Manual de Prácticas de Inmunohematología.

Facultad de Bioanálisis, Veracruz

Manual de Procedimientos de laboratorio

PRACTICA No.1 Lavado de eritrocitos y preparación de la suspensión al 2-5%. 1. IN INTR TROD ODUC UCCI CIÓN ÓN..

1.1 1.1

l lav lavad ado o de c!l c!lu ulas las es un pr proce ocedi"i di"ien ento to en en el #ue #ue se se "e$ "e$cla un un volu volu"e "en n de c!lu c!lula lass roa roass con con vol& vol&"e "ene ness de ''( ''() para per"i per"ititirr la re"oción de prote*nas no a+sor+idas a dic,a c!lula) utili$ando el "!todo de centriuación.

1.2

La prepar paración de la suspensión de c!lul lulas per"ite cuantiicar porc porcen entu tual al"e "ent nte e la conc concen entr trac ació ión n adec adecua uada da para para para para la reac reacci ción ón ant*eno-anticuerpo /A-Ac 0.

2. PRINCIP PRINCIPIO IO Y METODO METODOLOG LOGÍA. ÍA.

2.1

Re"ov Re"over er prot prote*n e*nas as no a+sor+ a+sor+ida idass al al ló+ ló+ulo ulo roo roo #ue #ue pued puedan an inter intereri erirr en la reacción A -Ac.

2.2 2.2

Prep Prepar arar ar porc porcen entu tual al"e "ent nte e la conc concen entr trac ació ión n de la susp suspen ensi sión ón celu celula lar r adecuada para opti"i$ar la reacción A-Ac. A-Ac.

3. LISTA LISTA DE REQUE REQUERIM RIMIEN IENTO TOS. S.

.1

#uipos de de la la+oratorio. Centr*ua.

1


.2 .2


ateri teria ales les de de la+ la+or orat ator orio io..

CANTIDAD 1  1 2 1 1 1 1

DESCRIPCIÓN uestra de sanre en estudio Pi$eta con ''( Tu+os de ensaye de 1 3 144 radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipeta Pasteur 7ul+o de o"a

4. PROC PROCED EDIM IMIE IENT NTO. O.

4.1 Lavado de c!"!a#

1. 8til 8tili$ i$ar ar uan uante tess 2. Arear Arear una al*cuota al*cuota de ''( al al tu+o previa"en previa"ente te identiic identiicado. ado. . Area Arearr un volu"en volu"en de ló+u ló+ulos los roos roos al tu+o tu+o #ue contie contiene ne la al*cuo al*cuota ta de ''() "e$clando suave"ente. 9. Arear Arear vol&"enes vol&"enes de ''( a presión presión ,asta las tres tres cuartas cuartas partes partes del tu+o. 5. Coloc Colocar ar el tu+o tu+o en la centr* centr*u ua a cali+r cali+r6nd 6ndolo olo con otro tu+o #ue conten contena a iual volu"en de ''(. :. Proceder Proceder al lavado lavado de c!lula c!lulass centriu centriuando ando a 2444 2444 RP por por  "in. "in. ;. Lavar Lavar los ló+ulos ló+ulos roos roos las las veces veces #ue sea neces necesario. ario. <. =ecantar =ecantar el so+ren so+renadant adante e de ''( ''() en cada cada lavado. lavado.

4.2 P$e%a$ac&'( de !a #"#%e(#&'( ce!"!a$ de! 2 a! )* 1. Colocar en un tu+o de ensaye de 12 3 ;5) 2> otas de ''( "6s "6s una ota ota del pa#uete lo+ular previa"ente lavado. 2


.2 .2


ateri teria ales les de de la+ la+or orat ator orio io..

CANTIDAD 1  1 2 1 1 1 1

DESCRIPCIÓN uestra de sanre en estudio Pi$eta con ''( Tu+os de ensaye de 1 3 144 radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipeta Pasteur 7ul+o de o"a

4. PROC PROCED EDIM IMIE IENT NTO. O.

4.1 Lavado de c!"!a#

1. 8til 8tili$ i$ar ar uan uante tess 2. Arear Arear una al*cuota al*cuota de ''( al al tu+o previa"en previa"ente te identiic identiicado. ado. . Area Arearr un volu"en volu"en de ló+u ló+ulos los roos roos al tu+o tu+o #ue contie contiene ne la al*cuo al*cuota ta de ''() "e$clando suave"ente. 9. Arear Arear vol&"enes vol&"enes de ''( a presión presión ,asta las tres tres cuartas cuartas partes partes del tu+o. 5. Coloc Colocar ar el tu+o tu+o en la centr* centr*u ua a cali+r cali+r6nd 6ndolo olo con otro tu+o #ue conten contena a iual volu"en de ''(. :. Proceder Proceder al lavado lavado de c!lula c!lulass centriu centriuando ando a 2444 2444 RP por por  "in. "in. ;. Lavar Lavar los ló+ulos ló+ulos roos roos las las veces veces #ue sea neces necesario. ario. <. =ecantar =ecantar el so+ren so+renadant adante e de ''( ''() en cada cada lavado. lavado.

4.2 P$e%a$ac&'( de !a #"#%e(#&'( ce!"!a$ de! 2 a! )* 1. Colocar en un tu+o de ensaye de 12 3 ;5) 2> otas de ''( "6s "6s una ota ota del pa#uete lo+ular previa"ente lavado. 2



2. e$clar suave"ente con la pipeta Pasteur. . ti#uetar con no"+re de la suspensión y ec,a de ela+oración. ). PROCESAMIEN PROCESAMIENTO TO Y REPORTE REPORTE DE RESULT RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la la pr6ctica reali$ada. reali$ada. .??????????????????????????????????????????????????????????????? ????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????????? ??????????????????????????????????? ?? ????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????????? ??????????????????????????????????? ?? ????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????????? ??????????????????????????????????? ?? ,. CON-IA CON-IAILI ILIDAD DAD ANALÍTI ANALÍTICA CA 1. Reali$ar el lavado celular de acuerdo con los procedi"ientos indicados. 2. Llenar con ''( las tres cuartas partes del tu+o. . =ecantar co"pleta"ente la ''( en cada lavado. 9. Resuspender el pa#uete celular con pe#ue@as al*cuotas de ''( despu!s de cada lavado. 5. vitar el contacto de la lu$ del tu+o con los dedos. :. Reali$ar periódica"ente control de calidad a la centr*ua por personal t!cnico especiali$ado. ;. 8tili$ar las revoluciones y tie"po indicados. CALIDAD. ;. GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6 la calidad de la suspensión celular. /. I IL LIO IOGR GRA A-ÍA. -ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

3


1. INTRODUCCIÓN.


PRACTICA No.2 Preparación de ,e"at*es A) 7 y .

n el la+ora la+orator torio io de in"un in"uno,e o,e"at "atolo olo*a *a se e"plea e"plear6n r6n "uest "uestras ras de ,e"at ,e"at*es *es conocidos to"ados de se"entos de unidades de sanre de eGtracción reciente) con ta"i$ae serolóico neativo para ser utili$ados co"o reactivos celulares en la deter"inación de la ase inversa de los rupos sanu*neos del siste"a A7. A7. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. La preparación de reactivos celulares de ,e"at*es conocidos A) 7 y  se preparan en el la+oratorio la+oratorio de in"uno,e"atolo*a in"uno,e"atolo*a por#ue per"itenH per"itenH 1. +tener +tener una suspens suspensión ión de c!lula c!lulass reactiva reactivass al 2.5% 2.5% para para deter"ina deter"inarr ase ase s!rica del siste"a A7. 2. 'oluciona 'olucionarr discrepancia discrepanciass en los rupos sanu*neos sanu*neos del siste"a siste"a A7. A7. . Reali$ar control de calidad en los reactivos ,e"oclasiicadores ,e"oclasiicadores del siste"a A7. 4



3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. .1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua

.2

ateriales de la+oratorio.

