PRACTICA DE LABORATORIO BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
Por:
Profesor: Katherine López
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR MEDELLIN 2017
INTRODUCCION
El presente se muestra a través de la realización de un taller las diferentes actividades realizadas en el laboratorio y que es un complemento a la materia Biología molecular que estamos cursando. Este trabajo muestra la experiencia del laboratorio agrupado en siete prácticas (la numero cuatro no realizada). La primera p rimera llamada bioseguridad abordamos el concepto de dilución de hipoclorito para la desinfección y los diferentes elementos del laboratorio con su respectiva utilidad, definimos bioseguridad importante para la realización de la práctica. La segunda practica del d el laboratorio llamada microscopía mostramos todos los montajes húmedos para observación, en los que observamos, agua estancada, hebra hilo, papel milimetrado, letra, tela, en esta práctica se pueden observan tanto fotos como conceptos. En la tercera practica abordamos el tema célula: crenación, citolisis, plasmólisis y turgencia”, donde a través de diferentes montajes pudimos observar estos fenómenos. La
quinta practica se aborda el tema de acción de lisosomas, a pesar de las dificultades que tuvimos en el laboratorio para observar bien este proceso mediante un ciliado, se define y explica lo realizado. La sexta practica “Tejidos vegetales: Aislamiento de cloroplastos intactos” no se realiza la practica en el laboratorio como tal,
pero se definen en este taller
conceptos vistos de fotosíntesis, la última practica y que corresponde a la número siete, abordamos la mitosis y meiosis, reconocemos el ciclo celular, los cromosomas y genes. Apreciamos el proceso de división celular por mitosis con sus fases: interface, profase, metafase, anafase, telofase. También el proceso de división celular por Meiosis, pero pe ro solo en la parte teórica.
OBJETIVO GENERAL
La guía de prácticas del curso de Biología Celular y Molecular tiene como objetivo dar herramientas al estudiante para comprender las propiedades, estructura, funciones, orgánulos celulares y las interacciones bioquímicas, genéticas, con el ambiente y su ciclo vital desarrollando su pensamiento científico y crítico respecto a las relaciones que se dan en la Biología celular y Molecular. OBJETIVOS ESPECIFICOS
•
Conocer las normas de bioseguridad en el laboratorio.
•
Comprender el funcionamiento del microscopio y reconocer los diferentes poderes del microscopio mediante diferentes montajes.
•
Aprender a hacer los montajes o preparaciones húmedas y las principales sustancias usadas. Reconocer las principales funciones del microscopio y comparar sus propiedades de resolución, ampliación y penetración.
•
Observar los fenómenos de hipotonía, isotonía e hipertonía en células animales y vegetales.
•
Observar la función de los lisosomas de manera análoga en ciliados.
•
Aprender a diferenciar los periodos del ciclo celular.
PRACTICA 1 “BIOSEGURIDAD” Presentación de resultados 1. Teniendo en cuenta la fórmula V1xC1=V2xC2; en una tabla presente diluciones al 0.5%, 1%, 1.5% y 5% de hipoclorito de sodio que tiene una concentración inicial de 10% indicando la concentración inicial, concentración final, volumen inicial de hipoclorito, volumen de agua y volumen final para cada dilución.
Concentración Final (C2)
Volumen inicial de Hipoclorito (V1)
Volumen final para la dilución (V2)
Volumen de agua (ml)
100.000 ppm
5.000 ppm 10.000 ppm
50 ml 100 ml
5.000 ppm 10.000 ppm
950 ml 900 ml
100.000 ppm
15.000 ppm
150 ml
15.000 ppm
850 ml
100.000 ppm
50.000 ppm
500 ml
50.000 ppm
500 ml
Concentración inicial (C1) 10% 100.000 ppm
2.En una tabla identifique el nombre, uso y elabore el gráfico del siguiente material de vidrio empleado en el laboratorio: Erlenmeyer, matraz aforado, embudo, tubo de ensayo, pinzas, gradilla, capsula, mortero, vaso de precipitado y probeta.
