MICROBIOLOGIA PRACTICA No. 5 Aislamiento e identificación microscópica de Honos Aislar e identifi identificar car hongos fila filame mentosos ntosos o mohos mohos y levaduras levaduras (hongos OB!" OB!"TI TI#O #O$$ Aislar unicelular unicelulares) es) por medio de su aislami aislamiento, ento, cultivo y microculti microcultivo vo para el estudio de sus características características morfológicas y de reproducción.
MARCO T"%RICO$ "&AM"N MOR'OL%GICO (" LO) MOHO) *HONGO) * HONGO) 'ILAM"NTO)O)+ Para el aislamiento y cultivo de los mohos (hongos filamentosos), se utilizan medios de cultivo específicos que favorezcan su desarrollo, por el tipo de nutrientes que contienen, (Agar papa dextrosa, Agar saouraud dextrosa, Agar extracto de malta) generalmente con elevadas concentraciones concentraciones de az!car, az! car, p" #cido, condiciones condiciones aeroias y temperatura entre $%& y '%&. e pueden utilizar placas o tuos con agar inclinado para su cultivo. Puesto que la identificación de los hongos depende en gran parte de sus características morfológicas, como como el tipo tipo de agru agrupac pació ión n de las espor esporas as,, dee deen n de toma tomarr preca precauc ucio ione ness al hacer hacer preparaciones para el examen microscópico. microscópico. *n general. +os cultivos líquidos líquidos no se utilizan utilizan para este propósito. *n los cultivos en medios medios sólidos en placa se oservan las características físicas del cultivo y las esporas como olor del micelio. olor de las esporas Aspecto (terroso, h!medo, cremoso. -ao -ao estas estas condi condici cione oness no es posi posile le reali realizar zar prepar preparaci acione oness micro microscó scópi picas cas ya que la mani manipul pulac ació ión n rompe rompe y desorg desorgan aniz izaa las las estruct estructuras uras y caract caracterí eríst stica icass del mice miceli lio, o, que determinan su identificación y clasificación con ase a su tipo de reproducción. +os hongos se estudian y clasifican a trav/s de las diferencias en su morfología y tipos de reproducción. +as colonias o talo difieren en tama0o, aspecto y color. u desarrollo puede ser en colonias aisladas o desarrollo extensivo sore toda la superficie del medio de cultivo, limitado limitado solo por los ordes o paredes de la caa o tuo. tuo . *l color característi c aracterístico co de los mohos se dee al color de masas de esporas asexuales. 1tra característica !til es el tipo de hifas que constituyen el miceli micelio o vegetativo, las cuales pueden ser septadas (con paredes transversales) transversales) o cenocíticas (sin paredes transversales) 2n m/todo para examinar los hongos filamentosos o mohos es el microcultivo o t/cnica de cultivo en portaoetos, ya que permite manear y oservar la especie sin modificar su desarrollo, el arreglo y acomodo de sus estructuras de manera que permanezcan intactas. intactas.
MOR'OLOG,A - R"PRO(CCI%N (" LA) L"#A(RA).
+a mayoría de las levaduras se reproducen, principalmente, mediante el proceso ase/0al de emación. Para ello, la c/lula madre forma una zona de crecimiento hacia el exterior, la cual finalmente se separa como una c/lula hia. +a reprod0cción se/0al en las levaduras que producen esporas sexuales se lleva a cao por la conugación de dos ascosporas1 formando una c/lula vegetativa diploide. +uego el n!cleo se divide en cuatro o menos n!cleos, que maduraran en cuatro ascosporas. +as ascosporas son retenidas en la c/lula madre, posteriormente el asca (saco) se rompe y liera las ascosporas, para repetir el ciclo.
PROC"(IMI"NTO PARA "L AI)LAMI"NTO (" HONGO). 2. *sterilizar el #rea de traao con una solución de yodoforo. 3. 1rganizar el material y medios de cultivo dentro del #rea de esterilidad del mechero 4. . 5. 6. 7. 8.
de -unzen encendido. Preparar caas de Petri o tuos con agar inclinado conteniendo el medio de cultivo para el desarrollo de hongos (Agar papa dextrosa, Agar saouraud dextrosa, Agar extracto de malta,). A partir de la muestra prolema, inocular las caas o placas de Petri y3o los tuos con agar inclinado selectivo para el desarrollo de hongos de la siguiente manera. 4omar el asa de cultivo y esterilizarla a la flama llev#ndola hasta la incandescencia, enfriarla inmediatamente sore la superficie del agar. on el asa tomar una peque0a porción de la muestra prolema y semrar por estria sore la superficie del medio de cultivo en las caas de Petri o en los tuos con agar inclinado. 5ncuar las caas de Petri y3o tuos con agar inclinado a temperatura amiente por ' a 6 días. 5dentificar las siguientes características de cultivo. olor del micelio. Aspecto del cultivo (terroso, h!medo, aterciopelado, rugoso) 4ipo de desarrollo (extensivo, en colonias).