CANTIDAD 1 2 9 1 1 1 1 9 1

DESCRIPCIÓN 'e"entos con unidades de sanre A) 7 y  Pi$eta con ''( Tu+os de ensaye de 1 3 144 Tu+os de ensaye de 15 3 154 radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipetas Pasteur 7ul+o de o"a 'ueros ,e"oclasiicadores Anti A) Anti 7) Anti A7.

4. PROCEDIMIENTO. 1. 8tili$ar uantes #uir&ricos 2. To"ar varios se"entos de unidades de sanre A y 7 . arcar tu+os de 1 3 144 con las silas A) 7 y . 9. Colocar el contenido de los se"entos en los tu+os. 5. Feriicar rupo sanu*neo A7 :. Iniciar la ase de lavado de c!lulas) decantando total"ente la ''( en cada lavado. ;. ti#uetar los tu+os de 15 3 154 con las silas A) 7 y . <. Colocar a cada tu+o de 15 3 154 >.;"l de ''( "as. "l / 5 otas0 de c!lulas e"pa#uetadas. >. Tapar los tu+os y "e$clar la suspensión con "ovi"ientos suaves. 14 Feriicar el rupo sanu*neo a cada suspensión. Conservar los ,e"at*es en rerieración a te"peratura de 1 a : C o ,asta o+servar evidencia de ,e"ólisis. ⁰

5



s#ue"a de Concentración de la 'uspensión Celular. Concentración %

Volumen de Células Empaquetadas

Volumen de SSF  ml !

"otal ml !

5  2

4.5 "l 14 otas 4. "l : otas 4.2 "l 9 otas

>.5 >.; >.<

14 14 14

). PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. .??????????????????????????????????????????????????????????????? ??????????????????????????????????????????????????????????????? ??????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????????????????????????????????????????????

,. CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. 'eleccionar unidades de sanre con ta"i$ae serolóico neativo y R,o /=0 neativas. 2. +servar evidencia de ,e"ólisis en los se"entos a separar. . Feriicar rupos y su+rupos del siste"a A7 y ant*eno = del siste"a R, 9. =ecantar total"ente la solución en cada lavado. 5. Preparar la suspensión celular entre el 2 y 5 %. :. antener los tu+os en el rerierador si no son utili$ados. ;. n caso de utili$ar ,e"at*es R,o /=0 positivos) reistrar la inor"ación en la eti#ueta de los tu+os. <. e$clar con "ovi"iento suave la suspensión al ser utili$ada. 0.GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6 la calidad de la suspensión celular.

6



/.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ern6nde$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244

PRACTICA No. Titulación de anticuerpos naturales e in"unes 1 INTRODUCCIÓN. La titulación de anticuerpos naturales e in"unes es un procedi"iento #ue en ciertas condiciones de te"peratura y "edios de reacción deter"ina la concentración aproGi"ada de un anticuerpo natural ó in"une en el suero en estudio) utili$ando el "!todo de la do+le dilución) y el resultado se eGpresa co"o el valor rec*proco de la "ayor dilución en la #ue se o+serva alutinación "acroscópica. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. l principio de esta t!cnica es el de cuantiicar la concentración de un anticuerpo presente en una "uestra de suero con ines terap!uticos) de investiación y en la ela+oración y control de calidad de los reactivos. 7



3LISTADE REQUERIMIENTOS.

.1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua 7a@o de ar*a a ; C ⁰

Ter"ó"etro para +a@o ar*a

:.2


CANTIDAD

1 12 1 1 1 1 9 1

DESCRIPCIÓN 'uero en estudio 'uspensión de ,e"at*es #ue contenan el A correspondiente al Ac a titular Pi$eta con ''( Tu+os de ensaye de 12 3 ;5 "" radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipetas Pasteur 7ul+o de o"a

4.PROCEDIMIENTO. Titulación de anticuerpo naturales anti A y anti 7J. Reali$ar t*tulo de Ac naturales del siste"a A7) se&n rupo sanu*neo. 'i es rupo J titular anti AJ y anti 7J 'i es rupo AJ titular anti 7J 'i es rupo 7J titular anti AJ 1. 8tili$ar uantes #uir&ricos 2. +tener el suero en estudio 8



. Identiicar dos ,ileras de tu+os de 12 3 ;5 "" con la letra A y la do+le dilución ee"ploH A K) A ) A 1M<) A 1M1:) A 1M2) A 1M:9) A 1M12<) A 1M25:) A 1M512) A 1M1429) e iual"ente para la serie 7J. 9. Arear a cada ,ilera un tu+o adicional con la sila A11) 711) para continuar diluyendo si es necesario. 5. Colocar con pipeta Pasteur cuatro otas de ''( en cada tu+o de las dos ,ileras) eGcepto en los tu+os n&"ero 11. :. Arear a los tu+os K de cada ,ilera cuatro otas del suero en estudio con pipeta Pasteur. ;. e$clar y pipetear el contenido del tu+o A K y transerir cuatro otas al tu+o A ) y as* sucesiva"ente ,asta el tu+o n&"ero 11. <. Repetir el paso no ; en la ,ilera 7. >. Arear a la ,ilera A una ota de ,e"at*es A y a la ,ilera 7 una ota de ,e"at*es 7 eGcepto en los tu+os A11) 711. 14.e$clar y centriuar durante un "inuto a 1444 rp". 11. Leer alutinación yMo ,e"ólisis en cada tu+o) de la ,ilera A) co"en$ando en el tu+o A1M2 ,asta el A 1M1429 so+re una uente de lu$) proceder de la "is"a "anera con la ,ilera 7. 12. Anotar resultados en cruces) tu+o en "ano en or"ato correspondiente. ) .PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual.

).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. .??????????????????????????????????????????????????????????????? ??????????????????????????????????????????????????????????????? ??????????????????????????????????????????????????????????????? ??????????????????????????????????????????????????????????????? ,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. Feriicar la viencia de los ,e"at*es y reactivos 2. Pipetear sin ,acer espu"a 9



. "plear "!todo de la do+le dilución 9. Reali$ar el t*tulo dependiendo del rupoH rupo  t*tulos anti A y anti 7) rupo A t*tulos anti 7) rupo 7) t*tulos anti A. 5. 8tili$ar pipeta li"pia para cada traslado :. Arear las otas con la pipeta en una "is"a posición. l 6nulo 6cil de tra+aar es el 6nulo recto. ;. 8tili$ar suero resco <. e$clar +ien cada dilución /9 veces 0 >. Pasar sólo 9 otas de un tu+o a otro 14. vitar interru"pir procedi"iento una ve$ co"en$ado 11. Reistrar resultados co"o el valor rec*proco de la "ayor dilución en la #ue se o+serva alutinación "acroscópica.

0.GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6 los t*tulos de los anticuerpos naturales.

/.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ern6nde$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

PRACTICA No.9 =eter"inación del siste"a A7 (ase lo+ular 1. INTRODUCCIÓN. s el siste"a #ue se utili$a de rutina en la tipiicación del rupo sanu*neo en el +anco de sanre. n este se deter"ina el ant*eno A7 presente en los ló+ulos roos "ediante una reacción de alutinación.

