BAB I PEMBUATAN PEMBUATAN MEDIA PERTUMBUHAN MIKROBA DAN STERILISASI A. TUJU TUJUAN AN PRAK PRAKTIK TIKUM UM 1. Mengetahui Mengetahui cara membuat membuat media pertumbuhan pertumbuhan mikroorga mikroorganisme nisme 2. Menget Mengetahui ahui jenis jenis dan kegunaan kegunaan media media 3. Menget Mengetahui ahui cara cara menst mensteri erilka lkan n media media B. DASA DASAR R TE TEOR ORII 1. Media Media Per Pertu tumbu mbuha han n Mir Mir!b !ba a Medium Medium pertum pertumbuh buhan an (disin (disingkat gkat medium) medium) adalah adalah substa substansi nsi yang yang
terdiri atas campuran zat-zat makanan (nutrien) yang dipergunakan untuk pemeliharaan dan pertumbuhan mikroorganisme. Mikroorganisme juga merupakan mahluk hidup, untuk memeliharanya dibutuhkan medium yang harus mengandung semua zat yang diperlukan untuk pertumbuhannya. Media pertumbuhan harus memenuhi persyaratan nutrisi yang dibutuhkan oleh oleh suatu suatu mikroorg mikroorganis anisme me (tlas, (tlas, 2!!").
#utris #utrisii yang yang dibutuh dibutuhkan kan
mikroorganisme untuk pertumbuhannya meliputi karbon, nitrogen, unsur non logam seperti sul$ur dan $os$or, unsur logam seperti %a, &n, #a, ', %u, Mn, Mg, dan e, itamin, air, dan energi (%appucino, 2!1"). *elain itu, secara umum nutrien dalam media pembenihan harus mengandung seluruh elemen yang penting untuk sintesis biologik oranisme baru. gar mikroba mikroba dapat tumbuh dengan baik dalam suatu medium, medium, maka maka harus dipenuhi syarat +syarat antara lain (*ingleton dan *ainsbury, 2!!) a. Medium Medium harus harus megandu megandung ng semua semua nurtisi nurtisi yang mudah mudah digunak digunakan an oleh mikroba. b. Medium harus mempunyai tekanan osmose , tekanan muka, dan p yang sesuai. c. Medium Medium tida tidak k mengand mengandung ung zat zat + zat zat pengh penghamb ambat. at. d. Medi Medium um haru haruss ste steri ril. l. /ilihat dari peranannya pada kehidupan mikroba, terdapat kaitan erat antara medium pertumbuhan dengan nutrisi pertumbuhan. Medium harus mengand mengandung ung nutris nutrisii yang yang sesuai sesuai dengan dengan kebutuh kebutuhan an mikroo mikroorg rgani anisme sme
terten tertentu. tu. *uatu *uatu mikroo mikroorg rgami amisme sme belum belum dapat dapat hidup hidup dalam dalam kompos komposisi isi nutrisi dan medium yang sama dengan mikroorganisme yang lain. 0entuk media ada tiga macam yang dapat dibedakan dari ada atau tidaknya bahan tambahan berupa bahan pemadat seperti agar-agar atau gelatin. 0entuk media tersebut yaitu a. Media a adat Media padat merupakan media yang mengandung banyak agar atau zat pemadat kurang lebih 1 agar sehingga media menjadi padat. Media ini dapat dibedakan menjadi tiga jenis menurut bentuk dan 4adahny 4ada hnyaa yai yaitu, tu, med media ia teg tegak, ak, med media ia mir miring ing,, dan med media ia lem lempen peng. g. Media tegak menggunakan tabung reaksi yang ditegakkan sebagai 4ada 4a dahn hny ya,
med ediia
mirrin mi ing g
men engg ggun unak akan an
tab abun ung g
reak re aksi si
yan ang g
dimiri dim iringka ngkan, n, sed sedangk angkan an med media ia lem lempeng peng men menggun ggunaka akan n pet petrid ridish ish (plate (pl ate)) seb sebagai agai 4ada 4adahny hnya. a. Med Media ia ini umu umumny mnyaa dig digunak unakan an unt untuk uk pertumbuhan koloni bakteri atau kapang. kapang.'a 'ala lau u ke dalam dalam medi mediaa ditambahkan antara 1!-1 gram tepung agar-agar per 1!!! ml media. 5umlah tepung agar-agar yang ditambahkan tergantung kepada jenis atau kelompok mikroba yang dipelihara. 'alau ke dalam media tidak ditambahkan zat pemadat, umumnya dipergunakan untuk pembiakkan mikroalga tetapi juga mikroba lain, terutama bakteri dan ragi. da yang memerlukan memerlukan kadar air tinggi sehingga jumlah tepung agar-agar agar-agar rendah. rendah. 6etapi etapi ada pula pula yang memerl memerlukan ukan kandunga kandungan n air rendah rendah sehingga sehingga penambahan penambahan tepung agar-agar agar-agar haru sedikit. Media padat umumya dipergunakan untuk bakteri, ragi, jamur dan kadang-kadang juga mikroalga b. Media semi padat Media semi padat atau semi cair merupakan media yang mengandung agar kurang dari yang seharusnya kurang lebih !,3 - !," sehingga media menjadi kenyal, tidak padat dan tidak begitu cair. 7mumnya digunakan untuk pertumbuhan mikroba yang banyak memerlukan air
