PÉREZ #21 RAMIRO PABLO HERNANDEZ GÓMEZ #26 CLAUDIA LARA PÉREZ #28

EQUIPO #4

PENAGOS SOLÍS DANIELA DEL CARMEN #37

PROFRA.: LORENA GUADALUPE COSGALLA MALDONADO

5TO. “F”

63 MANUAL DE BANCO DE SANGRE

5. Centrifugar el plasma rico en plaquetas P.R.P. a una velocidad de 3000 R.P.M. x 10 minutos, a una temperatura de 20°C. 6. Colocar la bolsa en el extractor y transferir el plasma sobrenadante a la segunda bolsa satélite, dejar un volumen de plasma , no menor de 50ml., así las plaquetas serán conservadas a 20°C. 7. Identificar los productos, tanto el PRP, como el C.P. con las etiquetas elevadas señalándola fecha, hora de preparación y vencimiento. 8. Colocar los concentrados plaquetarios en un agitador para plaquetas a +20°C, (es aproximadamente de 1 a 2 horas.) de 3 a 5 días de la bolsa colectora. 9. El plasma pobre en plaquetas se guarda y conserva a una temperatura de -20°C para su almacenamiento por un año.

3) CRIOPRECIPITADO DE FACTOR VIII FUNDAMENTO El Crioprecipitado de factor VIII o factor anti hemofílico (FAH) (es la porción del plasma que precipita en frio, después de que el P.F.C. ha sido descongelado bajo condiciones congeladas.) Contiene la mayor parte del factor VIII y cierta cantidad de fibrinógeno, de los existentes en la unidad original de plasma. Es la proteína que precipita a temperatura de -120°C y posteriormente de descongelar el plasma

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MATERIAL Centrifuga Bolsas triples y satelite Extractor Balanza Hematron Etiquetas


PROCEDIMIENTO 1. Colocar la sangre total del donador en bolsas triples y una vez obtenida y centrifugar a3000 RPM durante 15 minutos. 2. Pasar con un extractor el plasma a una bolsa satélite , pesando en una balanza para precisar el volumen, sellar el tubo piloto y separar el P.G. refrigerándolo de 2 a 6°C. 3. Poner los datos correspondientes a la bolsa del plasma (no etiqueta) 4. Congelar el plasma rápidamente con hielo seco y acetona para que de un proceso de congelación (completa o dejar congelar a una temperatura de 20°C durante toda una noche 14 a 18 Horas) de -120°C. 5. Una vez congelado el plasma, descongelarlo a una temperatura de 1 a 6°C. 6. Ya que estén descongelados, centrifugar el plasma a 4000 RPM durante 15 minutos, a una temperatura de 4°C. 7. Terminada la centrifugación, colocar la bolsa en un extractor de bolsas y separar el plasma en la segunda bolsa satélite. 8. Separado ya el plasma, etiquetar debidamente los productos ya fraccionados con todos los datos. 9. Los plasmas y crioprecipitados se guardarán a una temperatura de -20°C para su conservación


CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE HEMODERIVADOS

CONSERVACION DE HEMODERIVADOS

PRODUCTO

ANTICUAGULANTE

CONSERVADOR

Concentrado eritrocitario

ADSOL

41 días


C.P.D o A.C.D


C.P.D.A

21 dias

35 dias

Plasma fresco congelado

1 año

Plasma sin factor VII

1 año

Plasma pobre en plaquetas

1año

Factor VIII o crioprecipitado

1 año


TRANSPORTE DE HEMODERIVADOS

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Las unidades de sangre y componentes sanguíneos, deberán mantenerse durante su traslado a la temperatura ideal de conservación, de acuerdo al componente de que se trate

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Las unidades se colocarán en el interior de contenedores termoaislantes, de tal forma, que no sufran movimientos violentos, especialmente cuando se trate de unidades celulares en estado líquido.

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Los contenedores no deberán colocarse en los compartimentos de carga de camiones o autobuses

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Tratándose de transportación aérea, las unidades de sangre y componentes sanguíneos, se deberán trasladar en cabinas presurizadas, salvo aquéllas que se conservan en congelación.

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Se hará una estimación de la temperatura y aspecto físico de las unidades al momento de su recepción

5 MANUAL DE BANCO DE SANGRE 

Organización del banco de sangre (Organigrama)

DIRECCIÓN DEL BANCO DE SANGRE

SUBDIRECCIÓN MÉDICA

DIVISIÓN DE SERVICIOS

JEFATURA DE BANCO DE SANGRE

AUXILIARES DE DIAGNÓSTICO Y

TRATAMIENTO

SECCIÓN DE

SECCIÓN DE TOMA DE

INMUNOHEMATOLGÍA Y

MUESTRA Y

SEROLOGÍA

FLEBOTOMÍA

SECCIÓN DE SELECCIÓN

SECCIÓN DE PROMOCIÓN Y

DEL DONADOR

SECCIÓN DE FRACCIONAMIENTO, CONSERVACIÓN Y

ORIENTACIÓN SUMINISTRO DE

UNIDADES DE SANGRE


DONADORES DE SANGRE 

Tipos de donadores

Los donadores deben ser personas voluntarias, por motivos altruistas o por ser cercanos a pacientes. 

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Donante voluntario: persona que desea compartir su salud donando sangre, para el paciente que la necesite. Donante autólogo: es aquel paciente que tiene programada una cirugía electiva y dona su propia sangre en caso de requerir una transfusión. Donante directo: en algunas circunstancias clínicas el paciente puede beneficiarse del componente colectado de un donante específico. Tipos de donación Regular. Consiste en la extracción de 450 ml de sangre en bolsas que contienen soluciones anticoagulantes que permiten su almacenamiento en condiciones adecuadas. De esta donación se pueden obtener una bolsa de concentrado de hematíes, otra de plasma y si fuera necesario una de plaquetas. Frecuencia. En hombres, un máximo de 4 donaciones al año. En las mujeres, un máximo de 3 donaciones al año. El periodo mínimo entre donaciones debe ser de 2 meses. Por aféresis. Es un tipo especial de donación en la cual, mediante procedimientos efectuados por máquinas, se extrae sangre, se separan sus componentes, se recogen los que se necesitan y el resto se restituye al donante. Es especialmente beneficioso para el paciente puesto que la cantidad del componente necesitado y extraído es mucho mayor que en una donación convencional y, además, se minimizan los riesgos. La capacidad de recuperación del donante no se ve afectada. Frecuencia. Se puede repetir si es necesario cada 15 días. Es aconsejable dejar un intervalo de 30 días entre dos aféresis. Hay que dejar un intervalo de 60 días entre una donación normal y una aféresis. Auto transfusión. Consiste en la extracción a un paciente de una o varias unidades de sangre, en las semanas anteriores a una intervención quirúrgica, programada para cubrir las necesidades de transfusión derivadas de ésta. De esta manera al paciente se le transfunde su propia sangre. Sólo se aplica a pacientes razonablemente sanos


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Requisitos que debe cubrir un donador de sangre segura

Edad de 18 y 65 años Presentar identificación oficial con fotografía Peso mayor de 50kg. Persona clínicamente sana Traer un litro de agua embotellada No estar enfermo de gripe, tos, diarrea o haber tenido fuegos o otras enfermedades en la última semana Mujeres no estar menstruando menstruando o reglando, re glando, embarazadas o lactando No haber sido operado recientemente No ser alérgico a la penicilina No haber ingerido bebidas alcohólicas en los últimos tres días Dormir bien un día antes de la donación (mínimo 6hrs) Estar en ayuno Cenar dieta baja en grasas un día antes de la donación No fumar 3 hrs. Antes de la donación Aseo personal adecuado Tener disponibilidad de tiempo No haber recibido aplicación de alguna vacuna en el último mes No pueden donar personas con presión alta o baja, diabetes, epilepsia, o convulsiones y enfermedades de corazón No tener infecciones de piel No haber tenido tratamiento dental 72hrs. Antes de donar

 No tomar medicamentos una semana antes de la donación

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Razones para donar sangre

Con una donación, se salvan tres vidas. La cantidad donada sólo representa el 10% de la sangre que normalmente se posee, porcentaje que no interfiere con el funcionamiento normal del organismo. La donación de sangre se puede hacer a cualquier hora del día, sin necesidad de condiciones especiales. Cada día 75 personas salvan su vida en España gracias a las transfusiones. Los tratamientos de cáncer, la cirugía compleja, c ompleja, los accidentes de tráfico, los trasplantes de órganos,... serían imposibles sin donaciones de sangre. La sangre no puede fabricarse.


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Si piensas donar cuando haya una emergencia, ya llegas tarde. Tu sangre debe ser sometida a pruebas y procesos. Por lo tanto, es mejor acudir antes de que aparezca la necesidad. En verano, hace más falta, al contrario de lo que se cree, por el aumento de los accidentes y la escasez de donantes en sus residencias habituales. Porque mañana, a lo mejor, le hace falta a uno de los tuyos. Es el mejor donativo. Hacen un buen análisis de tu sangre. Garantías de seguridad para el donante y el receptor. Disponibilidad gratuita de los productos sanguíneos Utilización óptima de la donación. La donación de sangre, no puede ser motivo de comercio. Ni se compra ni se vende.

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Recomendaciones después de la donación

Tomar abundante agua No fumar hasta 30 min. Después de donar Evitar realizar ejercicio, levantar objetos pesados o cualquier actividad activi dad que utilicé el brazo de la punciona hasta el día siguiente Si sangras en el sitio de la punción eleva el brazo y presiona en el lugar de 5 a 10 min. Algunos esfuerzos pueden provocar mareos, nauseas o dolor de cabeza, si ello ocurre acuéstese con los pies elevados y se debe evitar por 24hrs. Trabajo que requiera fuerza, presión o rapidez Si en los días posteriores a la donación te da gripa, tos, catarro, etc… avisa ya que cuando

donaste te encontrabas en un periodo de incubación de la enfermedad y transmitirle tu sangre aun paciente seria muy peligroso para el.