10



2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 'e deter"ina la presencia o ausencia de los ant*enos del siste"a A7 "ediante alutinación en placa o en tu+o) despu!s de ponerlos a reaccionar con anticuerpos "onoclonales contenidos en antisueros conocidos. 3. LISTA DE REQUERIMIENTOS. .1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua 7a@o de ar*a a ; C ⁰


.2


CANTIDAD

1  1 1 1 1 9 1

DESCRIPCIÓN uestra de sanre anticoaulada 'ueros ,e"oclasiicadores Anti A) Anti 7) Anti A7 Pi$eta con ''( Tu+os de ensaye de 12 3 ;5 "" radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipetas Pasteur 7ul+o de o"a

4. PROCEDIMIENTO. 1. 8sar uantes #uir&ricos 2. 'eparar la "uestra de sanre en tu+os) previa"ente identiicados. . arcar tu+os de 12 3 ;5 con las silas A) 7 y A7 #ue le corresponde para la identiicación de la suspensión. 9. Preparar una suspensión de ló+ulos roos de 2-5%previa"ente lavados. 5. Colocar en los tu+os"arcados con las silas A) 7 y A7) una ota de reactivo anti-A)anti-7 y anti A7 respectiva"ente. 11



:. Arear a cada tu+o una ota de la suspensión lo+ular del 2-5% de la "uestra en estudio. ;. e$clar suave"ente y centriuar <. Leer y reportar los resultados de la reacción /alutinación) ,e"ólisis0 >. (or"a de reportar los resultados de los rupos sanu*neos del siste"a A7) ase lo+ularH R8P =IRCT  (A' L78LAR Anti A 9 9

Anti 7 9 9

Interpretación de Resultados

Anti A7 9 9 9

A 7 A7 

).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. R8P =IRCT O (A' L78LAR Anti A

Anti 7

Interpretación de Resultados

Anti A7

,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. 2. . 9. 5. :. ;.

8sar uantes #uir&ricos 'eparar de la "uestra de sanre en un tu+o previa"ente identiicado. Preparar la suspensión de eritrocitos entre 2 al % lavados una ve$. Arear los reactivos s!ricos antes de la suspensión lo+ular Reportar la intensidad de la alutinación en cruces Feriicar viencia de los reactivos Leer instructivo de la casa co"ercial de los reactivos 12



<. =ar tie"po y revoluciones adecuadas a la centr*ua >. 8tili$ar una uente de lu$ adecuada 14. vitar dear restos de los reactivos en el otero 11. vitar el contacto del otero del reactivo con las paredes del tu+o de ensaye 12. =esprender suave"ente el +otón de R al reali$ar lectura 1. Conservar los reactivos a una te"peratura de 1 a : C 19. 8tili$ar una ota de cada reactivo ⁰

0. GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6n las reacciones de alutinación en tu+o. /.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ern6nde$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

PRACTICA No.5 =eter"inación del siste"a A7 (ase s!rica

1. INTRODUCCIÓN.

s el siste"a #ue se utili$a de rutina en la tipiicación del rupo sanu*neo en el +anco de sanre y co"o co"ple"ento de la ase s!rica. n ella se deter"inan los anticuerpos anti A) anti 7 y anti A7 de orien natural presentes en el suero. 13



2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 'e deter"ina la presencia o ausencia de los anticuerpos del siste"a A7 "ediante alutinación en tu+o) despu!s de ponerlos a reaccionar con c!lulas reactivo conocidas. 3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.

.1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua 7a@o de ar*a a ; C ⁰


.2


CANTIDAD 1  1 1 1 1 9 1

DESCRIPCIÓN 'uero pro+le"a ritrocitos reactivo A y 7. Pi$eta con ''( Tu+os de ensaye de 12 3 ;5 "" radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipetas Pasteur 7ul+o de o"a

4.PROCEDIMIENTO. 1. Colocar dos otas de suero en estudio a tu+os "arcados A y 7. 2. Arear una ota de ,e"at*es A y una ota de ,e"at*es 7 en los tu+os correspondientes. . e$clar suave"ente y centriuar 14



9. Leer y reportar en cruces los resultados de la reacción /alutinación o ,e"ólisis0 en los tu+os del suero y ló+ulos roos. 5. Recoer el "aterial) conservar la "uestra de 1 C a : C durante 5 a < d*as :. (or"a de reportar los resultados de los rupos sanu*neos del siste"a A7) ase s!ricaH ⁰

A 9 

Interpretación =e resultados 7  9 9

⁰

A 7  A7

).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. R8P INFR' O (A' 'RICA

A1

A2

7

Interpretació n =e resultados 

,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. 8sar uantes #uir&ricos 2. 'eparar de la "uestra de sanre en un tu+o previa"ente identiicado. . Preparar la suspensión de eritrocitos entre 2 al % lavados una ve$. 9. A@adir el suero en estudio y lueo los ,e"at*es 5. Reportar la intensidad de la alutinación en cruces 15



:. Feriicar viencia de los reactivos ;. Leer instructivo de la casa co"ercial de los reactivos <. =ar tie"po y revoluciones adecuadas a la centr*ua >. 8tili$ar una uente de lu$ adecuada 14. e$clar los reactivos celulares suave"ente antes de ser usados 11. Conservar la "uestra de 5 a < d*as despu!s de reali$ar el procedi"iento 12. =esprender suave"ente el +otón de R al reali$ar lectura 1. Conservar los reactivos a una te"peratura de 1 a : C ⁰

0.GARANTÍA DE CALIDAD Con la u*a del "aestro) se evaluar6n las reacciones de alutinación en tu+o. /.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

PRACTICA No.: =eter"inación de los su+rupos de A y 7 1.INTRODUCCIÓN.

16



Los su+rupos son de+idos a #ue el A A) se presenta +ao varias or"as #ue diieren entre si cualitativa"ente y cuantitativa"ente y !sta dierencia uarda relación con la cantidad de A presente en los R el cual dis"inuye proresiva"ente desde A1 ,asta la or"a "6s d!+il. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 1. 'e detectan los su+rupos A1) A17) A inter) A2) A27 u otras or"as "6s d!+iles delos su+rupos en los R. 2. 'e resuelven las discrepancias de los rupos sanu*neos del siste"a A7) Identiicando los su+rupos de A y A7. . 'e identiican su+rupos d!+iles de A y A7 en donantes y receptores para evitar posi+les reacciones ,e"ol*ticas transusionales. 3. LISTA DE REQUERIMIENTOS. CANTIDAD

DESCRIPCIÓN Lectina yMo 'uero Anti A1 A+sor+ido ritrocitos 1 Pi$eta con ''(  Tu+os de ensaye de 12 3 ;5 "" 1 radilla 1 uantes #uir&ricos 1 Papel parainado 1 L6pi$ raso 9 Pipetas Pasteur 1 7ul+o de o"a .1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua 7a@o de ar*a a ; C ⁰


.2


4.PROCEDIMIENTO. 17



1. arcar un tu+o de ensaye de 12 G ;5 "" con las silas Lec A 1 yMo 'uero Anti A1 a+sor+ido. 2. Colocar una ota de suero anti A1 a+sor+ido /AntiA10 o lectinaanti A1 en el tu+o identiicado. . A@adir una ota de la suspensión de eritrocitos en estudio. 9. e$clar y centriuar a revoluciones y tie"po indicado. 5. Re"over suave"ente los eritrocitos sedi"entados. :. +servar alutinación "acroscópica. ;. Reistrar la intensidad de la alutinación. ).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. a0 'i se o+serva un +otón /90 los eritrocitos pertenecen al su+rupo A1 o A17. +0 'i se o+serva una alutinación "oderada /1-20) los eritrocitos pertenecen al su+rupo A2) A inter) A27 /A inter"edios0.