dan hid hidup up aner anerobi obik k dan unt untuk uk mel melihat ihat per perger gerakan akan mik mikrob roba. a.'alau 'alau penambahan zat pemadat hanya ! atau kurang dari yang seharusnya. seharusnya. 8ni umumnya umumnya diperlukan diperlukan untuk pertumbuhan pertumbuhan mikroba mikroba yang banyak memerlukan kandungan air dan hidup anaerobic atau $akultati$. c. Media cair Media cair merupakan media yang tidak ditambahi bahan pemadat, umumnya digunakan untuk pertumbuhan mikroalga. 'alau mikroalga. 'alau ke dalam media tidak ditambahkan zat pemadat, umumnya dipergunakan untuk pembiakkan mikroalge tetapi juga mikroba lain, terutama bakteri dan ragi. ". Steri# eri#ii$a$i $a$i *terilisasi
meru erupakan
proses
untuk
mema ematikan kan
semua
mikroorgan mikroorganisme isme yang hidup. danya pertumbuhan pertumbuhan mikro menyatakan menyatakan bah4a pertambahan bakteri masih berlangsung dan tak sempurnanya proses sterilisasi. 5ika proses sterilisasi sterilisasi berlangsung sempurna, maka spora bakteri yang merupakan bentuk b entuk paling resikan dari kehidupan mikroba tak akan terlihat lagi. *terilisasi merupakan metode praktis yang dirancang untu untuk k
memb member ersi sihk hkan an
dari dari
mikro ikroor orga gani nism sme, e,
atau atau
seng sengaj ajaa
untu untuk k
menghambat menghambat pertumbuhanny pertumbuhannya. a. Mikroorgan Mikroorganisme isme sangat berbeda, berbeda, dalam kelemahannya kelemahannya terdapat terdapat berbagai berbagai macam agen antimikroba antimikroba (*uria4iria, (*uria4iria, 2!!). %ara kerja sterilisa sterilisasi si ialah ialah cara kerja agar terhindar terhindar dari kontaminasi kontaminasi,, cara steril ini digunakan pada pembuatan media, dan pembuatan preparat. *terilisasi dapat dilakukan dengan cara a. isik yang dibagi menjadi beberapa bagian 1. /engan hot air sterilisation oven, oven , bahan dari gelas di bungkus dengan aluminium foil , dengan suhu 19!:-2!:% selama 2 jam. 2. anas anas basah basah dengan dengan tekanan tekanan suhu 121:% 121:% selama selama 1 menit. menit. lat lat yang digunakan adalah autoclave. autoclave. 3. Pressure Pressure cooker , panaskan air mendidih, biarkan klep uap terbuka agar agar kelu keluar ar uap uap kemu kemudi dian an klep klep uap uap ditu ditutu tup, p, liha lihatt suhu suhu dan dan tekanan, bila suhu telah 121:% dengan tekanan 1, atm, dijaga
konst konstan an sela selama ma 1 meni menit. t. 'emu 'emudia dian n buka buka klep klep uap uap hing hingga ga tercapai tekanan nol, dan setelah suhu mencapai suhu kamar, alat dan bahan dikeluarkan. b. 'imia, dengan menggunakan zat-zat kimia seperti desin$ektan, antiseptik. c. ;adi ;adias asii deng dengan an sina sinarr ultra violet , biasanya digunakan pada ruangan dan alat + alat plastik. d. Filter dengan dengan membran filter membran filter dan dan vacum pump. pump. lat-alat yang dipakai ketika penanaman, harus dalam keadaan steril. lat-alat logam dan gelas dapat disterilkan dalam autokla$. lat tanam seperti pinset dan gunting dapat juga disterilkan dengan pembakaran atau deng dengan an pema pemana nasa san n dala dalam m bacticinerator (8rianto, (8rianto, 2!!). *terilisa *terilisasi si dengan panas adalah unit operasi operasi dimana bahan dipanaskan dipanaskan dengan suhu yang cukup tinggi dan 4aktu yang cukup lama untuk merusak mikroba dan aktii aktiitas tas enzim. enzim. *ebagai *ebagai hasilny hasilnya, a, bahan bahan yang dister disteril ilkan kan akan akan memiliki daya simpan lebih dari enam bulan pada suhu ruang. %ontoh proses sterilisasi adalah produk olahan dalam kaleng seperti kornet, sarden dan sebagainya (8rianto, 2!!). %. In!u#a$i 8nokulasi 8nokulasi adalah adalah pekerjaan pekerjaan meminda memindahkan hkan bakteri bakteri dari medium yang
lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian ketelitian yang sangat tinggi. tinggi. Media Media untuk untuk membiak membiakkan kan bakter bakterii harusl haruslah ah steril steril sebelu sebelum m diguna digunakan. kan. enc encema emara ran n teru teruta tama ma bera berasal sal dari dari udar udaraa yang yang menga mengand ndung ung banya banyak k mikroo mikroorga rganis nisme. me. emind emindaha ahan n biakan biakan mikrob mikrobaa yang yang dibiak dibiakkan kan harus harus sangat hati-hati dan mematuhi prosedur laboratorium agar tidak terjadi kontaminasi.
&. Pen' Pen'am amat atan an Mir Mir!b !ba a ertumbuhan merupakan proses bertambahnya ukuran atau subtansi
atau atau masa masa zat zat suat suatu u orga organi nism sme, e, misa misalny lnyaa kita kita makhl makhluk uk makr makro o ini dikat dikatak akan an tumb tumbuh uh ketik ketikaa bert bertam ambah bah ting tinggi gi,, bert bertam amba bah h besar besar atau atau bertambah berat. ada organisme bersel satu pertumbuhan lebih diartikan sebagai pertumbuhan koloni, yaitu pertambahan jumlah koloni, ukuran koloni koloni yang semakin semakin besar besar atau atau subtan subtansi si atau atau massa massa mikroba mikroba dalam koloni tersebut semakin banyak, pertumbuhan pertumbuhan pada mikroba mikroba diartikan diartikan sebagai sebagai pertam pertambaha bahan n jumlah jumlah sel mikroba mikroba itu itu sendir sendiri. i. ertum ertumbuha buhan n mikroo mikroorga rganis nisme me tergan tergantun tung g dari dari tersed tersedian iannya nya air. air. 0ahan0ahan-baha bahan n yang yang terl terlar arut ut dala dalam m
air air, yang yang digu diguna naka kan n
oleh oleh mikr mikroo oorrgani ganism smee
untu untuk k
membentuk bahan sel dan memperoleh energi, adalah bahan makanan. 6untutan 6untutan berbagai mikroorga mikroorganisme nisme yang menyangkut menyangkut susunan susunan larutan larutan makanan dan persyaratan lingkungan tertentu, sangat berbeda-beda. 7ntuk 7ntuk menghi menghitun tung g jumlah jumlah mikrob mikrobaa suatu suatu bahan bahan dapat dapat dilaku dilakukan kan deng dengan an berm bermaca acamm-ma macam cam cara caraa, a, terg tergant antun ung g pada pada bahan bahan dan jeni jeniss mikr mikroba oba yang yang ditu ditumb mbuhk uhkan an atau atau dike dikemb mban angbi gbiak akan an.. /ala /alam m anal analis isaa mikrobilogi, menghitung jasad renik mikroorganisme suatu sedian,harus diperh diperhitu itungk ngkan an sii$at sii$at-si -si$at $at dari dari bahan bahan yang akan diperi diperiksa ksa,, terutam terutamaa kelarutan, kemungkinan adaya zat anti mikroba,dan derajat kontaminasi yang diperkirakan. ert ertum umbuh buhan an dan
perk perkem emba banga ngan n
mikr mikror orga gani nism smee
dala dalam m
bahan bahan
(makanan), akan menyebabkan perubahan + perubahan tertentu yaitu perubahan yang bersi$at $isik dan kimia4i, sebagai contoh yaitu konsistens konsistensii bahan menjadi lunak, timbul gas atau aroma tertentu dan zat racun yang membahayakan. 5umlah penyebaran bakteri=mikroorganisme ada ada baha bahan n (maka (makana nan) n) yang yang seda sedang ng meng mengal alam amii pembus pembusuka ukan n sanga sangatt berariasi jumlahnya dan tidak sama jenis spesiesnya serta tergantung pada arietas, habitat, susunan kimia, cara penanganan, suhu penyimpanan, dan lain-lain.