APLICACIÓN LA NORMA NORMA NOM-003-SSA2-19 NOM-003-SSA2-1993 93 1.1 Esta Norma tiene por objeto uniformar las actividades, criterios, c riterios, estrategias y técnicas operativas del Sistema Nacional de Salud, en relación con la disposición de sangre humana y sus componentes con fines terapéuticos. 1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria para todos los establecimientos para la atención médica y, en su caso, para las unidades administrativas de los sectores público, social y privado del país. 4 Disposiciones generales 4.1 Los disponentes alogénicos de sangre y de sus componentes podrán corresponder a las categorías siguientes: - Altruista; - Familiar. 4.2 Los actos de disposición de sangre y sus componentes para fines de transfusión autóloga, podrán llevarse a cabo mediante los procedimientos siguientes: - Depósito previo; - Hemodilución preoperatoria aguda; - Rescate celular cel ular transoperatorio y posoperatorio. 4.3 Los establecimientos que realicen cualquier acto de disposición regulado por esta Norma, deberán proporcionar a los disponentes originarios y, en su caso, a los secundarios, lo que a continuación se señala: a) La información concerniente al procedimiento al cual van a ser sometidos, así como, el folleto de autoexclusión confidencial a que se refieren los apartados 5.1 y C.5 de esta Norma; b) Notificación oportuna de alguna anormalidad en los resultados de las pruebas de laboratorio, así como, la información y orientación que el caso amerite; c) Informe por escrito de los resultados de las pruebas de laboratorio, si el disponente así lo solicita. 4.4 En la realización de los actos de disposición de sangre o de sus componentes, se deberán emplear técnicas seguras, asépticas y que permitan una identificación precisa de las unidades recolectadas. Los equipos para la recolección y transfusión utilizados deberán ser desechables y libres de pirógenos. 4.5 La sangre y sus componentes con fines transfusionales se podrá recolectar por extracción simple, aféresis o por técnicas de rescate perioperatorio. La venopunción para recolectar sangre por extracción simple, o algún componente sanguíneo mediante aféresis, deberá hacerse en áreas cutáneas libre de lesiones y se realizará después de su limpieza y antisepsia cuidadosas.


4.6 La recolección de sangre o de sus componentes, deberá hacerse en un ambiente y condiciones que garanticen seguridad, bienestar y respeto para el disponente, el receptor y el personal de salud. Estos requisitos y condiciones deberán mantenerse cuando la recolección de sangre se realice en unidades móviles. 4.7 Los componentes sanguíneos se podrán obtener mediante los procedimientos siguientes: - Sedimentación por gravedad (de unidades de sangre); - Centrifugación a temperatura controlada (de unidades de sangre); - Aféresis. 4.8 Los procedimientos para los análisis de laboratorio que se requieren en los actos de disposición regulados por esta Norma, deberán emplear una metodología sensible y específica aceptada por la Secretaría. 4.9 La sangre y sus componentes se podrán emplear con fines terapéuticos en las modalidades de: a) Sangre total, fresca o no; b) Componentes (o fracciones) celulares que se prepararán como concentrados de: - Eritrocitos (y variantes tales como, eritrocitos lavados, eritrocitos pobre en leucocitos y eritrocitos congelados y desglicerolados mediante lavado); - Leucocitos; - Plaquetas. c) Componentes (o fracciones) acelulares que son: - Plasma (que podrá ser: envejecido, fresco, fresco congelado y desprovisto de crioprecipitado); - Fracciones del plasma (como por ejemplo, crioprecipitado). 5 Manejo y selección de disponentes alogénicos 5.1 El personal del banco de sangre deberá proporcionar a los disponentes previamente a la recolección de sangre o de componentes sanguíneos, el folleto de autoexclusión confidencial (véase el apartado C.5 de esta Norma), con la finalidad de permitir que un candidato (o disponente) se pueda excluir mediante cualquiera de los mecanismos siguientes: a) Que se autoexcluya antes de la selección médica, condicionado por el material educativo que contiene el folleto; b) Que el sujeto inquiera con el médico las incógnitas que le hubiesen surgido con la información contenida en el folleto y, mediante su interlocución, el médico pueda identificar prácticas o condiciones de riesgo a las que el candidato hubiese estado expuesto y de esta manera lo excluya; c) Que el sujeto con antecedentes o con prácticas de riesgo para adquirir los virus de la inmunodeficiencia humana o de la hepatitis, que ya hubiese proporcionado su sangre o componentes sanguíneos, tenga la facilidad, mediante el talón a que hace referencia el inciso


d) del apartado C.5 de esta Norma, para notificar confidencialmente que no considera apta su sangre o componentes de ésta para uso transfusional y consecuentemente se les dé destino final inmediatamente después de su recolección. 5.2 El banco de sangre deberá proporcionar a los disponentes después de la recolección de sangre o de componentes sanguíneos, lo que a continuación se indica: a) Alimento líquido y sólido con un valor calórico mínimo de 400 kCal y con un volumen mínimo de 500 mL; b) Prescripción de suplementos de hierro a disponentes que proporcionen sangre, cuando se juzgue indicado. 5.3 Los candidatos a proporcionar sangre o componentes sanguíneos con fines de transfusión alogénica, se someterán a una valoración cuidadosa, que se registrará en una historia clínica conforme a las disposiciones que señala el apartado C.4 de esta Norma y que permita excluir a los siguientes: 5.3.1 Menores de 18 años y mayores de 65 años. 5.3.2 Los sujetos carentes del uso pleno de sus facultades mentales o aquéllos coartados del ejercicio libre de su propia voluntad. 5.3.3 Los sujetos que a continuación se indican y que, por razón de sus prácticas sexuales o por exposición a condiciones de alto riesgo, tienen mayor probabilidad de adquirir infección por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana o por los virus de la hepatitis: a) Homosexuales masculinos; b) Bisexuales; c) Heterosexuales con varios compañeros sexuales; d) Quienes ejercen la prostitución; e) Farmacodependientes que usan la vía intravenosa; f) Hemofílicos y politransfundidos; g) Exproveedores remunerados de sangre o plasma; h) Aquellos con antecedente de haber sido internos en instituciones penales o de enfermedades mentales; i) Los compañeros sexuales de personas infectadas por virus de la inmunodeficiencia humana o de cualquiera de los individuos que indica este apartado. 5.3.4 Los que tengan cualquiera de los antecedentes personales que se enlistan a continuación: a) Hepatitis; b) Positividad en marcadores serológicos para los virus B o C de la hepatitis, o ambos; c) Positividad en la prueba serológica para el Virus de la Inmunodeficiencia Humana, de cualquiera de sus tipos;


d) Manifestaciones clínicas o patológicas que puedan estar asociadas o no a enfermedad por Virus de Inmunodeficiencia Humana, entre las que figuran a continuación:

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Cuadro sugestivo de infección aguda por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana; Pérdida de peso involuntaria del 10 % o mayor del peso corporal habitual, ocurrida en un lapso de seis meses o menor; Fiebre, diarrea, odinofagia o astenia con duración igual o mayor de un mes; Candidiasis orofaríngea, vulvovaginal persistente, frecuente o con mala respuesta a tratamiento; Herpes zoster, dos episodios distintos o que abarquen más de un dermatoma; Herpes simple, mucocutáneo de más de un mes de duración; Encefalopatías, síndromes demenciales, neuropatía periférica o mielopatía; Displasia cervical moderada o grave, enfermedad pélvica inflamatoria o absceso tuboovárico; Púrpura trombocitopénica;

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Tuberculosis extrapulmonar…

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TIPOS DE ANTICOAGULANTES PARA LA CONSERVACION DE LA SANGRE 

Tipos de anticoagulantes

Un anticoagulante es una sustancia de distinta naturaleza química que afecta al proceso de coagulación. Poseen un efecto biológico, lo cual permite que se puedan dividir en dos tipos: Anticoagulantes de acción indirecta : Este tipo de anticoagulantes son aquellos que por medio de su intervención con otras proteínas alteran el funcionamiento de las cascadas de coagulación, esta acción también sucede cuando actúan en otras vías metabólicas. Entre los anticoagulantes de acción indirecta se encuentran:      

Inhibidores medianos de antitrombina III Inhibidores de síntesis de factores de coagulación Derivados del dicumarol Heparina no fraccionada Heparina de bajo peso molecular Danaparoi de sódico

Anticoagulantes de acción directa:

Estos anticoagulantes son aquellos que son capaces de inhibir la cascada de la coagulación. Entre los anticoagulantes de acción directa, se encuentran:

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Inhibidores directos de trombina Hirudina Argatroban

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Función de los anticoagulantes

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En algunos casos son llamados disolventes de sangre, pero este tipo de medicamentos no disuelven los coágulos que ya se hayan formado con anterioridad, si no que pueden llegar a impedir que dichos coágulos se agranden, provocando problemas serios a la salud. Los anticoagulantes pueden administrarse ya sea vía subcutánea o endovenosa. Además, de que tienen la capacidad de reducir la capacidad coagulante de la sangre, lo cual ayuda a prevenir la formación de coágulos dañinos en los vasos sanguíneos.


Mecanismos de acción de los anticoagulantes

EDTA: El EDTA puede ser aplicado intravenosa o tópicamente. Aunque se puede dar oralmente y su absorción en la vía digestiva es buena, se prefiere administrar intravenosamente en virtud de ser más eficaz para aumentar la tasa de excreci ón urinaria de los quelatos. Tras la administración IV el fármaco se absorbe y después de 6 horas puede detectarse en orina de un 60 a un 90% de la cantidad administrada. A las 25 horas puede recuperarse hasta un 99%. El resto aparece en las heces fecales. Los efectos farmacológicos del EDTA resultan de la formación de quelatos con metales divalentes y trivalentes en el cuerpo. En la forma de edetato de calcio disódico se aplica para quelar metales con gran afinidad al quelante más que al calcio iónico. Es de gran utilidad para quelar el plomo que se encuentra en hueso. En sangre, el fármaco puede encontrarse en plasma y debido a que se excreta por vía urinaria, el paciente debe ser evaluado cuidadosamente y certificar que tiene una función renal adecuada. Se ha detectado un pequeño porcentaje en el fluido espinal. HEPARINA: La heparina es una sustancia natural de la sangre que interfiere con el proceso de la coagulación sanguínea. Actúa sobre una sustancia llamada trombina, que juega un importante papel en la formación del coágulo en la sangre. La heparina clásica ejerce su efecto anticoagulante acelerando la formación de complejos moleculares entre la antitrombina III y los factores II(trombina), IX, X, XI, XII, los que quedan activados. Sin embargo, los factores más importantes que quedan inactivados son el factor II y el factor X 

Ventajas y desventajas de los anticoagulantes EDTA y HEPARINA

EDTA: 

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Una excesiva prolongación con el anticoagulante hace que se altere las células sanguíneas. Se recomienda realizar un frotis sanguíneo si el envío se prolonga más de 24 horas. También es el anticoagulante de elección para Test de Coombs y para realizar tinciones citoquímicas


Heparina: Las alteraciones que se producen son:   

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degeneración nuclear de los neutrófilos, deg No es APTA para estudios de inmunohematología: Test de Coombs. No se utiliza para las tinciones citoquímicas. Requisitos de un anticoagulante

La administración de ACO exige la realización de controles periódicos que informen sobre el grado de anticoagulación del paciente al objeto de administrar dosis eficaces con la mínima incidencia de sangrado (5). La prueba de laboratorio utilizada como control del tratamiento anticoagulante oral (TAO) es el tiempo de protrombina (TP) (6), prueba que ha sido estandarizada internacionalmente desde el año 1983 en forma del denominado "International Normalized Ratio" (INR) o "Cociente Normalizado Internacional", que permite comparar los resultados obten i d o s p o r d i f e r e n t e s l a b o r a t o r i o s c o n d i s t i n t o s reactivos: INR = (TP paciente/TP control) ISI. El pará-metro ISI (Índice de Sensibilidad Internacional) indica la sensibilidad del reactivo a la reducción de factores vitamina K dependientes; debe ser lo más próximo posible a 1. Si el INR es igual a 2, nos indica que el TP del paciente es el doble del TP control. Si el INR es 3, será el triple del control. Por tanto, los resultados se expresan como un índice referido a la actividad de una tromboplastina patrón (7-11). Los márgenes o rangos del INR han sido establecidos por la experiencia acumulada con la observación clínica de los pacientes (12-14).