Reacció con n Anti A Anti A7

9 9 9 2

9 9 9 2

R Anti A1

Reacció n Anti  A1

9 2



 2  9 9

2

del A2

suer o 7 

9 9 9 9 9 9

Interpretació n

A1 Aint A2 A Ael Alae

,. CON-IAILIDAD ANALÍTICA 18



1. 8sar uantes #uir&ricos 2. Tra+aar con "uestras de sanre resca . 'eparar de la "uestra de sanre en un tu+o previa"ente identiicado. 9. Preparar la suspensión de eritrocitos entre 2 al % lavados una ve$. 5. 'euir estricta"ente las instruccionesdel a+ricanteantes de utili$ar el suero anti A a+sor+ido /Anti A10 o lectina Anti A1) Anti  :. 8sar c!lulas A1 co"o testio positivo y c!lulas A 2 u  testio neativo ;. Conir"ar su+rupos A1 para preparar ,e"at*es A1 clasiicadores. <. Reportar la intensidad de la alutinación en cruces >. Feriicar viencia de los reactivos 14. Leer instructivo de la casa co"ercial de los reactivos 11. =ar tie"po y revoluciones adecuadas a la centr*ua 12. 8tili$ar una uente de lu$ adecuada 1. e$clar los reactivos celulares suave"ente antes de ser usados 19. Conservar la "uestra de 5 a < d*as despu!s de reali$ar el procedi"iento 15. Conservar los reactivos a una te"peratura de 1 a : C ⁰

0. GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6n las reacciones de alutinación en tu+o. /.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

PRACTICA No.; 19



Identiicación de ant*eno  eneritrocitos 1. INTRODUCCIÓN. La sustancia  se encuentra en las c!lulas roas ,u"anas) es la sustancia +6sica de la cual se ,an or"ado las sustancias A y 7) "ediante la inluencia de los enes A y 7 respectiva"ente. Las c!lulas roas del rupo  en las cuales no ,ay A A y 7) contienen la "ayor concentración de sustancia  y los su+rupos de A) a "edida #ue son "6s d!+iles poseen "6s sustancia . 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 1. 'e detecta la presencia del A ) en los R. 2. 'e resuelve discrepancias de los rupos sanu*neos del siste"a A7. CANTIDAD

DESCRIPCIÓN

. 'e

Lectina Anti  ritrocitos 1 Pi$eta con ''(  Tu+os de ensaye de 12 3 ;5 "" 1 radilla 1 uantes #uir&ricos 1 Papel parainado 1 L6pi$ raso 9 Pipetas Pasteur 1 7ul+o de o"a investian su+rupos de A. 3. LISTA DE REQUERIMIENTOS. .1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua 7a@o de ar*a a ; C ⁰

Ter"ó"etro para +a@o ar*a .2 ateriales de la+oratorio.

20



4.PROCEDIMIENTO. 1. 2. . 9.

arcar un tu+o de ensaye de 12 G ;5 "" con las silas anti  Colocar una ota de lectina Anti  en el tu+o identiicado. A@adir una ota de la suspensión de eritrocitos en estudio lavados una ve$. e$clar y centriuar suave"ente los eritrocitos sedi"entados y o+servar si eGiste alutinación "acroscópica. 5. Reistrar la intensidad de la alutinación. ). PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. a0 La lectina anti  alutina a#uellas c!lulas #ue contienen el ant*eno  +0 'i se o+serva una reacción neativa con la lectina anti ) los eritrocitos son del rupo A1 o A1 7. c0 'i se o+serva una alutinación de  los eritrocitos pertenecen a los su+rupos A1-2 /inter"edio0) A7) o A2. d0 'i se o+serva una alutinación de 2 los eritrocitos pertenecen a los su+rupos A2 o A27. e0 8sar c!lulas  ó A2 co"o testio positivo y c!lulas A 1 co"o testio neativo. ,. CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. 8sar uantes #uir&ricos 2. Tra+aar con "uestras de sanre resca . 'eparar de la "uestra de sanre en un tu+o previa"ente identiicado. 9. Preparar la suspensión de eritrocitos entre 2 al % lavados una ve$. 5. 'euir estricta"ente las instruccionesdel a+ricanteantes de utili$ar la lectina Anti  :. 8sar c!lulas  ó A2 co"o testio positivo y c!lulas A 1 co"o testio neativo. 21



>. Feriicar viencia de los reactivos 14. Conservar la "uestra de 5 a < d*as despu!s de reali$ar el procedi"iento 11. Conservar los reactivos a una te"peratura de 1 a : C ⁰

0.GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6n las reacciones de alutinación en tu+o. /.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

PRACTICA No.< =eter"inación del actor R, /=0 1 INTRODUCCIÓN. s un procedi"iento en el #ue se deter"ina la presencia o ausencia del ant*eno /=0 en la "e"+rana del ló+ulo roo. La presencia de este ant*eno se deno"ina R, /=0 positivo y la ausencia R, /=0 neativo. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 'e deter"inar6 la presencia ó ausencia del ant*eno = en una "uestra de sanre. 3. LISTA DE REQUERIMIENTOS. .1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua

.


CANTIDAD 1 1 1 1 1 1

DESCRIPCIÓN uestra de sanre Reactivo anti-= "onoclonal ó policlonal Pi$eta con ''( Tu+o de ensaye de 12 3 ;5 "" radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso 22



1 1

Pipeta Pasteur 7ul+o de o"a

4 PROCEDIMIENTO. 1. Leer las instrucciones del a+ricante del reactivo a utili$ar. 2. Preparar una suspensión celular al 2 a % . arcar un tu+o de 12 3 ;5 "l 1.9) arear 1 ota de reactivo anti-= / "onoclonal ó policlonal0. 9. A@adir una ota de la suspensión celular con pipeta de Pasteur. 5. e$clar y centriuar 1 "in a 1444 rp". :. Leer y reportar la reacción en cruces en el or"ato correspondiente. ;. Investiar el = d!+il si el resultado es neativo. ).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada.

