LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA BAHAN ALAM PERCOBAAN 3 DAN 4
Isolasi Glikosida Flavonid dari Manihot utilissima utilissima Folium dan Identifikasi Falovonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis
Disusun oleh : 1. Nisadiyah Faridatus Shahih 2. Rizky Ariyanti 3. Wahyu Nunggal P. 4. Lala Febria 5. Rafdy Falih Albani
(G1F012064) (G1F012064) (G1F012070) (G1F012070) (G1F012072) (G1F012072) (G1F012074) (G1F012074) (G1F012076) (G1F012076)
Golongan/kelompok
:
IV B/Tanin
Hari/tanggal
:
Kamis, 12 Juni 2014
Asisten
:
Glorya - Zaky
LABORATORIUM BIOLOGI FARMASI JURUSAN FARMASI FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU-ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN PURWOKERTO 2014
PERCOBAAN III ISOLASI GLIKOSIDA FLAVONOID DARI M anihot util iss FOLIUM FOLIUM issima
A. Tujuan Praktikum
Memahami dan melakukan isolasi flavonoid dari daun ketela ( Manihot ( Manihot utilissima). utilissima). B. Pendahuluan
Senyawa flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar yang ditemukan di alam. Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu dan biru serta sebagai zat warna kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan (Lenny, 2006). Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90°C selama 15 menit. Infusa adalah proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahan – bahan – bahan nabati. Penyarian dengan cara ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang. Oleh sebab itu sari yang diperoleh dengan cara ini tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. Cara ini sangat sederhana dan sering digunakan oleh perusahaan obat tradisional. Dengan beberapa modifikasi cara ini sering digunakan unuk membuat ekstrak. Dekokta adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90°C selama 30 menit. Penguapan ekstrak larutan dilakukan dengan penguap pengurangan tekanan, yaitu rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak yang kental (Harborne, 1987).
PERCOBAAN III ISOLASI GLIKOSIDA FLAVONOID DARI M anihot util iss FOLIUM FOLIUM issima
A. Tujuan Praktikum
Memahami dan melakukan isolasi flavonoid dari daun ketela ( Manihot ( Manihot utilissima). utilissima). B. Pendahuluan
Senyawa flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar yang ditemukan di alam. Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu dan biru serta sebagai zat warna kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan (Lenny, 2006). Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90°C selama 15 menit. Infusa adalah proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahan – bahan – bahan nabati. Penyarian dengan cara ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang. Oleh sebab itu sari yang diperoleh dengan cara ini tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. Cara ini sangat sederhana dan sering digunakan oleh perusahaan obat tradisional. Dengan beberapa modifikasi cara ini sering digunakan unuk membuat ekstrak. Dekokta adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90°C selama 30 menit. Penguapan ekstrak larutan dilakukan dengan penguap pengurangan tekanan, yaitu rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak yang kental (Harborne, 1987).
C. Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam praktikum adalah aquadest, eter, asam klorida (HCl 2 N), dan natrium sulfat anhidrat. Sedangkan alat yang digunakan dalam praktikum adalah panci infusa, corong besar, erlenmeyer (50 ml dan 250 ml), tabung reaksi, corong pisah (250 ml), cawan porselen, flakon (3 buah). D. Cara Kerja
50 gram serbuk bahan
Dimasukkan ke dalam panci infusa 1 (atas), Ditambahkan dengan 500 ml aquadest, Diletakkan diatas panci infusa 2 (bawah) yang telah berisi air biasa, tunggu sampai mendidih dan suhu di panci atas mencapai 90oC, dibiarkan selama 15 menit (untuk mendapatkan infusa), Disaring melalui corong buchner sehingga diperoleh filtrat yang jernih, Dipindahkan ke dalam erlenmeyer 250 ml, Disimpan dalam almari es hingga terbentuk kristal amorf putih kekuningan ( ± 1 minggu),
Filtrat + kristal amorf
Dituang sebagian besar filtrat pada erlenmeyer ke tempat lain dengan hati-hati supaya kristal tidak ikut tertuang, Disaring dengan kertas saring yang telah ditara hingga memperoleh kristal, jika masih ada kristal yang menempel pada dasar erlenmeyer maka bilang dengan air es dan saring, Dikeringkan kertas saring bersama endapan pada suhu 50oC selama 30 menit, Ditimbang untuk memperoleh rendemen, Diambil sedikit padatan dengan ujung spatel kecil, Dilarutkan dalam 2 ml campuran metanol-air sama banyak dalam flakon (sari I), Diambil sisa padatannya, masukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan dengan 10 ml HCl 2 N, Ditaruh corong kecil berisi kapas di atas tabung untuk mengurangi penguapan Dilakukan refluks pada penangas air mendidih selama 1 jam, Didinginkan dan dimasukkan ke dalam corong pisah yang berisi eter sebanyak 10 ml, Dikocok dan tunggu hingga terbentuk dua lapisan, Dipisahkan bagian air asam dan organik eter,
Dikocok kembali lapisan air asamnya dengan 10 ml dietil eter yang baru dalam corong pisah, Dipisahkan bagian air asam dan organik eter, dan dicampurkan dengan yang pertama, Disaring sari eternya dengan kertas saring yang berisi 1 gram natrium sulfat anhidrat ke dalam cawan porselin, Diuapkan eternya tanpa pemanasan dan larutkan residu yang diperoleh dengan 2 ml metanol dalam flakon (Sari II). Diuapkan lapisan air asam hasil hidrolisis dengan cawan porselin di atas penangas air dengan hembusan angin sehingga cairan tinggal kira-kira 1ml dan tuangkan ke dalam flakon (Sari III)
Sari I, Sari II, Sari III
E. Hasil dan Pembahasan E.1. Hasil Pengamatan No. Perlakuan 50 gram serbuk bahan dimasukkan ke 1. dalam panci infusa 1 (atas), Kemudian ditambahkan dengan 500 2. ml aquadest, Kemudian diletakkan diatas panci 3. infusa 2 (bawah) yang telah berisi air biasa, tunggu sampai mendidih dan suhu di panci atas mencapai 90oC, dibiarkan selama 15 menit (untuk mendapatkan infusa), Kemudian disaring melalui corong 4. buchner sehingga diperoleh filtrat yang jernih, Kemudian dipindahkan ke dalam 5. erlenmeyer 250 ml, Kemudian disimpan dalam almari es 6. hingga terbentuk kristal amorf putih kekuningan ( ± 1 minggu), Kemudian dituang sebagian besar 7. filtrat pada erlenmeyer ke tempat lain dengan hati-hati supaya kristal tidak ikut tertuang, Kemudian disaring dengan kertas 8. saring yang telah ditara hingga memperoleh kristal, jika masih ada kristal yang menempel pada dasar erlenmeyer maka bilang dengan air es dan saring, Dikeringkan kertas saring bersama 9. endapan pada suhu 50 oC selama 30 menit,
10.