TÉCNICAS PRETRANSFUSIONALES 

Biometría Hemática

En medicina el hemograma o CSC (conteo sanguíneo completo) o biometría hemática es uno de los elementos diagnósticos básicos. Es un cuadro o fórmula sanguínea en el que se expresan el número, proporción y variaciones de los elementos sanguíneos. Recoge: 1. Número de hematíes, hematocrito, hemoglobina e índices eritrocitarios 2. Recuento y fórmula leucocitaria 3. Número de plaquetas El hemograma incluye la cuenta plaquetaria, cuenta leucocitaria (WBC), cuenta eritrocitaria (RBC) hemoglobina, hematocrito y los índices. La biometría hemática es el hemograma mas la cuentadiferencial.La biometría hemática completa (BHC) es una prueba de detección básica y constituye la técnica dellaboratorio que se pide con mas frecuencia. Los datos que se proporcionan constituyen informacióndiagnostico muy valioso sobre el sistema hematológico y otras partes del cuerpo, pronostico, respuestaal tratamiento y recuperación.Consta de una serie de pruebas que determinan el número, variedad, porcentaje, concentración ycalidad de las células sanguíneas:

FORMULA BLANCA •Cuenta leucocitaria:

Constituye una guía muy útil sobre la gravedad de la enfermedad. Endistintos padecimientos, se observan patrones específicos de la respuesta leucocitaria. •Cuenta leucocitaria diferencial: Se expresa en forma de porcentaje del numero total deleucitos, es importante tanto la distribución de los glóbulos blancos como el tipo de leucocitos yel grado con el que aumentan y disminuyen, el porcentaje es relativo de cada tipo de leucocito presente en la sangre.


FORMULA ROJA •Cuenta eritrocitaria:

Medición muy importante para determinar la anemia o policitemia, determina el número total de glóbulos rojos o eritrocitos en 1 mm3 (cubico) de sangre. •Hematocrito:

Determina la masa eritrocitaria, los resultados se expresan como porcentaje de eritrocitos en un volumen de sangre completa, constituye una medida muy importante de la anemia o policitemia. •Hemoglobina:

La medición de la hemoglobina forma parte de la biometría hemática, sirve para detectar enfermedades que se acompañen de anemia, ayuda a determinar la intensidad de anemia, a vigilar la respuesta al tratamiento y valorar la policitemi a. •Indices eritrocitarios: Se utilizan para diferenciar las anemias, si se utilizan en conjunto al examinarse los glóbulos rojos en el frotis es posible obtener un cuadro muy claro de la morfología de los glóbulos rojos. Con base a los índices a los eritrocitos se clasifican en normales o anormales, en cuanto a volumen o contenido de hemoglobina. Volumen corpuscular medio (VCM) El mejor índice para clasificar las anemias es el tamaño de cada célula. Este índice expresa el volumen que ocupa un solo eritrocito y se mide en micras cúbicas del volumen medio. El volumen corpuscular medio expresa si el tamaño del glóbulo rojo es normal (normocitico), menor (microcitico) o mayor (macrocitico). Hemoglobina corpuscular medio (MCH La cuantificación de la hemoglobina corpuscular media es el promedio del peso de la hemoglobina por glóbulo rojo. Este índice es muy importante en el diagnostico de pacientes con anemias muy graves.3. Concentración de hemoglobina media (MCHC): Esta prueba mide la concentración promedio de hemoglobina en glóbulos rojos. La MCHC es muy útil para vigilar el tratamiento de la anemia debido a que las determinaciones hematológicas mas precisas(hemoglobina y hematocrito) son las que se utilizan para calcular esta prueba.

CUENTA PLAQUETARIA: Está indicada cuando al cuenta plaquetaria es menor de lo normal, es útil para estudiar los trastornos hemorrágicos que acompañan hepatopatías ,trombocitopenia, uremia y tratamiento con plaquetas, así como después de enfermedades que se acompañan de insuficiencia de médula ósea. •VPM (volumen plaquetario medio): Esta prueba proporciona información sobre el tamaño delas plaquetas. Se lleva a cabo para estudiar enfermedades hematológicas como púrpura trombocitopenica, leucemias y para estudiar a los alcohólicos que se encuentran bajo tratamiento.


Hematocrito

OBJETIVO Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo, conocer su importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento. FUNDAMENTO El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número de glóbulos rojos y de su tamaño. El resultado se expresa en porcentaje. El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo completo (hemograma). Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae típicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano. Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil. Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el plasma de la sangre y las células, depositándose en el fondo y presentando un color rojo intenso. Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado, llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este último es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura se usa una escala estandarizada. MATERIAL Tubo de Wintrobe Tubos capilares azules o Microcentrifuga graduado de 0-100 mm rojos Alcohol al 70% Pipetas Pasteur Plastilina Sangre venosa Equipo para Encendedor o cerillos venopuncion (Tubo lila) Centrifuga PROCEDIMIENTO Para macrohematocrito: Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA


Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extraída con anticoagulante ayudándose de una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.

Se recomienda como medida de precaución tapar el tubo con un tapón de goma para evitar la evaporación Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos

Leer directamente de la graduación la columna de glóbulos rojos y anotar resultados Para Microhematocrito: Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.

Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina o sellando con fuego Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma

Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm


Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total de plasma y eritrocitos o por medio de la regleta. Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea hroizontal correspondiente al cero Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el 1.0 quede al nivel del tope del plasma. El tubo debe de encontrarse completamente en posición vertical.

La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción del volumen de estos. RESULTADOS En el tubo de Wintrobe se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos rojos, comparando el número de la lectura con los siguientes porcentajes: Hombres: 47.0 5.0% Mujeres: 42.0 5.0% Niños (5 años) 38%-44% Lactantes (3 meses): 37-42% Recién nacidos: 50-58% La sangre era de Edgar Osvaldo Pérez García, y el tubo de Wintrobe demostró un 49% de eritrocitos, estando en un rango normal. En el tubo capilar, al comparar con la regleta, se obtubo un valor de 49%, al igual que el Wintrobe. Sin embargo con los calculos matematicos hubo una pequeña diferencia. Se considera a la medida total de eritrocitos, leucocitos y plasma en mm como un 100% y con la medida de solo los eritrocitos tambien en mm se obtiene su porcentaje con respecto a este por medio de una regla de tres: Medida total= 58 mm (eritrocitos, leucocitos y plasma) Medida de eritrocitos= 29 mm 58 mm -------------------------- 100% 29 mm ------------- x (hematocrito) HEMATOCRITO: 50 %


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Velocidad de Sedimentación Globular

OBJETIVO Que el alumno realice una prueba de Velocidad de Sedimentación Globular y que analice los factores que la determinaron. FUNDAMENTO Cuando se deja una muestra de sangre anticoagulada en reposo, los hematíes como tienen mayor densidad que el plasma, tienden a sedimentar, la velocidad de caída depende de la tendencia que tienen los eritrocitos a formar pilas y esta a su vez depende de la interacción de dos fuerzas opuestas: Una fuerza de atracción: Las fuerzas de Van der Waals y una fuerza de repulsión: El potencial Z. El equilibrio entre estas dos fuerzas puede ser alterado por la presencia de ciertas moléculas asimétricas plasmáticas, especialmente el fibrinógeno (Proteína de fase aguda )y las gama globulinas cuando están muy aumentadas, estas proteínas funcionan como dieléctricos disminuyendo el potencial Z, por lo tanto priman las fuerzas de atracción y se acelera la velocidad de sedimentación. La velocidad de sedimentación también depende de una serie de otros factores muchos de ellos aún no identificados como: Daño orgánico, respuesta tisular y relación con la circulación, número de eritrocitos, etc. Cuando hay un proceso infeccioso o inflamatorio en general aumenta el fibrinógeno y por lo tanto la velocidad de sedimentación se acelera. MATERIAL Tubo de Wintrobe Pipeta Pasteur o pipeta de transferencia Gradilla para tubos de Wintrobe Sangre venosa con EDTA. PROCEDIMIENTO 1. Tome Sangre Del Tubo O Frasco Con Una Pipeta Pasteur, Transfiérala A Un Tubo De Wintrobe Y Llénelo Hasta La Marca De "0". Debe Procurar Que Al Vaciar La Pipeta La Punta De Ésta Quede Al Fondo Del Tubo E Ir Vaciando La Sangre Suavemente, Al Mismo Tiempo Que Se Va Retirando La Pipeta Del Fondo. 2. Lleve El Tubo De Wintrobe A La Gradilla E Inicie El Conteo De Tiempo, Dejando Reposar La Muestra Durante Una Hora. :


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VALORES NORMALES Para las mujeres: menor de 15 mm/hora (M. Wintrobe) Para los hombres: menor de 12 mm/hora (M. Wintrobe) CAUSAS DE ERROR

Errores que podrían haber aumentado la velocidad de sedimentación 

Desviación de la verticalidad de la pipeta.



Elevación de la temperatura ambiente.



Error en el anticoagulante.



Mal enrase a cero Errores que podrían haber disminuido la velocidad de sedimentación



Utilización tardía de la sangre.



Error en el anticoagulante. 

Determinación de Hemoglobina

OBJETIVO El alumno aprenderá a realizar la prueba de determinación de hemoglobina, a utilizar l a boquilla, la pipeta de Sahlí y aprenderá cómo calibrar y utilizar el espectrofotómetro FUNDAMENTO La hemoglobina es una proteína contenida dentro del eritrocito, es la encargada de combinarse, de forma reversible, con el oxígeno para llevarlo de los pulmones a todas las células y favorecer así los procesos de oxidación y con ello la de energía. A su vez recibe el dióxido de carbono generado en los procesos de oxidación intracelular y lo lleva a los pulmones para ser desechado al medio ambiente.