,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. Investiar = d!+il a todo resultado R, = neativo. 2.Reali$ar prue+a de antilo+ulina directa a todos los R, / = 0 neativo. . Leer las instrucciones del a+ricante del reactivo utili$ado. ⁰


23



PRACTICA No.> Prue+a para el = d!+il /=u0 . 1.INTRODUCCIÓN l = d!+il se ,a descrito co"o una or"a d!+il del ant*eno R, /=0. Las c!lulas roas = neativo =Q positivo tienen pocos sitios anti!nicos =) ,a+i!ndose de"ostrado #ue sólo to"an un ;-25% del anticuerpo anti-= #ue nor"al"ente ia una c!lula R, / = 0 positivo. Las nor"as del 7anco de 'anre de+en re#uerir #ueH 1. Toda sanre con resultado neativo o positivo d!+il de+e ser pro+ada para =Q "ediante la prue+a de Coo"+s indirecta. 2. 'i un donante resulta R, neativo) =Q positivo) de+e ser considerado co"o un R, positivo y su sanre de+e ser transundida a un R, positivo. . Cuando se trata de un receptor R, neativo) =Q positivo) ciertos +ancos de sanre reco"iendan #ue se de+e considerar co"o R, neativo y transundirse con sanre R, neativo. Alunos autores piensan #ue estos individuos pueden ser transundidos con sanre R, positivo) aun#ue en raros casos se ,a reportado in"uni$ación de tales receptores con producción de anti-=.) co"o iual"ente ,a sucedido con alunos pacientes R, positivo. 9. "+ara$adas R, neativo) =Q neativo) si su ,io es R, positivo de+en reci+ir la in"unolo+ulina anti-R, para prevenir la in"uni$ación. Las "adres =Q positivo no la re#uieren. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA.'e deter"inar6 la presencia o ausencia del ant*eno = en una "uestra de sanre. 24


CANTIDAD


DESCRIPCIÓN

uestra de sanre Reactivo anti-= "onoclonal ó policlonal Reactivo de antilo+ulina ,u"ana C!lulas control de Coo"+s 1 Pi$eta con ''( 1 Tu+o de ensaye de 12 3 ;5 "" 1 radilla 1 uantes #uir&ricos 1 Papel parainado 1 L6pi$ raso 1 Pipeta Pasteur 1 7ul+o de o"a LISTA DE REQUERIMIENTOS.

3.

.1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua 7a@o de ar*a Ter"ó"etro

.2


4 PROCEDIMIENTO. 'i no se o+serva alutinación en la deter"inación del R,) deter"inar el = d!+il. 25



1. Arear un tu+o control /1.5 0 el cual contiene lo indicado por el a+ricante para el anti-=) pero sin anticuerpo) "6s una ota de c!lulas pro+le"as suspendidas de 2 a  %. 2. Incu+ar los tu+os 1.9 y 1.5 en +a@o de "ar*a a ; C) por un tie"po "*ni"o de 24)"inutos. . Centriuar a"+os tu+os a 15 seundos a 944 rp") ó 1 "inuto a 1444 rp". 9. 'uspender los +otones celulares y eGa"inar la alutinación si los eritrocitos no son alutinados continuar con la ase antilo+ulina. 5. Lavar 9 veces con solución salina isiolóica) cu"pliendo con la t!cnica del lavado de c!lulas. :. Arear a cada tu+o dos /20 otas de antilo+ulina ,u"ana poliespec*ico. ;. e$clar y centriuar a 15 seundos a 944 rp" ó 1 "in por 1444 rp". <. Resuspender las c!lulas desprendiendo suave"ente el +otón) leer "acroscópica"ente reistrando los resultados. >. Arear 1 ota de c!lulas control de Coo"+s a los resultados neativos) centriuar e interpretar resultado. ⁰

).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. Interpretación de prue+a para = d!+ilH "ubo con #$⁰   &'( !

"ubo control  &') !

Neativo Positivo Positivo

Neativo Neativo Positivo

*nterpretación

R, / = 0 neativo R, / = 0 positivo 7lo#ueo in +i+o por anticuerpo) deinir situación) veriicar con R, salino.

).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. ,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. Investiar = d!+il a todo resultado R, = neativo. 2.Reali$ar prue+a de antilo+ulina directa a todos los R, / = 0 neativo. . Leer las instrucciones del a+ricante del reactivo utili$ado. ⁰

26



9. Arear CCC a toda reacción de antilo+ulina ,u"ana neativa. 0.GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6n las reacciones de alutinación en tu+o. /.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

PRACTICA No.14 Preparación de c!lulas control de Coo"+s . 1. INTRODUCCIÓN 'on c!lulas del rupo J R, / = 0 positivo sensi+ili$adas con suero diluido I anti-= o R, ó A 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. Con el e"pleo de las c!lulas control de Coo"+s se conir"ar6 las prue+as de antilo+ulina neativa.

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.

.1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua 7a@o de ar*a 27



Ter"ó"etro

.2 ateriales de la+oratorioH CANTIDAD

1 1 1 1 1 1 1 1

DESCRIPCIÓN uestra de sanre Reactivo anti-= "onoclonal ó policlonal Reactivo de antilo+ulina ,u"ana C!lulas control de Coo"+s Pi$eta con ''( Tu+o de ensaye de 12 3 ;5 "" radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipeta Pasteur 7ul+o de o"a

4.PROCEDIMIENTO. 1. arcar un tu+o de 1 3 144 "" ,asta los niveles de  y : "l y llenarlo ,asta la "arca de : con salina. 2. Arear una ota de suero anti-R, con el otero en or"a vertical. . Cu+rir el tu+o con parail" y "e$clar por inversión unas 24 veces. 9. Retirar un volu"en de esta solución ,asta #ue lleue el nivel a la "arca de  "l.=e nuevo) llenar el nivel con salina) ,asta la "arca :) cu+rir con parail" y "e$clar por inversión 24 veces. 5. Arear el contenido co"pleto de un se"ento de c!lulas  R, positivo al tu+o. Cu+rir con parail" y "e$clar por inversión 24 veces. :. Incu+ar a ; C durante 4 "inutos) teniendo el cuidado de #ue el nivel del aua del +a@o ar*a so+repase el nivel de la suspensión en el tu+o. ⁰

Pasado este tie"po) las c!lulas est6n sensi+ili$adas y listas para ser usadas co"o control en las prue+as de antilo+ulina #ue resultan neativas.Conservadas en el rerierador) duran ,asta ; d*as. 'e pueden to"ar racciones para preparar las del d*a) previo lavado 9 veces con solución salina.La suspensión inal de+e ser del 2%. ).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. 28


).2


Re%o$+e de Re#"!+ado#

'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. , CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. 2. . 9. 5. :.

acer un Coo"+s directo #ue de+e ser positivo 2 Fiilar #ue la te"peratura del +a@o ar*a se conserve a ; C. e$clar cada cierto intervalo de tie"po. acer los lavados correcta"ente. Reali$ar control de calidad del reactivo La suspensión de las CCC de+e ser del 2 al 5% ⁰


PRACTICA No.11 Prue+a de Antilo+ulina=irecta . 1.INTRODUCCIÓN La prue+a de antilo+ulina directa es un procedi"iento #ue se usa para deter"inar la sensi+ili$ación in +i+o de los ló+ulos roos) es decir) cuando la reacción entre el A y su correspondiente anticuerpo se eect&a en el oranis"o "ientras a"+os est6n circulando. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. La prue+a de la antilo+ulina directa per"ite detectar la sensi+ili$ación in +i+o de los ló+ulos roos por in"unolo+ulina de la clase I yMó racciones del co"ple"ento C. 3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.

29



.1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua

.2

ateriales de la+oratorioH

CANTIDAD

2 1 1 1 1 1 1

DESCRIPCIÓN uestra de sanre C!lulas Control de Coo"+s Reactivo de antilo+ulina ,u"ana y "onoespec*ico/ I) Cd) C+) C9 0 Tu+os de 12 3 ;5 Pi$eta con ''( radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipeta Pasteur

4.PROCEDIMIENTO. 1. 8tili$ar uantes #uir&ricos 2. arcar un tu+o de ensaye 12 3 ;5 "" con las silas C= 3. Preparar una suspensión al 5% en ''( de c!lulas roas de la "uestra en estudio. 4. Colocar al tu+o "arcado) una ota de la suspensión de ,e"at*es en estudio. ). Arear ''( al tu+o y reali$ar cuatro lavados consecutivos decantando co"pleta"ente toda la salina en cada uno de los lavados. ,. In"ediata"ente despu!s del <i"o lavado) arear dos otas del reactivo de AP / antilo+ulina ,u"ana poliespec*ica 0 0. e$clar y centriuar por un "inuto a 1444 rp". /. +servar el tu+o cuantiicando la alutinación de la reacción ant*enoanticuerpo y anotar resultados en el or"ato correspondiente. . La prue+a neativa de+e conir"arse con c!lulas control de Coo"+s) arear una ota) "e$clar) centriuar) leer y anotar resultados.