NOMBRE
USO
El matraz Erlenmeyer es un recipiente de vidrio que se utiliza en los laboratorios, tiene forma de cono y tiene un cuello cilíndrico, es Erlenmeyer plano por la base. Se utiliza para calentar líquidos cuando hay peligro de pérdida por evaporación.
Matraz aforado
Un matraz aforado o matraz de aforo es un recipiente de vidrio de fondo plano, posee un cuello alargado y estrecho, con un aforo que marca dónde se debe efectuar el enrase, el cual nos indica un volumen con gran exactitud y precisión
GRAFICO
Embudo
Un embudo es una pieza cónica de vidrio o plástico que se utiliza para el trasvasijado de productos químicos desde un recipiente a otro
Tubo de ensayo
En los laboratorios se utiliza para contener pequeñas muestras líquidas, y preparar soluciones
Pinzas
Permite sostener firmemente diferentes objetos mediante el uso de una doble nuez ligada a un soporte universal. La pinza se compone dos brazos o tenazas, que aprietan el cuello de los frascos u otros materiales de vidrio mediante el uso de tornillos que pueden ajustarse manualmente.
Gradilla
Una gradilla es un utensilio utilizado para dar soporte a los tubos de ensayos o tubos de muestras. Normalmente es utilizado para sostener y almacenar los tubos. Este se encuentra hecho de madera, plástico o metal.
Capsula
La capsula de porcelana es un pequeño contenedor semiesférico con un pico en su costado. Este es utilizado para evaporar el exceso de solvente en una muestra. Las Capsulas de Porcelana existen en diferentes tamaños y formas, abarcando capacidades desde los 10 ml hasta los 100 ml.
Mortero
El Mortero tiene como finalidad machacar o triturar sustancias solidas
Su objetivo principal es contener líquidos o sustancias químicas diversas de distinto tipo.
Vaso de precipitado
Probeta
Es utilizado para trasportar líquidos a otros recipientes. También se puede utilizar para calentar, disolver, o preparar reacciones químicas. La probeta es un instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes superiores y más rápidamente que las pipetas, aunque con menor precisión.
(Tplaboratorioquimico, Sf)
Cuestionario: 3. Defina que es Bioseguridad Conjunto de actividades, intervenciones y procedimientos de seguridad ambiental, ocupacional e individual que garantizan el control del Riesgo Biológico. 4. ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud? Cumpliendo las normas de bioseguridad, utilizando correctamente los elementos de protección personal y acatando las instrucciones dadas por el profesional para cada practica o actividad realzada en él. 5. Defina el concepto de: ➢
Limpieza: procedimiento encaminado a disminuir el número de gérmenes en un área mediante la utilización de agua y jabón.
➢
Contaminación: Presencia o acumulación de sustancias en el medio ambiente que afectan negativamente el entorno y las condiciones de vida, así como la salud o la higiene de los seres vivos.
➢
Desinfección: Proceso encaminado a disminuir a cantidades mínimas el número de microorganismos en un área, por medio se sustancias químicas destruyendo la mayor parte de ellos.
➢
Descontaminación: Limpieza y desinfección o proceso de esterilización que se efectúa para convertir los utensilios contaminados en aptos y seguros para su uso.
➢
Esterilización: Proceso por el cual se destruyen todos los microorganismos incluyendo el 100% de esporas. (Dr. Andrea, Dr. Pablo, & Claudia, 1979)
PRACTICA 2 “MICROSCOPÍA” Presentación de resultados Elaborar los esquemas correspondientes para cada una de las preparaciones. Cada esquema debe incluir: título, aumento y además señalar las distintas estructuras celulares que se observen.
MONTAJE
4X
Se observan fibras y ESTANCADA partículas contenidas en la gota de agua.
10X
40X
100X
Se observa en más detalle lo que puede ser una especie de habitad en el agua estancada.