Existen varios métodos para su determinación como hematina ácida, hematina alcalina, oxihemoglobina, carboxihemoglobina y cianometahemoglobina; éste último es el de elección por que es estable en soluciones diluidas, porque existen en el mercado estándares de cianometahemoglobina y porque las lecturas se pueden hacer en espectrofotómetro de uso común y corriente. La sangre se hemoliza por agregado de un agente densoactivo, con el ferrocianuro de potasio se oxidan el átomo de fierro de ferroso a férrico para producir metahemoglobina. El cianuro de potasio estabiliza la metahemoglobina pasando de cianometahemoglobina. La cloración producida es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina presente. MATERIAL Boquilla Pipeta de Sahlí Gradilla Tubo de ensayo Gasas

Celdas para espectrofotómetro Espectrofotómetro Reactivo de Drabkin (solución de cianomatahemoglobina) PROCEDIMIENTO

-ferrocianuro de potasio -cianuro de potasio -bicarbonato de potasio Sangre venosa con EDTA.

1. Coloque La Boquilla De Una Pipeta De Shali En La Boca Y Aspire La Sangre Contenida En El Tubo En El Tubo De Ensayo, Hasta La Marca De 20 Cm.


2. La Sangre Contenida En La Pipeta Debe Depositarla En Un Tubo De Ensaye Que Contenga 5 Ml. De Ferrocianuro De Potasio Y Solución De Cianuro De Potasio (Reactivo De Drabkin), Procure Que Esta Mezcla Quede Homogénea.

3. Deje Reposar Por Espacio De 10 Minutos, Obteniéndose Así La Cianometahemoglobina.

4. La Densidad Óptica De Este Pigmento Es Medida Posteriormente En El Espectronic 20 A 540 Nm Y Multiplique El Valor Obtenido Por El Factor ( 37.7) Que Se Obtiene De La Curva Estándar Correspondiente Al Reactivo. Parámetros Normales En Adultos Para La Ciudad De México. En El Hombre Es De 15 A 20 G/100 Ml. En La Mujer 12.5 A 17.5 G/100 Ml.


VALORES NORMALES Mujeres: 12 -14 gr/dl Mujeres embarazadas: 11-14 gr/dl Hombres: 13-19gr/dl Recién nacidos: 13.19gr/dl CAUSAS DE ERROR Empleo de anticoagulantes no recomendados Coagulación parcial de la sangre No eliminación del exceso de sangre adherida a las paredes externas del capilar antes de introducirlo en el reactivo Dilución incompleta de la sangre en el reactivo Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o vencido Lectura antes del tiempo necesario para la completa transformación de la Hb en cianometahemoglobina Empleo de instrumentos no calibrados Soluciones turbias de cianometahemoglobina Conservación del reactivo en botellas de polietileno: se pierden grupos CN con formación exclusiva de metahemoglobina, en vez de cianometahemoglobina, con lo que los valores de concentración de Hb obtenidos son inferiores a los reales 

Conteo de Glóbulos Rojos

OBJETIVO Aprender a realizar un recuento de Eritrocitos por milímetro cúbico de sangre, interpretar el resultado, así como adiestrarse en el manejo de la cámara de Neubauer y la pipeta de Thoma FUNDAMENTO Para el conteo de eritrocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales. Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases: Dilución de la sangre  Muestreo de la sangre diluida en un volumen  Recuento de células en ese volumen  Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables. Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que utiliza la cámara de Neubauer


Para el conteo de eritrocitos, es necesario diluir la sangre con el líquido de Hayem, en una proporción exacta. Luego se examina en el microscopio con una cantidad pequeña colocada en la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación se obtiene el número total. Para la realización del conteo manual se necesita un líquido de dilución, una cámara de recuento, una pipeta diluidora y un microscopio. MATERIAL Pipeta de Thoma para Tubo de plástico Gasas glóbulos rojos (perla Tubos de ensayo Alcohol al 70% roja) Papel parafin Sangre venosa Equipo para venopuncion Cámara de Neubauer Liquido de Hayem (Tubo lila) Cubrehematimetro Boquilla roja Microscopio PROCEDIMIENTO 1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA 2. Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3. Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (Hayem) y llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101


5. Se tapa la punta con papel parafin y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

6. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar 2 minutos que los eritrocitos se sedimenten

7. Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. luego con el objetivo de 40x contar sobre el cuadro grande central de la cámara solo en 5 cuadrados pequeños: uno central y cuatro angulares (80 cuadritos del total)

8. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho. OBSERVACIONES


Cámara de Neubauer, 10x El rayado de la cámara de Neubauer cubierta de miles de eritrocitos, que destacan por su forma redonda y gran cantidad.

Cámara de Neubauer, 40x Enfocando el cuadro central de los cuadros pequeños, se aprecian claramente los 16 cuadritos pequeños donde se tienen que contar los eritrocitos que hay en ellos. RESULTADOS Los recuentos de eritrocitos se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm 3 Después de contar los hematíes de los 5 cuadrados pequeños, se suman y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo: N° de hematíes x mm3 = altura x dilución x área N° de hematíes x mm3 = 1/10 x 1/200 x 1/5 = 1/10 000 N° de hematíes x mm3 = hematíes contados x 10 000 En el análisis hecho, el número de eritrocitos fue de 491, que al multiplicarse por 10 000 daba como resultado 4 910 000/mm3, lo que indica un índice normal pues el paciente era una mujer de 11 años de edad.


VALORES DE REFERENCIA (Millones de células/mm3) Hombres:………………………………..4 500 000-5 500 000 Mujeres:…………………………...…….4 000 000-5 000 000 Niños (4 años):……….........................4 200 000 -5 200 000 Lactantes (1-6 meses):....…………….3 800 000-5 200 000 Recién nacidos:………………………..5 000 000-6 000 000 

Frotis sanguíneo

OBJETIVO Que el alumno aprenda a hacer una buena extensión de sangre o frotis sanguíneo, con la cantidad ideal de sangre, el grueso indicado, la forma adecuada, etc. FUNDAMENTO Una extensión o frotis sanguíneo consiste en recubrir parcialmente un portaobjetos con una gota de sangre, de tal manera que las células de ésta se dispongan formando una sola capa de ellas. Esto puede hacerse manual o automáticamente. Lo último se realiza mediante un aparato (spinner) que centrifuga rápidamente el portaobjetos con la sangre depositada en su centro. Con este aparato se obtienen unos frotis que presentan una distribución celular muy homogénea. PARTES DE UNA EXTENSIÓN. CABEZA. 

Es la zona inicial de la extensión.



Es la región más gruesa.



En ella se encuentra una mayor proporción de linfocitos, y los hematíes forman aglomerados (pilas de monedas). CUERPO.



Es la zona media del frotis.



Su espesor es el apropiado.



En ella existe una adecuada proporción entre los distintos tipos de leucocitos.



Contiene la "zona ideal" de observación, que corresponde a la porción que limita con la cola. COLA.



Es la zona final de la extensión.



Suele tener un aspecto redondeado.



Es la región más fina.

30 MANUAL DE BANCO DE SANGRE 



En ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y además. los hematíes están deformados y presentan una tonalidad uniforme. En su porción terminal suelen ser más abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes. BORDES.



Contienen una mayor proporción de leucocitos grandes. Si están deshilachados, en ellos las células son difíciles de reconocer por estar deformadas o destruidas CARACTERÍSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIÓN.



La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del portaobjetos.



La cola debe estar cercana al otro extremo del portaobjetos, pero sin llegar a él.



 

 

El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el nombre de "barbas". Toda la extensión ha de ser fina y homogénea. Los bordes laterales de la extensión deben estar separados de los bordes del porta por 1 mm aproximadamente. Una extensión normal ha de tener una longitud de las ¾ partes del portaobjetos. El uso de teñidores automáticos exige la realización de extensiones más cortas que las consideradas normalmente como correctas (con una longitud de la mitad del portaobjetos). MATERIAL 2 portaobjetos bien limpios y desengrasados. Pipeta Pasteur Algodón Alcohol al 70% Muestra de sangre venosa con EDTA


DESARROLLO DE LA TÉCNICA

CAUSAS DE ERROR


Conteo de Glóbulos Blancos

OBJETIVO Aprender a realizar y aplicar la metodología para un recuento de Leucocitos por milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado. FUNDAMENTO Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales. Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases: Dilución de la sangre Muestreo de la sangre diluida en un volumen Recuento de células en ese volumen Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los campos 1, 3,7 y 9. Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el líquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento. El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos. En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrás Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca) Equipo para venopuncion (Tubo lila) Boquilla blanca

MATERIAL Tubo de goma Tubos de ensayo Papel parafilm Cámara de Neubauer Cubrehematimetro Microscopio

Gasas Alcohol al 70% Sangre venosa Liquido de Turk


PROCEDIMIENTO Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.


Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten

Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar en los 4 cuadrados angulares. el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho. OBSERVACIONES

Cámara de Neubauer, 40x Enfocando uno de los cuadros laterales, se aprecian claramente los 16 cuadros pequeños donde se tienen que contar los leucocitos que hay en ellos. Se debe de tener cuidado de no confundir los restos de eritrocitos hemolizados con los leucocitos, que deben de aparecer como puntos purpuras o negros, como los que están a las 9


RESULTADOS Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm 3 Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo: N° de leucocitos x mm 3 = altura x dilución x área N° de leucocitos x mm 3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000 N° de leucocitos x mm 3 = 4/200 = 1/50 N° de leucocitos x mm 3 = N° de leucocitos contados x 50 En el análisis hecho, los resultados de la cuenta de células quedaron así por casilla:

El número de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 5 550/mm3, lo que indica un índice normal, sin embargo apenas y supera el mínimo, pues el paciente era un hombre, de 41 años de edad. VALORES DE REFERENCIA (Millones de células/mm3) Hombres y Mujeres:………………………………..5 000-10 000 

Conteo de Plaquetas

OBJETIVO Realizar e interpretar la técnica para la cuenta de trombocitos o plaquetas en la cámara de Neubauer. FUNDAMENTO Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2- 4 μ, de bordes irregulares, pero pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de una célula gigante que mide de entre 50- 100 μ de diámetro llamada megacariocito.


Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detención) adhiriéndose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguíneos lesionados, para formar así el trombo plaquetario o tapón hemostático. El líquido diluyente puede ser una solución estéril de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar). Este líquido se provee listo para usar y su conservación es indefinida en refrigerador (2 - 10° C) o puede ser también oxalato de amonio al 1%. El fundamento del método consiste en la producción de hemólisis por la utilización de un líquido hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo. MATERIAL Pipeta de Thoma para Tubo de goma Gasas glóbulos rojos (perla Tubos de ensayo Caja de Petri roja) Papel parafilm Papel filtro Equipo para Cámara de Neubauer Alcohol al 70% venopuncion (Tubo lila) Cubrehematimetro Sangre venosa Boquilla roja Microscopio Diluyente de plaquetas PROCEDIMIENTO 1. Obtener 10 ml de sangre venosa, en un tubo con anticoagulante EDTA 2. Agitar la sangre de manera suave en el tubo para mezclarla con el anticoagulante 3. Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de la pipeta de Thoma. Limpiar la punta con una gasa

4. Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (Dilución 1:100) 5. Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto

6. Colocar la Cámara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el cubrehematímetro sobre las mesetas


7. Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cámara, depositándola entre la meseta y el cubrehematímetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el líquido hacia los surcos

8. Colocar la cámara de Neubauer ya cargada en el interior de una caja de Petri, con papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporación, dejar en reposo de 10 a 15 minutos

9. Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glóbulos rojos) las plaquetas que aparecen mucho más pequeñas que los hematíes, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes 10. El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y está dividido en 16 cuadritos más pequeños, de tal manera que el número total de estos últimos es de 400, mismos en los que se lleva a cabo el recuento de plaquetas. OBSERVACIONES


Cámara de Neubauer, 10x Enfocando la cuadricula central se aprecian los 25 cuadros centrales, con una gran cantidad de plaquetas en ellos. Se pueden distinguir solo algunos eritrocitos, mucho mayores que las plaquetas, que desprenden gran brillo

Cámara de Neubauer, 40x Uno de los cuadros centrales, lleno de plaquetas, de forma redonda la mayoría u ovalada. RESULTADOS Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm 3 Después de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el número obtenido se multiplica por el factor de dilución de la siguiente manera: N° de plaquetas x mm 3 = No. De plaquetas contadas X dilución X 10 Dilución: 1:100 Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm 3 ya que el volumen de la cámara es de 0.1 mm 3 El número de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los cálculos quedaron así: No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm 3, lo que indica un índice elevado de plaquetas. VALORES DE REFERENCIA (Millones de células/mm3) Hombres y Mujeres:………………………………..150 000 - 450 000


TÉCNICAS SEROLÓGICAS 

Chagas

La enfermedad de Chagas o trypanosomosis americana es una infección sistémica causada por el protozoo Trypanosoma cruzi . Es una zoonosis en la que participan un gran número de reservorios vertebrados y transmisores triatóminos. Su importancia radica en su elevada prevalencia, su incurabilidad, las grandes pérdidas económicas por incapacidad laboral, y la muerte repentina de personas aparentemente sanas. Es considerada una "enfermedad desatendida" (neglected disease). La infección se transmite principalmente por triatóminos, que son hemípteros (chinches), de la Subfamilia Triatominae. Otros modos de transmisión son: transfusional, congénito, transplantes de órganos y oral. Se estima que en la región de las Américas, se presenta en 21 países, afecta a unos 8 millones de personas, y se encuentran en riesgo de adquirir la infección aproximadamente 100 millones de personas, con 56.000 nuevos casos anuales y 12 000 muertes/año. La enfermedad se considera, de manera histórica, un severo problema de salud en áreas rurales de México, América Central y Sudamérica, con manifestaciones clínicas y características epidemiológicas variables. Actualmente, se reportan con mayor frecuencia casos provenientes de ciudades de Latinoamérica, así como de EUA, Europa y Japón, debido a la migración de personas. Cabe señalar que EUA no puede ser clasificado como un área de no endemicidad, ya que los estados sureños presentan transmisión enzootica de T. cruzi , aunque la OPS no lo incluye en el mapa de transmisión. MATERIAL Muestra de suero del paciente Cassette para Chagas Pipeta automática con puntilla PROCEDIMIENTO 1. Tomar 25 um de suero del paciente 2. Depositarla en el cassete 3. Depositar el reactivo de Chagas 4. Esperar de cinco a diez minutos 5. Observar el resultado.


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Panel de Hepatitis

La palabra "hepatitis" significa, simplemente, inflamación del hígado, sin apuntar a ninguna causa específica. Una persona con hepatitis puede: Padecer uno o varios trastornos, incluyendo una infección vírica o bacteriana del  hígado. Presentar lesiones hepáticas provocadas por una toxina (una especie de veneno).  Presentar lesiones hepáticas provocadas por la interrupción de la irrigación sanguínea  normal del hígado. Padecer un trastorno autoinmunitario que afecta al hígado.  Haber sufrido un traumatismo abdominal en la zona del hígado.  La hepatitis haya sido provocada por uno de los siguientes tres virus: el virus de la hepatitis A  el virus de la hepatitis B  el virus de la hepatitis C  En casos muy poco frecuentes, el virus Epstein Barr (que provoca la mononucleosis) también puede desencadenar una hepatitis porque puede provocar inflamación hepática. Hay otros virus y bacterias que también pueden provocar hepatitis, incluyendo los virus de las hepatitis D y E, el virus de la varicela y elcitomegalovirus (CMV). La hepatitis A En los niños, la forma de hepatitis más frecuente es la hepatitis A (también denominada hepatitis infecciosa). Este tipo de hepatitis está causado por el virus de la hepatitis A (VHA), que se encuentra en las heces de las personas infectadas. Las heces infectadas pueden estar presentes en pequeñas cantidades en alimentos y objetos (desde el picaporte de una puerta hasta los pañales de un bebé). El virus de la hepatitis A se contagia: Cuando alguien ingiere algo contaminado con heces infectadas por el VHA (esto facilita  su transmisión en condiciones de hacinamiento e insalubridad). A través del agua, la leche y los alimentos contaminados, sobre todo el marisco.  Puesto que la hepatitis A puede ser una infección leve, particularmente en la infancia, es posible que algunas personas no se den cuenta de que han contraído la enfermedad y ésta pase desapercibida y quede sin diagnosticar. De hecho, aunque las pruebas médicas indican que alrededor de un 40% de los norteamericanos que viven en medios urbanos han padecido la hepatitis A, sólo alrededor de un 5% recuerdan haber estado enfermos. A pesar de que el virus de la hepatitis puede provocar una enfermedad de larga duración


(de hasta seis meses), generalmente sólo provoca enfermedades de corta duración y noes causa de enfermedad hepática crónica. La hepatitis B La hepatitis B (también denominada hepatitis sérica) está causada por el virus de la hepatitis B (VHB). El VHB puede provocar un amplio abanico de síntomas, desde malestar general hasta enfermedad hepática crónica que, a la larga, puede desembocar en un cáncer de hígado. El virus de la hepatitis B se contagia: A través de fluidos corporales infectados, como la sangre, la saliva, el semen, las  secreciones vaginales, las lágrimas, y la orina. Mediante transfusiones de sangre contaminada (lo que es muy poco frecuente en  EE.UU.). Al compartir agujas o jeringuillas infectadas para inyectarsedroga.  Al mantener relaciones sexuales con una persona infectada por el VHB.  Mediante el contagio de un recién nacido por su madre infectada.  La hepatitis C La hepatitis C se transmite a través del contacto directo con la sangre de una persona infectada. Los síntomas provocados por el virus de la hepatitis C pueden ser muy parecidos a los provocados por los virus de las hepatitis A y B. No obstante, la infección por el virus de la hepatitis C virus puede conducir, a la larga, a una enfermedad hepática crónica y es el principal motivo de transplante de hígado en EE.UU. El virus de la hepatitis C se contagia: Al compartir agujas y jeringuillas para inyectarse droga.  Al hacerse tatuajes o piercings con instrumental no esterilizado.  Mediante transfusiones de sangre (especialmente antes de 1992; desde entonces, en  EE.UU. se hacen controles sistemáticos de la sangre donada para detectar esta enfermedad). Mediante el contagio de un recién nacido por su madre infectada.  A través de las relaciones sexuales (aunque se trata de una vía de contagio menos  habitual). La hepatitis C es también un riesgo habitual en los centros de diálisis. Raramente las personas que conviven con un enfermo de hepatitis C se pueden contagiar al compartir artículos que pueden contener la sangre del enfermo, como maquinillas de afeitar o cepillos de dientes.

42 MANUAL DE BANCO DE SANGRE MATERIAL Suero del paciente Tira reactiva para hepatitis TÉCNICA 1. Introducir la tira para detección de la hepatitis dentro del tubo con suero hasta la línea marcada y dejarla hasta que absorba hasta la línea. 2. Esperar de 5 a 10 minutos. 3. Observar los resultados.

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Virus de la Inmunodeficiencia Humana

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) infecta a las células del sistema inmunitario, alterando o anulando su función. La infección produce un deterioro progresivo del sistema inmunitario, con la consiguiente "inmunodeficiencia". Se considera que el sistema inmunitario es deficiente cuando deja de poder cumplir su función de lucha contra las infecciones y enfermedades. El síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) es un término que se aplica a los estadios más avanzados de la infección por VIH y se define por la presencia de alguna de las más de 20 infecciones oportunistas o de cánceres relacionados con el VIH. El VIH puede transmitirse por las relaciones sexuales vaginales, anales u orales con una persona infectada, la transfusión de sangre contaminada o el uso compartido de agujas, jeringuillas u otros instrumentos punzantes. Asimismo, puede transmitirse de la madre al hijo durante el embarazo, el parto y la lactancia.


MATERIAL Suero del paciente Cassette para el diagnóstico del virus del VIH Pipeta automática con puntillas PROCEDIMIENTO 6. Tomar 25 um de suero del paciente 7. Depositarla en el cassete 8. Depositar el reactivo para VIH 9. Esperar de cinco a diez minutos 10. Observar el resultado.

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VDRL

La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual (venérea),causada por la bacteria Treponema pallidum. Esta enfermedad consta de tres etapas que pueden prolongarse durante muchos años de vida. La prueba de VDRL es una prueba de detección para sífilis. Este examen mide sustancias, llamadas anticuerpos, que se pueden producir en repuesta al Treponema pallidum. La reacción de floculación es una prueba de agrupamiento microscópico del antígeno y el anticuerpo. Los resultados positivos de una prueba de este tipo dependen del grado de material floculante formado en la substancia de prueba. La prueba de VDRL comenzó a desarrollarse antes de la Primera Guerra Mundial, con la participación de August von Wassermann y AlbertLudwig Sigesmund Neisser, esta prueba durante el transcurso de investigaciones fue modificada, ya que la prueba de VDRL emplea marcadores indirectos de la


enfermedad, por estarazón a esta prueba se le conoce como una prueba no-treponemica para la identificación del sífilis. MATERIAL Suero del paciente Antígeno VDRL Control positive y negative Aplicadores Placa Agitador de placas Pipeta

PROCEDIMIENTO 1. Tomar con la pipeta un poco de suero del paciente.

