Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de química Laboratorio de fisiología 2017-2
Práctica 2. Hemostasia y grupos sanguíneos Grupo: 03 Realización: 14/02/17 Integrantes: ● Alcaid Alcaide e Palap Palapa a Miriam Miriam ____ _______ _____ ____ ____ _____ ___ Firma ● Roél Roél Sánc Sánchez hez Ivonne Ivonne ____ ______ _____ _____ ____ ____ __ Firma ● Sanchez Sanchez Basurto Basurto Arantxa Arantxa Citlali Citlali ______ __________ _______ ___ Firma ● Nieve Nieves s Mart Martíne ínez z Froil Froilán án Yair Yair _____ _______ ____ ____ ____ __ Firma
Introducción Un elemento fundamental para la homeostasis es la sangre. La sangre es un tejido conectivo compuesto por una matriz extracelular de líquido llamado plasma , en el cual se disuelven diversas sustancias y se encuentran numerosas células y fragmentos celulares en suspensión. (Tortora, 2006). La hemostasia tiene como función la prevención de la pérdida de sangre y del mantenimiento del flujo sanguíneo. Los mecanismos hemostáticos que actúan en un sangrado incluyen espasmo vascular, formación del tapón plaquetario, coagulación de la sangre gracias a la activación de factores plasmáticos, y crecimiento de tejido fibroso dentro del coágulo con el fin de reparar la lesión en forma permanente. (Guyton, 1989). La sangre se mantiene en su forma líquida siempre y cuando permanezca dentro de los vasos, pero si se extrae del cuerpo, se espesa y se forma un gel. Finalmente el gel se separa de la parte líquida que se le llama suero, es solo plasma sanguíneo sin las proteínas de la coagulación. El gel se denomina coágulo. Consiste en una trampa de fibras proteicas insolubles llamadas fibrina en la cual quedan atrapados los elementos corpusculares. El proceso de formación del gel es llamado coagulación, esta involucra diversas sustancias conocidas como factores de la coagulación. La mayor parte de los factores de la coagulación son identificados con números romanos que indican el orden de descubrimiento. Puede ser dividida en tres procesos. Puede producirse por una de las dos vías, la vía intrínseca y la vía extrínseca. (Tortora, 2006) Existan determinadas moléculas en la superficies de todas las células del cuerpo que pueden ser reconocidos como extrañas por el sistema inmunitario de otra persona. Nuestro sistema inmunitario responde a esto con determinados linfocitos que segregan una clase de proteínas denominadas anticuerpos y estas se unen de forma específica con los antígenos. Estas moléculas se conocen como antígenos. La especificidad de los anticuerpos es análoga a la especificidad de las enzimas por sus sustratos. Los antígenos eritrocitarios son de gran importancia clínica porque sus tipos tiene que ser compatibles entre los donantes y los receptores de transfusiones sanguíneas. (Fox, 2008) Hipotesis Se realizarán varias pruebas con muestras de eritrocitos, así que supondremos que en el momento de causar una herida, que se rompa o dañemos un vaso sanguíneo esto activará los mecanismos de la hemostasia. La duración de la hemorragia no debe tardar mucho en ser controlada hasta ser nula. Para determinar nuestro grupo sanguíneo, se colocaran una gota de suero de diferentes antígenos( A,B, AB, D) a una muestra de sangre, teniendo en cuenta que el sistema inmunitario manifiesta tolerancia hacia sus propios antígenos sobre sus glóbulos rojos y en el plasma antígenos contrarios. Al agregar el suero sobre una muestra de nuestra sangre sabremos qué grupo sanguíneo somos al observar en cual se presente una reaccion de aglutinacion. Objetivos generales ❖ ❖ ❖
Obtener una muestra de sangre humana empleando la técnica de la venopunción. Manejar adecuadamente las muestras de sangre humana. Comprender el fenómeno de la hemostasia así como sus diversas etapas.