11. 12.
Ditimbang untuk memperoleh rendemen, nmn oo n i 1 oo n Diambil sedikit padatan dengan ujung spatel kecil, Dilarutkan dalam 2 ml campuran
Hasil Pengamatan
Diperoleh filtrat jernih berwarna coklat
Terbentuk kristal amorf putih kekuningan pada dasar erlenmeyer Kristal tetap pada dasar erlenmeyer
Kertas saring = 0,526 gram
Kertas saring + bahan = 0,6522 gram Bahan = 0,1262 gram Rendemen =(0,1262/50)x100% =0,2524%
Diperoleh sari I
metanol-air sama flakon (sari I),
13.
14.
15. 16.
17.
18.
banyak
dalam
Diambil sisa padatannya, masukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan dengan 10 ml HCl 2 N, Ditaruh corong kecil berisi kapas di atas tabung untuk mengurangi penguapan Dilakukan refluks pada penangas air mendidih selama 1 jam, Didinginkan dan dimasukkan ke dalam corong pisah yang berisi eter sebanyak 10 ml, Dikocok dan tunggu hingga terbentuk dua lapisan,
Dipisahkan bagian organik eter,
air
asam
dan
Dikocok kembali lapisan air asamnya dengan 10 ml dietil eter yang baru dalam corong pisah, 20. Dipisahkan bagian air asam dan organik eter, dan dicampurkan dengan yang pertama, 21. Disaring sari eternya dengan kertas saring yang berisi 1 gram natrium sulfat anhidrat ke dalam cawan porselin, 22. Diuapkan eternya tanpa pemanasan dan larutkan residu yang diperoleh dengan 2 ml metanol dalam flakon (Sari II).
Warna bagian air = jernih Warna bagian organik kuning jernih
eter
=
Warna bagian air = jernih Warna bagian organik kuning jernih
eter
=
19.
Diperoleh sari II
23.
Diuapkan lapisan air asam hasil Diperoleh sari III hidrolisis dengan cawan porselin di atas penangas air dengan hembusan angin sehingga cairan tinggal kira-kira 1ml dan tuangkan ke dalam flakon (Sari III)
E. 2. Pembahasan
Pada praktikum ini bertujuan untuk dapat memahami dan melakukan isolasi flavonoid dari daun ketela ( Manihot utilissima). Senyawa flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar yang ditemukan di alam. Senyawasenyawa ini merupakan zat warna merah, ungu dan biru serta sebagai zat warna kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan. Flavonoid mempunyai kerangka dasar karbon yang terdiri dari 15 atom karbon, dimana dua cincin benzene (C6) terikat pada suatu rantai propane (C3) sehingga bentuk susunan C6C3-C6 (Lenny, 2006). 3' 4'
2' 8 7
(8a) 9
A 6 5
1
1'
O
B 5'
2 6'
C 3 10 (4a)
4 O
Gambar 1. Struktur Senyawa Flavonoid (Lenny, 2006). Sebagian besar senyawa flavonoida alam ditemukan dalam bentuk glikosida, dimana unit flavonoid terikat pada suatu gula. Glikosida adalah kombinasi antara suatu gula dan suatu alcohol yang saling berikatan melalui ikatan glikosida. Pada prinsipnya, ikatan glikosida terbentuk apabila gugus hidroksil dari alcohol beradisi kepada gugus karbonil dari gula sama seperti adisi alcohol kepada aldehida yang dikatalisa oleh asam menghasilkan suatu asetal. Pada hidrolisa oleh asam, suatu glikosida terurai kembali atas komponen-komponennya menghasilkan gula dan alcohol yang sebanding dan alcohol yang dihasilkan disebut dengan aglikon. Residu gula dari glikosida flavonoida alam adalah glukosa, ramnosa, galaktosa dan gentibiosida. Flavonoida dapat ditemukan sebagai mono- , di- atau triglikosida dimana satu, dua atau tiga gugus hidroksil dalam molekul flavonoid terikat oleh gula. Poliglikosida larut dalam air dan sedikit larut dalam pelarut organic seperti eter, benzene, kloroform dan aseton. Senyawa-senyawa flavonoid
yang umumnya bersifat antioksidan dan banyak yang telah digunakan sebagai salah satu komponen bahan baku obat-obatan (Anonim, 2008). Pada percobaan kali ini digunakan simplisia dari daun ketela pohon ( Manihot utilissima. Berikut taksonominya: Kingdom
: Plantae
Divisi
: Spermatophyta
Sub Divisi
: Angiospermae
Kelas
: Dicotyledoneae atau biji berkeping dua
Ordo
: Euphorbiales
Famili
: Euphorbiaceae
Genus
: Manihot
Spesies
: Manihot utilissima Pohl. ; Manihot esculenta Crantz sin.
Ketela pohon atau singkong, dalam bahasa Inggris bernama cassava, adalah pohon tahunan tropika dan subtropika dari keluarga Euphorbiaceae. Umbinya dikenal sebagai makanan pokok penghasil karbohidrat dan daunnya sebagai sayuran. Di Indonesia sendiri ketela pohon menjadi makanan bahan pangan pokok setelah beras dan jagung. Manfaat daun ketela pohon sebagai bahan sayuran memiliki protein cukup tinggi dan Umbi singkong merupakan sumber energi yang kaya karbohidrat namun sangat miskin protein. Kayunya bisa digunakan sebagai pagar kebun atau di desa-desa sering digunakan sebagai kayu bakar untuk memasak. Dengan perkembangan teknologi ketela pohon dijadikan bahan dasar pada industri makanan dan bahan baku industri pakan. Selain itu digunakan pula pada industri obat-obatan. Ketela pohon sangat berkhasiat untuk menyembuhkan berbagai macam penyakit diantaranya yaitu reumatik, demam, sakit kepala, diare, cacingan, mata kabur; nafsu makan, luka bernanah, luka baru kena panas (Anonim, 2008).
Monografi dari bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum adalah seba gai berikut : 1.
Eter Eter mengandung tidak kurang dari 96,0% dan tidak lebih dari 98,0% C4H10O. Selebihnya terdiri dari etanol dan air. Eter sangat mudah menguap dan terbakar. Uapnya dapat meledak jika bercampur dengan udara dan nyala api.
