PREVIO PREVIO DE LA SEGUNDA SEGUNDA PRACTICA DE BIOQUIMICA BIOQUIMICA (HOMOGENEIZA CION Y CENTRIFUGACIÓN) CENTRIFUGACIÓN) 1.- ¿Qué parámetros físicos y químicos se deben considerar durante una homogeneización? FISICOS
QUIMICOS
Tipo de tejido (duro, blando o semiduro)
Tipo de solución (hipo,iso e hipertónica)
Tipo de buffer (en base a la forma, estructura de lo que queramos separar)
Utilización de sustancias químicas para la separación de organelos o macromoléculas macromoléculas por ejemplo SDS (detergentes)
2.- ¿Qué tipo de homogenizado debe utilizarse para muestras blandas, blandas, duras y semiduras? VIRTIZ Tejido duro
POTER Tejido semiduro
MORTERO Tejido blando
3.- ¿Qué características tiene una centrifuga y cuantos tipos de centrifuga existen? Una centrífuga o centrifugadora es una máquina una máquina que pone en rotación una muestra para acelerar por fuerza fuerza centrífuga la decantación la decantación o sedimentación de sus componentes o fases (generalmente una sólida y una líquida), en función de su densidad. Existen diversos tipos de estos, comúnmente para objetivos específicos. específicos. Por esencia cualquier centrifuga esta compuesta por: a) b) c)
Motor Flecha Rotor
Existen distintos tipos de centrifugas las cuales son: a) b) c)
Centrifugas de baja velocidad o clínicas: Son útiles para partículas grandes como células, precipitación de sales insolubles. Centrifugas de alta velocidad : Son útiles en la separación de fracciones celulares insuficientes para la separación de ribosomas, virus y macromoléculas. Ultracentrífugas: Existen Ultracentrífugas: Existen dos tipos de ultracentrífugas -Analíticas: Obtención de datos precisos de propiedades de sedimentación. -Preparativas: Aislamiento de partículas de bajo S (coeficiente de sedimentación).
4.- ¿Cuáles son los parámetros físicos que participan durante la centrifugación de un homogenizado tisular? -El homogenizado tendrá que ser una solución isotónica 0
-La temperatura del homogenizado tendrá que estar al menos 4 C 5.- ¿Cuáles son los tipos de centrifugación que existen? -Centrifugación diferencial: Se diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las moléculas. Esta diferencia debe ser grande para que sea observada al centrifugar. Las partículas que posean densidades similares a la del medio sedimentarán juntas. Este método es inespecífico, por lo que se usa como centrifugación preparativa para 2
separar componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar mitocondrias de núcleos y membrana)pero no es útil para separar moléculas. -Centrifugación isopícnica: Partículas con el mismo coeficiente de sedimentación se separan al usar medios de diferente densidad. Se usa para la separación de ADN con mucha frecuencia. -Centrifugación zonal: Las partículas a separar se separan por la diferencia en la velocidad de sedimentación a causa de la diferencia de masa de cada una. La muestra se coloca encima de un gradiente de densidad preformado. Por la fuerza centrífuga las partículas sedimentan a distinta velocidad a través del gradiente de densidad según su masa. Se debe tener en cuenta el tiempo de centrifugación ya que si se excede, todas las moléculas podrían sedimentar en el fondo del tubo de ensayo. -Ultracentrifugación: Permite estudiar las características de sedimentación de estructuras subcelulares (lisosomas, ribosomas y microsomas) y biomoléculas. Utiliza rotores (fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo. Existen diferentes maneras de monitorear la sede las partículas en la ultracentrifugación, el más común de ellos mediante luz Uerfresones. -Anexo:
La centrifugación es un método físico por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una fuerza rotativa , la cual imprime a la mezcla con una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad. Fundamento teórico El objetivo de la centrifugación es separar sólidos insolubles (de particulas muy pequeñas difíciles de sedimentar) de un liquido. Para ello, se aplica un fuerte campo centrífugo, con lo cual las partículas tenderán a 2 desplazarse a través del medio en el que se encuentren con la aceleración G. E = velocidad angular x radio