Objetivos específicos ❖ ❖
Observar mediante la técnica “in vivo” el tiempo aproximado que tarda en finalizar el proceso de homeostasis ante una lesión cutánea. Observar el fenómeno de la hemostasia modificando las condiciones de temperatura y concentración de iones Ca2+ en el medio.
❖ ❖
Observar en el microscopio el polímero fibrina. Observar la reacción de aglutinación en muestras de sangre al mezclarlas con antisueros del sistema AB0 y del sistema Rh.
Resultados Fase vascular y plaquetaria: El tiempo total en que se completó esta etapa fue de 330s (5.5min), se logró plasmar un total de once manchas sobre el papel filtro las cuales iban decreciendo en tamaña mientras corría el tiempo. Tabla 1. Pruebas realizadas a la sangre para observar la coagulación a distintas temperaturas. Temperatura (°C)
Coagulación
Tiempo (min)
0
Sí hubo coagulación, la sangre se separó y en la parte de abajo quedó la fase sólida
13:44
37
La coagulación fue muy rápida a comparación con las otras temperaturas, quedó totalmente espesa en una sola fase.
6:40
60
Sí hubo coagulación, la sangre se empieza a hacer más espesa y se separa, la fase sólida queda abajo
12:22
Citrato de sodio al 8% + Cloruro de calcio al 2%
Citrato de sodio al 8% + Cloruro de calcio al 4%
Más de 15 minutos y contando
Más de 45 minutos y contando
Tabla 2. Acción del calcio
Tiempo
Tabla 3. Tipos de grupos sanguíneos
Nombre
Antisuero al que reaccionó
Tipo de antígenos
Rh
Tipo de sangre
Miriam
Anti-A
A
Negativo
A negativo
Ivonne
Anti D
Ninguno
Positivo
O positivo
Arantxa
Anti D
Ninguno
Positivo
O positivo
Froilan
Anti-A y Anti D
A
Positivo
A positivo
Análisis de resultados Fase vascular y plaquetaria. Esta actividad experimental consistió en determinar la cantidad de sangrado y el tiempo aproximado que requiere el proceso de hemostasia ante alguna lesión que involucra la aparición de sangre. En este proceso fue un poco lento ya que tardó 5.5 minutos en dar la respuesta del organismo ante la herida realizada por una lanceta, observamos durante el procedimiento la disminución de manchas de sangre en el papel filtro, logrando obtener 11 manchas las cuales su tonalidad fue disminuyendo con el paso del tiempo. Efecto de la temperatura Esta actividad experimental consistió en observar la coagulación de la sangre y ver si ésta se daba a diferentes temperaturas (0°C, 37°C, 60°C), fue de esperarse que en el caso del tubo que estuvo a 37ºC hubiera coagulación de la sangre en un tiempo relativamente pequeño de 6:40 minutos. Una vez reconocido el fenómeno se procedió a colocar a la misma temperatura (37°C) a las muestras que no habían coagulado respecto a la que sí en este caso se pudo observar que una de ellas también logró coagular (0°C) en comparación de la otra (60°C). Acción del calcio Al realizar esta parte, observamos que ciertos factores influyeron para que la respuesta en estos compuestos tardará demasiado tiempo en dar respuesta o bien no se llevará a cabo el objetivo, el cual consistía en observar la coagulación de la sangre modificando la temperatura.Vimos principalmente que las concentraciones de calcio (2% y 4% respectivamente) tardaron alrededor de 45 minutos aproximadamente, lo cual durante el proceso de observación la sangre tomó una consistencia líquida y durante todo el tiempo transcurrido no se apreció modificación alguna dando como resultado la nula coagulación de la sangre. Formación de fibrina Se observan tenuemente las fibras de fibrina, las cuales se encargan de empaquetar glóbulos rojos y plaquetas para la coagulación de la sangre, las fibras se extienden por todas partes para acelerar el fenómeno de la coagulación. En el microscopio óptico se pudo observar pequeños “hilos”, mismos que