30



).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. . ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. Interpretación de los resultadosH 1. 'i la prue+a de antilo+ulina "uestra alutinación) se interpreta co"o positiva) siniica #ue ,u+o sensi+ili$ación in +i+o de los eritrocitos y se reportaH prue+a de antilo+ulinaó de Coo"+s positiva) se@alando en cruces la intensidad de la reacción. n este caso reali$ar prue+a de Coo"+s directo utili$ando reactivos "onoespec*icos. 2. 'i no ,u+o alutinación la prue+a es neativa y siniica #ue no eGiste sensi+ili$ación eritrocitaria esta prue+a ser6 v6lida sola"ente si la prue+a control de Coo"+s es positiva ,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA 1. Leer las instrucciones del a+ricante al utili$ar los reactivos co"erciales. 2. Los lavados de las c!lulas de+en ser consecutivos. . Resuspender las c!lulas #ue #uedan ad,eridas al ondo del tu+o con una pe#ue@a cantidad de ''( lueo arear la ''( presionando la pi$eta para #ue la resuspensión de las c!lulas #uede ,o"o!nea. 9. Los tu+os de+en ser llenados con ''( ,asta aproGi"ada"ente las tres cuartas Spartes del tu+o. 5. n cada uno de los lavados decantar total"ente la ''(. :. n caso de tener #ue reportar un t*tulo) reali$ar diluciones del suero de Coo"+s y poner en contacto estas diluciones con las c!lulas en estudio. ;. GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6n las reacciones de alutinación en tu+o. /. ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

31



PRACTICA No.12 Prue+as Pretransusionales 1. INTRODUCCIÓN s una serie de procedi"ientos #ue se reali$an rutinaria"ente en el 7anco de 'anre con la inalidad de aseurar la co"pati+ilidad sanu*nea entre el receptor y el donador para evitar reacciones ,e"ol*ticas transusionales en el usuario. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 1. =etectar inco"pati+ilidades del siste"a A7 y R, 2. aranti$ar al receptor la ad"inistración de una transusión A7 y R, co"pati+les. 2. =etectar anticuerpos en el suero del receptor #ue est!n diriidos a los ant*enos del donante. . Cu"plir con la nor"ativa de la Ley de Transusión y 7ancos de 'anre y su 32



rela"ento.

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS. .1 #uipos de la+oratorio. Centr*ua 7a@o ar*a a ; C ⁰

.2 ateriales de la+oratorioH CANTIDAD

2 2 1 1 1 1 1 1 1

DESCRIPCIÓN uestras de sanre C!lulas Control de Coo"+s Reactivo de antilo+ulina ,u"ana y "onoespec*ico/ I) Cd) C+) C9 0 Reactivos A7 y R, Al+&"ina +ovina al 22% Taretas de identiicación de la transusión Tiera Pin$as ti#uetas autoad,esivas asas Papel secante Tu+os de 12 3 ;5 Tu+os de 1 3 144 Pi$eta con ''( radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipeta Pasteur 7ul+o de o"a

4. PROCEDIMIENTO. 1. Reali$ar los siuientes procedi"ientosH 1.1 Reci+ir solicitud de transusión de sanre yMo co"ponentes sanu*neos. 33



1.2

Feriicar la identiicación del receptor) conrontando los datos de la solicitud) con la ,istoria cl*nica del paciente) /apellidos y no"+re co"pletos) ec,a de inreso) n&"ero de C!dula de Identidad) n&"ero de istoria) 'ervicio) ca"a) ec,a de naci"iento0. 1.3 Revisar #ue la solicitud de transusión lleve dianóstico) ra$ón a indicación de la transusión) si ,a sido transundido con anterioridad) reacciones adversas) no"+re) ir"a y silas del "!dico #ue indica el trata"iento) ec,a) rupo sanu*neo) +oleta de rupo sanu*neo) todos los datos escritos en letra clara. 1.9 Colocar la"uestra de sanre) identiicando al receptor por sus apellidos y no"+re co"pleto) conrontar este dato con la solicitud de transusión) ,istoria cl*nica. 1.5 Procesar la "uestra de sanre) co"pro+ando nueva"ente la identiicación tanto en el receptor) los tu+os y la solicitud de transusión. 1.5.1=eter"inar rupos sanu*neos A7 y R, 1.5.2 Resolver discrepancias antes de iniciar la prue+a cru$ada. 1.5. =etectar Ac irreulares utili$ando c!lulas pantallas con en!tica conocida. Reali$ar prue+a de antilo+ulina directa. 1.5.9 Reistrar resultados en or"atos correspondientes) y en los tu+os #ue contienen el pa#uete celular y suero. 1.:

'eleccionar la sanre adecuada para la transusión.

1.:.1Gtraer del rerierador la unidad ó unidades A7 y R, co"pati+les con el receptor. 1.:.2+servar las condiciones *sicas de la unidad / ,e"ólisis) coloración del pa#uete celular) de"arcación de la l*nea pa#uete celular plas"a) +ur+uas de aire0. 1.:. +servar ec,a de eGpiración) y resultados del ta"i$ae serolóico. 1.; 1.<

Procesar la "uestra de sanre del donador. 'eparar uno de los se"entos sellados del tu+o interado a la unidad de sanre) identiic6ndolo con una eti#ueta #ue contena serial de donación) N&" de se"ento y ec,a de preparación. 1.> Colocar el se"ento en tu+o de ensaye identiicado. 1.14 Feriicar con esta "uestra rupo sanu*neo A7 y R,. 1.11 =eter"inar su+rupos y otros A cuando el receptor contena Ac irreulares. 1.12 Reali$ar P$"ea C$"ada Mao$. 1.12.1Preparar una suspensión al 2 al 5% con los ló+ulos roos del donante lavados una ve$. 34



1.12.2 Identiicar un tu+o de 12 3 ;5 1.12. Colocar dos otas del suero del receptor en el tu+o previa"ente identiicado. 1.12.9 Arear al "is"o tu+o una ota de suspensión de ,e"at*es del donador previa"ente lavados. 1.12.5 e$clar y centriuar a velocidad y revoluciones esta+lecidas 1 1.12.: Leer desprendiendo suave"ente el +otón celular) o+servando ,e"ólisis yMo alutinación. 1.12.; Reistrar el resultado tu+o en "ano. 1.12.< Arear dos otas de al+&"ina) "e$clar e incu+ar a te"peratura de ; C durante 24 a 4 "in. 1.12.> e$clar y centriuar a revoluciones esta+lecidas. ⁰

1.1 Lavar cuatro veces con ''( para la prue+a de antilo+ulinaindirecta decantando total"ente la ''( en cada lavado. 1.19 Arear dos otas de reactivo de antilo+ulina ,u"ana. 1.15 Arear una ota de c!lulas de Coo"+s si el resultado de la prue+a es neativo.Centriuar) leer y reistrar resultado) el cual de+e ser positivo si el resultado es neativo) repetir el procedi"iento. 1.15.1Reistrar los resultados o+tenidos en los or"atos correspondientes /solicitud de transusión) tareta deidentiicación) li+ros de reistro.0 1.15.2 uardar los tu+os del receptor y donante tapados en envase o radilla identiicada) a una te"peratura de 1 a : C por siete d*as. 1.15.Colocar la unidad ó unidades de sanre ó co"ponentes en el sitio para su conservación) ,asta el "o"ento de la transusión. ⁰

P$"ea C$"ada 5e(o$. s el procedi"iento inverso de la prue+a cru$ada "ayor) en donde las c!lulas del receptor se ponen en contacto con el suero ó plas"a del donante y los "is"os pasos de la prue+a cru$ada "ayor. s una prue+a opcional y se reali$a cuando al donante no se le investia detección de anticuerpos.