Se enfoca directamente una de las partículas vistas en 10x pero aún o se define ningún micro organismo.
Se observa un protozoo que es muy encontrarlos en aguas estancadas que contienen materia orgánica en descomposición y que son ricas en sustancias nutritivas.
AGUA
MONTAJE
4X
10X
40X
100X
Se observan las fibras del hilo y como se encuentran trenzadas. De textura fibrosa.
Se aprecia que el hilo está conformado por unas fibras aún más delgadas que al entrelazaren forman el hilo inicial.
Se observa los dos hilos sobrepuestos, se ven los espacios entre las fibras que lo componen y a la vez las microfibras que componen a estas.
Casi no se diferencia el hilo a no ser por el color rojo de uno. Es la microfibra en un tamaño muy amplio.
Hebra de hilo
Letra
Observamos la definición de la letra y la textura del papel.
Se observa todo el contorno de la letra donde se puede ver que la tinta no cubre todos los espacios del papel, y se aprecia aún mejor la textura del papel.
Al parecer es un fragmento de la letra, la cual es una mancha algo borrosa.
La letra es una mancha porosa sin ninguna definición, se aprecia lago de la textura rugosa del papel.
MONTAJE
4X
10X
40X
100X
Tela
se observan los hilos de colores que entrelazados forman cada uno de los trazos de la tela.
Hay una mejor definición de la tela, se ven los espacios entre las fibras organizados de un color a otro.
Se ven los espacios entre las fibras y las fibras que pasan entre un color y otro.
Se definen mejor los colores de la tela en comparación con el anterior (40x), y los espacios que existen entre fibra y fibra.
Papel No aplica
milimetrado Diámetro aproximado del campo visual 4.5mm.
Diámetro aproximado del campo visual 1.7mm.
Diámetro aproximado del campo visual 0.5mm.
Cuestionario 1. ¿Qué organismos pueden observarse en la gota de agua estancada? Mayormente podemos apreciar los paramecios (género Paramecium) que son protozoos ciliados con forma ovalada, que abundan en aguas dulces estancadas con abundante materia orgánica, como charcos y estanques. “Son probablemente los seres unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados más estudiados por la Ciencia. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de apenas 0.5 milímetros”. (blogs, 2015, párr 1).
2. ¿Son todos de igual tamaño y forma? Todos estos organismos presentan diversas formas y tamaños, algunos son alargados, ciliados, redondos, por ejemplo; Ameba (o Amiba) es un protista unicelular del género Amoeba, es un protozoo caracterizado por su forma cambiante, casi todos los nematodos son gusanos de cuerpo muy pequeño afilado y alargado. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de apenas 0.5 milímetros. 3. ¿Se observan organismos móviles o estáticos? Algunos se observan estáticos y en otros se observan movimientos, sobre todo en los más pequeños, se mueven por medio de flagelos o colas que tienen. 4. Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine: 4.1.
¿Cómo se manifiesta el poder de resolución?
Las mejores imágenes se para nuestro concepto fueron en la resolución 10x, pues se puede apreciar bien la textura del hilo y de la tinta de las letras. “El poder de resolución del microscopio es la capacidad de los lentes de mantener separado dos puntos que a simple vista parece uno solo”. (Armas,
Sf, Capitulo 3). En 40x y 100x la letra se distorsiona y el hilo sigue estando compacto y se
observan las fibras en las terminaciones. 4.2.
¿Cómo se manifiesta el poder de aumento?
En 40x y 100x se distorsiona la tinta y la forma de la letra, mientras en el hilo se pueden observar el color de base del hilo, los micro cortes y el color. “Cada sistema de lentes es capaz de producir una imagen aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, así que 10x significa que la imagen está aumentada 10 veces”.
4.3.
(Armas, Sf, Capitulo 3).
¿Cómo se manifiesta el poder de definición?
En 40x y 100x la letra ya la letra no tiene forma, mientras el hilo sigue manteniendo la forma y se observa mejor las fibras que lo compone. 4.4.