Gambar 2. Struktur Senyawa Eter. Pemerian, cairan mudah mengalir, mudah menguap, tidak berwarna, berbau khas. Teroksidasi perlahan-lahan oleh udara dan cahaya dengan membentuk peroksida, mendidih pada suhu lebih kurang 35 oC. Kelarutannya, larut dalam air dapat bercampur dengan etanol, dengan benzena, dengan kloroform, dengan pelarut heksana, dengan minyak lemak dan minyak menguap (Anonim, 1995). 2.
Aquades Air suling adalah air murni yang diperoleh dengan penyulingan. Air murni adalah air yang dimurnikan yang diperoleh dengan destilasi, perlakuan menggunakan penukar ion, osmosis balik, atau proses lain yang sesuai. Dibuat dari air yang memenuhi persyaratan air minum. Tidak mengandung zat tambahan lain. Pemerian cairan jernih tidak berwarna, dan tidak berbau (Anonim, 1995).
3.
Metanol ( CH3OH )
Gambar 3. Struktur Senyawa Metanol. Metanol, juga dikenal sebagai metil alkohol, wood alcohol atau spiritus, adalah senyawa kimia dengan rumus kimia CH3OH. Ia merupakan bentuk alkohol paling sederhana. Pada "keadaan atmosfer" ia berbentuk cairan yang
ringan, mudah menguap, tidak berwarna, mudah terbakar, dan beracun dengan bau yang khas (berbau lebih ringan daripada etanol). metanol digunakan sebagai bahan pendingin anti beku, pelarut, bahan bakar dan sebagai bahan additif bagi etanol industry (Anonim, 1995). 4. Natrium sulfat anhidrat Na2SO4 dengan berat molekul 142,04, murni pereaksi. Metanol P, metil alkohol CH3OH berat molekul 32,04, murni pereaksi (Anonim, 1995). 5.
Asam klorida
Gambar 4. Struktur Asam Klorida. Nama Resmi
:
Acidum Hydrochlorodium
Nama Lain
:
Asam Klorida
Rumus Molekul
:
HCl
Berat Molekul
:
36,46
Pemerian
:
Cairan tidak berwarna, berasap, bau merangsang, jika diencerkan dengan 2 bagian air, asap dan bau hilang.
Penyimpanan
:
Dalam wadah tertutup rapat.
K/P
:
Zat tambahan (Anonim, 1995)
Pada praktikum isolasi glikosida flavanoid dari manihot utilissima folium hal pertama yang dilakukan adalah membuat cairan infusa dari simplisia mannihot utilistima, bahan yang digunakan 50 gram manihot utilissima di tambah dengan air hingga 500 ml ke dalam panci infusa. Panci infusa bagian bawah diisi dengan air biasa, hal ini dilakukan untuk menjaga suhu pemanasan tetap pada 90°C karena yang menghantarkan panas adalah uap air bukan api secara langsung, kemudian setelah panic atas suhunya mencapai 90 oC ditunggu selama 15 menit. kemudian cairan infus di saring menggunakan penyaring Buchner untuk mendapatkan
bagian
yang
jernih
dan
ampasnya
dibuang,
penyaringan
menggunakan penyaring Buchner agar filtrat yang dihasilkan baik dan benar-
benar jernih, setelah itu kemudian dituang kedalam labu erlenmeyer dan disimpan dalam lemari es selama 1 minggu agar dapat terbentuk kristal (Harbone, 1987). Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90° C selama 15 menit. Infusa adalah proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahan – bahan nabati. Penyarian dengan cara ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang. Oleh sebab itu sari yang diperoleh dengan cara ini tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. Cara ini sangat sederhana dan sering digunakan oleh perusahaan obat tradisional. Dengan beberapa modifikasi cara ini sering digunakan unuk membuat ekstrak. Infusa dibuat dengan cara : Membasahi bahan bakunya, biasanya dengan air 2 kali bobot bahan, untuk bunga empat kali bobot bahan, dan untuk karagen 10 kali bobot bahan. Bahan baku ditambah dengan air dan dipanaskan selama 15 menit pada suhu 900 – 980 C. Umumnya untuk 100 bagian sari diperlukan 10 bagian bahan. Hal ini disebabkan karena kandungan simplisia kelarutannya terbatas, misalnya kulit kina digunakan 6 bagian. disesuaikan dengan cara penggunaanya dalam pengobatan, misalnya daun kumis kucing, sekali minum infus 100 cc, karena itu di ambil 1/2 Bagian. Berlendir, misalnya karagen digunakan 1
1
/2
bagian. Daya kerjanya keras, misalnya digitalis digunakan 1/2 bagian. Untuk memindahkan penyarian kadang – kadang perlu ditambahkan bahan kimia misalnya Asam Sitrat untuk infus kina, Kalium atau Natrium karbonat untuk infus kelembak. Penyarian dilakukan pada saat cairan masih panas, kecuali bahan yang mengandung bahan yang mudah menguap (Anonim, 2000). Dekokta adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur 90°C selama 30 menit. Penguapan ekstrak larutan dilakukan dengan penguap pengurangan tekanan, yaitu rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak yang kental (Harborne, 1987). Setelah 1 minggu filtrat disimpan dilemari es kemudian filtrate di tuang kedalam gelas beaker, tetapi yang dituang yang bagian atas atau yang jernihnya saja agar kristal pada cairan dibawah tidak ikut tertuang. Setelah dituang, kristal kemudian di saring menggunakan kertas saring yang sebelumnya telah ditimbang bobotnya. Bobot kertas saring tadi yaitu 0,526 gram. Setelah itu kertas saring bersama endapan kristal tadi di keringkan didalam oven pada suhu 50 °C. Hal ini