2. Colocar una gota de suero en la placa

3. Colocar una gota de control positivo y otra del control negativo


4. Colocar el reactivo para VDRL sobre las tres gotas previamente colocadas.

5. Extender con un aplicador los lastres gotas

6. Poner la placa sobre el agitador de placas durante 4 minutos

7. Observar los resultados.


Rosa de Bengala

La brucelosis o Fiebre de Malta es una enfermedad infecciosa causada por la bacteriaBrucella, que normalmente se transmite entre animales y afecta al ganado vacuno (B. abortus), cabras y ovejas (B. melitensis), perros ( B. canis) y cerdos ( B. suis) siendo, por tanto, una enfermedad más común en zonas rurales. Esta enfermedad se trasmite al ser humano mediante el consumo de productos lácteos no pasteurizados, contacto directo con órganos de animales infectados y mediante la inhalación de aerosoles infectados. La enfermedad puede dar formas crónicas y persistir durante años. La brucelosis es todavía común en la región mediterránea, Oriente Medio, Asia central y algunas partes de Latinoamérica, aunque en los últimos diez años la infección ha resurgido con gran prevalencia en países de Europa del Este, los Balcanes y Eurasia. La infección por Brucella melitensis se sigue reconociendo como un importante reto de salud pública que supone una gran carga económica y financiera en aquellos países en los que esta enfermedad es endémica. Brucella melitensis es muy contagiosa en humanos y la enfermedad puede cronificarse y

afectar a varios sistemas del organismo, a no ser que se diagnostique y trate de forma rápida y eficaz. Sin embargo, la OMS considera esta enfermedad como una de las siete enfermedades zoonóticas que ha sido históricamente ‘desatendida’. Las características fundamentales así como la epidemiología de la brucelosis humana son conocidas, aunque muchas veces esta enfermedad no se detecta. MATERIALES Antígeno de Rosa de Bengala Suero del paciente Portaobjetos limpio agitador de placas Aplicadores Pipeta automática Placa PROCEDIMIENTO 1. Tomar un poco de suero del paciente con la pipeta


2. Colocar una gota del suero en la placa

3. Colocar una gota del antígeno de Rosa de Bengala

4. Mezclar con un agitador

5. Realizar movimientos rotatorios

6. Observar resultados


PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD 

Determinación de los grupos sanguíneos

Un grupo sanguíneo es una clasificación de la sangre de acuerdo con las características presentes o no en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son losantígenos (el sistema ABO) y el factor Rh. El sistema ABO fue descubierto por Karl Landsteiner en 1901, convirtiéndolo en el primer grupo sanguíneo conocido; su nombre proviene de los tres tipos de grupos que se identifican: los de antígeno A, de antígeno B, y "O". Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar enhemólisis, anemia, fallo renal, shock y muerte. El motivo exacto por el que las personas nacen con anticuerpos contra un antígeno al que nunca han sido expuestas es desconocido. Se piensa que algunos antígenos bacterianos son lo bastante similares a estos antígenos A y B que los anticuerpos creados contra la bacteria reaccionan con los glóbulos rojos ABOincompatibles. El científico austríaco Karl Landsteiner recibió el Premio Nobel de Fisiología o Medicina en1930 por sus trabajos en la caracterización de los tipos sanguíneos ABO. Además de los grupos mayoritarios, hay otros treinta y dos muchísimo más escasos. MATERIAL Centrífuga 6 tubos de ensayo 3 pipetas pasteur 5 aplicadores

Solución de albúmina al Eritrocitos humanos tipo 22% A, B y O en suspensión al Sueros tipificadores 5% con solución salina. (antiA, antiB y antiAB) Muestra de suero PROCEDIMIENTO 1. Rotular 3 tubos como antiA, antiB, antiAB y los otros 3 como A, B y O y otro como autotestigo. 2. Realizar una suspensión de eritrocitos al 5% con solución salina con la sangre que se coagulo. 3. Agregar una gota de suero tipificador antiA, B y AB según corresponda, en el tubo de autotestigo colocar una gota de albúmina bovina. 4. Centrifugar a 1000rpm por 1min 5. Desprender el botón de células que queda en el fondo del tubo agitándolo suavemente y observar la aglutinación. 6. Anotar resultados 7. Colocar una gota del suero del paciente en los tubos marcados como A, B y O y colocar 2 gotas de la suspensión de eritrocitos A, B y O según corresponda. 8. Mezclar suavemente 9. Centrifugar a 1000rpm por 1min 10. Desprender el botón del fondo agitándolo suavemente y observar aglutinación 11. Anotar resultados


RESULTADOS GRUPO

A B AB O 

Reacción de los eritrocitos con los antisueros tipificadores ANTI-A ANTI-B ANTI-AB + + + + + + + -

Reacción del suero con antígenos conocidos A B O + + + + -

Prueba mayor y menor (Compatibilidad sanguínea)

Estas pruebas determinan si existe compatibilidad sanguínea entre el donante y el receptor a través de enfrentar sus sueros y eritrocitos en una prueba in vitro . De esta manera se descartan anticuerpos irregulares y de otros grupos 29sanguíneos diferentes al ABO y Rh que pudieran reaccionar al momento de la transfusión. MATERIAL Centrífuga Solución de albúmina Tubo con sangre y EDTA Baño María bovina al 22% (tanto del receptor como Tubos de ensayo Solución salina isotónica el donador) Pipetas pasteur Suero (tanto del receptor Suero de Coombs como el donador) PROCEDIMIENTO FASE SALINA: 1. Con la sangre con EDTA, realizar el lavado de eritrocitos con solución salina (lavar 3 veces). 2. Colocar en un tubo de ensaye 2 gotas de suero del donador y dos gotas de eritrocitos del receptor 3. Colocar en el otro tubo de ensaye 2 gotas del suero del receptos y dos gotas de eritrocitos del donador 4. Colocar en ambos tubos 2 gotas de solución salina isotónica 5. Centrifugar por 1000rpm por 1min 6. Observar el botón del fondo, agitar suavemente hasta que se disuelva. FASE DE ALBÚMINA: 1. En dos tubos limpios, realizar los pasos 1 y 2 de la técnica anterior. 2. Colocar 1 gota de albumina bovina y agitar suavemente. 3. Centrifugar a 1000rpm por 1min 4. Observar el botón del fondo y agitar suavemente hasta que se disuelva. FASE DE COOMBS (CONFIRMATORIA) 1. Realizar los pasos 1 y 2 nuevamente 2. Colocar 1 gota de reactivo de Coombs y agitar suavemente. 3. Centrifugar a 1000rpm por min 4. Observar el botón del fonso y agitar suavemente hasta que se disuelva.


RESULTADOS Si en ninguna de las fases se observa aglutinación el resultado es que ambas sangre son compatibles, si en alguna se observa algún tipo de aglutinación o no se disuelve el botón de sangre, las sangre no son compatibles mutuamente. 

Prueba de Coombs

Permite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo, que es una antiglobulina. Prueba de COOMBS DIRECTA: se emplea la antiglobulina para la detección de anticuerpos incompletos antieritrocitarios, que ya se encuentran unidos " in vivo" a los hematíes. Prueba de COOMBS INDIRECTA: se emplea la antiglobulina para la detección de anticuerpos incompletos antieritrocitarios no unidos " in vivo" a los hematíes. Por ello se realiza en dos fases, en la primera se enfrentan los anticuerpos frente a hematíes de antigeinicidad conocida para provocar su unión, y posteriormente se añade al antiglobulina hemaglutinante. COOMBS DIRECTA MATERIAL: Centrífuga Baño María Solución salina isotónica Reactivo de Coombs Suspensión de eritrocitos problema y eritrocitos normales previamente lavados al 2% 2 tubos de ensaye

1. 2. 3. 4. 5.

PROCEDIEMIENTO Colocar en 1 tubo de ensaye 2 gotas de suspensión de eritrocitos problema al 2% Añadir 2 gotas del suero de Coombs Preparar de la misma forma un tubo con suspensión de eritrocitos normales (testigo) Centrifugar ambos tubos a 1000rpm por 1min Buscar aglutinación desprendiendo el botón del fondo.

RESULTADOS La aglutinación de los eritrocitos problema con el suero de Coombs indica que dichos eritrocitos están recubiertos con anticuerpos específicos. El tubo testigo no debe presentar aglutinación.


COOMBS INDIRECTA MATERIAL Centrífuga Baño María Suspensión de eritrocitos O Rh positivos al 5% Solución salina isotónica 3 tubos de ensaye Suero anti-D diluido a título de subaglutinante Suero problema Suero de Coombs

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

PROCEDIMENTO Colocar en un tubo 2 gotas del suero problema y añadir 2 gotas de la suspensión de eritrocitos O Rh positivos al 5% Colocar en otro tubo (testigo) dos gotas de suero anti-D y 2 gotas de la suspensión de eritrocitos O Rh positivo Centrifugar a 1000rpm por 1min Desprender botón del fondo en busca de aglutinación, en caso de no existir o ser débil se resusupenden y se incuban por 20 minutos a 37°C. Lavar eritrocitos una vez. Añadir 2 gotas de suero de Coombs Mezclar bien y centrifugar a 1000rpm por 1min Desprender botón y buscar aglutinación. RESULTADOS La aglutinación de los eritrocitos con el suero problema indica la presencia de anticuerpos aglutinantes. La aglutinación de los eritrocitos con suero problema y suero de Coombs señala la presencia de Anticuerpos no aglutinantes en el suero problema


REACCIONES POSTRANSFUSIONALES Se denomina reacción postransfusional a los efectos desfavorables que pueden aparecer en un paciente durante o después de la transfusión de algún hemoderivado a consecuencia del mismo. A pesar de los avances desarrollados en la obtención y conservación de la sangre, la transfusión conlleva riesgos que no hay que olvidar a la hora de su indicación que derivan de la naturaleza del producto ( diversidad antigénica , potencial infectivo…), alteraciones

del producto en su almacenamiento y cambios de volumen y de electrolitos en el sujeto. Desde la aparición del SIDA la actitud de la población frente a la transfusión ha cambiado, demandando una transfusión sin riesgos. Dicha demanda no es actualmente alcanzable. Se distinguen reacciones transfusionales inmediatas y tardías según el momento de aparición.