corresponden a las fibras de fibrina; por otra parte en el resaltado de bordes se puede visualizar de una manera más clara cómo es que las fibras se expanden en todas direcciones, ocasionando la coagulación sanguínea. Grupos sanguíneos Esta parte experimental pudimos observar que al añadir la aglutinina correspondiente, se formará un aglutinamiento de glóbulos rojos. Siendo que sí se forma este aglutinamiento significa que el antígeno o aglutinógeno se encuentra en la superficie de nuestro glóbulo rojo. Obtuvimos dos tipos de sangre A y O, lo que implica que el tipo de sangre del tipo A tiene antígenos y observamos que la del tipo de sangre O no tienen en su membrana ninguna de las dos proteínas ni A ni B, por lo que no pueden despertar reacción defensiva alguna en otra persona, lo cual hace un tipo de sangre universal. Respecto al tipo de Rh que tienen, los compañeros del tipo A tienen Rh positivo y Rh
negativo, donde observamos que si aglutina en el factor Rh será positivo mientras para el negativo no lo hacía, lo mismo pasó para las compañeras con el tipo de sangre O, donde las dos aglutinaron y fue positivo. Discusión de resultados Fase vascular y plaquetaria. Los valores normales de la coagulación sanguínea deben mostrar una tasa de protrombina (TP) superior al 70 %, el tiempo de tromboplastina activada debe situarse entre 30 y 40 segundos mientras que el tiempo de sangría (TS) será de entre dos y cuatro minutos. (1) Los resultados no fueron los esperados debido a que el pinchamiento del dedo medio no fue de profundidad lo cual ocasionó que el sangrado fuera mínimo y por lo tanto la recolección de gotas fuese inferior a comparación de lo esperado que era llenar por lo menos la circunferencia del papel filtro. Efecto de la temperatura Lo obtenido en esta fase fue de manera satisfactoria, ya que observamos la tendencia de que a menor temperatura la coagulación es más tardada o en algunos casos nula, a diferencia de que si se incrementa la temperatura la sangre coagula con mayor velocidad. Acción del calcio Se precisan iones calcio para favorecer o acelerar todas las reacciones de coagulación, excepto los dos primeros pasos de la vía intrínseca. Por tanto en ausencia de iones calcio, la sangre no se coagula por ninguna de las dos vías. (2) La acción de calcio fue por demás errónea, empezando por las concentraciones de las soluciones ya que había solución de cloruro de calcio al 2% y al 4%, mientras que la solución de Citrato de sodio estaba al 8% y las soluciones indicadas tenían que ser del 4%, pero probablemente éste no sea el factor determinante para no llevarse a cabo el experimento, ya que también se observó que la temperatura registrada en el termómetro era de 35.5ºC cuando realmente se tenía que trabajar a 37ºC. Por lo tanto el conjunto de estos factores hizo posible que no se llevase a cabo el experimento. Formación de fibrina La participación de las plaquetas en el proceso de la hemostasia es fundamental. El resultado es la formación de una red de fibrina que refuerza el lábil tapón de plaquetas. Posteriormente, la fibrina formada se retrae a un volumen pequeño, proceso que es dependiente de la plaqueta (3). Los resultados obtenidos en esta fase fueron satisfactorios, después de dejar reposar la muestra de sangre por unos treinta minutos esta empezó a coagular, la coagulación implica la formación de hebras de fibrina. Al tratar la muestra como estaba indicado en el protocolo de la práctica (enjuagarla y teñirla) se pudieron observar las fibras de fibrina en el microscopio usando el aumento de 40x. Grupos sanguíneos Una gota de sangre se combina con suero anti-A, que contiene anticuerpos anti-A, los que aglutinará glóbulos rojos con