¿Cómo se manifiesta el poder de penetración o profundidad?
En la letra se observa que traspasa la tinta y se alcanza a ver el papel en la cual fue impresa, y en el hilo no se alcanzan a ver las fibras a profundidad. Podemos decir que la penetración o profundidad es la capacidad que tiene el microscopio de permitir la observación de diversos planos del objeto estudiado de manera simultánea.
PRACTICA 3 CÉLULA: CRENACIÓN, HEMÓLISIS, PLASMÓLISIS Y TURGENCIA”
Presentación de resultados Elaborar los esquemas correspondientes para cada una de las preparaciones. Cada esquema debe incluir: título, aumento y además señalar las distintas estructuras celulares que se observen. En un cuadro presente los resultados de las soluciones hipotónicas, isotónicas e hipertónicas para los dos tipos de células. MEDIO MEDIO
AGUDA DESTILDA
AGUDA DESTILDA
CELULA CELULA VEGETAL Aumento 10x, Se observa la pared
celular, la forma de la célula, las (ELODEA) micro fibrillas de celulosa, los cloroplastos (de color verde por la presencia de clorofila), el núcleo que es el cuerpo grande y denso y la vacuola la zona clara en el centro de la célula.
ANIMAL (GOTA DE
Aumento 40x, Se pueden observar las SANGRE) células muy juntas y podríamos decir que identificamos dos tipos de células los linfocitos y los basófilos, por los granulas que se contienen en toda ella.
CELULA VEGETAL
NaCl 0,6%
NaCl 0,9%
Sol. Hipotónica
Sol. Isotónica
NaCl 1,2% Sol. Hipertónica
NaCl 10% Sol. Hipertónica
Esta solución hipertónica contiene mucho soluto y se observa aun la forma de la pared celular, solo que a diferencia de la anterior existió una ligera deformación de la célula. También vimos que los cloroplastos se agrupan entre ellos.
Objetivo 100x
Que se observa
CELULA ANIMAL
En el medio hipotónico el contenido de la célula se alcanzó a ver diluido, ya que entro agua a la célula para alcanzar el equilibrio entre su interior y el medio.
En el medio isotónico la célula se observó sin cambios en forma y tamaño, ya que la concentración de solutos tanto en su interior con en su exterior se encontraba en equilibrio.
En la solución hipertónica se observó la pared celular más alargada, porque para equilibrar el medio con su exterior, salió agua de la célula al medio, sin deformar demasiado a la célula, porque que la concentración del medio estaba cerca al equilibrio.
NaCl 0,6%
NaCl 0,9%
NaCl 1,2%
NaCl 10%
Sol. Hipotónica
Sol. Isotónica
Sol. Hipertónica
Sol. Hipertónica
En la solución hipotónica lo glóbulos rojos se hinchan hay osmosis con el medio y ellos.
En la solución isotónica debido a su equilibrio los eritrocitos "glóbulos rojos" no presentan ninguna alteración gracias medio equilibrado en el que se encuentran.
En esta solución aún se observan glóbulos rojos los cuales han perdido tamaño por la deshidratación algunos se han estallado ya.
En la Solución hipertónica se destruyeron los glóbulos rojos y al deshidrataren estos estallaron.
Objetivo 100x
Que se observa
Cuestionario 1. Mencione las diferencias observadas entre el comportamiento de la célula vegetal y animal. Explique. CELULA VEGETAL Ocurrió plasmólisis S I S I cuando la célula fue L sometida a un medio O hipertónico, Se observó M S que la célula perdía A L tamaño y cambiaba de P forma, perdiendo agua en su interior.
Ocurrió en el medio A I hipotónico, se observó C que la célula vegetal N E presento un proceso de G R hinchamiento por la U de líquido. T entrada Células Turgentes
CELULA ANIMAL Ocurrió cuando la célula se expuso a una mayor N concentración de Ó I solutos provocando que C A la célula libere N contenido líquido al E R medio y se provoca una C deshidratación. Los eritrocitos se destruyen. Esto sucede en un medio hipotónico la S I célula le cede el paso al S I agua al interior L O permitiéndole T I equilibrarse con su C medio. Los eritrocitos aumentan de tamaño.
