LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI PEWARNAAN SEL BAKTERI
Nama
: I Gusti Ayu Nyoman Suastini
NIM
: 1208505061
Kelompok
: V
Golongan
:
Tanggal Praktikum
: 25 Maret 2014
Asisten
: Ni Wayan Desi Bintari
II
JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA 2014
1
BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan tidak kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Pengamatan tanpa pewarnaan menjadi lebih sukar dan tidak dapat digunakan untuk melihat bagian sel dengan teliti. Mikroorganisme yang telah diwarnai lebih mudah dikenali daripada mikroorganisme yang tidak diwarnai, dan bakteri terwarnai berbeda-beda berdasarkan perbedaan struktural dinding selnya (Sachne dan McPherson, 2004). Salah satu pewarnaan yang sering digunakan untuk mengidentifikasi bakteri adalah pewarnaan gram. Bakteri yang tetap berwarna ungu dengan pewarnaan oleh Kristal violet disebut bakteri gram positif, sedangkan yang warna ungunya hilang jika dibilas dengan alkohol, tetapi tetap berwarna merah muda karena menahan warna merah safranin disebut bakteri gram negatif (James, dkk., 2002). Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang lebih sederhana, dengan jumlah peptidoglikan yang lebih banyak. Dinding sel bakteri gram negatif memiliki peptidoglikan yang lebih sedikit dan secara structural lebih kompleks (Campbell, dkk., 2003). Bakteri yang sudah diberi warna dapat dilihat bentuknya dengan mikroskop cahaya. Bentuk bakteri juga berguna untuk mengidentifikasi bakteri, misalnya bentuk sferis (kokus), bentuk batang (basilus), dan bentuk koma (vibrio). (James, dkk., 2002). 1.2 Tujuan 1. Untuk mengetahui tujuan dari pewarnaan sel bakteri. 2. Untuk mengetahui jenis-jenis pewarnaan bakteri dan prinsip pewarnaan gram 3. Untuk mengetahui perbedaan bakteri gram positif dan gram negatif dari pewarnaannya. 4. Untuk mengetahui bentuk sel bakteri dan untuk mengetahui jenis kelompok bakteri tersebut. 2
BAB II MATERI DAN METODE Pewarnaan bakteri dilakukan dengan menggunakan spesies bakteri Pseudomonas. Dilakukan tiga cara pewarnaan yaitu, pewarnaan langsung, pewarnaan tidak langsung dan pewarnaan gram. Pewarnaan langsung dilakukan dengan meneteskan air di tengah kaca objek kemudian diambil sedikit biakan bakteri Pseudomonas menggunakan jarum ose yang telah dipanaskan dan diangin-anginkan, dibuat apusan hingga diperoleh campuran tipis dan merata. Selanjutnya difiksasi dan ditetesi pewarna metilen blue yang akan mewarnai sel dalam 60 detik. Dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan. Pewarnaan tidak langsung, tinta cina diteteskan pada pinggir ujung kaca objek, diambil sedikit biakan bakteri hasil isolasi menggunakan jarum ose yang telah dipanaskan kemudian disuspensikan pada tinta cina. Suspensi bakteri tersebut diratakan dengan kaca objek lain dan dibiarkan mengering. Pewarnaan gram, dibuat apusan bakteri 1 tetes air pada permukaan kaca objek. Kemudian difiksasi hingga air mengering, diwarnai dengan metilen blue selama 5 menit lalu dicuci dengan air mengalir. Selanjutnya ditetesi dengan lugol dan dibiarkan selama 1 menit yang bertujuan untuk menguatkan perlekatan pewarna dasar. Dicuci dengan larutan alkohol 95% sampai warnanya terhapus kemudian dicuci dengan air, diwarnai dengan safranin selama 15 menit, dicuci kembali dengan air dan dikeringkan di atas nyala api bunsen. Pengamatan dilakukan di bawah mikroskop dengan perbesaran 100 x menggunakan minyak emersi untuk menaikkan indeks bias cahaya sehingga objek dapat terlihat dengan lebih jelas dan kemudian hasil pengamatan digambar.