dilakukan agar mendapatkan kristal murni (rutin) yang bebas dari pelarut. Setelah kering, kertas saring dan kristal ditimbang lagi untuk memperoleh rendemannya, dan bobot kertas saring + kristal tadi yaitu 0,6522 gram. Kemudian kristal di ambil dengan spatel dan dilarutkan dengan campuran metanol-air 2 ml sama banyak. Digunakan campuran metanol-air untuk melarutkan kristal rutin ini yang bersifat polar dan fungsi metanol sendiri yaitu untuk melarutkan pengotor dari kristal rutin itu. Larutan tersebut kemudian dinamai dengan sari 1 yang mengandung rutin (Mulia, 1990). Kemudian sisa padatan diambil dan di masukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 10 ml HCL 2N. Penambahan ini berfungsi untuk menghidrolisis rutin menjadi bentuk glikon dan aglikonnya, karena rutin adalah glikosida flavanoid. Bentuk aglikon dari rutin adalah kuersetin yang berfungsi sebagai antiinflamasi, antikanker dan antioksidan. Kemudian setelah itu dilakukan refluks pada penangas air mendidih selama 1 jam dan jika cairan dalam tabung terlalu banyak yang menguap bisa ditambahkan 5 ml aquadest yang panas kedalamnya, refluks bertujuan untuk menyempurnakan reaksi hidrolisis yang terjadi. Setelah refluks, campuran dimasukkan ke dalam corong pisah untuk di pisahkan dengan pelarut eter. Eter digunakan karena memiliki kepolaran yang sama dengan kuersetin sehingga kuersetin dapat larut didalamnya. Ketika pemisahan akan terbentuk 2 lapisan yaitu lapisan air asam yang berada di bawah dan lapisan eter yang berada di atas. Kedua lapisan tersebut lalu dipisahkan. untuk hasil campuran eter dituang kedalam beker glass. Kemudian pada lapisan air asam dilakukan kembali partisi menggunakan 10 ml pelarut dietil eter yang baru dalam corong pisah. Hal ini bertujuan untuk mengambil kembali kuersetin yang mungkin belum terbawa pada pemisahan pertama tadi. Kemudian dipisahkan kembali dengan cairan eternya dimasukkan ke dalam beaker glass yang sudah berisi campuran eter sebelumnya. Sari eter yang didapat kemudian di saring dengan kertas saring yang terdapat 1 gram natrium sulfat anhidrat ke dalam cawan porselin, hal ini dilakukan untuk membersihkan air yang mungkin terbawa ke dalam larutan eter aglikon flavanoidnya. Kemudian eternya diuapkan tanpa pemanasan dan residunya dilarutkan dengan 2 ml metanol sebagai pelarut dari kuersetin. Campuran tersebut dinamai dengan sari II. Setelah itu kemudian uapkan
lapisan air asam hasil hidrolisis pada cawan porselin diatas penangas air dengan hembusan angina sehingga cairan kira-kira tinggal 1 ml, yang disebut sebagai sari III (Harbone, 1987). Pada praktikum kali ini Kristal yang didapatkan sebanyak 0,2162 gr dengan rendemen sebesar 0,2524 %. Hasil rendemen ini tidak sesuai dengan literature karena seharusnya dengan 50 gr bahan yang digunakan, kristal yang didapat lebih dari 0,2162 gr. Hal ini dapat disebabkan karena filtrat terkontaminasi jamur jadi pada saat filtrat yang atas dibuang, kristal yang terbentuk juga ikut terbuang dan bisa juga disebabkan kurang lamanya penyimpanan atau pendinginan didalam lemari es, juga karena kurang telitinya praktikan dalam penimbangannya. Kesalahan yang terjadi dalam percobaan kali ini dapat dikelompokkan menjadi dua macam yaitu kesalahan random dan kesalahan sistematik (Gandjar dan Rohman, 2007). a.
Kesalahan random (random error) Kesalahan random adalah kesalahan yang selalu terjadi dalam analis dikarenakan adanya sedikit variasi yang tidak dapat ditentukan (dikontrol) saat pelaksanaan (Gandjar dan Rohman, 2007) seperti selisih dalam penimbangan bahan dan ketidaktepatan dalam penambahan volume larutan.
b.
Kesalahan sistematik Kesalahan mengakibatkan
sistematik hasilnya
memiliki
sifat
menyimpang
yang
dari
konstan,
rata-rata.
serta
dapat
Kesalahan
ini
dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti : 1)
kesalahan personel dan operasi
2)
kesalahan alat dan pereaksi
3)
kesalahan metode
Untuk mengatasinya dapat dilakukan beberapa cara seperti Kalibrasi alat yang dipakai, melakukan penetapan blanko,penetapan kontrol, satu seri penetapan kadar serta penetapan dengan berbagai metode (Gandjar dan Rohman, 2007)
F.
Kesimpulan
Dari praktikum ”Isolasi Glikosida Flavonoid dari Manihot utilissima Folium” dapat ditarik kesimpulan yaitu sebagai berikut : 1.
Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang terdapat dalam tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid.
2.
Flavanoid didalam bahan yang diisolasi bersifat polar sehingga dapat disari dengan air panas dan dikristalkan dengan pendinginan.
3.
Pemisahan aglikon dari glikosidanya dapat dilakukan dengan hidrolisis asam.
4.
Pada praktikum kali ini, dihasilkan sari 1 berupa larutan rutin, sari II berupa kuersetin dan sari III dihasilkan standar.
5.
Hasil rendeman yang diperoleh yaitu 0,2524%.
Daftar Pustaka
Anonim, 1995, Farmakope Indonesia edisi IV , Depkes RI, Jakarta Anonim, 2000, Acuan Sediaan Herbal , Depkes RI, Jakarta. Anonim, 2008, Singkong Manihot esculenta Crantz, www.plantamor.com, Diakses pada 08 Juni 2014. Gandjar, I. G., Rohman A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta. Harbone, J.B, 1987, Metode Fitokimia penuntun cara modern menganalisis tumbuhan terbitan kedua, ITB, Bandung. Lenny, Sovia, 2006, Karya Ilmiah Senyawa Flavonoida, Fenil Propanoida, dan Alkaloida, www.library.usu.ac.id. Diakses pada 08 Juni 2014. Mulia M dan Syahrani A., 1990, Aplikasi Analisis Spektrofotometer UV-VIS , Mecphiso Grafika, Surabaya.
Lampiran 1. Jawaban Pertanyaan
1.
Apakah perbedaan antara infusa dan decocta? Decocta dan infusa dapat diartikan sebagai sari-sari dalam air yang dibuat dari bahan-bahan alam yang direbus pada suhu 90 0C sampai 980C. Perbedaannya yaitu pada decocta lamanya penyarian setengah jam, sedangkan pada infusa selama 15 menit. Selain itu pada infusa digunakan simplisia yang lunak, mengandung minyak atsiri dan bahan nya tidak tahan panas. Sedangkan decocta, simplisia yang digunakan biasanya keras, tidak mengandung minyak atrisi, dan tahan pemanasan.
2.