Nota: No pudimos observar bien detenidamente la creación y la citolisis puesto que el objetivo de 40x y 100x se observaba que las células se encontraban unas encima de otras y no permitió la observación o tal vez la coagulación de sangre ocurría demasiado rápido que nos daba el tiempo de visualizar bien estos fenómenos. 2. Describe lo que sucede en una célula cuando se coloca en un medio: a) hipotónico, b) isotónico, c) hipertónico.
Figura 1Célula Vegetal
Figura 2 Célula Animal
a) Hipotónico: La célula al estar expuesta en una concentración con menos solutos, la célula tiende a buscar el equilibrio y deja pasar líquido al interior de ella y tiende a sobreexponerse ante el medio. b) Isotónico: Este proceso ocurre cuando el medio tiene la misma concentración de soluto tanto dentro y por fuera de la célula. c) Hipertónico: Es la concentración de solutos más grande que se encuentra en el medio externo en donde se encuentra la célula, y esta tiende a perder líquido (agua) inclusive hasta llegar a deshidratarse por completo. 3. Explique en qué consisten los fenómenos de ósmosis y de difusión. En la membrana de la célula semipermeable, se da el paso de agua que sucede del área de mayor concentración de agua (con menor concentración de soluto) al área de menor concentración de agua (con mayor concentración de soluto). A este proceso se le conoce como Ósmosis. Es el movimiento de moléculas de una región de alta concentración a otra de menor concentración. A este proceso se le llama difusión. (Raisman & Dra. Ana María, 2008) 4. ¿Por qué los sueros fisiológicos que se aplican a pacientes intravenosamente deben ser isotónicos? Porque si el suero es de solución hipertónica provocaría un efecto negativo en el en organismo, ya que causaría la deshidratación total de las células. Si esta fuera de solución hipotónica la célula se sobre hinchan dentro del organismo provocando un rompimiento celular ocasionando muerte celular. “La osmolaridad del líquido isotónico se aproxima a la osmolaridad del plasma suero (285 --
‐ 295 mOsm/l). Los líquidos isotónicos se utilizan para hidratar el compa rtimento intravascular
en situaciones de pérdida de líquido importante, como deshidratación, hemorragias, etc. Las soluciones isotónicas utilizadas frecuentemente son Cloruro sódico al 0,9% (conocido tamb ién por suero salino o fisiológico)”
(Raisman & Dra. Ana María, 2008)
PRACTICA 5 “Acción de lisosomas” Presentación de resultados Presentar los siguientes esquemas: A. B. C. D. E.
Cultivo de levaduras a 0-4°C Cultivo de levaduras a 30°C Cultivo de levaduras a 100°C Esquema inicial del cultivo de ciliados con levaduras. Esquema final del cultivo de ciliados con levaduras.
Se tomaron 3 tubos de ensayo y en cada uno de ellos se puso un milímetro de cultivo de levaduras. Luego se tomó el primero y se puso en el refrigerador para que alcanzase una temperatura de entre 0 y 4 °C, el segundo se puso en baño María a 30 °C y el tercero se puso a hervir en baño María. 10 minutos cada uno. Luego de los diez minutos se toma cada tubo de ensayo y se les puso 0.5cc de Rojo Congo al 0.4%, agitamos cada 1 y dejamos reposar durante 5 minutos, realizamos una observación sin el microscopio para ver el grado de tinción.
En base a la observación señalamos el cultivo de baño maría a 30°C como el indicado, de este tomamos dos gotas y las pusimos en el portaobjetos para después agregarle los ciliados que estaban en agua sucia, colocamos el cubre objetos y procedimos a la visualización de la función de los lisosomas.