antígenos A. Otra gota de sangre se mezcla con un suero anti-B, que contiene anticuerpos anti-B, y aglutinará glóbulos rojos que poseen el antígeno B. Si los glóbulos rojos aglutinan sólo cuando son mezclados con el suero anti-A, son del grupo A. Si lo hacen sólo al mezclarse con suero anti-B, serán del grupo B. En cambio, si ambas gotas de sangre aglutinan, el grupo será AB; y si ninguna de las dos aglutina, la sangre será del grupo 0. (4) Los resultados derivados de esta fase fueron satisfactorios pues las pruebas para saber a qué grupo sanguíneo pertenece cada integrante del equipo coincidieron con el conocimiento previo que se tenía de la naturaleza del grupo sanguíneo de cada uno. Así los que son sangre tipo A, al mezclar su muestra con el suero anti-A (con contenido de anticuerpos anti-A), se observará una reacción de aglutinación confirmando que la sangre es del tipo A, de la misma manera ocurrirá para los de sangre B pero esta vez en contacto con el suero anti-B. Cuando no se observa ningún tipo de aglutinación
significa que la muestra de sangre no tiene antígenos que reaccionan con los anticuerpos del suero por lo que el tipo de sangre será O. Para determinar si la muestra de sangre posee el factor Rh, esta se mezcla con el suero anti-D (que contiene anticuerpos para el antígeno Rh), si hay aglutinamiento significará que la sangre es Rh positiva. Conclusión Si se logró determinar el tiempo que tarda la homeóstasis cuando existe una lesión cutánea, que en este caso fue pinchar la parte anterior del dedo medio. La parte de acción de calcio fue fallida lo cual ya se trato en la discusión. En el caso de la fibrina se logró lo esperado ya que al observar al microscopio se vió como una especie de raíz de árbol, forma que tiene la fibrina, la cual absorbe el azul de metileno que se le añadió a la muestra. Y las pruebas para determinar los diferentes grupos sanguíneos de los miembros del equipo fue correcta, algunos de los resultados coincidieron con el grupo sanguíneo que algunos de los miembros ya sabían y por otra parte, los miembros restantes conocieron en ese momento su grupo sanguíneo. Finalmente para concluir es importante la identificación de los grupos sanguíneos de cada individuo, ya sea para la evaluación en casos de necesarios de una transfusión sanguínea, donar sangre o para determinar la incompatibilidad. La síntesis de fibrina en el organismo es de suma importancia, un exceso de fibrina en el cuerpo humano propiciaría desórdenes como trombosis, mientras que un déficit de la misma nos expondría a hemorragias continuas. El fenómeno de la coagulación es un proceso que se efectúa a una cierta temperatura “normal”, si esta propiedad se modifica el proceso se inhibe y dependiendo de esta modificación se puede activar o inhibir permanentemente. Bibliografía ● (1): CCM. La coagulación de la sangre. Consultado el 20 de febrero del 2017 en: http://salud.ccm.net/faq/6188-la-coagulacion-de-la-sangre ● (2): Guyton, A.C. Hall, J.E. Tratado de fisiología médica. 7ª ed. Madrid: Elsevier; 1989. ● (3): Bauer KA, Weiss LM, Sparrow D, et al. Agning-associated changes in indices of thrombonin generation and protein C activation in humans. J Clin Invest 1.987; 80:1527-1534. ● (4): Tortora, G.J. Derrickson, B. Principios de anatomía y fisiología. 11ª ed. Buenos Aires: Editorial Médica Panamericana; 2006. ● Fecha: 19/Febrero/2017, Hora; 14:28, disponible en: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1405-99402005000700016 ● Fecha: 19/Febrero/2017, Hora; 14:44, disponible en: http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:rJpwOXnk1UYJ:depa.fquim.unam. mx/amyd/archivero/P8_Calcio_en_la_coagulacion_30659.pdf+&cd=1&hl=es-419&ct=clnk&gl =mx