(.ALAT DAN BAHAN 1. ALAT
(a)
(d)
(g)
(b)
(e)
(h)
(c)
($)
(i)
(j)
(k)
>ambar 8. 1 lat yang digunakan pada praktikum pe mbuatan media pertumbuhan mikroba
'eterangan a. utokla$ b. >elas 0eaker c. 0unsen d. >el >elas arlo arloji ji e. >elas ukur $. >unting g. eng engad aduk uk kaca kaca h. enj enjepi epitt tabu tabung ng reak reaksi si i. *patula j. 6abung 6abung reaksi k. 6eko ukur kur ". BAHAN a. ir ir seb seban any yak ! m? b. @itamin @itamin 0 c. >ula >ula seba sebany nyak ak gra gram m d. 0ubu 0ubuk k aga agarr ins insta tan n e. 'apas $. erban g. Aeast
D.(ARA KERJA 1. Ster Steri# i#i$ i$a$ a$ii A#at #at
6abung reaksi *uhu 12!!% selama menit *terilisasi tabung reaksi (utokla$)
>ambar 8.2 *kema *terilisasi lat ". Pembu Pembuata atan n Med Media ia A'ar 'ar
@itamin @itamin 0 1=2 butir
gram gula pasir
3 gram bubuk agar + agar
emanasan ! m?air
engadukan sampai homogen enuangan ke 4adah 1=3 olume tabung reaksi embekuan Mediaembuatan agar >ambar 8.3 *kema Media gar %. In!u#a$i
emindahan mikroorganisme ke medium yang telah dibuat
enyegelan medium yang telah dibuat
enyimpanan hasil inokulasi t B 9 hari
0akteri tumbuh dan berkembang menjadi banyak >ambar 8." *kema 8nokulasi
E. HASIL PEN)AMATAN 1. Data Data Pen Pen'a 'ama mata tan n
6abel 6abel 8.8 asil engamatan embuatan Media ertumbuhan Mikroba dan *terilisasi #o 1 2
3
"
erlakuan *ter *teril ilis isas asii tabu tabung ng reak reaksi si meng menggu guna naka kan n autokla$ pada suhu 12!!% selama menit Mend Mendiidihk dihkan an ! m? air air C bubu bubuk k aga agarr 3 gram C gula pasir gram C D butir itamin 0 kompleks yang sudah dihaluskan sambil diaduk Medi Mediaa aga agarr dit ditua uang ngka kan n ke ke dal dalam am tabu tabung ng reaksi 1=3 olumenya kemudian dimiringkan dan didiamkan pada suhu ruang Masukan bibit Aspergillus Niger Niger dengan dengan
engamatan 6abung 6abung reaksi steril ?arutan ber4arna kuning dan kental
Media agar mengeras
0ibit menempel pada
ka4at yang sudah dipanaskan secara zigzag Eadah dah dis diseg egel el rapat apat dan dan did didiiamka amkan n dalam suhu ruang engamatan hari kedua ( 5umat)
9
engamatan hari keenam ( *elasa)
F
engamatan hari ketujuh ( ;abu)
G
engamatan ha hari kedelapan ( 'amis)
media agar
Media agar ber4arna kuning dan jumlah mikrobanya sedik Media agar tetap ber4arna kuning. Mikroba mulai tumbuh banyak dari ada pengamatan sebelumnya. Media agar ber4arna kuning, mikroba mulai tumbuh merata dibeberapa bagian agar Media agar ber4arna kuning, mikroba tumbur merata disemua bagian agar
). KESIMPULAN DAN SARAN 1. Ke$im* $im*u u#an #an a. da bebera beberapa pa jenis jenis media media yaitu yaitu media cair cair,, media media setengah setengah
padat dan media padat. ialah
sebagai
tempat