Sebutkan keuntungan dan kerugian penyarian glikosida flavonoid dengan air? Keuntungan : murah dan mudah diperoleh, stabil, tidak mudah menguap dan tidak mudah terbakar, tidak beracun, serta alamiah. Kerugian : banyak komponen polar yang dapat larut bersama air, media air memungkinkan timbulnya jamur atau bakteri jika disimpan di suhu ruang, tidak selektif, dan untuk pengeringan diperlukan waktu lama.
3.
Bagaimana dapat diketahui bahwa hidrolisis yang dikerjakan telah sempurna? Deteksi warna dapat dilakukan untuk mengetahui bahwa hidrolisis yang dikerjakan telah sempurna.
Lampiran 2. Jurnal Praktikum
PERCOBAAN IV IDENTIFIKASI FLAVONOID DENGAN KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
A. Tujuan Praktikum
Melakukan analisis kualitatif golongan senyawa flavonoid dengan metode kromatografi lapis tipis. B. Pendahuluan
Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan yang berpembuluh tetapi beberapa kelas lebih tersebar daripada yang lainnya. Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi dan karena itu menunjukkan pita serapan kuat pada sprektum UV dan sprektum tampak. Flavonoid pada umumnya terdapat dalam tumbuhan, terikat terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon falvonoid yang mana pun mungkin saja terdapat dalam satu tumbuhan dalam beberapa bentuk kombinasi glikosida. Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Mereka diekstraksi dengan etanol 70% dan tetap ada dalam lapisan air setelah ekstrak ini dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid berupa senyawa fenol, karena itu warnanya berubah bila ditambah basa amonia, jadi mereka mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan. Tidak ada benda lain yang begitu mencolok dibandingkan flavonoid yang member konstribusi keindahan dan kesemarakan pada bunga dan buah-buahan di alam. Flavin akan memberikan warna kuning atau jingga, antosianin akan member warna merah, ungu atau biru yaitu semua warna yang terdapat pada pelangi terkecuali warna hijau. Secara biologis, flavonoid memainkan peranan penting dalam kaitannya dengan penyerbukan pada tanaman oleh serangga. Sebagian flavonoid memiliki rasa yang pahit sehingga dapat menolak sejenis ulat tertentu. (Sastroamidjoyo, 1996). Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu. Pada kromatografi, komponen-komponennya akan dipisahkan antara dua buah fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam akan menahan komponen campuran sedangkan fase gerak akan melarutkan zat komponen campuran. Komponen yang mudah tertahan pada fase diam akan tertinggal. Sedangkan komponen yang mudah larut dalam
fase gerak akan bergerak lebih cepat. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan campuran senyawa menjadi senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya yang menggunakan. Kromatografi juga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan sangat sedikit, baik penyerap maupun cuplikannya. C. Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam praktikum adalah lempeng KLT GF 254, metanol, amonia, pereaksi sitroborat, fase atas dari campuran n-butanol : asam asetat : air (3 : 1 : 1) v/v sebagai eluen. Sedangkan alat yang digunakan dalam praktikum adalah chamber KLT, pipa kapiler/ tusuk gigi, pinset, alat penyemprot, oven, lampu UV 244 nm. D. Cara Kerja
Sari I, Rutin dalam metanol Sari 2, Kuersetin dalam metanol, Sari 3
Ditotolkan pada lempeng KLT GF 254 (6x8cm, dengan garis awal = 1 cm, garis akhir = 0,5 cm, dan jarak elusi = 6,5 cm), Dielusi pada chamber KLT yang telah berisi campuran n-butanol : asam asetat : air (3 : 1 : 1) v/v sebagai eluen, Dikeringkan dengan hair dryer, Dideteksi : 1. Sinar UV 254, ditandai bercaknya, 2. Uap amonia, di bawah sinar tampak dan UV 254, ditandai bercaknya, 3. Pereaksi sitroborat, dipanaskan 110oC selama 5 menit, di amati di bawah sinar UV 254, ditandai bercaknya, Dicatat Rf, hRf, dan warna yang terbentuk,
Rf, hRf, warna
E. Hasil dan Pembahasan E.1. Hasil Pengamatan
0,5 cm
6,5 cm
1 cm 6 cm Gambar 1. Skema Lempeng KLT.
Lempeng KLT dan totolan sampel yang terelusi saat praktikum.
No
Perlakuan
Hasil Pengamatan
1.
Ditotolkan pada lempeng KLT GF 254 (6x8cm,
KiriKanan
dengan garis awal = 1 cm, garis akhir = 0,5 cm,
1. Sari 1
dan jarak elusi = 6,5 cm),
2. Rutin 3. Sari 2 4. Kuersetin 5. Sari 3
2.
Dielusi pada chamber KLT yang telah berisi
Ke-5
sampel
campuran n-butanol : asam asetat : air (3 : 1 : 1)
hingga garis akhir.
terelusi
v/v sebagai eluen,
3.
Dikeringkan dengan hair dryer,
Lempeng KLT GF 254 telah kering, siap untuk di deteksi.
4.
Dideteksi : 1.
Sinar UV 254, ditandai bercaknya,
Sari I = 4,7 cm Rutin = 4,8 cm Sari II = 6,5 cm Kuersetin = 6,3 cm Sari III = 6 cm
2.
Uap amonia, di bawah sinar tampak dan
Sari I = 4,4 cm
UV 254, ditandai bercaknya,
Rutin = 4,5 cm Sari II = 6,5 cm Kuersetin = 6,3 cm Sari III = 6,1 cm
3.
110 oC
Sari I = 4,5 cm
selama 5 menit, di amati di bawah sinar UV
Rutin = 4,5 cm
254, ditandai bercaknya,
Sari II = 6,5 cm
Pereaksi
sitroborat,
dipanaskan
Kuersetin = 6,2 cm Sari III = 6,1 cm
5.
Dicatat nilai Rf dan hRf yang diperoleh
hRf = Rf x 100
Rf 1, hRf Sari I = 0,72 cm, 72 cm
Rutin = 0,73 cm, 73 cm Sari II = 1 cm, 100 cm Kuersetin = 0,97 cm, 97 cm Sari III = 0,92 cm, 92 cm
Rf 2, hRf Sari I = 0,68 cm, 68 cm Rutin = 0,70 cm, 70 cm Sari II = 1 cm, 100 cm Kuersetin = 0,96 cm, 96 cm Sari III = 0,93 cm, 93 cm Rf 3, hRf Sari I = 0,70 cm, 70 cm Rutin = 0,70 cm, 70 cm Sari II = 1 cm, 100 cm Kuersetin = 0,93 cm, 93 cm Sari III = 0,93 cm, 93 cm 6.