PROC"(IMI"NTO PARA "L MICROCLTI#O. 2. *sterilizar #rea de traao con una solución de yodoforo. 3. 1rganizar el material y medios de cultivo dentro del #rea de esterilidad del mechero de -unzen encendido. 4. Preparar caas de Petri conteniendo el medio de cultivo para el desarrollo de hongos (Agar papa dextrosa, Agar saouraud dextrosa, Agar extracto de malta,). . uadricular las caas con un exacto, de manera de poder extraer loques del agar. 5. *sterilizar caas de Petri conteniendo un portaoeto y cureoetos. 6. Arir la caa dentro del #rea de esterilidad y colocar con pinzas esteriles un loque del agar cuadriculado. 7. A partir de la muestra prolema conteniendo mohos en desarrollo, inocular o semrar por picadura el loque de agar en las cuatro caras del loque. 8. 5ncuar los microcultivos a temperatura amiente por ' a 6 días. 9. upervisar el desarrollo de los hongos cada $7 horas. 2:. 5dentificar al microscopio la especie de hongo desarrollado, colocando el portaoeto en la platina y enfocar con el oetivo de seco d/il (8%9) y seco fuerte (7%9). 22. 5dentificar características de cultivo y morfológicas
aracterísticas de cultivo. olor del micelio. Aspecto del cultivo (terroso, h!medo, aterciopelado, rugoso) 4ipo de desarrollo (extensivo, en colonias). aracterísticas morfológicas. 4ipo de hifas (taicadas o cenocíticas) de esporas (artrosporas, conidiosporas, clamidosporas, 4ipo esporangiosporas, lastospora o lastoconidia) :orfología o estructura de desarrollo.. 23. 5ncluir fotografía de la identificación microscópica en el reporte.
PROC"(IMI"NTO PARA "L AI)LAMI"NTO (" L"#A(RA)$ 2. A partir de un cultivo de $7 h. en caldo nutritivo de la levadura Sacharomyces se 3. 4. .
inoculan placas de Petri conteniendo el medio de cultivo para el desarrollo del microorganismo. emrar por estria en tres planos sore la superficie del medio de cultivo, para otener colonias aisladas. 5ncuar a temperatura amiente por ' a 6 días. 5dentificar las siguientes características de cultivo ;orma de las colonias. olor de las colonias. Aspecto (cremosas, rillantes, opacas, rugosas). 4ama0o. -orde (liso, rugoso).
PROC"(IMI"NTO PARA LA I("NTI'ICACI%N MICRO)C%PICA. 2. A partir del cultivo de $7 h de Sacharomyces hacer preparaciones h!medas. 3. *sterilizar una asa de cultivo y enfriarla, colocar una asada del cultivo de $7 h de 4. . 5.
Sacharomyces sore un portaoetos limpio y adicionar una gota de lugol. olocar un cureoetos sore la preparación. olocar la preparación h!meda sore la platina del microscopio y oservar con los oetivos en seco, seco d/il 8%9 y seco fuerte 7%9. 5dentificar las características morfológicas por medio de una fotografía e incluirlo en el reporte de laoratorio.
I("NTI'ICAR CLTI#O (" MOHO)$ 2. Color de micelio 3. Aspecto *pol;oso <=medo1 aterciopelado1 filamentoso1 seco+ MICROCLTI#O$ 2. Hifas. Ta>icadas o cenoc?ticas 3. Tipo de esporas ase/0ales *artrosporas1 clamidosporas1 esporaniosporas o >lastosporas+
4. Tomar 0na fotoraf?a de cada 0na de las estr0ct0ras identificadas *
$.
'.
7.
Tamao * 2mm1 de 2 mm o D 2 mm de diEmetro+
Aspecto *cremoso1 >rillante1 opaco1 r0oso1 planas1 secas1 cónca;as o con;e/as + Caracter?sticas de c0lti;o Microscópicas 6.
2. 'orma 3. Proceso de emación 4. 'otorafiar imEenes
"N "L R"PORT" (" LABORATORIO INCLIR$
2. "L C")TIONARIO (" LA PRACTICA CORR")PON(I"NT" *n0merar pre0nta @ resp0esta+ 3. "L R"PORT" (" LABORATORIO INCL-"$ 2+ N=mero de practica 3+ Nom>re de la practica 4+ O>Feti;o + Tcnicas 0tiliadas 5+ Medio de c0lti;o 6+ Tiempo @ temperat0ra de inc0>ación 7+ Caracter?sticas indicadas en el p0nto anterior 8+ Incl0ir fotoraf?a de la identificación microscópica en el reporte.