35



).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. . ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. Interpretación de los resultadosH 1. 'e considera #ue eGiste co"pati+ilidad si no se visuali$a ,e"ólisis ó alutinación en ninuno de los pasos de la prue+a cru$ada. 2. 'i el resultado es positivo) se invalida la prue+a) repetir el procedi"iento veriicando todos sus pasos.

,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA.

36



La persona encarada de preparar la transusión / tecnóloo) t!cnico) ener"era en ,e"oterapia 0) de+er6 cu"plir con la siuiente nor"ativa) para aseurar al receptor los "ayores +eneicios de la transusión. 1. Feriicar al "o"ento de iar la solicitud de la transusión de sanre ó co"ponentes #ue el or"ato esta+lecido lleve reistrados los datos eGiidos. 1.1 Identiicación del receptorH - No"+re y apellidos co"pletos. - N&"ero de ,istoria cl*nica) u+icación) ec,a de naci"iento) ec,a de inreso. - =ianóstico) transusiones) ra$ón de la indicación) e"+ara$o) reacciones transusionales. - No"+re) apellidos y ir"a del "!dico #ue la indi#ue. - Todos estos datos de+en estar escritos con letra clara y lei+le. 2 La "uestra de sanre de+er6 ser to"ada por el personal autori$ado cu"pliendo con los re#uisitos eGiidos en el procedi"iento de to"a de "uestra de sanre.  Antes de iniciar el procedi"iento de la prue+a de co"pati+ilidad) conor"ar la inor"ación contenida en el tu+o eti#uetado y la solicitud de transusión. 9 'i el receptor ,a reci+ido "<iples transusiones es reco"enda+le to"ar nuevas "uestras de sanre. 5 8tili$ar suero resco con "enos de 9< ,oras de eGtra*do para el procedi"iento de la prue+a de co"pati+ilidad. : Reali$ar detección de anticuerpos y prue+a de antilo+ulina directa al receptor. ; 'eleccionar la unidad ó unidades de sanre cu"pliendo nor"as esta+lecidasH -A7 y R, / = 0 co"pati+le con el receptor. -Revisar condiciones *sicas de la unidad de sanre. -Feriicar el ta"i$ae serolóico / s*ilis) C,aas) A de la ,epatitis 7) anticore) FC) ALT) IF y otros. -+servar ,e"ólisis) +ur+uas de aire) coloración del pa#uete celular. <. Cu"plir con las ases esta+lecidas / centriuación in"ediata) al+&"ina) te"peratura de ; C) prue+a de antilo+ulina indirecta. >. Resolver discrepancias de rupos sanu*neos) antes de iniciar la prue+a "ayor. 14. Identiicar la unidad de sanre con eti#ueta #ue incluya inor"ación tanto del receptor co"o donador. 11 uardar los tu+os pilotos / receptor) donador) por espacio de ; d*as en nevera a te"peratura de 1 a : C 0. 12. La prue+a cru$ada "enor es opcional / cuando no se reali$a la detección de anticuerpos al donante.0 ⁰

⁰

0.GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6n las reacciones de alutinación yMó ,e"ólisis en tu+o e interpretación de los resultados. 37



/.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

PRACTICA No.1 =ierenciación del rouleauG de una verdadera alutinación. 38



1. INTRODUCCIÓN. l enó"eno de rouleauG es una or"a de pseudoalutinación no espec*ica en la cual los ló+ulos roos son areados en or"a de pilas de "onedas) de+ido a ciertas propiedades del suero en el #ue se encuentran suspendidos. 2 PRINCIPIO Y METODOLOGÍA . =ierenciar una pseudoalutinación no espec*ica de una verdadera alutinación.


.1

#uipos de la+oratorio. Centr*ua.

.2


CANTIDAD 1  1 2 1 1 1 1

DESCRIPCIÓN 'uero resco ló+ulos roos previa"ente seleccionados Pi$eta con ''( Tu+os de ensaye de 12 3 ;5"" radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipeta Pasteur 7ul+o de o"a

39



4 PROCEDIMIENTO.

Para dierenciar el rouleauG de una verdadera alutinación se usan dos t!cnicasH a0 =espu!s de una incu+ación y resuspensión de rutina) continuar con los pasos siuientesH 1. Centriuar de nuevo la "e$cla sueroM,e"at*es 2. li"inar el suero so+renadante . 'ustituirlo por un volu"en e#uivalente de ''( /dos otas0 y "e$clar suave"ente. 9. Centriuar la "e$cla de solución salina y o+servar alutinación. 5. Leer resuspendiendo la "e$cla y o+servar alutinación. +0 Reali$ar el siuiente procedi"ientoH 1. Identiicar un tu+o de ensaye 12 3 ;5 "" 2. Colocar dos otas de suero pro+le"a . Arear una ota de la suspensión de los ló+ulos roos del 2 al % previa"ente seleccionados y lavados una ve$. 9.Incu+ar a ; C durante 4 "in 5. Retirar el so+renadante con una pipeta Pasteur :. Arear iual volu"en de ''( / dos otas 0 y "e$clar. ;. Centriuar y leer suspendiendo el +otón de c!lulas suave"ente) ⁰

).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1 Re%o$+e de Re#"!+ado# 'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. Interpretación Procedi"iento a0H 40



1. 'i las c!lulas se dispersan unior"e"ente se trata de un enó"eno de rouleauG. 2. La alutinación verdadera per"anecer6. Procedi"iento +0 1. 'i se trata de un enó"eno de rouleauG las c!lulas se dispersan unior"e"ente. 2. La verdadera alutinación no se ver6 aectada. ,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA .2 . .9

8tili$ar ló+ulos roos rescos 8tili$ar suero resco pro+le"a Lavar los ló+ulos roos seleccionados) una ve$.

. 0.GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6 la calidad de la suspensión celular. /.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

41



PRACTICA No.19 =eter"inación de crioalutininas. 1.INTRODUCCIÓN. s un procedi"iento para deter"inar e investiar Ac r*os / I 0) #ue ayudan al dianóstico de ciertas ener"edades / e.H neu"on*as por "icoplas"as) ener"edades linoprolierativas0. 2 PRINCIPIO Y METODOLOGÍ . 1. =etectar autoanticuerpos r*os en una "uestra de suero. 2. Cuantiicar anticuerpos at*picos de tipo I en una "uestra de suero.


.1

#uipos de la+oratorio.

Centr*ua. 7andea con aua natural y trocitos de ,ielo Ter"ó"etro para +a@o de ar*a

9.1


CANTIDAD

DESCRIPCIÓN 42



'uero resco ló+ulos roos previa"ente seleccionados Pi$eta con ''( Tu+os de ensaye de 12 3 ;5"" radilla uantes #uir&ricos Papel parainado L6pi$ raso Pipeta Pasteur 7ul+o de o"a

1  1 2 1 1 1 1

) PROCEDIMIENTO.