REACCIONES POSTRANSFUSIONALES INMEDIATAS. 1.- Reacciones hemolíticas agudas por incompatibilidad eritrocitaria . Se producen por la lisis intravascular de los hematies transfundidos. Suelen deberse a incompatibilidad ABO (muy frecuentemente en relación con error en la identificación del paciente o de la muestra de sangre ), más raramente pueden causar reacciones hemolíticas los sistemas Kidd y Duffy. Los síntomas observados son fiebre, escalofríos, urticaria, opresión torácica, dolor lumbar, taquicardia , náuseas y vómitos. Si la reacción es severa se produce un colapso circulatorio debido a la activación del complemento por la lisis intravascular y liberación de sustancias vasoactivas . En ocasiones se desarrolla coagulación intravascular diseminada ( CID ) a consecuencia de la liberación de sustancias intraeritrocitarias ( tromboplastina tisular ) que activan la coagulación. Como consecuencia de la hipotensión ( colapso ) y CID se puede producir oliguria y anuria ( insuficiencia renal aguda ). El diagnóstico se realiza tras repetir la prueba cruzada que demuestra la incompatibilidad y observar la evidencia de hemólisis (hemoglobinuria, hemoglobinemia, LDH, bilirrubina total y no conjugada). La prueba de Coombs directa es positiva. El tratamiento se basa en promover la diuresis ( procurar flujo urinario mayor de 100 ml/hora ) y mantener la tensión arterial( tensión arterial sistólica mayor de 100 mm de Hg ) mediante adecuada hidratación/transfusión y diuréticos ( furosemida / manitol ) . En caso de CID, el tratamiento sustitutivo mediante plasma fresco congelado según sea preciso. Si fuera necesario por fracaso renal se realizará hemodiálisis.


2.- Reacciones febriles no hemolíticas. Suelen estar causadas por anticuerpos antileucocitarios ( leucoaglutininas ). Se producen en pacientes previamente sensibilizados a antígenos del sistema HLA con historia de transfusiones previas o embarazos. Clínicamente se manifiestan por fiebre y escalofríos. Son las más frecuentes. El tratamiento dada la escasa repercusión del cuadro es con antipiréticos tipo paracetamol u otro. En caso de no ceder se pueden emplear derivados opiáceos tipo meperidina. Se pueden prevenir este tipo de reacciones en pacientes con antecedentes mediante medicación pretransfusional ( esteroides + antihistamínicos + antitérmicos ) y utilizando sangre pobre en leucocitos. 3.- Reacciones alérgicas. En general, no suelen ser graves. Se atribuyen a anticuerpos en el receptor contra las proteínas del plasma del donante. Se producen en 1-2% de las transfusiones y se manifiestan con signos y síntomas de urticaria. Responden al tratamiento con antihistamínicos como polaramine, no siendo preciso suspender la transfusión. Las reacciones anafilácticas son muy raras. La causa suele ser la existencia de anticuerpos antiinmunoglobulina A en individuos con déficit hereditario de dicha inmunoglobulina. Son reacciones muy graves que precisan tratamiento urgente mediante hidratación, adrenalina, esteroides y otras medidas de soporte vital. 4.- Reacciones por sobrecarga circulatoria. Se producen más fácilmente en pacientes con alteraciones cardiológicas que además se ven agravadas por la situación de anemia. La infusión demasiado rápida o de demasiado volumen son factores contribuyentes a esta complicación, sobre todo en caso de sangre con largo periodo de almacenamiento. Por este motivo, en este tipo de enfermos se debe transfundir muy lentamente, aunque sin sobrepasar las 4 horas límite con cada unidad y valorar el volumen a infundir. Se recomienda también transfundir la sangre más fresca posible y la administración de un diurético previo. 5.-Edema pulmonar no cardiogénico 6.-Hemólisis no inmunológicas. 7.- Sepsis bacteriana


8.-Complicaciones por transfusión masiva

EFECTOS ADVERSOS RETARDADOS. Son aquellos efectos atribuibles a la transfusión que aparecen en un periodo no inmediato ( al cabo de días, semanas o meses ). 1.-Reacciones hemolíticas demoradas o tardías. Se deben a la producción de anticuerpos de forma rápida frente a antígenos transfundidos, haya o no existido inmunización previa por embarazo o transfusión. Se detecta anemización del paciente unos días después de la transfusión. Pueden producirse escalofríos o fiebre, así como aumento de la bilirrubina y positivización de la prueba de Coombs. Ocasionalmente pueden ser graves con marcada hemoglobinemia y hemoglobinuria. La mayor destrucción eritrocitaria se produce entre el día 4 y el 13 postransfusión. El tratamiento pasa por la identificación del anticuerpo y la transfusión si es preciso de hematies que carezcan del antígeno, y conseguir una buena hidratación y diuresis. 2.-Transmisión de enfermedades infecciosas. A pesar de los avances en los tests microbiológicos a que se someten todas las donaciones de sangre , y el test de autoexclusión previo a la donación, el riesgo de transmisión de enfermedades no está completamente erradicado. Tan sólo los productos que pueden ser tratados con las últimas técnicas tienen un riesgo prácticamente nulo como es el caso de las inmunoglobulinas, albúmina y los factores de concentrados de la coagulación. Los principales agentes infecciosos que pueden ser trasmitidos a través de la transfusión son los siguientes : *Hepatitis C. *Hepatitis B * Virus de la inmunodeficiencia humana - VIH -. *Sífilis. * Otras infecciones (Malaria, otras hepatitis , Citomegalovirus, Toxoplasmoxis )


HEMODERIVADOS La sangre es un tejido muy particular, que posee numerosas propiedades. La sangre circulante está compuesta por elementos celulares (hematies, leucocitos, plaquetas) suspendidos en una solución acuosa de sales y proteinas (plasma).Constituye el medio de transporte del oxígeno y otras sustancias necesarias para el metabolismo celular. Algunos componentes ofrecen protección contra la invasión de organismos extraños. Otros preservan la integridad de los vasos sanguíneos sanos, limitan la pérdida de los vasos lesionados y mantienen la fluidez de la sangre. La mayoría de pacientes ingresados en unidades de cuidados intensivos requerirán uno o más componentes sanguíneos durante su estancia. Actualmente es posible reponer cualquier componente sanguíneo mediante transfusiones. Sin embargo cuando se introduce cualquier material extraño en el organismo pueden producirse graves reacciones entre el tejido del donante y las defensas del receptor. Es importante, por tanto, comprender la constitución genética única del individuo, la capacidad del organismo para reconocer antígenos extraños y producir anticuerpos contra ellos, y la naturaleza de los antígenos que se encuentran en las células sanguíneas. Se efectúan pruebas de laboratorios para asegurar que la sangre y los hemoderivados son estrictamente compatibles con el receptor y que los riesgos de la transfusión se reducen a un mínimo. LOS HEMODERIVADOS SE COMPONEN DE:

SANGRE TOTAL: La sangre total es aquella que se colecta de un solo donador, en una bolsa de 500 ml. Diluida de 1: 8 con anticoagulante y conservadores (citrato de sodio, fosfato, dextrosa y adenina). Es de uso limitado a los procedimientos de exanguinotransfusión, sobre todo en neonatos y algunos casos de sangrado agudo profuso. En un adulto de 70 kg de peso, la transfusión de 1 unidad de sangre total produce un incremento de casi 1 a 1.5 g/dl de hemoglobina y de 3 a 5% de hematocrito, y se hace evidente en 48 a 72 hrs. El punto terapéutico medular de la transfusión sanguínea es


incrementar la demanda de oxígeno de acuerdo con las necesidades del paciente. los beneficios asumidos de un incremento en la masa eritrocitaria no siempre se traducen en los verdaderos beneficios en términos de transporte de oxígeno en pacientes cr íticos.

PAQUETE GLOBULAR: El paquete globular tiene un volumen aproximado de 250 a 300 ml y contiene todos los eritrocitos de 1 unidad de sangre, pero sólo una pequeña fracción de plasma (hematocrito 80%), así como plaquetas y leucocitos en pequeñas cantidades no funcionales. debe mantenerse en refrigeración a 4 ºc. No debe mantenerse fuera de refrigeración por más de 6 hrs. Casi nunca requiere calentamiento para ser trasfundido y esto no debe ser hacerse si no es en un incubador específico a 37 ºc. La transfusión está indicada para incrementar la masa eritrocítica en un paciente en quien se requiera aumentar la capacidad de transporte de oxígeno por síndrome anémico.

PLASMA: Una unidad de plasma tiene un volumen aproximado de 200 a 250 ml. Si es separado y congelado a -30 ºc dentro de las 6 horas siguientes a la obtención, conserva la actividad de todos los factores de la coagulación y si se mantiene a esta temperatura posee una vigencia hasta de un año.


PLASMA FRESCO CONGELADO: El plasma se separa inmediatamente después de la recolección de sangre por centrifugación en frío y se congela enseguida, esto permite conserva la actividad prácticamente íntegra de todos los factores de coagulación.

PLASMA DE BANCO O REFRIGERADO: Si no se congela y se conserva en refrigeración, los factores lábiles de la coagulación (v y viii) pierden su actividad procoagulante y, por tanto, no es útil para el tratamiento de enfermos con deficiencias de estos factores.

BOLSAS PARA FRACCIONAR SANGRE: Artículo de uso médico, estéril, elaborado con materiales plásticos, metálicos y látex, atóxico, libre de pirógenos y no reactivo tisular. Consiste en una serie de bolsas unidas


entre sí, mediante tubos de dimensiones apropiadas, una de las cuales puede contener una solución aditiva. la bolsa principal debe contener un anticoagulante y estar unida a un tubo transportador primario equipado con aguja.

CRIOPRECIPITADO: Se obtienen por congelación del plasma fresco congelado, con menos de 6 horas de extraído y descongelación lenta entre 1 y 6 °c, o bien usando un horno de microondas especial. El crioprecipitado contiene 80 a 100 u de factor viii, aproximadamente 250 mg de fibrinógeno, 30% de actividad PLASMÁTICA DEL FACTOR XIII, 40 A 70 % DE FACTOR DE VON WILLEBRAND Y FIBRONECTINA. Debe conservarse en congelación entre – 20 y – 30 °c hasta 12 meses. y deben de descongelarse a 37 °c antes de su aplicación y transfundirse en cuento sea posible, dentro de las 4 a 6 horas. es el indicado para el tratamiento de pacientes con hemofilia a. LEUCOCITOS:

Los únicos leucocitos que se usan para transfusión son los granulocitos y la utilidad principal está dada en pacientes con neutropenia intensa y un proceso infeccioso donde, a pesar del uso de antimicrobianos, la morbi – mortalidad por neutropenia es elevada. La indicación es en neutropenia menor de 0.5 x 109 /l (500 neutrófilos por microlitos). Los granulocitos tienen un recambio rápido debido a lo corto de su permanencia intravascular (aproximadamente 6 horas).