menge mengemb mban angbi gbiakk akkan an
*edangkan kegunaan dari media untuk
menumbuhkan
mikr mikroo oorg rgan anis isme me
yang yang
kita kita
dan ingi ingin n
biakkan. b. *terilisasi dapat dilakukan dengan tekanan uap tinggi meng menggun gunaka akan n auto autokla kla$$ sehi sehingg nggaa alat alat dan medi mediaa ster steril il . *ter *teril ilis isas asii
dil dilakuk akukan an
bert bertuj ujua uan n
unt untuk
mengh enghin inda dari ri
kontami kontaminas nasi, i, yaitu yaitu masukny masuknyaa mikroo mikroorg rganis anisme me yang yang tidak tidak diinginkan. &. Saran a. ati + hati hati dalam dalam memindahka memindahkan n bibit bibit dari dari media media lama lama ke ke media baru b. ada saat pemanasan, aduklah campuran terus menerus agar campuran cepat homogen c. aa saat saat steri sterilisas lisasii pastika pastikan n semua semua prosedur prosedur yang dilakuk dilakukan an sesuai dengan *< d. 0erhati-hat 0erhati-hatilah ilah pada saat saat menuangk menuangkan an agar agar dari dari gelas gelas beaker beaker ke tabung reaksi
DA+TAR PUSTAKA
tlas, ;onald M. (2!!"). Handbook (2!!"). Handbook of Microbiological Media fourth Edition Volume Volume
1. 7nited *tates <$ merica merica %;% ress. ress. %appuccino, 5. > H #atalie, *. (2!13). Manual (2!13). Manual Laboratorium iologiI iologiI alih bahasa, #ur Mi$tahurrahmah. 5akarta J>%. >arr >arra4 a4ay ay,, M. <., ;. %. Jan Jans. s. 1GF". 1GF". Fungal Nutrition and Ph!siolog!. Ph!siolog!. #e # e4 Aork5ohn Eiley and *ons. 8rianto, 'oes. 2!!. Mikrobiologi 2!!. Mikrobiologi "ilid "ilid 1. 1. Arama Eidya 0andung. Meryandini, Meryandini,nja nja dkk, 2!!G. #solasi akteri dan $arakterisasi En%imn!a& @ol. @ol. 13, #o. 1I 80 elczar., Michael 5. dan J. %. *. %han, 2!!9. 'asar(dasar 2!!9. 'asar(dasar Mikroorganis Mikroorganisme me.. 5akarta 7niersitas 8ndonesia ress.
;ei ;einy, ny, *, *. 2!12. 2!12. Potensi Lactobacillus Acidophilus A)** +,-. /ebagai iopreservatif Pada 0ebusan 'aging #kan )ongkol . 5urnal 85*, 88(2) !"+ 13. *e$tian, /eky dkk, 2!12. Pembuatan 2!12. Pembuatan Etanol 'ari $ulit Pisang Menggunakan Metode
Hidrolisis Hidrolisis En%imatik dan Fermentasi. Fermentasi. 5urnal 6eknik 'imia #o. 1, @ol. 1F I 7#*;8. *ingleton, *ingleton, ., ., dan *ainsbury, *ainsbury, /. 2!!. 'ictionar! 2!!. 'ictionar! of Microbiolog! and Molecular iolog!& Edisi Edisi ke(. ke(. 7' 5ohn 4iley H *ons ?td. 22F-22G *uria4iria, 7. 2!!. Mikrobiologi 2!!. Mikrobiologi 'asar . apas *inar *inanti 5akarta. *4asta4ati, ronthea dkk. 2!!F. Pemanfaatan 2!!F. Pemanfaatan Limbah $uliat 2dang Men3di Edible *oating untuk Mengurangi Pencemaran Lingkugan. Lingkugan. @ol. " #o." I 7#/8 Ealuyo. Ea luyo. ?. 2!!9. Mikrobiologi 2!!9. Mikrobiologi 2mum. 2mum. 7MM ress. Malang
