UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA CENTRO UNIVERSITARIO DE OCCIDENTE DIVISIÓN DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA AGRÍCOLAS CARRERA DE AGRONOMÍA
LABORATORIO DE GENETICA PREPARACION DE UN MEDIO DE CULTIVO PARA DROSOPHILA MELANOGASTER INTRODUCCIÓN La principal cría de estos insectos fue llevada a cabo por biólogos genetistas a principios del siglo XX que encontraron en este pequeño animal un buen modelo para desarrollar sus experimentos y poder explicar la transmisión de los caracteres hereditarios. La cría de la mosca del vinagre es relativamente fácil porque este insecto se reproduce con mucha facilidad gracias al gran número de huevos que deposita en cada puesta (son animales muy prolíficos que hacen distintas puestas), que tiene un ciclo vital muy corto (por lo que rápidamente tendremos nuevas crías), y a que las dificultades asociadas a este animal durante la cría son mínimos. El pequeño tamaño de la mosca del vinagre es otro detalle que hace de la cría de Drosophila melanogaster una una tarea poco complicada, puesto que gracias a esta característica no es necesario unas grandes infraestructuras para criar estos animales. Como consecuencia, los costos económicos para la cría de la mosca del vinagre son mucho más bajos que si se desarrollase con otros animales más grandes. La facilidad con la que se pueden criar la mosca del vinagre es uno de los motivos que explican porque los científicos la han utilizado para investigaciones genéticas. Drosophila melanogaster , cuando vive salvaje, se alimenta de una gran variedad de materias
orgánicas en descomposición. Preferentemente, son de tipo vegetal, es decir, frutas y verduras, pero en ocasiones esta mosca se nutre de animales muertos o de excrementos de animales. La alimentación de este insecto no es difícil satisfacer en el sentido de que demuestra especificidad hacia ningún tipo concreto de fruta, y por lo tanto se puede utilizar una variedad muy grande de productos alimenticios para su cría. El inconveniente de la nutrición de la mosca del vinagre se da sobre todo por la manipulación dificultosa que representa este insecto muy pequeño y alado, es decir con capacidad de volar. Con sólo una película de materia orgánica en fermentación le es suficiente a este insecto para reproducirse. En cambio, sin este elemento las larvas de la mosca m osca del vinagre no pueden sobrevivir porque otra materia alimenticia no les satisface.
Ello obliga a preparar algún medio de cultivo que le dé características sólidas a la papilla fermentada con la que alimentaremos a la mosca de la fruta y de ahí la importancia de incluir agar-agar en la mezcla. No obstante, existen muchas recetas alternativas que pueden funcionar adecuadamente. OBJETIVO: Preparar un medio de cultivo adecuado para el desarrollo in vitro de Drosophila
melanogaster.
MATERIAL: Frascos de vidrio de 6 onzas. Algodón. Gasa. Pinzas. Papel filtro. Agar-agar. Tegosept. Alcohol etílico. Sacarosa. Levadura. Harina de maíz. Harina de trigo. Ácido propiónico. Agua pura.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA 1. Tome varios frascos de vidrio, tápelos con algodón o gasa y esterilícelos en el horno Pasteur, durante una hora. 2. Se pesan los ingredientes del medio de cultivo: 1. Agar-agar 5 grs. 2. Harina de maíz 30 grs. 3. Harina de trigo 15 grs. 4. Sacarosa 17.5 grs. 5. Levadura 15 grs. 6. Alcohol etílico 5 cc. 7. Tegosept 5 cc. 8. Acido propiónico 2.5 cc. 9. 900 cc de agua.
3. Se disuelve en agua destilada estéril por separado el agar- agar y en otro recipiente la harina de maíz, harina de trigo y los demás reactivos, la levadura se disuelve previamente en agua. Excepto el alcohol etílico, tegosept y el ácido propiónico. 4. Se agita constantemente la mezcla, se lleva a punto de ebullición durante 15 minutos. Finalmente se vierte el alcohol etílico, tegosept y el ácido propiónico. 5. Se deja enfriar ligeramente la mezcla y antes de que se solidifique se vierte en los frascos de vidrio previamente esterilizados, se coloca con una pinza estéril un disco de papel filtro esterilizado en la superficie del medio de cultivo. 6. Se tapa con algodón o gasa. Una vez depositado el medio se deja reposar por un día antes de utilizarlo. CUESTIONARIO: 1. Indique cuál es la función del tegosept y el ácido propiónico en el medio de cultivo. Estos funciones como medio inocuidad cuya función es evitar que proliferen agentes patógenos como hongos y bacterias en el cultivo, lo cual hace inocua a la mescla evitando así la contaminación de esta como lo puede ser la Aparicion de moho o ác aros. 2. ¿Qué ventajas tiene un medio sólido sobre un medio líquido para el cultivo de Drosophila melanogaster?
Dado que es una especie terrestre y no acuática en ninguna de sus faces hace que estas se desarrollen dentro de su propio medio además de el hecho de ser solido permite moverse en su medio ya que estas no pueden moverse en líquidos, se debe de agregar que además de que están en su medio la observación y control se hace mas fácil en un medio solido. 3. ¿Cuál es el objetivo de incluir un disco de papel filtro en el medio de cultivo y que otros
materiales podríamos colocar en lugar de este? :La función de este objeto es la de mantener la inocuidad lo cual hace evita el contacto con el aire y agentes externos que podrían afectar al cultivo por lo cual el pale usado esta esterilizado al igual que las pinzas, se podría usar papel tipo mayordomo debidamente esterilizado. 4. ¡Cuándo sabemos que el medio de cultivo se ha agotado para pasar a las moscas a otro frasco con medio de cultivo nuevo? Esto se puede determinar mediante el número de moscas que lleguen a darse ya que al aumentar la población aumentara la demanda de cultivo, oxigeno y espacio para movilizarse para poder sobrevivir. 5. Investigue qué otros medios de cultivo se han utilizado con éxito en la cría in vitro de Drosophila melanogaster ? Dentro de los medios de cultivos se pueden hacer mesclas cacera (como lo fue en esta practica) de componentes para tener medio de cultivos como los es la utilización de: harina de papa, harina de maíz, azúcar, levadura vinagre, plátano o fruta que se pueda tener una consistencia parecida al plátano, al mezclarse de una forma triturada, en las proporciones adecuadas se tendrá como resultado un medio de cultivo en el cual el vinagre como agente elimina patógenos. En estos cultivos puede variar los componentes como gelatina neutra, levadura de cerveza.
Del mimo modo otra forma de realizar un cultivo profesiones conlleva la mescla de ingredientes tales como: glucosa, levadura harina de maíz, germen de trigo, melaza o sirope, harina de soja agar agar,nipajin y acido propinoico el cual se disuelve en etanol y acido propanoico, estos últimos en moción fungirán como agente eliminadores de patógenos, esta mescla no se trabaja triturada si no es hervida y después toma consistencia como la del presente instructivo.