3
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN 3.1 Hasil Pengamatan (Terlampir) 3.2 Pembahasan Pewarnaan bakteri pada praktikum ini menggunakan tiga metode, yaitu pewarnaan langsung, pewarnaan tidak langsug dan pewarnaan gram. Terdapat enam jenis spesies bakteri yang dilakukan pewarnaan, yaitu Klebsiella, E. coli, Bacillus, Staphylococcus, Pseudomonas, Enterococcus. Pada pewarnaan langsung digunakan larutan warna yaitu metilen blue. Berdasarkan hasil pengamatan pada keenam jenis bakteri tersebut terdapat empat jenis bakteri yang berbentuk batang (basil) dan dua lainnya berbentuk bulat (coccus). Metilen blue termasuk ke dalam pewarna basa, bakteri dapat terwarnai dengan pewarna basa disebabkan sitoplasma bakteri kay akan asam amino dan mengandung muatan negative seperti kelompok fosfat, sifat ini yang bereaksi dengan zat warna bermuatan positif (Jawetz, et al., 1996). Pewarnaan tidak langsung dilakukan dengan menggunakan tinta cina sebagai zat warna. Bakteri merupakan organisme mikroseluler yang pada dinding selnya mengandung ion negatif zatt warna sehingga pewarna ini tidak akan mewarnai sel tetapi mewarnai lingkungan luarnya saja, dalam hal ini tinta cina merupakan zat warna negatif (Entjang, 2003) sehingga bakteri yang teramati akan berwarna bening atau transparan karena zat warna hanya akan mewarnai lingkungan disekitar bakteri. Berdasarkan pengamatan pada praktikum ini, pada keenam jenis bakteri tampak bagian dalam sel bening dan disekitarnya berwarna hitam akibat pewarnaan dengan tinta cina. Pewarnaan gram pada praktikum ini menggunakan pewarna dasar metilen blue dan pewarna pembanding atau pewarna kontras safranin. Metilen blue akan memberikan warna biru pada bakteri, sedangkan safranin akan memberikan warna merah muda (James, dkk., 2002). Pada pewarnaan gram ini, dari keenam jenis bakteri tampak menghasilkan warna merah. Pada bakteri Klebsiella tampak berbentuk basil 4
(batang) berwarna merah. Pada bakteri E. coli tampak berbentuk batang atau basil, sedangkan pada Bacillus juga memiliki bentk yang sama dengan E. coli dan Klebsiella. Bentuk yang berbeda tampak bakteri Staphylococcus dan Enterococcus yang berbentuk bulat atau coccus yang juga tampak berwarna merah. Pada bakteri Pseudomonas tampak berbentuk basil atau batang. Bentuk coccus merupakan bentuk bakteri seperti bola-bola kecil. Bentuk coccus dapat berupa seperti rantai bergandengan panjang ataupun bergandengan berdua (Adam, 1992). Dalam praktikum ini, tampak bakteri Staphylococcus berbentuk bulat bergerombol seperti anggur. Berdasarkan hasil yang diperoleh, keenam jenis bakteri tersebut termasuk ke dalam jenis bakteri gram negatif karena warna ungunya hilang jika dibilas dengan alkohol, tetapi tetap berwarna merah muda karena menahan warna merah safranin. Berdasarkan literatur, keenam jenis bakteri tersebut memang termasuk ke dalam jenis bakteri gram negatif, dimana Pseudomonas sp, E. coli dan Klebsiella merupakan infeksi basiler gram negatif yang paling sering terjadi (Behrman, dkk., 1996). Bakteri jenis Bacillus merupakan kelompok bakteri gram positif (Yuwono, 2008), namun dalam praktiku ini menunjukan hasil sebagai gram negatif yaitu merah. Hal tersebut dapat terjadi mungkin dikarenakan sampel bakteri yang rusak, sehingga bukan lagi bakteri Bacillus yang terindentifikasi melainkan bisa saja bakteri kontaminan yang bersifat gram negatif. Sedangkan Enterococcus dan Staphylococcus termasuk ke dalam kelompok bakteri gram negatif (Tjay dan Rahardja, 2007)
5
BAB IV KESIMPULAN 4.1 Tujuan dari pewarnaan antara lain adalah untuk mempermudah pengamatan bentuk sel mikroorganisme (khususnya bakteri). Teknik pewarnaan langsung dengan langung mewarnai bagian bakteri tersebut sehingga bagian dalam dari sel bakteri dapat dilihat, pewarnaan tidak langsung dengan mewarnai lingkungan sekitar sel sehingga hanya dapat diamati bentuk selnya, serta pewarnaan gram untuk menentukan gram dari suatu bakteri. 4.2 Bakteri gram positif memiliki ciri-ciri berwarna ungu karena mengikat pewarna dasar dan tidak terhapus oleh alkohol serta tidak menyerap pewarna pembanding. Serta bakteri gram negaif jika diwarnai memiliki ciri-ciri berwarna merah karena tidak mengikat pewarna dasar dan terhapus oleh alkohol serta mengikat pewarna pembanding. 4.3 Bentuk bakteri Bacillus berbentuk batang dan membentuk rantai, Staphylococcus berbentuk bulat bergerombol seperti anggur, E.coli, Klebsiella dan Pseudomonas berbentuk batang, sedangkan Enterococcus berbentuk bulat.
DAFTAR PUSTAKA Adam, S. 1992. Dasar-Dasar Mikrobiologi dan Parasitologi untuk Perawat. Jakarta. Penerbit Buku Kedokteran EGC Behrman., Kliegman., A. Nelson. 1996. Ilmu Kesehatan Anak Nelson. Jakarta. Penerbit Buku Kedokteran EGC Campbell, N. A., J. B. Reec., L. G. Mitchell. 2003. Biologi. Edisi Kelima Jilid 2. Jakarta: Erlangga Etjang, I. 2003. Mikrobiologi dan Parasitologi untuk Akademi Keperawatan. Citra Aditya Bakti. Bandung James, J. C. Baker., H. Swain. 2002. Prinsip-Prinsip Sains Untuk Keperawatan. Jakarta: Erlangga Jawetz, E., J. L. Melnick., E. A. Adelberg. 1996. Mikrobiologi Kedokteran. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta Sachner, R. A. dan McPherson, R.A 2004. Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan Laboratorium. Edisi II. Jakarta: EGC Tjay, T. H. dan K. Rahardja. 2007. Obat-Obat Penting. Gramedia. Jakarta Yuwono, T. 2008. Biologi Molekular. Erlangga. Jakarta 6