Dicatat warna yang terbentuk
Warna1 Sari I = cokelat kehijauan Rutin = cokelat kehijauan Sari II = cokelat kehijauan Kuersetin = ungu pudar Sari III = ungu pudar Warna2 Sari I = cokelat kehijauan Rutin = cokelat kehijauan Sari II = cokelat kehijauan Kuersetin = ungu pudar Sari III = ungu pudar Warna3 Sari I = cokelat kehijauan, lebih pudar Rutin = cokelat kehijauan Sari II = cokelat kehijauan, lebih pudar Kuersetin = ungu pudar Sari III = ungu pudar
E.2. Pembahasan
Pada praktikum ini bertujuan untuk dapat melakukan analisis kualitatif golongan
senyawa
flavonoid
dengan
metode
kromatografi
lapis
tipis.
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan cara pemisahan campuran senyawa menjadi senyawa murninya dan mengetahui kuantitasnya yang menggunakan. Kromatografi juga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan sangat sedikit, baik penyerap maupun cuplikannya. Senyawa flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar yang ditemukan di alam. Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu dan biru serta sebagai zat warna kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan. Flavonoid mempunyai kerangka dasar karbon yang terdiri dari 15 atom karbon, dimana dua cincin benzene (C6) terikat pada suatu rantai propane (C3) sehingga bentuk susunan C6-C3-C6 (Lenny, 2006). 3' 4'
2' 8 7
(8a) 9
A 6 5
1
1'
O
B 5'
2 6'
C 3 10 (4a)
4 O
Gambar 1. Struktur Senyawa Flavonoid (Lenny, 2006). Sebagian besar senyawa flavonoida alam ditemukan dalam bentuk glikosida, dimana unit flavonoid terikat pada suatu gula. Glikosida adalah kombinasi antara suatu gula dan suatu alcohol yang saling berikatan melalui ikatan glikosida. Pada prinsipnya, ikatan glikosida terbentuk apabila gugus hidroksil dari alcohol beradisi kepada gugus karbonil dari gula sama seperti adisi alcohol kepada aldehida yang dikatalisa oleh asam menghasilkan suatu asetal. Pada hidrolisa oleh asam, suatu glikosida terurai kembali atas komponen-komponennya menghasilkan gula dan alcohol yang sebanding dan alcohol yang dihasilkan disebut dengan aglikon. Residu gula dari glikosida flavonoida alam adalah glukosa, ramnosa,
galaktosa dan gentibiosida. Flavonoida dapat ditemukan sebagai mono- , di- atau triglikosida dimana satu, dua atau tiga gugus hidroksil dalam molekul flavonoid terikat oleh gula. Poliglikosida larut dalam air dan sedikit larut dalam pelarut organic seperti eter, benzene, kloroform dan aseton. Senyawa-senyawa flavonoid yang umumnya bersifat antioksidan dan banyak yang telah digunakan sebagai salah satu komponen bahan baku obat-obatan (Anonim, 2008). Pada percobaan kali ini digunakan simplisia dari daun ketela pohon ( Manihot utilissima. Berikut taksonominya: Kingdom
: Plantae
Divisi
: Spermatophyta
Sub Divisi
: Angiospermae
Kelas
: Dicotyledoneae atau biji berkeping dua
Ordo
: Euphorbiales
Famili
: Euphorbiaceae
Genus
: Manihot
Spesies
: Manihot utilissima Pohl. ; Manihot esculenta Crantz sin.
Ketela pohon atau singkong, dalam bahasa Inggris bernama cassava, adalah pohon tahunan tropika dan subtropika dari keluarga Euphorbiaceae. Umbinya dikenal sebagai makanan pokok penghasil karbohidrat dan daunnya sebagai sayuran. Di Indonesia sendiri ketela pohon menjadi makanan bahan pangan pokok setelah beras dan jagung. Manfaat daun ketela pohon sebagai bahan sayuran memiliki protein cukup tinggi dan Umbi singkong merupakan sumber energi yang kaya karbohidrat namun sangat miskin protein. Kayunya bisa digunakan sebagai pagar kebun atau di desa-desa sering digunakan sebagai kayu bakar untuk memasak. Dengan perkembangan teknologi ketela pohon dijadikan bahan dasar pada industri makanan dan bahan baku industri pakan. Selain itu digunakan pula pada industri obat-obatan. Ketela pohon sangat berkhasiat untuk menyembuhkan
berbagai macam penyakit diantaranya yaitu reumatik, demam, sakit kepala, diare, cacingan, mata kabur; nafsu makan, luka bernanah, luka baru kena panas (Anonim, 2008). Monografi dari bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum adalah seba gai berikut : 1.
Air suling (Depkes RI, 1979). Nama resmi
: Aqua Destillata
Nama lain
: Air suling
Pemerian
: Cairan jernih; tidak berwarna; tidak berbau; tidak mempunyai rasa.
BM / RM 2.
: 18,02 / H2O
Asam asetat (Depkes RI, 1979).
Gambar 2. Struktur Asam Asetat Nama resmi
: Acidum Asetat
Nama lain
: Asam asetat,cuka
Pemerian
: Cairan jernih tidak berwarna, bau menusuk, rasa asam, tajam
Kelarutan
: Dapat campur dengan air, dengan etanol (95%)P, dan dengan gliserol P
Berat jenis
: 1,040 g/ml-1,042 g/ml
3.
Methanol (Depkes RI, 1979).
Gambar 3. Struktur Methanol. Pemerian
:
Cairan tidak berwarna, jernih, bau khas.
Kelarutan
: Dapat bercampur dengan air, membentuk cairan jernih, tidak berwarna.
BJ / RM 4.
: (15,5°/15,5°) 0,796 sampai 0,798/ CH 3OH
Amonia (Depkes RI, 1979). Nama lain
:
Amonia
RM / BM
: NH 4OH / 35,05
Pemerian
: Cairan jernih, tidak berwarna, bau khas, dan menusuk kuat
Kelarutan
: Mudah larut dalam air
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat dan ditempat sejuk Kegunaan 5.
: Sebagai dapar pH 10
n-Butanol (Perry, 1984).
Gambar 4. n-Butanol Merupakan cairan putih jernih dan berbau tajam Produksi n-butanol sebagian besar digunakan pada pembuatan resin urea fonnaldehid dan plasticizer dibutil pthalat. n-Butanol merupakan senyawa organik yang memiliki ikatan hydrogen. Berat molekul (gr/mol) 74,12; titik didih pada 1 atm (oC) 117,73; titik beku, ( oC) -89,3; spesifik gravity pada 20 oC 0,8098.
6.