Reali$ar el siuiente procedi"ientoH 1. Identiicar un tu+o de ensaye 12 3 ;5 "" 2. Colocar dos otas de suero pro+le"a . Arear una ota de la suspensión de los ló+ulos roos del 2 al % previa"ente seleccionados y lavados una ve$. 9.incu+ar a ; C durante 4 "in 5. Retirar el so+renadante con una pipeta Pasteur :. Arear iual volu"en de ''( / dos otas 0 y "e$clar. ;. Centriuar y leer suspendiendo el +otón de c!lulas suave"ente) ⁰

).PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS 'e tra+aar6 de "anera individual. ).1

Re%o$+e de Re#"!+ado#

'e e"itir6 el reporte de resultados de la pr6ctica reali$ada. ,.CON-IAILIDAD ANALÍTICA .2

8tili$ar ló+ulos roos rescos 43


. .9


8tili$ar suero resco pro+le"a Lavar los ló+ulos roos seleccionados) una ve$.

. 0.GARANTÍA DE CALIDAD. Con la u*a del "aestro) se evaluar6 la calidad de la suspensión celular . /.ILIOGRA-ÍA. T.Ro"ero) =.ernande$) A.'oo))A.Bi"ene$) C.spino) D.=6vila.Arias. anual de t!cnicas y procedi"ientos en +anco de sanre.2E d.Caracas) Fene$uela)ditorial Prado. 244.

Nor"as enerales utili$adas en 7anco de 'anre 1 .vitar eGtraer "uestras de sanre de coneGiones de soluciones. 2. 'eparar toda "uestra de sanre co"pleta  .8tili$ar concentraciones de ,e"at*es en suspensión entre 2 a 5 % 9 .8tili$ar proporciones de una ota de suspensión de ,e"at*es con dos otas de suero. 5. Cu"plir con la centriuación y tie"po esta+lecido en cada procedi"iento :. =ear retraer el co6ulo por espacio de cinco a die$ "inutos. ; .Reali$ar lectura de las reacciones cuantiicando en cruces y reistrando la inor"ación) tu+o en "ano. < .La presencia de ,e"ólisis en la lectura de un resultado se interpreta co"o una reacción A Ac positivo y se reistra co"o ,e"ólisis parcial/P0 o ,e"ólisis total/T0 >. Todo resultado d!+il o dudoso de+er6 o+servarse con lupa o "icroscopio. 14. Reistrar todos los resultados en tu+os previa"ente identiicados) ,oa de solicitud de eG6"enes y li+ro correspondiente 11. 8tili$ar "aterial de vidrio li"pio y sin rayas para reali$ar los procedi"ientos 12 .Conservar los reactivos serolóicos y celulares a te"peratura de 1 a :UC se&n 44



las instrucciones del a+ricante 1. Controlar la te"peratura de la nevera entre 1 a : U C 19. antener el +a@o de ar*a a te"peratura de ;U C. 15. Ante cual#uier duda so+re el resultado esperado reali$ar de nuevo el eGperi"ento 1: .antener en orden el ca"po y sitio de tra+ao 1;. =escartar el "aterial usado en procedi"ientos de ener"os cuyo dianóstico sea 'I=A) ,epatitis u otros. 1<. =escartar las unidades con serolo*a positiva) rotularse y enviarse al cre"atorio para su incineración. 1>. No renar la centr*ua cuando est6 uncionando 24. Pasar con pipeta de pasteur el suero al tu+o previa"ente identiicado

Nor"as de 7ioseuridad l principal rieso #ue corre el personal del la+oratorio es la conta"inación de las "anos y de las "ucosas oculares) nasal y +ucal por sanre y otras secreciones. sa conta"inación se produce co"o consecuencia de cortes y pinc,a$os provocados por o+etos ailados) as* co"o por el derra"e y las salpicaduras de "aterial de "uestra. n el presente "anual se descri+en pr6cticas y procedi"ientos ideados para #ue esos accidentes se redu$can al "*ni"o. 1 Colocarse uantes) desec,e los uantes sie"pre #ue piense #ue se ,an conta"inado) l6vese las "anos y pónase un par de uantes nuevos. 2 No to#ue con las "anos enuantadas los oos) la nari$ y otras "ucosas eGpuestas con la piel descu+ierta  No a+andone el tra+ao ni se pasee por el la+oratorio con los uantes puestos. 9 L6vese las "anos con aua y a+ón in"ediata"ente despu!s de ,a+erse conta"inado y una ve$ #ue ,aya ter"inado su tra+ao. 5 ientras est! en el la+oratorio) pónase +ata o unior"e) son preeri+les las +atas laras. Vu*tese la ropa de protección antes de salir del la+oratorio.

45



: antena el la+oratorio li"pio y ordenado) evitando la presencia de "aterial y e#uipo #ue no tenan relación con el tra+ao. ; =esinecte la supericie de tra+ao una ve$ ter"inada cada tarea y al inali$ar la ornada) con desinectante eneral eica$ puede usarse una solución de ,ipoclorito con una concentración de 4.1 % de cloro li+re /1  L 1444 pp"0 < vite usar auas y otros instru"entos) colo#ue las auas) erinas y otros instru"entos usados) en un recipiente i"perora+le. No vuelva a tapar las auas usadas ni las desacople de las erinas. > Nunca pipetee l*#uidos con la +oca. 14 14. Lleve a ca+o todos los procedi"ientos t!cnicos de or"a tal #ue sea "*ni"o el rieso de producir aerosoles) otitas) salpicaduras o derra"e. 11 ientras est6 en el la+oratorio no co"a) +e+a) u"e ni se apli#ue cos"!ticos) ta"poco uarde ali"entos ni enseres personales dentro de la nevera y conelador. 12. Ase&rese de #ue eGista un prora"a eica$ de luc,a contra insectos y roedores. 1. 'i se derra"a el "aterial inectado c&+rase en pri"er luar con papel u otro "aterial a+sor+ente. Fi!rtase un desinectante alrededor de la $ona aectada y so+re el "aterial a+sor+ente y d!ese actuar durante die$ "inutos. l desinectante #ue se reco"ienda de ordinario para li"piar supericies conta"inadas es una solución de ,ipoclorito con 4.55 de cloro li+re /5 ML 5444 pp"0. La "e$cla de desinectante y "aterial derra"ado de+e li"piarse con "aterial a+sor+ente) el cual se dear6 en el recipiente de desec,os conta"inados. A continuación ,ay #ue li"piar de nuevo la supericie con desinectante. =urante todo este proceso ,ay #ue llevar uantes y evitar el contacto directo entre las "anos enuantadas y el "aterial deno"inado desinectante. Los vidrios o pl6sticos rotos se recoer6n con esco+a y recoedor. 19. n caso de pinc,a$os con auas u otros o+etos) cortes y conta"inación de la piel con "aterial derra"ado o salpicado) ,ay #ue lavarse concien$uda"ente con aua y a+ón. 'i se produce una ,erida sanrante) de+e avorecerse la ,e"orraia. Todo derra"e) accidente y eGposición con "aterial ineccioso) se co"unicar6 de in"ediato alsupervisor del la+oratorio) y se llevar6 un reistro por escrito de todo incidente de !ste tipo) acilitando la evaluación) viilancia) trata"iento y en caso necesario) el asesora"iento "!dico apropiado.

46

Manual de Prácticas de Inmunohematología.

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