PRESENTACION DE RESULTADOS. En la práctica se eligió la muestra del cultivo de levaduras a ojo ya que así fue recomendado por la tutora, y observamos que la de 30°C se veía en un color más vivo que el resto, así que se eligió para mezclarla con los ciliados, al no notar que los ciliados digirieran la levadura solo tomamos una foto que fue la del esquema inicial del cultivo. Se suponía que estos ciliados comerían la levadura y que la acción enzimática de los lisosomas de este haría que la levadura digerida cambiara de color, pero no fue así. A continuación, la foto tomada:
Figura 3 Ciliado en cultivo de levadura al baño maría.
CUESTIONARIO: 1) Tomando en cuenta tus observaciones experimentales, ¿Qué ocurre con las células de levadura dentro de los ciliados y por qué? En nuestro experimento, los ciliados observados, no le hicieron digestión a la levadura debido a que murieron al colocar el cubreobjetos y presionarlos con la lente del microscopio. Pero lo que en realidad sucede es que las levaduras cambian de color debido a la acción enzimática de los lisosomas dentro de los ciliados al este hacer su digestión. En teoría se intensifica el movimiento de los cilios situados cerca y dentro del citostoma (boca) creándose de esta manera una corriente de agua y partículas de levadura hacia su interior. La levadura tras penetrar el citoplasma se localiza en las vacuolas fagocitarias que se fisionan con los lisosomas para producir la digestión de esta. 2) Discuta el mecanismo que ocurre al calentar las levaduras y al agregar colorante. Lo que sucede es que cuando la temperatura al ser mayor la velocidad de difusión del colorante es mayor, las propiedades de conservación se alteran por la temperatura tan alta, caso opuesto a la de congelación que se cristaliza para preservarse, De ahí q la temperatura ideal es a baño María donde se expande sin maltratar y por eso asimila mejor el colorante.
En el tubo de ensayo al unir las levaduras con el Rojo Congo presenta un color rojo (por encima de pH 5), necesitando presencia de calor para este proceso de tinción. Pero cuando las vacuolas digestivas se fusionan con los lisosomas, que tienen pH más ácido, esta vira a la púrpura y luego al azul a pH 3. 3) Realice en esquemas, el origen y las funciones de los diversos tipos de lisosomas.
Existen lisosomas primarios y secundarios; los primarios son pequeños, no contienen material enzimático que les permita la digestión de materiales, cuando el lisosoma primario se fusiona con otras vesículas, se forman los lisosomas secundarios. Este se divide en 3 tipos diferentes, endosoma tardío, fagosoma o autofagosoma. El endosoma tardío; estos surgen de la unión de los endosomas tempranos con los endosomas primarios, estos contienen material que ingresa por endocitosis a la célula. El fagosoma contiene los elementos provenientes de una vacuola fagocítica (patógenos por lo general). El autofagosóma contiene material proveniente del interior de la célula, este material yo no le sirve a la célula por lo que el autofagosoma lo desintegra y lo lleva afuera de la célula.