Sitroborat Pereaksi sitroborat digunakan untuk mendeteksi keberadaan senyawa golongan flavonoid dari glikosida saponin reaksi positif ditunjukkan dengan berpendar di bawah sinar UV 366nm. Pada plat, tidak ada bercak yang berwarna kuning, tetapi terdapat bercak yang berpendar di UV 366 setelah di semprot sitroborat. Hal ini menunjukkan bahwa dimungkinkan adanya kandungan flavonoid pada fraksi ini (Wagner, 1984). Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan kromatografi planar dengan fase
diam berupa lapisan yang seragam pada permukaan bidang datar yang didukung oleh lempeng kaca, plat almunium atau plastic. Fase gerak sebagai pelarut pengembang akan bergerak sepanjang fase diam karena pengaruh kapiler pada pengembangan
secara
ascending
atau
karena
pengaruh
gravitasi
pada
pengembangan secara descending. Pemisahan pada KLT yang optimal akan diperoleh jika pada penotolan sampel dengan ukuran bercak sekecil dan sesempit mungkin, dan jika penotolan sampel tidak tepat akan menyebabkan bercak yang menyebar dan puncak ganda. Parameter pada KLT yang digunakan untuk identifikasi adalah nilai Rf, dua senyawa dikatakan identik jika memiliki nilai Rf yang sama jika diukur pada kondisi KLT yang sama. Analisis kuantitatif dengan KLT dapat dilakukan dengan mengukur langsung lempeng dengan ukuran luas bercak atau densikometri (Gandjar, 2007). Fasa gerak yang digunakan dalam KLT sering disebut dengan eluen. Pemilihan eluen didasarkan pada polaritas senyawa dan biasanya merupakan campuran beberapa cairan yang berbeda polaritas. Kepolaran eluen sangat berpengaruh terhadap Rf (faktor retensi) yang diperoleh. Faktor retensi (Rf) adalah jarak yang ditempuh oleh komponen dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh eluen. Nilai Rf sangat karakterisitik untuk senyawa tertentu pada eluen tertentu. Hal tersebut dapat digunakan untuk mengidentifikasi adanya perbedaan senyawa dalam sampel. Senyawa yang mempunyai Rf lebih besar berarti mempunyai kepolaran yang rendah, begitu juga sebaliknya. Hal tersebut dikarenakan fasa diam bersifat polar. Senyawa yang lebih polar akan tertahan kuat pada fasa diam, sehingga menghasilkan nilai Rf yang rendah (Anonim, 2013).
Keuntungan KLT : 1.
Waktu relatif singkat
2.
Menggunakan inestasi yang kecil.
3.
Paling cocok untuk analisis bahan alam dan obat.
4.
Jumlah cuplikan yang dengan sedikit.
5.
Kebutuhaan ruang minimum.
6.
Penanganan sederhana.
7.
Zat yang bersifat asam/basa kuat dapat dipisahkan dengan KLT.
Kelemahan KLT : 1.
Hanya merupakan langkah awal untuk menentukan pelarut yang cocok dengan pada kromatografi kolom
2. Noda yang terbetuk belum tentu senyawa murni.
Terdapat beberapa tahap yang dilakukan pada KLT yaitu penyiapan plat, pemilihan adsorben, pemilihan pelarut, menentukan sistem pengembang yang cocok, pengamatan lokasi bercak pada kromatogram, deteksi dan identifikasi (Kusmardiyani dan Nawawi, 1992). Langkah pertama yang dilakukan untuk mengidentifikasi flavonoid adalah dengan mempersiapkan fase diam dan fase gerak yang digunakan sebagai eluen. Fase diam yang digunakan adalah selulosa GF254, sedangkan fase gerak yang digunakan adalah n-butanol : asam asetat : air (3:1:1) v/v dan cuplikan yang digunakan adalah sari I, sari II, sari III, dan pembanding larutan rutin serta kuersetin. Dengan digunakannya eluen yang bersifat polar maka senyawa polar akan terelusi lebih dulu dan memiliki R f yang lebih tinggi, dibandingkan dengan senyawa non-polar ataupun semipolar. Pada KLT ini yang diuji adalah senyawa polar yaitu glikosida flavonoid (rutin) dan senyawa non-polar yaitu aglikon glikosida (kuersetin). Pelarut n-butanol sebagai pelarut non-polar yang melarutkan senyawa non-polar dan yang melarutkan senyawa polar adalah air sebagai pelarut polar. Penotolan dilakukan terhadap sari I, sari II, sari III dan pembanding larutan rutin serta kuersetin, dengan menggunakan pipa kapiler. Penotolan dilakukan pada plat KLT, dimana jarak antar totolan sejauh 1 cm. Setelah dilakukan penotoloan, plat KLT kemudian
dideteksi di bawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm. Pada saat deteksi di bawah sinar UV diamati bercak flavonoid yang terlihat kemudian diukur jaraknya dari garis front. Setelah itu, plat KLT diuapkan amonia dan dideteksi kembali di bawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm. Kemudian, langkah selanjutnya di deteksi dengan pereaksi sitroborat, lalu dipanaskan. Setelah nilai R f kedua dihitung, plat KLT disemprot dengan pereaksi sitroborat dan diamati kembali di bawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm, setelah itu lakukan perhitungan nilai R f . Nilai R f dihitung dengan persamaan (Gandjar, 2007) : R f = Nilai maksimum R f
adalah 1 dan ini dicapai ketika solut mempunyai
perbandingan distribusi (D) dan faktor retensi (k’) sama dengan 0 yang berarti solut bermigrasi dengan kecepatan yang sama dengan fase gerak (Gandjar dan Rohman, 2007). Nilai R f yang diperoleh dari hasil perhitungan dan warna yang terbentuk kemudian dibandingkan dengan nilai R f dan warna fluoresens yang ada dalam pustaka. Setelah melakukan percobaan Kromatografi Lapis Tipis maka diperoleh hasil sebagai berikut, hasil yang di amati dibawah sinar UV 254 yaitu sari I menghasilkan jarak 4,7 cm; sari II menghasilkan jarak 6,5 cm; sari III menghasilkan jarak 6,0 cm; rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan jarak 4,8 cm dan 6,3 cm. Setalah dideteksi dengan uap amonia, hasil yang di amati pada sinar tampak dan UV254 yaitu sari I menghasilkan jarak 4,4 cm; sari II menghasilkan jarak 6,5 cm; sari III menghasilkan jarak 6,1 cm; rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan jarak 4,5 cm dan 6,3 cm. Setelah dideteksi dengan pereaksi Sitroborat, hasil yang di amati dibawah sinar UV254 yaitu sari I menghasilkan jarak 4,5 cm; sari II menghasilkan jarak 6,5 cm; sari III menghasilkan jarak 6,1 cm; rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan jarak 4,5 cm dan 6,2 cm. Selanjutnya untuk mendapatkan nilai Rf, data jarak yang didapat tersebut dibagi dengan jarak start sampai finish yaitu 6,5 cm. Sehingga nilai Rf 1 yang diperoleh adalah sari I menghasilkan Rf 0,72 cm; sari II