La utilidad únicamente ha sido más evidente en recién nacidos. los granulocitos de 1 unidad de sangre son insuficientes y poco útiles; debe usarse procedimiento de aféresis utilizando un separador celular de flujo continuo o intermitente, que en el lapso de 2 o 3 horas permita obtener suficientes granulocitos Deben utilizarse lo más pronto posible después de su extracción, pero puede ser visible si se conservan sin agitar a 22 °c, hasta de 8 a 24 horas. los mejores parámetros para la valoración son la negativización de los cultivos, datos clínicos, más que el incrementos de las cifras. PLAQUETAS: El empleo de plaquetas es una práctica que se ha incrementado en el curso de los últimos años sobre todo en los pacientes oncohematológicos. Esto es debido a la mayor disposición de concentrados plaquetarios de varios o un solo donador, por medio de aféresis . Cada unidad de plaquetas obtenida de sangre fresca por centrifugación contiene aproximadamente 5.5 x 10 10 plaquetas en un volumen de 50 ml de plasma. Debe almacenarse a 22 ° c (+/- 2) en agitación continua y suave, y conservar su viabilidad hasta por 72 horas en sistemas plásticos con anticoagulante.


TÉCNICAS DE SEPARACIÓN Precipitación espontánea •Reposo 24-48 horas a 4°C 



Interacción diferencial campos físicos:

•Centrifugación •electroforesis 

Interacción diferencial con medios sólidos:

•intercambio iónico •Ultrafiltración •cromatografía

TECNICAS: 1. FRACCIONAMIENTO DE LA SANGRE

FUNDAMENTO La elección cuidadosa del elemento a fraccionar favorece el aprovechamiento óptimo de la sangre, es decir la donación de una persona puede beneficiar a cuatro pacientes al separarse en: Concentrados eritrocitarios, plasma fresco congelado, plasma desprovisto de F-VIII, concentrado plaquetario y concentrado de factor VIII ó crioprecipitado.

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MATERIAL Y EQUIPO Tijeras Centrífuga Refrigerada. Balanza. Prensa. Hematron. Bolsas de colección de sangre. Pinzas Rodillo. Pinzas de Kelly


PROCEDIMIENTO A) Preparación de glóbulos rojos (Bolsa doble) y plasma fresco congelado (P.F.C.). 1) Para este procedimiento se debe de usar una unidad de recolección que tenga una bolsa de transferencia. 2) La separación del plasma de los glóbulos rojos puede ser o hacerse de la siguiente forma: Por centrifugación entre (3000) RPM Durante 15 minutos la temperatura de la centrífuga debe ser de 4°C. TECNICA DE SEPARACION 3) Una vez centrifugadas las bolsas de sangre, Colocar la bolsa de sangre centrifugada en el extractor de plasma. 4) Libere el mecanismo de presión suavemente 5) Cierre con una pinza hemostática el tubo que comunica a una de las bolsas satélite. 6) Romper el sello de la bolsa madre y dejar fluir el plasma en la otra bolsa satélite. Se debe usar una bolsa para medir la cantidad de plasma obtenido. 7) Cerrar con otra pinza hemostática el tubo de comunicación , por el cual esta fluyendo el plasma , cuando haya pasado la cantidad estipulada, sellar el tubo piloto con un sellado relectrónico (hematrón). 8) Identificar la unidad de plasma con el mismo sistema que se usó para la bolsa madre, cortar el piloto después de haber sellado. 9) Pilotear con una separación de 5 ó 10 cm. de separación todo el tubo piloto que quedó en la bolsa del concentrado eritrocitario y colocarlo a un costado de la bolsa para pruebas futuras. 10) Del mismo modo para el paquete de plasma como se indicó anteriormente , pilotear el tubo y adicionarlo al extremo de la bolsa. 11) El concentrado eritrocitario debe ser guardado en un refrigerador especial a una temperatura entre 4 y 6°C para su conservación. 12) El plasma se guarda o se debe mantener a una temperatura de -20°C para su conservación

62 MANUAL DE BANCO DE SANGRE 2) BOLSA TRIPLE

FUNDAMENTO B) Preparación de Concentrados Plaquetarios: En la recolección de sangre para preparar plaquetas, se debe observar la siguiente recomendación: Dejar la sangre a temperatura ambiente que es entre 20-24°C , hasta que inicie el proceso de separación. Es necesario practicar dos centrifugaciones, la primera a baja velocidad produce el plasma rico en plaquetas (PRP) y la segunda a alta velocidad , produce un concentrado de plaquetas más una unidad de plasma pobre en plaquetas (PPP). 

Se señalan tres factores importantes en este procedimiento:

1. El tiempo y la fuerza gravitacional de centrifugación. 2. La técnica de re suspensión de plaquetas después de la centrifugación .3. El pH del plasma.

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MATERIAL Centrífuga Refrigerada. Hematron. Bolsas de colección de sangre. Pinzas Rodillo. Pinzas de Kelly Extractor Etiquetas Agitador para plaquetas PROCEDIMIENTO

1. La centrífuga refrigerante debe tener una temperatura de 20°C. 2. Centrifugar a 1800 RPM, durante 10 minutos. 3. Colocar la bolsa de sangre en el extractor y separar el plasma rico en plaquetas en una bolsa satélite, pinzar el tubo piloto por donde fluye el plasma o sellar una vez terminado el paso de separación de PRP y cortar. 4. Anotar datos del donador como son nombre, grupo sanguíneo y Rh. sin poner la etiqueta que quedará al final. (Esto es para tener un mejor control en la identificación de los productos a obtener.


ÍNDICE INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………….. INTRODUCCIÓN……………………………………………………………………………..3 3 BANCO DE SANGRE Y SU ORGANIZACIÓN……………………………………………4 ORGANIZACIÓN……………………………………………4    

¿Qué es un Banco de Sangre? Historia del banco de sangre Organización del banco de sangre (Organigrama) Croquis del banco de sangre

CARACTERÍSTICAS CARACTERÍSTICAS DEL DONADOR……………………………………………..……..6 DONADOR……………………………………………..……..6  

Tipos de donadores Requisitos que debe cubrir un donador de sangre segura

APLICACIÓN LA NORMA NORMA NOM-003-SSA2-19 NOM-003-SSA2-1993 93……………………………………..9 ……………………………………..9 TIPOS DE ANTICOAGULANTES ANTICOAGULANTES PARA PARA LA CONSERVACION CONSERVACION DE LA SANGRE SANGRE….13 ….13     

Tipos de anticoagulantes Función de los anticoagulantes Mecanismos de acción de los anticoagulantes Ventajas y desventaj desventajas as de los anticoagulante anticoagulantes s EDTA y HEPARINA HEPARINA Requisitos de un anticoagulante

TÉCNICAS PRETRANSFUSIONALE PRETRANSFUSIONALES S……………………………………………………16       

Biometría Hemática Hematocrito Velocidad de Sedimentaci Sedimentación ón Globular Determinación de Hemoglobina Conteo de Glóbulos Rojos Conteo de Glóbulos Blancos Conteo de Plaquetas

TÉCNICAS SEROLÓGICAS……… SEROLÓGICAS…………………………………… …………………………………………………… ………………………….39 ….39     

Chagas Panel de Hepatitis Virus de la Inmunodefic Inmunodeficiencia iencia Humana Humana VDRL Rosa de Bengala

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD………………………………………………………48 COMPATIBILIDAD………………………………………………………48   

Determinación de los grupos sanguíneos Prueba mayor y menor (Compatibilidad sanguínea) Prueba de Coombs

REACCIONES POSTRANSFUSIONALES……………………………………………….52 POSTRANSFUSIONALES……………………………………………….52 HEMODERIVADOS…………………………………………………………………………55 HEMODERIVADOS …………………………………………………………………………55 TÉCNICAS DE SEPARACIÓN SEPARACIÓN…………………………………………………………….6: …………………………………………………………….6: CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE HEMODERIVADOS…………………………65 HEMODERIVADOS…………………………65


INTRODUCCIÓN

Las transfusiones sanguíneas salvan vidas diariamente. El objetivo primordial de todos los Bancos de sangre, puestos de sangrado y servicios de transfusión, es contar con sangre y sus derivados en forma segura y en cantidades suficientes. La sangre y sus componentes son empleados ampliamente en la terapéutica médica rutinaria, sin embargo, pueden ser causantes de daños a la salud de disponentes, receptores y del personal de salud. Es por ello que el personal que labora en estas áreas debe estar debidamente capacitado, desde Personal de Intendencia, Secretaria, Trabajo Social, Auxiliares de Laboratorio, Laboratoristas, Químicos, Enfermeras y Médicos Seleccionadores Seleccionadores,, para el adecuado funcionamiento de los mismos. Este manual se hizo con la finalidad de dar a conocer a químicos, técnicos y cualquier persona en general sobre la organización de un banco de sangre y principalmente sobre la extracción, manejo, pruebas, conservación, fraccionamiento,, etc., de la sangre y de todos sus componentes y/o derivados. fraccionamiento


BANCO DE SANGRE Y SU ORGANIZACIÓN 

¿Qué es un Banco de Sangre?

Un banco de sangre es una organización dedicada a recolectar, almacenar, procesar y suministrar sangre humana. Se encargan de analizar las muestras recolectadas y separar a la sangre en sus componentes. Los donadores deben ser personas voluntarias, por motivos altruistas o por ser cercanos a pacientes La sangre total se conserva a temperaturas de entre 2 y 6º C por 28 días. El concentrado eritrocitario o paquete globular se almacena en las mismas condiciones que l a sangre total, solo que por 42 días. El concentrado plaquetario sólo se puede conservar 5 días a 22º C. El plasma fresco se congela por debajo de -20º C. El crioprecipitado se obtiene de una congelación rápida y luego una descongelación lenta. Existen además algunos productos que provienen del plasma como la albúmina, concentrado de antitrombina III, factor IX, gammaglobulinas e inmunoglobulinas. 

Historia del banco de sangre

En 1930 empiezan a funcionar los primeros bancos de sangre tanto en Europa como en Norteamérica. En la primera y segunda guerra mundiales incrementaron la necesidad de abrir nuevas investigaciones sobre la transfusión de sanguínea para los heridos al mismo tiempo que el mundo se revoluciona y surgen nuevas tecnologías. Judith pool informo que si el plasma fresco congelado se descongelaba habían más concentraciones del factor VII de la coagulación que el plasma fresco original


Organización del banco de sangre (Organigrama)

DIRECCIÓN DEL BANCO DE SANGRE

SUBDIRECCIÓN MÉDICA

DIVISIÓN DE SERVICIOS

JEFATURA DE BANCO DE SANGRE

AUXILIARES DE DIAGNÓSTICO Y

TRATAMIENTO

SECCIÓN DE

SECCIÓN DE TOMA DE

INMUNOHEMATOLGÍA Y

MUESTRA Y

SEROLOGÍA

FLEBOTOMÍA

SECCIÓN DE SELECCIÓN

SECCIÓN DE PROMOCIÓN Y

DEL DONADOR

SECCIÓN DE FRACCIONAMIENTO, CONSERVACIÓN Y

ORIENTACIÓN SUMINISTRO DE

UNIDADES DE SANGRE

Manual de Banco de Sangre

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