PRACTICA 6 “Tejidos vegetales: Aislamiento de cloroplastos intactos” 3. Describir brevemente otra técnica para determinar fotosíntesis. 4. Nombre la materia prima y los productos para cada fase de la fotosíntesis. expuesto a la luz). Nota: En las técnicas descritas se encuentran incluida la materia prima utilizada y el producto resaltados. Todos los métodos para medir fotosíntesis se basan en la medición del intercambio gaseoso (CO2 – O2) que ocurre durante el proceso. La medición se realiza sobre uno de los dos gases y los resultados siempre se expresan en tres dimensiones: mg (gas). Área (foliar cm2 o dm2). Tiempo (minutos, segundos, horas). En el caso que se mida fotosíntesis en algas en vez de Área foliar se emplea la unidad de volumen (cm3 de agua). Clasificación de los métodos 1) POR PRODUCCIÓN DE OX|IGENO 1.1. Método manométrico (microrespirómetro de Warburg) 1.2. Método de las botellas (determinación de Oxigeno por Winckler) 2) POR MEDICIÓN DEL CO2 ABSORVIDO 2.1. Método de la campana por titulación 2.2. Absorción infrarroja de CO2 2.3. Absorción de CO2 radioactivo 3) POR POROMETRIA A continuación, utilizaremos la técnica del primer método por producción de oxígeno. Método de las botellas (determinación de Oxigeno por Winckler)
El método de las botellas se utiliza ampliamente para medir fotosíntesis en ambientes acuáticos (rios, lagunas, lagos, mares, océanos). Es decir, permite estimar la productividad primaria de los ambientes acuáticos. El método se basa en medir la producción de oxígeno. En el sitio de muestreo se llenan con agua del lugar las tres botellas, a una se le agrega cloruro de manganeso y reactivo de Winkler (Ver determinación oxígeno disuelto), se la tapa con cuidado y se la coloca en el medio acuático, colgada o suspendida con un dispositivo de flotación. Otra botella, con agua del lugar, se tapa con cuidado y se coloca en el medio acuático a la misma profundidad que la anterior. La tercera botella, con agua del lugar, se tapa con cuidado y la envuelve en una bolsa de polietileno negra (para evitar la entrada de la luz solar), luego se cuelga del dispositivo de flotación a la misma profundidad de las anteriores. Este dispositivo (las tres botellas a la misma profundidad) se deja por un tiempo de 2 o 3 horas, y luego se retiran. En laboratorio se sigue el procedimiento (Ver determinación oxígeno disuelto) para todas las botellas y se estiman los mg de O2 que existen en cada una. Ayuda Didáctica complementaria U.T. 2 – Medición de Fotosíntesis – FV – FCA – UNER Pág. 2. Botella 1: Medimos el oxígeno inicial (Oi) Botella 2: Medimos el oxígeno producido (Op) por fotosíntesis de las algas menos el oxigeno respirado por las algas (Or). Botella 3: Medimos el oxígeno respirado (Or) Botella 1
Botella 2
Botella 3
Oi
Oi + Op - Or Oi - Or
Fórmula: Fotosíntesis Neta (FN) = Fotosíntesis Bruta (FB) – Respiración (R) FN = Oi + Op – Or – (Oi – Or) = Oi + Op – Or – Oi + Or = Op
R = Oi – (Oi – Or) = Oi - Oi + Or = Or FB = FN + R = Op + Or Determinación del oxígeno disuelto por el Método de Winkler 3
Inmediatamente después de que se haya tomado la muestra de agua, se añade 2 cm de cloruro 3
de manganeso al 50 por 100 en solución y 2 cm de reactivo Winkler (100 g de hidróxido 3
potásico y 60 g de yoduro potásico en 200 cm de agua) usando pipetas* que lleguen bastante debajo de la superficie. Esto puede hacer que se derrame algo de agua de la parte de arriba. Volver a colocar la tapa, quitando el aire, y mezclar completamente invirtiendo y girando la botella con fuerza. Se forma un precipitado de hidróxido manganoso, pero el oxígeno del agua puede transformar parte de éste en una cantidad equivalente de hidróxido mangánico. Al volver al laboratorio, dejar reposar el precipitado. A continuación introducir* cuidadosamente 2 3
cm de ácido sulfúrico concentrado, reponiendo el tapón rápidamente y evitando la introducción de aire o la pérdida de precipitado. Mezclar completamente por rotación hasta que se disuelva el precipitado; el hidróxido mangánico oxida el yoduro potásico en una cantidad equivalente a la de yodo libre. Puede hacerse una estimación aproximada a partir del color del yodo. La comparación con cristales standard en un comparador B.D.H o la titulación darán una determinación más precisa. 3
Titulación: girar para mezclar; a continuación, usando una pipeta, llevar 100 cm de la botella de muestra a un recipiente cónico. Titular inmediatamente con solución N/80 normalizada de tiosulfato sódico hasta que solamente quede un débil color amarillo; agregar unas pocas gotas de solución de almidón recién preparadas, y a continuación añadir más 3
tiosulfato gota a gota justamente hasta que desaparezca el color azul. Cada cm de tiosulfato 3
utilizado es equivalente a 1 mg de oxígeno por litro; así, x cm de tiosulfato implican una concentración de oxígeno de x mg por litro. (H. , 2008)
PRACTICA 7 “Meiosis y Mitosis”
Presentación de resultados Realice dibujos de todas las fases observadas. PROFASE
TELOFASE
Imagén 1Foto tomada del montaje facilitado por la profesora en la práctica.