menghasilkan Rf 1,00 cm; sari III menghasilkan Rf 0,92 cm; rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan Rf 0,73 cm dan 0,97 cm; untuk nilai Rf 2 yang diperoleh adalah sari I menghasilkan Rf 0,68 cm; sari II menghasilkan Rf 1,00 cm; sari III menghasilkan Rf 0,93 cm; rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan Rf 0,70 cm dan 0,96 cm; untuk Rf 3 yang diperoleh adalah sari I menghasilkan Rf 0,70 cm; sari II menghasilkan Rf 1,00 cm; sari III menghasilkan Rf 0,93 cm; rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan Rf 0,70 cm dan 0,93 cm. Dari data tersebut, menurut literatur dapat disimpulkan bahwa sari I mengandung rutin dan sari II mengandung kuersetin karena antara sari I dan rutin memiliki nilai Rf yang berdekatan dan pada sari II dan kuersetin juga mengandung nilai Rf berdekatan (Gross, 1991). Pada saat KLT dilihat dibawah sinar UV bercak yang tampak yaitu rutin manghasilkan 4,1 cm dan sari II menghasilkan 5 cm, jadi yang mampu berflourosensi hanya rutin dan sari II karena yang akan tampak pada UV hanyalah zat yang mampu berflouresensi (Gandjar, 2007). Kemudian, warna yang terbentuk untuk warna yang pertama adalah sari I dan sari II menghasilkan warna cokelat kehijauan, sari III menghasilkan warna ungu pudar, untuk rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan warna cokelat kehijauan dan ungu pudar. Warna yang kedua, untuk sari I dan sari II menghasilkan warna cokelat kehijauan, sari III menghasilkan warna ungu pudar, untuk rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan warna cokelat kehijauan dan ungu pudar. Warna yang ketiga, untuk sari I dan sari II menghasilkan warna cokelat kehijauan tapi lebih pudar, sari III menghasilkan warna ungu pudar, untuk rutin dan kuersetin masing-masing menghasilkan warna cokelat kehijauan dan ungu pudar.
F.
Kesimpulan
Dari praktikum ”Identifikasi Falovonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis” dapat ditarik kesimpulan yaitu sebagai berikut : 1.
Senyawa golongan flavonoid dapat diidentifikasi dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT) dan spektrofotometer UV-vis. 2. Nilai Rf ditentukan dengan mengukur jarak titik pusat bercak dari titik awal dibagi dengan jarak tepi muka pelarut dari titik awal. 3. Dengan adanya warna fluoresens itu dapat mengetahui adanya rutin dan kuersetin karena hanya rutin dan kuersetin yg dapat berpendar pd Rf standar dan sampel yang telah ditentukan (0-1).
Daftar Pustaka
Anonim, 2008, Singkong Manihot esculenta Crantz, www.plantamor.com, Diakses pada 08 Juni 2014. Anonim,
2013 ,
Kromatografi
Lapis
Tipis.
http://www.ilmukimia.org/2013/05/kromatografi-lapis-tipis-klt.html. diakses tanggal 9 mei 2014. Depkes RI, 1979, Farmakope Indonesia Edisi III, Dirjen Ri, Yogyakarta. Gandjar, Ibnu Gholib dan Abdul Rohman, 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta. Kusmardiyani, Siti dan Nawawi As'ari, 1992, Kimia Bahan Alam, Pusat antar Universitas Bidang Ilmu Hayati, Yogyakarta. Lenny, Sovia, 2006, Karya Ilmiah Senyawa Flavonoida, Fenil Propanoida, dan Alkaloida, www.library.usu.ac.id. Diakses pada 08 Juni 2014. Perry R. H., and Green D., 1984, "Chemical Engineer's Hand Book", six edition, Mc Graw Hill Book Company. Robbers.J.E., Speedie.M.K., Tyler.V.E., 1996, “Pharmacognosy and Pharmaco”, biotechnology. Sastrohamidjojo. H., 1996, Sintesis Bahan Alam, Gajahmada University Press, Jogjakarta. Wagner H.,S. Bladt and EM. Zgainski, 1984, Plant Drugs Analysis., SpringerVerlag., Berlin.
Lampiran 1. Jawaban Pertanyaan.
1.
Apa perbedaan fluoresensi rutin (flavonoid-3-glikosida) dan aglikonnya? Rutin merupakan salah satu jenis glikosida flavonoid yang bersifat polar, sehingga dapat diekstraksi dengan pelarut polar, seperti air, methanol atau etanol. Filtrate yang didapat dari hasil penyarian didinginkan untuk mempercepat pembentukan kristal.Pemisahan aglikon dan glikosidanya dapat dilakukan dengan hidrolisis asam, seperti menggunakan HCl. Akan didapat hasil berupa kuersetin dan glukosa dari hidrolisis rutin. Terlihat berupa tidak berwarna pada sinar tampak, berwarnabiru keunguan pada sinar UV 254nm,birukeunguan pada sinar UV 366nm, dan memberikan fluoresensi berwarna biru terang dengan penampak bercak AlCl 3.
2.
Apakah dasar pemisahan senyawa dengan metode kromatografi lapis tipis? Pemisahan komponen suatu senyawa yang dipisahkan dengan kromatografi lapis tipis tergantung pada jenis pelarut, zat penyerap dengan sifat daya serap masing-masing komponen. Komponen yang terlarut akan terbawa oleh fase diam (penyerap) dengan membandingkannya dengan standar yang sangat memakan waktu dan harus dilakukan terpisah pada kondisi eluen yang sama. Dalam hal ini untuk mendapatkan resolusi yang baik, penting untuk memilih dua campuran pelarut yang berbeda, meskipun dengan kekuatan pelarut yang sama (Gandjar, 2008).
3.
Berikan 2 contoh fase gerak lain yang bisa digunakan daam identifikasi flavonoid? Metal asetat, heksan, methanol. Methanol sifatnya polar. Heksan sifatnya nonpolar . Metil asetat sifatnya semi polar.