PROFASE ANAFASE TELOFASE
Imagén 2 Raíz de cebolla 100x
Imagén 3Raíz de cebolla 100x
Cuestionario a. ¿Qué etapas de la meiosis y mitosis observo? Durante la práctica empleando la raíz de cebolla pudimos observar las diferentes etapas de la mitosis, donde se proceden dos células hijas genéticamente idénticas entre sí, con la de cebolla vista al microscopio como se observa en las imágenes anteriores pudimos observar 4 etapas o fases: Profase, Metafase, Anafase y Telofase. Durante la práctica no realizamos montajes para poder observar las meiosis y sus dos divisiones. b. ¿Qué proceso se está desarrollando en las etapas observadas? En el proceso de mitosis de la raíza de cebolla observamos las 4 fases, profase, metafase, anafase y Telofase. c. ¿Qué tipo de células se están observando? Al trabajar con la raíz de cebolla estamos observando células vegetales d. ¿Cuántos cromosomas poseen las células en mitosis? 46 cromosomas, en la mitosis se tienen desde la profase hasta la metafase 23 pares de cromosomas (46 cromosomas), cada uno con dos cromátides (92 cromátides), en la anafase se dividen los centrómeros de los cromosomas, por lo que al final de la telofase habrá 2 células hijas cada una con 46 cromosomas y 46 cromátides, pues al dividirse los centrómeros cada cromosoma se partió en dos. e. ¿Cuántos cromosomas poseen las células en meiosis? 23 pares de cromosomas, en la meiosis, desde la profase I hasta la metafase I hay en la célula 46 cromosomas y 92 cromátides, como en la anafase I no se dividen los centrómeros, cada una de las 2 células resultantes de mitosis I tendrá 23 cromosomas con 46 cromátidas. En meiosis II se reducirá su número en cada una de las 4 células resultantes a 23 cromosomas y 23 cromátides, pues durante la anafase II, se dividen los centrómeros.
CONCLUSIONES Aprendimos que las normas de seguridad son importantes tanto en el laboratorio con en la vida cotidiana. Los cambios en la célula vegetal fueron observados con forme a la teoría de la plasmólisis y turgencia, aunque en la metodología de la práctica asegura de forma implícita la observación de los cambios en la célula animal, la verdad no fue bien observable, la crenación y la citólosis. Pudimos observar como ocurren los procesos de plasmólisis y turgencia en las células vegetales comprobando así la teoría repasada antes de entrar a la práctica. Adicional pudimos comprobar los fenómenos de hipotonía, isotonia e hipertonía. Observamos y aprendimos que, a diferencia de las células animales, todas las células vegetales presentan pared celular que poseen plastos que son los responsables de la fotosíntesis, los almidones y la pigmentación, y como los diferentes tipos de cloroplastos les dan el color verde a las plantas y hacen las fotosíntesis. La célula es un diseño perfecto de la naturaleza de los organismos vivos. Se identificaron las fases de la mitosis que se representaron en la célula vegetal (telofase e interface). Pudimos observar al microscopio las características de cada fase, ejemplo la profase, metafase, anafe hasta llegar a la telofase donde es totalmente visible la división de la célula madre en dos células hijas. Esta práctica nos ayudó a entender mejor el proceso de mitosis de una manera visual, pues nosotros mismos lo observamos a través del microscopio.
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